Universidad Nacional de Colombia

Facultad de Ciencias Departamento de Farmacia PRCTICA DE LAB RAT RI C NCENTRACI N INI!A IN"IBIT RIA PARA DE#INFECTANTE#

B%ETI& #' Determinar la concertacin mnima inhibitoria de una sustancia antimicrobiana para diferentes tipos de microorganismos, empleando diferentes genero - especies y diferentes cepas de un mismo gnero especie.

!ATERIALE# )Por *rupo de Traba+o, Tubo de ensayo pequeo Tubo de ensayo grande Tubo de ensayo pequeo con ml de acti!o "ipeta de 1# ml estril "ipeta de 1ml $ecipiente con %# ml de caldo &uller 'inton (&') *a+a de agar &' 1 1 1 1 ,

!ICR

R*ANI#! #

*ulti!o en - ml de caldo &ueller 'inton a %./* por , horas de los siguientes microorganismos. Escherichia coli Pseudomonas eruginosa Salmonella enteritidis Staphylococcus aureus Streptococcus faecalis . .'$ ,.1.1 ,.1. ,.1.% ,.1., ,.1.,.1.3 .'( ,. .1 ,. . PR CEDI!IENT Preparaci/n del Activo' 0l tubo de ensayo pequeo con ml del acti!o m1rquelo como tubo 2o 1. &arque los 11 tubos pequeos desde el 2o al 1 . *on una pipeta estril de 1# ml dispense 1 ml de caldo &' en cada tubo. *on una pipeta estril tome 1 ml del tubo 2o 1, colquelo en el tubo 2o y homogeneice bien. *on una pipeta estril tome 1 ml del tubo 2o. , colquelo en el tubo 2o % y homogeneice. $epita este procedimiento hasta el tubo 2o 1#, y de este tubo descarte 1 ml. (!er fig. 2o.1) Preparaci/n del In/culo Tome el culti!o del microorganismo y prepare un dilucin con *aldo &' de -4T (3## nm) . "repare 1- ml de inculo en caldo &' a doble concentracin, haciendo dilucin 1 en 1## de una suspensin del culti!o bacteriano de -4T.

$ ml

$6

$$

$(

5igura 2o. 1. "reparacin de las diluciones del antimicrobiano. .',.%.1 ,.%. ,.%.% ,.%., Desarrollo del Ensa0o 6nocule los doce tubos con 1 ml de la suspensin de microorganismo 6ncube los tubos del 2o1 al 11 a %-7* por , horas y el tubo 2o. 1 pngalo en el refrigerador. 8os tubos 2o 11 y 1 son los controles positi!o y negati!o respecti!amente. 0l 2o. 11 como referencia de crecimiento y el 1 como referencia de no-crecimiento. 8uego de la incubacin determine en cuales tubos hubo crecimiento y en cuales se presenta no crecimiento. 9e espera que no haya crecimiento a las concentraciones m1s altas y que dependiendo del modelo a emplear apare:ca crecimiento en la medida que la concentracin del acti!o disminuya (;er figura 2o. ). 'aga subculti!o en una ca+a de agar &' de los tubos de no-crecimiento, del primer tubo que manifieste crecimiento y de los tubos de control (;er figura 2o. %). 8a *&6 ser1 la menor concentracin que manifieste crecimiento en el subculti!o y la *&8 la menor concentracin que no manifieste crecimiento.

,.%.,.%.3

"ara mayor claridad !eamos un e+emplo

$6

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5igura 2o. . $esultados despus de la incubacin (%.7*< , h) de los tubos inoculados

$(

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C!I C!L
(

5igura 2o.%. $esultados de la incubacin de los subculti!os en agar &' de los tubos 9i por e+emplo no hubo crecimiento desde el tubo 2o. 1 hasta el 2o % (fig. 2o. ), debemos hacer repiques en una ca+a de agar &' desde el 2o 1 hasta el 2o , (hay crecimiento) y de los dos tubos control (2o 11 y 1 ), para determinar si el no-crecimiento es producto de la inhibicin o de la muerte del microorganismo. 0n este e+emplo, la *&6 es la concentracin del tubo 2o % y la *&8 la del tubo 2o. (fig. no. %)