UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL

PROYECTO DE TESIS

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$a#&'a(a)a&'a de *a e# la c!#+t!ca de c ec!*!e#to de Tetraselmis suecica

AUTOR,
Silva Benites Juan Carlos.

ASESOR,
Dr. Vsquez Villalobos Vctor Javier.

TRUJILLO - PER. /001

PROYECTO DE TESIS

1. GENERALIDADES 1.1. Ttulo: Efecto de la variacin de las proporciones sanguaza/agua de mar en la cintica de crecimiento de Tetraselmis suecica 1.2. Personal investi a!or: 1.2.1. Investigador: - Apellidos y om!res - &epartamento - (acultad - %ategor'a - %digo 1.2.2. Asesor: Apellidos y om!res 1.". Ti#o !e investi a$i%n 1.-.1. &e acuerdo a la 3rientacin : Aplicada 1.-.2. &e acuerdo a la 4cnica de %ontrastacin: E5perimental 1.&. R' i(en !e investi a$i%n 6i!re 1.). Institu$i%n a la *ue Pertene$e el Pro+e$to: 7niversidad s/n : 4ru8illo. acional de 4ru8illo: Escuela de Ingenier'a Agroindustrial de la (acultad de %iencias Agropecuarias. %iudad 7niversitaria2 Av. $uan 9a!lo II : &r. /0s1uez /illalo!os2 /'ctor $avier. : "ilva #enites $uan %arlos : Ingenier'a Agroindustrial : %iencias Agropecuarias : #ac)iller : *2+11,-..

1.,. Lo$ali!a! e institu$i%n !on!e se e-e$utar. el #ro+e$to:

Instituciones: 6a!oratorio de Ingenier'a Agroindustrial de la (acultad de %iencias Agropecuarias2 de la 7niversidad 4ru8illo 1./. Crono ra(a !e e-e$u$i%n !el #ro+e$to: %uadro 1. %ronograma en ;eses de E8ecucin del 9royecto Actividades / Etapas ;es 1 ;es 2 ;es ;es + ;es , ;es < acional de 4ru8illo. acional de 6a!oratorio de 3peraciones Agroindustriales de la 7niversidad

=evisin #i!liogr0fica Ela!oracin y sustentacin del 9royecto E5perimentacin An0lisis de =esultados =edaccin del Informe %orreccin del informe 9resentacin

1.0. Dura$i%n total !el #ro+e$to: -(ec)a de Inicio : Agosto 2**.

-(ec)a de 4rmino : Enero 2**.

1.1. 2oras se(anales !e!i$a!as al #ro+e$to: +* )oras semanales

1.13. Re$ursos !is#oni4les: 1.13.1. Personal: -Autor -Asesor : #r. "ilva #enites2 $uan %arlos : &r. /0s1uez /illalo!os2 /'ctor $avier.

1.13.2. 5ateriales + e*ui#os: ;aterial de vidrio: !iorreactores de vidrio2 c0mara neu!auer2 vasos de precipitacin2 termmetro2 matraces2 pro!etas2 !uretas2 pipetas2 micropipetas2 mec)ero. =eactivos de la!oratorio: medio >uilard2 agar-agar. ;aterial !i!liogr0fico: 6i!ros2 revistas2 !oletines2 tesis. 3tros materiales: mangueras2 4s de pl0stico2 agu8as cali!radas. E1uipos: microscopio2 !alanza anal'tica2 p? metro2 agitador magntico2 compresora2 centrifuga2 computadora

1.13.". Lo$ales: - 6a!oratorio de Ingenier'a Agroindustrial Agropecuarias de la 7niversidad de la (acultad de %iencias

acional de 4ru8illo. acional de 4ru8illo.

- 6a!oratorio ;ultifuncional de la 7niversidad - #i!liotecas de la 7niversidad

acional de 4ru8illo @"ede %entralA.

1.11. Re$ursos No Dis#oni4les: %uadro 2: =elacin de =ecursos o &isponi!les

=ecursos o &isponi!les ;ateria 9rima: Alga @Tetraselmis suecica) "u! 4otal =eactivos: 6ugol Acido c'trico ?idr5ido de sodio "u! 4otal ;aterial de Escritorio: ;emoria 7"# 1># Impresiones y Escaneados "u! 4otal >astos de 4ra!a8o de %ampo: 9asa8es y >astos de %ampo #Cs1ueda #i!liogr0fica "u! 4otal 3tros "ervicios : Internet Asesor'a Estad'stica %opias fotost0ticas Encuadernacin y Empastado 3tros "u! 4otal 4otal >eneral -,*.** <**.** 1+*,.** >lo!al ,*.** ,*.** 1,*.** >lo!al >lo!al 1,*.** -**.** 1 unidad 2,* ml 2,* ml 2,* ml 1*.** 1*.** ,.** 2,.** -,.** ,*.** B,.** 1,*.** %antidad 1,** ml %osto +**.** +**.**

1.12. 6inan$ia(iento: -Autofinanciado PLAN DE IN7ESTIGACI8N

I.

Ante$e!entes.9 El estudio de las microalgas inici a finales del siglo DID2 cuando el micro!ilogo )olands #ei8erincE @1B.*A dio el nom!re de Chlorella vulgaris a una diminuta alga verde de forma esfrica2 esta!leciendo de esta forma los cultivos puros y las tcnicas para el cultivo de microalgas en tu!o y en placa con medio slido @Arredondo2 1..,A. 6as microalgas )an sido empleadas para su consumo como fuente de alimento: prote'nas y l'pidos2 tam!in en el tratamiento de aguas residuales y la produccin de compuestos 1u'micos de inters !iotecnolgico: pigmentos2 antio5idantes2 0cidos grasos. @Arredondo2 1..,F (idalgo2 1..,A. 9ara o!tener un cultivo de microalga en crecimiento activo es necesario un inoculo via!le de un tamaGo m'nimo2 suministro de nutrientes2 condiciones fisico1u'micas adecuadas @p?2 temperatura2 salinidadA y luz como fuente de energ'a @(idalgo2 1..,A. 6as venta8as 1ue presenta la produccin de microalgas son: 9ueden duplicar su !iomasa en 2+ )oras. 6a transformacin de nitrato a prote'na es del 1** H. "e puede variar la composicin 1u'mica de las microalgas cam!iando las condiciones de cultivo. "u facilidad de cultivo a nivel industrial @Arredondo2 1..,A. 6a utilizacin de cultivos microalgales para diferentes o!8etivos )a concentrado el esfuerzo de los investigadores durante las Cltimas dcadas en me8orar su produccin y composicin 1u'mica. Este control puede ser e8ercido mediante la manipulacin de factores f'sicos y 1u'micos como: temperatura2 luz2 salinidad2 composicin del medio de cultivo2 p?2 @(idalgo2 1..,F ;alcolm2 2**2A. 6a velocidad de s'ntesis de los meta!olitos celulares se ve influenciada por la temperaturaF as' tenemos 1ue el rango ptimo de temperatura para el crecimiento de la mayor'a de las microalgas entre ellas la de Tetraselmis suecica se sitCa entre 1B y 2, I% @(idalgo2 1..,A. 7n decremento de la temperatura se ve refle8ado en una acumulacin de l'pidos totales @$ames

