Universidad de Alcal Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular Bioqumica. 2 de Farmacia.

Curso 2010/11 PROBLEMAS DE IONIZACIN DE AMINOCIDOS

1. Escribir la forma que presenta cada uno de los siguientes aminocidos a pH 7: isoleucina (Pka: 2,36 y 9,68), tirosina (Pka: 2,2; 9,11 y 10,07), treonina (Pka: 2,11; 9,62 y 13,6), glutmico (Pka: 2,19; 9,67 y 4,25) y arginina (Pka: 2,17; 9,04 y 12,48).

Ile, Tyr y Thr: carga neta cero. Glu: carga neta negativa. Arg: carga neta positiva.
2. 4.- a) Escribir los posibles estados de ionizacin de los siguientes aminocidos: cido glutmico Histidina Serina b) Calcular el punto isoelctrico de cada uno de ellos. c) Elegir un aminocido que tampone adecuadamente a pH=2, 4, 6, 9 y 13. d) Indicar qu estado de ionizacin de la serina predominar a pH=1, 3,7 y 11.

b) Glu pI = 3,22

His pI = 7,59

Ser pI = 5,65

c) Tampone a pH = 2,4 el Glu Tampone a pH = 6,9 la Ser Tampone a pH = 13 ninguno, ningn pKa est prximo a ph =13 e) a pH = 1 carga positiva a pH = 3,7 carga positiva a pH = 11 carga negativa
3. Escribir los diferentes estados de ionizacin de la histidina dependientes del pH (Pka: 1,82; 9,17 y 6,0). Dibujar la curva de titulacin e indicar en ella (del I al XI) la forma del aminocido: I) Predominantemente protonada. II) Con carga neta media +1. III) La mitad de los grupos amino estn ionizados. IV) El pH es igual al pKa del grupo carboxilo. V) El pH es igual al pKa del grupo amino lateral VI) Mxima capacidad tamponante.. VII) Carga neta media igual a cero. VIII) El 50% carga neta media cero y el 50% tiene carga neta media -1. IX) Molcula totalmente ionizada. X) Punto isoelctrico. XI) Peores regiones de tamponamiento.

1,82

9,17

VI//VIII III//VII//X//XI V//VI II//IX//XI IV//VI

I//XI
4. Dado el siguiente tripptido: Asp-Lys-Ala a) Escribir las diferentes formas de ionizacin b) Indicar la estructura que predomina a pH 4. c) Calcular el pI d) Indicar la carga del pptido a pH 1, 4, 8 y 12. e) Seran iguales los pptidos Asp-Lys-Ala y Ala-Lys-Asp?. Por qu?. f) Explique razonadamente algn tratamiento por el cual se obtenga, en un nico paso, un dipptido y un aminocidos libre.

a)

DATOS: Considerar los siguientes valores de pKa: 2,2; 3,8; 9 y 10.

H
+

O (1)

H3N- CH-C-N-CH-C-N-CH-COOH CH2 O (CH2)4 H CH3 COOH NH3+ pKa = 2,2 H O (2)

H3N- CH-C-N-CH-C-N-CH-COOCH2 O (CH2)4 H CH3 COOH NH3+

pKa = 3,8

H
+

O (3)

H3N- CH-C-N-CH-C-N-CH-COOCH2 O (CH2)4 H CH3 COO- NH3+

pKa = 9 H O (4)

H2N- CH-C-N-CH-C-N-CH-COOCH2 O (CH2)4 H CH3 COO- NH3+

pKa = 10 H O (5)

H2N- CH-C-N-CH-C-N-CH-COOCH2 O (CH2)4 H CH3 COO- NH2

b) (3) c) pI = 6,4 d) e) No f) Tripsina: Asp-Lys + Ala

5. Se prepar un tampn 30mM a pH semejante al que existe en el interior de la clula heptica (6,65), para lo cual se utiliz histidina. Se pregunta: a) Cuntos gramos de histidina son necesarios para preparar el tampn? (pm=155,2) b) Cules son las concentraciones de las especies inicas presentes en la solucin tampn?

pH=1 2+

pH=4 cero y +

pH=8 cero y -

pH=12 2-

His2+
pK1=1,82

His+
pKR=6

His0
PK2=9,2

His-

a) 30 mM = 4,65 g b) Aplicando Henderson-Haselbach. A pH = 6,65 tengo el equilibrio, utilizo His+ y His0

His0 [A-] pH = pKa + lg His+ [AH]

y sabiendo que [His0] + [His+] = 30 mM

[His+] = 5,5 mM [His0] = 25,5 mM

6. Se llev a cabo una electroforesis sobre papel de una mezcla de Gly, Ala, Glu, Lys, Arg. Indicar su estado de ionizacin y su movilidad electrofortica a pH=2, pH=6 y pH=9.

Gly pI = 6,1 a) pH = 2 Gly+ Ala+ b) pH = 6 Glyo Alao c) pH = 9 Gly- Ala-

Ala pI = 6,1

Glu pI = 2,3

Lys pI = 10

Arg pI = 10,75

Glu+/o

Lys+

Arg+ Movilidad: Glu Gly/Ala Lys Arg

Glu-

Lys+

Arg+

Movilidad: Glu Gly/Ala Lys Arg

Glu-

Lys+

Arg+

Movilidad: Glu Gly/Ala Lys Arg

7. A una resina de intercambio inico cargada positivamente se le aade una mezcla de Lys, Arg, Asp, Glu, Tyr y Ala a pH=10. Predecir el orden de elucin de los aminocidos por tratamiento de la resina con disoluciones a pH sucesivamente decrecientes.

Orden de elucin de mayor pI a menor pI: 1 Arg 2 Lys/Tyr 3 Ala 4 Glu 5 Asp
8. De un hidrolizado proteico se han separado los siguientes pptidos, de los que se han valorado los pKa de sus grupos ionizables, obtenindose los siguientes valores: Asp-Gly (2.2; 4.5;9.1) Ala-Lys-Ala (3.3;8.0;10.6) Gly-Glu-Lys-Ala (3.3;4.1;8.2;10.5) Calcular su pI e indicar el pH al que debera realizarse una electroforesis para separarlos

a) Asp-Gly pI = 3,3 b) Ala-Lys-Ala pI = 9,05 c) Glu-Glu-Lys- Ala pI = 6,2 Separar a pH = 6, Ala-Gly (carga -) (carga 0) Ala-Lys-Ala (carga +) Glu-Glu-Lys- Ala