et al.2 1.B.F 6pez2 2**2AF por otro lado2 niveles de irradiancia provocan una alta proporcin de 0cidos grasos poliinsaturados y una !a8a proporcin de los saturados y monoinsaturados @"uEeniE y %armeli2 1.B.F ;alcolm et al.2 1..<A. 6a concentracin de nutrientes es fundamental y de!e suministrarse al medio de cultivo en cantidades espec'ficas para su adecuada a!sorcin2 lo cual se lleva a ca!o por sistemas enzim0ticos2 mediado por energ'a @A49A y limitados por la mem!rana celular @A!alde et al.2 1..JA. El nitrgeno despus del car!ono2 es cuantitativamente el elemento m0s importante ya 1ue ocupa el segundo lugar como constituyente de la materia org0nica de las clulas microalgales @6pez2 1..,A. 6os cultivos est0ticos a gran escala dependen en gran medida de la limitacin de 2 %2 9 y "i principalmente en diatomeas @?arrison et al.2 1..*A. 6os elementos 1ue conforman el medio de cultivo tam!in afectan la composicin 1u'mica de las microalgasF por e8emplo la fuente y concentracin de nitrgeno provoca un efecto directo so!re el crecimiento celular y la produccin de prote'nas @?errero et al.2 1..12 1..+F (lynn et al.2 1..2A. Algunas de las variaciones en la composicin 1u'mica pu!licadas para diferentes microalgas y revisadas por #roKn et al. @1.B.A pone en evidencia 1ue !a8o el efecto de limitacin o deficiencia de nitrgeno en el medio de cultivo2 los niveles de car!o)idratos y/o l'pidos tienden a aumentar2 mientras los niveles de prote'nas decrecen. El desarrollo de la acuicultura de moluscos y crust0ceos )a motivado la intensificacin de las investigaciones so!re la produccin masiva de microalgas marinas2 para su utilizacin como alimento en los sistemas de acuacultura. El principal pro!lema asociado con el uso de microalgas en acuacultura es la falta de conocimiento so!re el valor nutricional de las algas y los re1uerimientos nutricionales de los consumidores de est0s @;alcolm2 1..1A. El agua del cultivo es el medio donde los organismos se van a desarrollar y su calidad tiene un efecto directo en la supervivencia2 por esta razn para el 5ito de los cultivos larvarios las varia!les como la temperatura2 la salinidad2 el p? y el o5igeno disuelto de!en ser correctamente controlados. 6a importancia de mantener estas varia!les en

los rangos ptimos sugeridos para la especie en cultivo2 es fundamental para el crecimiento y supervivencia2 as' tenemos por e8emplo 1ue la temperatura es un factor importante 1ue determina la velocidad de las reacciones meta!licas de los organismos lo cual se ve refle8ado en los procesos de muda2 crecimiento y supervivencia @;art'nez-%rdova2 1...AF otro factor importante es la salinidad ya 1ue los organismos en cultivo de!en de mantener su intercam!io inico entre el interior y el e5terior del cuerpo. %uando este intercam!io no est0 en e1uili!rio2 el organismo tiene 1ue realizar ciertas estrategias para e1uili!rar la concentracin de iones2 lo cual implica un gasto de energ'a. El p? es importante en las reacciones meta!licas ya 1ue las enzimas de los organismos funcionan adecuadamente dentro de un rango de p? determinado2 un cam!io puede alterar el funcionamiento de la )emolinfa2 la respiracin y las reacciones enzim0ticas del organismo @Arellano2 1..*A. El o5'geno tam!in es un par0metro muy importante en el desarrollo de moluscos y !ivalvos en sus diferentes estadios2 el !a8o nivel de o5igeno disuelto es una de las causa m0s comunes de mortalidad y reduccin de crecimiento en estan1ues intensivos @"eidman y 6aKrence2 1.B,A. Arellano @1..*A report 1ue la temperatura ptima para el cultivo de Tetraselmis suecica de!e mantenerse en 2- L *., I%2 la salinidad entre 2B-, ups y el p? entre J.,- B.2. ;ientras 1ue ;art'nez-%rdova @1...A report 1ue las condiciones fisico1u'micas ptimas para el cultivo de Tetraselmis suecica son entre 2*-2, I%2 salinidad de -J--B ups2 o5'geno disuelto de ,-B mg32/6 y p? entre J.,-B.,. Tetraselmis suecica es un alga utilizada en las dietas de los cultivos marinos2 tiene un tamaGo adecuado para poder ser ingerida2 una pared celular digeri!le y contiene adem0s todos los constituyentes !io1u'micos esenciales para el desarrollo de los microorganismos. Esta microalga es el elemento natural de muc)as especies de organismos en acuacultura y parte importante en la !ase de las cadenas alimenticias naturales de las 1ue tales especies dependen en su )a!itad natural. Es de gran importancia para el

cultivo comercial de diversos organismos como zooplancton2 las cuales son necesarios durante todo el ciclo de vida en la alimentacin de organismos !ivalvos y peces e indispensa!les en las etapas larvarias de crust0ceos @?errero et al., 1991). Tetraselmis suecica es fuente de alimento indispensa!le para: Estadios de crecimiento de moluscos !ivalvos. Estadios larvales de especies de crust0ceos. Estadios tempranos de especies de peces. 9roduccin masiva de zooplancton. Esta!ilizador de la calidad del agua del cultivo larval y control micro!iano en la tcnica de Magua verdeN. Adem0s Tetraselmis suecica cumple con las siguientes caracter'sticas: 9otencial de cultivo masivo. (acilidad de mane8o. 4amaGo celular apropiado. (0cil digesti!ilidad celular. /alor nutricional de la especie. Esta!iliza la calidad del agua en sistemas est0ticos2 remueve meta!olitos y produce 32. (uente directa de alimento para las larvas. 9olisac0ridos de pared celular estimulan sistema inmune no espec'fico de la larva. (uente indirecta de nutriente para larvas a travs de presas vivas2 cuyo valor nutricional se mantiene gracias a las microalgas. Aumenta la tasa de ingesta me8orando el contraste visual y la dispersin de la luz en el estan1ue de cultivo. %ontrol micro!iano por e5udado algal en el agua de cultivo o en el estmago larval. As' tenemos por e8emplo 1ue 3campo @1..+A e5perimentando con postlarvas2 8uveniles y adultos del camarn caf P. californiensis, sometindolos a , temperaturas y una salinidad de -, ups2 encontr 1ue el

consumo de o5'geno por parte de los camarones se incrementa con la temperatura y es inversamente proporcional al peso. 6a alimentacin inicial en los primeros estadios larvarios del camarn @protozeaA es a !ase de microalgas2 las cuales proveen de los re1uerimientos nutricionales2 energticos 1ue la larva necesita para su actividad meta!lica @Ourmaly et al.2 1.B.F (idalgo et al.2 1..+F ;alcolm2 1..12 2**2A. 9or esta razn es importante investigar cuantitativamente los aspectos relacionados con la alimentacin larvaria ya 1ue el desarrollo y crecimiento dependen principalmente del origen2 calidad y cantidad del alimento consumido @;art'nez-%rdova2 1...A. 7no de los factores 1ue influye en la supervivencia de las larvas de camarn es el origen y el contenido del alimento principalmente en prote'nas2 car!o)idratos y l'pidos. Algunos autores ponderan la calidad del alimento en funcin de la composicin 1u'mica2 as' tenemos 1ue Puinitio y /illegas @1.B2A utilizando dos dietas una de Chaetoceros calcitrans y la otra de Tetraselmis suecica en la alimentacin de Penaeus monodon, determinaron una supervivencia de <+ H y <B H respectivamente2 encontrando una mayor concentracin de car!o)idratos en las larvas alimentadas con Tetraselmis suecica asoci0ndolo con la supervivencia2 no o!stante no e5iste una diferencia significativa en la supervivencia de las mismas2 sin em!argo Tetraselmis suecica presenta mayor facilidad en su mane8o2 su produccin es m0s sencilla y en mayor volumen. Oures)y y &avis @2***A mencionan 1ue los re1uerimientos de prote'nas en camarones peneidos es una consideracin nutricional muy importante ya 1ue es el mayor nutriente limitante para el crecimiento y uno de los componentes m0s costosos en dietas artificiales.

II.

Revisi%n !e literatura.

II.1 5i$roal a. Tetraselmis suecica @OylinA #utc)er es un alga de la %lase Prasinophyceae 1ue se caracteriza por ser unicelular y mvil. Es de color verde2 de J a . micrones de di0metro2 con una mem!rana celular delgada2 sin cu!ierta de s'lice o car!onato de calcio. 9osee cuatro flagelos isodin0micos. 6a reproduccin vegetativa ocurre por fisin longitudinal de las clulas 1ue adoptan el estado inmvil. En condiciones adversas ocurre formacin de cistos. 6os flagelos nacen de una )endidura apical 1ue se o!serva en la parte anterior de la clula y 1ue est0 u!icada en la misma direccin en 1ue el organismo avanza. Tetraselmis suecica es un alga euri)alina 1ue posee la capacidad de formar esporas y cuyos l'mites de tolerancia a las varia!les f'sicas son amplios. Es comCn o!servarla en aguas costeras y estuarinas. "u cultivo a gran escala es relativamente f0cil2 constituyndose como una !uena fuente de alimento en la acuicultura @#oroKitzEa y #oroKitzEa2 1.B. ) Tetraselmis suecica es una microalga 1ue en cultivos autotrficos puede utilizar diferentes fuentes nitrogenadas tradicionales @urea2 fosfato diamnico2 nitratos2 nitritos2 etc.AF sin em!argo en cultivos )eterotrficos como el ensilado2 puede meta!olizar diversos amino0cidos y vitaminas produciendo cam!ios importantes en su crecimiento y composicin !io1u'mica @;erino compendio personal2 2**BA. 4am!in menciona 1ue Tetraselmis suecica es un alga marina capacitada para sintetizar 0cidos grasos poliinsaturados2 de!ido a su capacidad de meta!olizar y acumular los nutrientes provenientes del e5tracto de ensilado de pescado en condiciones )eterotrficas.

(igura 1. 4etraselmis suecica (uente: (http://marenostrum.or /curiosi!a!es/composicion/in!e".htm# Tetraselmis suecica es un alga euri)alina 1ue posee la capacidad de formar esporas y cuyos l'mites de tolerancia a las varia!les f'sicas son amplios. En los recept0culos empleados para su cultivo en el la!oratorio alcanza densidades mayores a las 2** *** clulas por ml. "u tamaGo la encuadra en la fraccin fitoplanctnica denominada nanoplancton y su principal importancia est0 en 1ue posee las dimensiones 1ue le permite ser consumida por las fases larvales de los !ivalvos filtradores. %onstituye adem0s un alimento adecuado para los micro)er!'voros adultos tanto suspens'voros como sediment'voros @Veneridae2 Mytilidae2 Pectinidae2 etc.A. 6a importancia de los integrantes del nanoplancton como Tetraselmis suecica fue comprendida me8or despus de las e5periencias de %ole @1.-<A2 1uien demostr 1ue las larvas de Ostrea edulis no pueden ingerir part'culas mayores a los 1* micrones2 de lo cual se desprende 1ue los estados larvales de algunos moluscos !ivalvos dependen de este tipo de organismos para su alimentacin y desarrollo. 7na vez 1ue esto fue apreciado en su total dimensin2 varios investigadores simularon las proliferaciones fitoplanctnicas e5plosivas de primavera @"pring !loomsA y crearon en el

la!oratorio las condiciones 1ue favorecen el crecimiento del nanoplancton. As' se pudieron cultivar los organismos 1ue a fines de primavera y a principios de verano constituyen densas colonias en las frtiles y temperadas pozas 1ue se forman en las depresiones de las rocas litorales. &e este nanoplancton litoral2 formado fundamentalmente por Chlorophyceas2 es de donde se )an aislado la mayor'a de las cepas 1ue en la actualidad se emplean para la alimentacin de los estados larvales de los moluscos. 2.2. 5e!io !e $ultivo 6a produccin de microalgas se convierte en un campo muy atractivo para la investigacin en !iotecnolog'a y acuicultura2 posi!ilitando el desarrollo de sistemas de cultivo !a8o condiciones !0sicas 1ue permita su produccin a !a8o costo como una apropiada alternativa para el desarrollo de unidades de cultivo a nivel masivo. En tal sentido2 se )an desarrollado una serie de medios de cultivo2 destacando a1uellos 1ue utilizan agua de mar fertilizada y e5iste las posi!ilidades de realizar cultivos )eterotrficos2 los 1ue segCn #oroKitzEa @1..JA son una !uena alternativa para la produccin intensiva de microalgas. As' mismo2 (a!regas et. al. @1..JA2 destacan 1ue la actual tendencia de realizar cultivos )eterotrficos posi!ilita la utilizacin de diversos amino0cidos y vitaminas de sustancias org0nicas de desec)os o residuos industriales2 produciendo cam!ios importantes en el crecimiento y composicin !io1u'mica de las microalgas. "e )an desarrollado diferentes medios para el cultivo de microalgas 1ue van desde las frmulas para enri1uecer el agua de mar natural2 )asta el uso de medios artificiales 1ue permitan resultados constantes en contraste con los resultados tan varia!les 1ue !rinda el uso del agua de mar natural 1ue entre otros factores depende del lugar donde se colecta sta2 y el tiempo de almacenamiento de la misma.

6os medios artificiales se usan principalmente para fines e5perimentales2 ya 1ue como se )a mencionado2 !rinda resultados constantes2 aun1ue e5isten algunas especies 1ue no crecen en medios artificiales por factores desconocidos 1ue afectan su crecimiento2 las principales frmulas utilizadas van desde el agua de ;iguel2 1ue data de 1.1*2 desarrollada por AllenelsonF el medio de End-"c)erei!er de 1.-+2 )asta frmulas espec'ficas para familias como la frmula del 6a!oratorio ?asEins de ueva QorE para diatomeas2 1.J,F ;att)iesen R 4)orner2 1.<<F >uillard (.2 1.J-F &roop2 1.J,2 1.J.F "c)one2 1.B22 etc. 6as principales formulaciones de los medios de cultivo2 tanto de mantenimiento de cepas como de produccin masiva @minerales2 enri1uecidos y org0nicosA. 9ara la produccin de microalgas a nivel comercial se usa el agua de mar enri1uecida con fertilizantes agr'colas @7rea2 (osfato triple2 Amonio2 etc.A @%)u2 1.+22 y 4amiya2 1.,JF "I"((A2 itrato de 1.<+aA y

tradicionalmente la fertilizacin de estan1ues con a!onos org0nicos2 en cultivos de especies )er!'voras como las carpas. El fitoplancton se desarrolla y multiplica en relacin de las condiciones fisico1u'micas del medio. En trminos generales son los macronutrientes o factores limitantes del crecimiento el car!ono2 itrgeno2 (sforo2 "ilicio2 ;agnesio2 9otasio y %alcio2 1ue se re1uieren en cantidades relativamente grandes2 mientras 1ue los llamados micronutrientes @(ierro2 ;anganeso2 %o!re2 Sinc2 "odio2 ;oli!deno2 %loro y %o!altoA se necesitan en menores cantidades. E5isten otros medios 1ue incluyen en su composicin sustancias org0nicas @vitaminas2 amino0cidosA necesarios para a1uellas especies de microalgas Au5trofas2 es decir 1ue no sintetizan por medio de la fotos'ntesis este tipo de compuestos y resultan factores 1ue pueden limitar su crecimientoF tal es el caso de 9latimonas2 %)rysop)ytas y algunas #acillariop)yceas.

2." San ua:a En la costa peruana se )a desarrollado una prspera industria pes1uera2 orientada a la produccin de )arina y aceite de pescado2 y al enlatado y congelado2 y 1ue representa uno de los ru!ros m0s importantes de la econom'a nacional. "in em!argo2 en los lugares donde se u!ican estas industrias la contaminacin del agua y del aire es un pro!lema2 especialmente en 9aracas @IcaA2 %)im!ote @Ancas)A2 9aita @9iuraA y otros puertos. 6a contaminacin se produce de varias formas: ; El manipuleo del pescado de las lanc)as )acia los centros de transformacin produce aguas de succin cargadas de restos de pescado. ; 6a sanguaza es el resultado de la accin !acterial y la autolisis @auto digestinA de las encimas e5istentes en el estomago del pescado y en lo 1ue este )aya ingerido. Esta reaccin aumenta con la temperatura del pescado almacenado y como resultado2 tanto prote'na como aceite son perdidos en la sanguaza. Es un efluente generado @agua2 sangre y slidos de pescadoA durante el almacenamiento en las pozas y el transporte de la materia prima )acia los cocinadores en las f0!ricas de pescado. "e produce *.*, 4; de sanguaza por cada 4; de pescado crudo. El pro!lema est0 en verter los desec)os directamente al mar o al aire2 sin tratamiento previo2 producindose una so!recarga de restos org0nicos y 1u'micos. /arias zonas del mar aledaGas a los centros industriales manifiestan una alta contaminacin y muerte masiva de organismos marinos @peces y mariscosA. 6a Cnica forma de controlar el pro!lema es tratar los desec)os @sanguaza2 agua de cola y gasesA antes de ser vertidos al mar.

%uadro -. %omposicin 1u'mica de la sanguaza o!tenida del terminal pes1uero 2J de 3ctu!re. %)im!ote. Deter(ina$iones 9rote'nas >rasas ?umedad "ales minerales "lidos totales < <2* +2* .*2*-22 1-22

(uente: la!oratorios 6A%#I "%=62 2**. 2.& A ua !e 5ar ;0s del J* por ciento de la 4ierra est0 ocupado por agua. 9ero el agua de mar no es agua pura2 sino 1ue contiene ciertas cantidades otras materias2 !ien disueltas2 !ien en suspensin. 6a composicin 1u'mica del agua del mar es descrita a menudo en tra!a8os 1ue parecen escritos por al1uimistas 1ue2 de80ndose arrastrar por su imaginacin2 la descri!en compuesta por toneladas de metales preciosos. Es cierto 1ue el mar contiene2 diseminados en el seno de sus aguas2 algunos de esos metales2 pero su e5traccin2 a escala industrial y econmica2 a pesar de los repetidos ensayos )ec)os en muc)os lugares2 no es renta!le. "in em!argo2 si estos metales no son2 por el momento2 aprovec)ados por el )om!re2 la sal 1ue el ocano contiene2 sa!or 1ue pueden apreciar todos los 1ue la prue!an2 )a sido altamente utilizada a travs de la )istoria2 por lo 1ue su valor es infinitamente superior al 1ue podr'an tener los metales. Aun1ue la salinidad y la composicin 1u'mica varia de un mar a otro -lo 1ue comporta cam!ios de densidad as' como otros par0metros f'sicos y 1u'micos- anotamos a1u' la composicin 1u'mica media apro5imada de 1 litro de agua de mar.

%uadro +: %omposicin 1u'mica media apro5imada de 1 litro de agua de mar.

Co(#onente %loruro de sodio %loruro de magnesio "ulfato neutro de sodio %loruro de calcio %loruro de potasio #icar!onato de sodio #romuro de sodio Tcido !rico %loruro de estroncio (luoruro de sodio Agua destilada

Canti!a! 2+2* ,2* +2* 121 *2J *22 *2*.< *2*2< *2*2+ *2**1

=ni!a!es gramos gramos gramos gramos gramos gramos gramos gramos gramos gramos mililitros

@"alinidad apro5imada -+.,H - p? J..-B.-A (uente: la!oratorios 6A%#I "%=62 2**.

2.) Ti#os !e Cultivo 1. %ultivo Est0tico

&esarrollo del cultivo )asta fase de crecimiento e5ponencial y la utilizacin del volumen total del mismo. >eneralmente el uso de estos cultivos es para fines de !ioensayo o !ien para transferencia a volCmenes mayores. 2. %ultivo %ontinuo

&e acuerdo a Ou!itsc)eE @1.J*A2 un cultivo continuo es un sistema de flu8o en el cual las clulas individuales est0n suspendidas en un volumen constante en un estado de e1uili!rio din0mico2 esta!lecido por una remocin de cultivo

y adicin de medio nutritivo por unidad de tiempo con tendencia al infinito. "e )a!la de una diferencia entre un cultivo semicontinuo y un cultivo continuo. Al parecer sto es incorrecto2 ya 1ue la diferencia estri!a en el nCmero de per'odos de remocin del cultivo y adicin del medio nutritivo y en los sistemas continuos este per'odo de remocin y adicin es generalmente autom0tico en aparatos llamados tur!idostatos y Puimiostatos. %uando se re1uiere de grandes cantidades de clulas a intervalos frecuentes para alimentar especies en cultivo @peces2 crust0ceos2 moluscosA2 los cultivos semicontinuos o continuos proveen un gran nCmero con mayor consistencia en forma uniforme y constante. En estos cultivos es importante determinar la concentracin ptima de los nutrientes por unidad de tiempo en relacin a la tasa de dilucin o cosec)a del cultivo. %uando se esta!lece el estadio de e1uili!rio del sistema2 la produccin es m05ima. -. %ultivo ;asivo

"e considera cultivo masivo a a1uellos 1ue se utilizan como alimento vivo de peces crust0ceos y moluscos y cuya produccin es a gran escala en tan1ues u otros recipientes de volumen no controlado. E5isten muc)as alternativas para la produccin de microalgas en cultivo masivo2 desde la utilizacin de tan1ues de pl0stico2 madera2 concreto )asta los estan1ues rCsticos2 as' como la utilizacin de fertilizantes minerales de tipo agr'cola )asta una gran variedad de escretas de ganado como fuentes de nutrientes. En relacin a la utilizacin de luz artificial o natural2 sta depender0 del tipo de infraestructura con 1ue se cuente. El control de la temperatura ser0 necesario en relacin del tipo de microalga en cultivo y de la regin clim0tica en donde se esta!lezca el mismo.

2., Cara$tersti$as #rin$i#ales !e $ultivo >#2? @uente !e $ar4ono? (i$ronutrientesA En cultivos masivos la aireacin es un factor muy importante para la )omogenizacin de los nutrientes y para evitar la sedimentacin de las microalgas. 9or e8emplo: las diatomeas suelen acumularse en lugares donde el agua no se mezcla2 esto tam!in depende de la forma del recipiente de cultivo 1ue cuando no es adecuado retarda el crecimiento. 3tro factor importante es la penetracin de la luz en el cultivoF en los cultivos masivos la profundidad es tan grande 1ue la intensidad de la luz insidente no es suficiente para la fotos'ntesis2 )asta el fondo del tan1ue. En los cultivos masivos a la intemperie la penetracin de la luz es m0s efectiva2 pero se de!e reducir la intensidad de la luz fuerte2 cu!riendo estos estan1ues con una malla. En cultivos a gran escala es recomenda!le la inyeccin de %3 2 @*.,HA para contri!uir al proceso fotosinttico. El crecimiento y la divisin celular son afectados por la intensidad de la luz y el fotoperiodo @)oras de iluminacin y o!scuridadA en relacin tam!in a la temperatura2 por e8emplo en &iatomeas a 2*I% y 12*** lu5 se o!tiene un crecimiento favora!le.

%uadro ,. %aracter'sticas de algunas de las especies de algas unicelulares utilizadas en acuacultura @%oll-;orales.2 1.B-A 4E;9E=A47=A 394I;A

>E E=3

%I%63

&IA;E4=3 ;E&I3

9)aeodactylum @diatomeaA "Eeletonema @diatomeaA &unaliella @cloroficeaA %)lorella @cloroficeaA 4etraselmis @cloroficeaA ;onoc)rysis @crisoficeaA Isoc)rysis @crisoficeaA

1* ) 1-.1 ) 2+ ) J.J ) 1B ) 1,.- ) -*.2 )

2,I% 1BI% 1<I% 2,I% 1BI% 2*:2,I% 2*I%

1*.+U V2*U 1J.BU ,U 1B.+U 1*U 1*.2U

(uente: %oll-;orales @1.B-A. Estas especies se )an utilizado en acuicultura marina dados su valor nutritivo y digesti!ilidad2 adem0s de su capacidad para crecer en cultivos masivos. 6a duracin del ciclo celular como los re1uerimientos de temperatura son suscepti!les de variacin mediante seleccin de variedades. A continuacin se presentan tam!in los principales re1uerimientos de las microalgas para un tener un adecuado crecimiento.

%uadro <. =e1uerimientos principales de los cultivos de microalgas %3;97E"43" P7I;I%3"

=EP7E=I;IE 43"

/A63=E"

('sicos 6uz @lu5A 4emperatura @I%A "alinidad @I/IIA p? =edo5 utritivos % 32 ?

2

22*** : +2*** lu5 1, : 22I% *.-JW J:. %32%332?23 ?+X 393+ "3+ "ales "ales "ales #122 tiamina2 !iotina g/1** ml g/1** ml g/1** ml g/1** ml g/1** ml g/1** ml mg/1** ml Ug/1** ml Ug/1** ml

9 " a2 O2 %a2 ;g (e2 Sn2 ;n2 #2 #r2 "i %u2 %o2 %l2 I2 "r2 =!2 Al2 et /itaminas (uente: Oinne @1.J.A.

En esta ta!la se e5ponen los re1uerimientos principales de los cultivos de microalgas y sus valores apro5imados. En cada caso )a!r0 1ue estudiar los re1uerimientos particulares de la especie y de la variedad 1ue se vaya a cultivar en las condiciones concretas de cultivo 1ue se van a utilizar2 por lo 1ue estos datos son slo orientacin @Oinne2 1.J.A. "e )an )ec)o una gran cantidad de estudios para conocer la composicin de las especies de alimento vivo m0s utilizados en Acuacultura en diferentes condiciones y con diferentes tipos de nutrientes. Estos tra!a8os )an revelado 1ue el contenido nutricional de estas especies est0 en funcin directa de su alimento @(ogg2 1.J,F Yatana!e et al.2 1.JBa2 1.B-F ?irata et al.2 1.B,A. &e acuerdo a lo anterior2 es importante conocer y mane8ar las diferentes tcnicas de cultivo del alimento vivo para esta!lecer las condiciones m0s adecuadas2 1ue permitan el o!tener un alimento de alto contenido nutricional

principalmente ricos en amino0cidos y 0cidos grasos esenciales entre otros nutrientes2 1ue favorezcan el desarrollo y supervivencia de las diferentes especies de crust0ceos2 moluscos y peces 1ue se o!tienen por Acuacultura. %uadro J: %omposicin general de algunas microalgas utilizadas en acuacultura

;I%=3A6>A" Tetraselmis unaliella Monochrysis Chaetoceros !"eletonema Phaeodactylum (uente: (ogg2 1.J,

9=34EI A 1.+2 1.+*..+ 1.12 1.-B *.BB

%A=#3?I&=A43 *.+1 *.B *.,. *.22 *.J. *.<+

>=A"A *.J *.1, *.22 *.21 *.1J *.1J

6a composicin celular reportada2 corresponde a resultados de cultivo en condiciones fisico1u'micas y nutricionales similares para las seis especies @las cantidades de prote'na2 car!o)idratos y grasas est0n e5presadas en relacin a cantidad total de %ar!onoA.

2./ 5o!elo (ate(.ti$o !e o(#ert: #ara la #re!i$$i%n !el $re$i(iento !e 4io(asa en el al a Tetraselmis suecica

1. 7sar softKare "tatistica J.* 2. Aplicar el modelo de >ompertz en cada uno de los con8untos de datos. %alcular los par0metros de regresin e interpretar los par0metros !iolgicos. QA Z a [ e5p @- e5p @! : c [ 4AAA -. Analizar cualitativamente la influencia de la temperatura so!re los

par0metros !iolgicos o!tenidos.

+. &onde: QA Z 6og @ / oA 4A Z 4iempo

A Z a @para calculo de po!lacin m05imaA \ Z @! : 1A/c 7ma5 Z a[c 4> Z 6n@2A/7ma5

III. B=STI6ICACI8N. 7no de los pro!lemas m0s graves en la acuacultura de moluscos2 es el aprovisionamiento de microalgas. En la medida 1ue se desarrollen tcnicas simples para su cultivo masivo2 los pro!lemas de produccin de larvas de moluscos se ver0n disminuidos grandemente. Actualmente en los centros de productores de semilla de moluscos2 las microalgas son cultivadas en forma discontinua. "u produccin se realiza en forma calendarizada2 en donde la vida del cultivo es generalmente corta. 9or otro lado la produccin de !iodiesel a partir del aceite de cultivos de algas va saliendo poco a poco de los la!oratorios para llegar a ser una realidad en plantas industriales. 6as venta8as de esta tecnolog'a parecen contundentes: las algas tienen un alto rendimiento por superficie cultivada2 !a8os costes de produccin y no compiten con productos alimentarios como otros cultivos energticos. Adem0s algunas e5periencias aprovec)an las emisiones de %32 de centrales trmicas o de otro tipo de industrias para el cultivo de las algas2 convirtiendo un pro!lema am!iental en materia prima para la produccin de com!usti!le. El proyecto consiste en el estudio del empleo de un desec)o contaminante @sanguazaA y agua de mar2 como medio de cultivo alternativo para la cintica de crecimiento de !iomasa de la microalga tetraselmis suecica.Este cultivo se encuentra sometido a un monitoreo continuo de los insumos necesarios para

el crecimiento de la microalga tales como: luz2 p?2 temperatura y concentracin de sanguaza. &e!ido a 1ue el medio ideal de cultivo2 el conocido medio >uillard2 resulta muy costoso para la produccin de !iomasa de las microalgas2 en especial tetraselmis suecica optamos por el uso de sanguaza el cual es un desec)o contaminante de las empresas pes1ueras 1ue afecta el mar y el medio am!iente2 muc)as de estas empresas no tratan este desec)o y solo lo arro8an al mar2 es por ello 1ue el empleo de esta materia prima y el agua de mar2 el cual es a!undanteF no demandan mayores costos. 9or otro lado la sanguaza presenta un valor altamente nutritivo de!ido a 1ue contiene prote'nas2 grasas y sales minerales las cuales pueden ser aprovec)adas por la microalga en su alimentacin. uestro tra!a8o pretende adem0s ser una alternativa de solucin para las empresas 1ue eliminan la sanguaza2 present0ndoles a1u' un uso Ctil y f0cilmente aprovec)a!le2 de esta manera nuestro proyecto pretende tam!in incentivar a la preservacin del medio am!iente2 es por ello 1ue este es un tra!a8o ecolgico .4iene por finalidad proponer nuevas alternativas para la produccin y desarrollo de microalgas2 y el uso para el cual son destinadas. En la acuacultura como alimento para la produccin de moluscos y !ivalvos como se menciona anteriormente. A su vez las algas )an reci!ido considera!le atencin como una promesa de gran fuente de petrleo de !iocar!urantes para aliviar la escasez de suministro y los precios elevados de las fuentes tradicionales de materia prima como so8a2 palma2 colza2 grasas animales2 residuos de grasas2 etc. &ado 1ue la materia prima puede contri!uir apro5imadamente el B*H del costo de produccin de !iocom!usti!les2 de mantenimiento de la materia prima de !a8o costo y de f0cil acceso es fundamental para el crecimiento continuo de la industria de los !iocar!urantes. 6as algas se )a demostrado 1ue producen un 2, - 1**D m0s petrleo y 1ue re1uieren muc)o menos agua para crecer por unidad de superficie en comparacin con otros cultivos como los !iocom!usti!les so8a. Adem0s2 la falta de los componentes de los aceites @es decir2 los )idratos de

car!ono y prote'nasA despus de la e5traccin de petrleo pueden ser utilizados para una multitud de efectos - como insumos en la alimentacin animal2 la alimentacin de los peces2 fertilizantes2 colorantes2 etc. o utilizados para producir com!usti!les / energ'a a travs de la fermentacin2 la gasificacin o la digestin anaer!ica. 6as algas consumen los insumos como la luz del sol2 el agua2 %3 2 y nutrientes2 y pueden generalmente ser cultivada en tierras no aptas para otros fines. 6a capacidad de ingerir el %3 2 y producir o5'geno a travs de la fotos'ntesis es particularmente atractivo como un medio para reducir las emisiones de car!ono. I7. PROCLE5A. ]%u0l ser0 el efecto de cuatro proporciones de sanguaza/agua de mar en la cintica de crecimiento de Tetraselmis suecica^ 7. 2IPOTESIS. 6a proporcin sanguaza/agua de mar @,/1**A permitir0 o!tener un mayor valor de velocidad espec'fica de crecimiento @ max = *.*+)2 menor tiempo de generacin @4> Z -* )A2 menor fase lag @ = 50 hA y m05imo crecimiento @A Z *.,A de Tetraselmis suecica. 7I. OCBETI7OS. Evaluar cuatro proporciones de sanguaza/agua de mar @2.,2 ,2 1* y 2* HA en la cintica de crecimiento de Tetraselmis suecica @velocidad espec'fica de crecimiento @max)2 tiempo de generacin @4>A2 fase lag @AA. &eterminar la proporcin m0s adecuada de sanguaza/agua de mar 1ue permitir0 o!tener un mayor valor de velocidad espec'fica de crecimiento @max)2 menor tiempo de generacin @4>A2 menor fase lag @A y m05imo crecimiento @AA de Tetraselmis suecica.

7II. 5ATERIALES Y 5ETODOS /.1 5ATERIAL : 5aterial Ciol% i$o +Do *u(i$o ;icroalga Tetraselmis !uecica. Agua destilada Alco)ol. %loruro de "odio al -* H ?idr5ido de sodio *.1 Acido actico "anguaza %32 y 35igeno 6ugol. 5aterial !e La4oratorio 4ermmetro p?-metro =efrigerador ;icroscopio Electrnico ;atraces /aso de precipitacin #uretas

 9ipetas "oporte universal 6aminas porta y cu!re o!8etos #otellas de vidrio esterilizadas 4u!os de ensayo =e8illa E*ui#os Agitador magntico. Autoclave ;ufla %entrifuga %ompresora Otros: Agu8as Algodn >uantes 1uirCrgicos ;angueras ;ec)ero ;icropipeta

/.2 5ETODOLOGIA /.2.1 Es*ue(a eE#eri(ental

(igura 2. Es1uema e5perimental para la evaluacin del efecto de cuatro proporciones sanguaza/agua de mar en la cintica de crecimiento de Tetraselmis suecica.

6eyenda: %: control con medio >uillard/agua de mar 91: proporcin sanguaza/agua de mar: 2.,/1** 92: proporcin sanguaza/agua de mar: ,/1** 9-: proporcin sanguaza/agua de mar: 1*/1** 9-: proporcin sanguaza/agua de mar: 2*/1** El e5perimento se realizara en el la!oratorio de proyectos agroindustriales de la (acultad de ciencias Agropecuarias de la 7niversidad acional de 4ru8illo.

6a cepa Tetraselmis suecica ser0 o!tenida por intermedio del &r. (ernando ;erino docente de la 7niversidad acional del "anta. 6a sanguaza ser0 o!tenida del terminal pes1uero de %)im!ote2 de!idamente esterilizada en #aGo ;ar'a2 de80ndola sedimentar2 refriger0ndola y usando el so!renadante como medio de cultivo. El agua de mar ser0 previamente filtrada y esterilizada en autoclave2 luego refrigerada y sedimentada para su posterior aprovec)amiento. 7tilizaremos + concentraciones de sanguaza/agua de mar: 2.,H2 ,H2 1*H y 2*H2 un control con agua de mar y medio >uillard sin adicin de sanguaza2 a cada uno le adicionaremos 2,* m6 de inoculo2 todos ellos de!idamente aireados con una compresora a flu8o de aire constante2 sometidos a una intensidad de luz constante @2 fluorescentes grandes de +* lumi5 cada unoA y manteniendo la temperatura constante. &e todos ellos se controlaran: el p? y la temperatura2 y le )aremos - recuentos diarios de cel/m6. para poder medir su crecimiento2 luego de ello y para su posterior evaluacin utilizaremos estos datos en el modelo matem0tico de >ompertz2 o!teniendo de este2 la fase 6ag o fase de adaptacin2 la velocidad espec'fica de crecimiento2 el tiempo de generacin y crecimiento m05imo.

Pre#ara$i%n !e uni!a!es eE#eri(entales Control El control ser0 preparado con agua de mar previamente esterilizada en una !otella de vidrio @12,* m6 de agua de marA para dic)a esterilizacin se utilizara el autoclave por tiempo de .* min. a 1 !ar de presin y 12* I% de temperatura2 seguidamente se agrego 1.2, ml de medio >uillard @1m6/6A y por Cltimo el inoculo @2,* m6A de Tetraselmis suecica2 para ser de!idamente aireado y monitoreado: p?2 temperatura y cel./m6. =ni!a!es eE#eri(entales

%uatro unidades e5perimentales in'ciales previamente esterilizadas y desinfectadas con proporciones de 2.,H2 ,H2 1*H y 2*H de sanguaza/agua de mar2 2,* m6 de inoculo para cada una y no se utilizara medio >uillard.

%uadro .. 9rotocolo E5perimental @Tetraselmis suecicaA

$ontrol San ua:a (mL) A ua !e 5ar (mL) 5e!io Guillar! (mL) * 12,* 1.2,

2.) < $$ -1.2, 121B.J, * 2,*

) < $$ <2., 11BJ., * 2,*

13 < $$ 12, 112, * 2,*

23 < $$ 2,* 1*** * 2,*

ino$ulo>T.Sue$i$aA (mL) 2,* (uente: ela!oracin propia

/.2.2 Dia ra(a !e @lu-o #ara la #ro!u$$i%n !e 4io(asa !e Tetraselmis suecica. 6a produccin de !iomasa de Tetraselmis suecica se realizara de acuerdo al es1uema mostrado a continuacin en la figura -.

(igura -. &iagrama de flu8o de produccin de !iomasa de la microalga Tetraselmis !uecica. 1. Re$e#$i%n !e $e#a 6a microalga Tetraselmis suecica ser0 o!tenida del la!oratorio de %ultivos de Especies Au5iliares de la (acultad de %iencias de la 7niversidad acional del "anta. El cultivo de esta microalga se realiza en !otellas de pl0stico de 1,** ml utilizando agua de mar previamente tratada y enri1uecida con medio f/2 de #uillard !a8o condiciones controladas de iluminacin y aireacin. 2. Pre#ara$i%n !e a ua !e (ar

El agua de mar empleada en el presente tra!a8o ser0 o!tenida de la playa M#uenos AiresN de la ciudad de 4ru8illo2 apro5imadamente se emplearan -* litros de agua de mar. ". Pre#ara$i%n !el ino$ulo Antes de la e8ecucin del proyecto2 el inculo ser0 preparado con agua de mar tratada y medio >uillard f$%2 los cuales se encontraran confinados en matraces de ,** ml con un volumen de cultivo de 2,* ml.2 teniendo una agitacin mec0nica de manera peridica. &. Se!i(enta$i%n !e a ua !e (ar "e de8ara sedimentar el agua de mar por un periodo de 2+ )oras2 !a8o som!ra2 luego se proceder0 a la filtracin. ). 6iltra$i%n !e a ua !e (ar 9ara eliminar las impurezas se utilizara un filtro con una malla de 2 _ de di0metro2 posteriormente de80ndolo reposar por 12 )oras. ,. Esterili:a$i%n !e a ua !e (ar El agua de mar ser0 vertida en !otellas de vidrio previamente esterilizadas y desinfectadas2 luego se proceder0 a la esterilizacin y neutralizacin en una autoclave a 1 !ar de presin2 12* I % de temperatura por .* minutos. Este proceso permitir0 eliminar los microorganismos 1ue pudieran interferir en el crecimiento microalgal. /. Pre#ara$i%n !e san ua:a 6a sanguaza 1ue se utilizara en el presente tra!a8o ser0 de comenzar el e5perimentoA. 0. Esterili:a$i%n !e san ua:a 6a sanguaza ser0 de!idamente esterilizada en !aGo ;ar'a @J* I% durante 2* min.A para eliminar microorganismos 1ue puedan afectar su composicin y acelerar el proceso de degradacin. ad1uirida del terminal pes1uero 2J de octu!re de la cuidad de %)im!ote @+B )oras antes

1. Re@ri era$i%n !e san ua:a 7na vez esterilizada la sanguaza2 esta ser0 refrigerada a una temperatura de *I% para su conservacin y as' evitar su r0pida degradacin. 13. Se!i(enta$i%n !e san ua:a Esterilizada y refrigerada la sanguaza2 por conservarse en un estado de conservacin2 esta se dividir0 en 2 fases de las cuales utilizaremos el so!renadante2 desec)ando el precipitado. 11. Sie(4ra en 4iorrea$tores A este so!renadante se agregara en las proporciones sanguaza/agua indicadas @2.,H2 ,H2 1*H y 2*HA en las !otellas con agua de mar previamente esterilizadas2 luego de ello se agregara el inoculo es decir la microalga Tetraselmis suecica 12. Pro!u$$i%n !e 4io(asa 7na vez agregada la sanguaza y el inoculo en los !iorreactores 1ue contienen el agua de mar controlaremos el crecimiento de Tetraselmis suecica por medio de - recuentos diarios2 lo 1ue nos permitir0 evaluar si nuestro medio est0 siendo aprovec)ado por el alga.

7II.

Ci4lio ra@a

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3 % w/v Solucin Metales Traza Primaria C SO4.5H2O 0.9! %w/v "#SO4.7H2O 2.2 % w/v "#Cl2 $.05 % w/v CoCl2.6H2O $ % w/v %#Cl2.4H2O $! % w/v Na2%#O4.2H2O 0.63 % w/v )uente: @$. "4EI 2 1.J.A

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