UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMON FACULTAD DE BIOQUIMICA Y FARMACIA

EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD GASTROPROTECTORA DE LOS EXTRACTOS DE LLANTN (Plantago major) Y FORMULACION DE UN FITOMEDICAMENTO Pinto D. Jenny, Bustamante G. Zulema Universidad Mayor de San Simn Cochabamba-Bolivia

RESUMEN Plantago major, tambin conocido como llantn, es una planta herbcea que se encuentra principalmente en zonas templadas y clidas de todo Bolivia. Las hojas de esta planta se utilizan Respecto a la situacin de salud en Bolivia, se debe indicar que una de las caractersticas de las sociedades como las nuestras, es que los ndices de salud son alarmantes. econmicos En el presente trabajo se evalu la actividad del extracto acuoso y etanlico del Plantago major a travs de la Prueba de Induccin de Ulcera Gstrica por Etanol Absoluto. accesibles A esto se suma la falta de a las mayoras y con polticas apropiadas y la falta de medicamentos credibilidad por los pobladores, lo que ocasiona que poblaciones de reas rurales y suburbanas no dispongan de medicamentos esenciales para atender sus problemas de salud. SNIS, 1997. (7) Est situacin podra mejorar, si los recursos naturales Los resultados han sido sometidos a un anlisis estadstico, para lo cual se aplic el programa estadstico SPSS con un intervalo de confianza del 95 %, con la finalidad de ofrecer evidencias convincentes de las pruebas, encontrando que tanto una el extracto acuoso como el extracto al Segn Cceres
5,

sta masa poblacional buscara cada vez ms necesidades de salud.

el

recurso de plantas medicinales para satisfacer sus

en forma tradicional como medicina astringente, antiinflamatoria, diurtica y antiulcerognica. Sin embargo esta ltima actividad no ha sido validada cientficamente a travs de pruebas biolgicas en nuestro pas.

que son tan abundantes podran ser aprovechados para la extraccin de frmacos que pueden ser utilizados en la elaboracin de medicamentos de bajo costo y accesibles a las mayoras. la informacin popular y tradicional

etanlico de llantn (500 mg/kg peso) presentan actividad gastroprotectora similar Omeprazol; medicamento patrn.

sobre el uso de plantas medicinales es un acervo cultural celosamente guardado por las generaciones a travs del tiempo. Desde tiempos remotos, las plantas medicinales

As tambin se determin que los compuestos que posiblemente son responsables de la actividad gastroprotectora son los taninos y flavonoides presentes.

tienen un rol muy importante en la vida del hombre, especialmente para los habitantes del rea rural, los cuales conocen su aplicacin. Actualmente existe una tendencia mundial cada vez

I. INTRODUCCIN Se conoce que para el ao 2020 la poblacin mundial habr alcanzado la cifra de 7500 millones de habitantes de los cuales el 75 % vivir en pases en vas de desarrollo que hoy consume menos del 15 % del mercado farmacutico, lo que hace suponer que

mayor para el uso de los

productos naturales,

donde el 25 % de las recetas emitidas en pases desarrollados, llevan el principio activo de alguna planta medicinal. La aplicacin de este tipo de prescripcin mdica va creciendo cada vez ms en los distintos pases de Sudamrica, teniendo en cuenta la bsqueda de nuevas fuentes de recursos renovables,

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para poder reactivar la economa y realizar aportes a las ciencias farmacolgicas. Sin embargo a la luz de los modernos avances en botnica, fitoqumica, farmacologa, farmacognsia, farmacodinamia tradicional y y toxicologa, sobre el las conocimiento propiedades popular

productos se encuentren al alcance de las mayoras disminuidas.(3) En nuestro pas existe un gran nmero de especies vegetales utilizadas con fines medicinales, sobre las que se encuentra el llantn (Plantago major) utilizado desde la antigedad como gastroprotector. No obstante su amplio uso en la medicina tradicional, se han realizado pocos estudios tendentes a comprobar las actividades farmacolgicas atribuidas, y en consecuencia, que orienten a una adecuada utilizacin con fines teraputicos; por lo que es importante apoyar su validacin a travs pruebas cientficas.

medicinales de las plantas deber ser comprobado y validado para garantizar una terapia adecuada, eficaz y con mnimo riesgo de ocasionar efectos secundarios o txicos que puedan resultar peor que la enfermedad.(5) Bolivia presenta una gran biodiversidad de plantas medicinales. Las plantas medicinales contribuyen al fortalecimiento de los programas de salud y tambin a la economa del pas; lo que nos proporciona una serie de desafos y oportunidades para la realizacin de trabajos de investigacin acerca de la flora boliviana lo que nos permitir dar a conocer el potencial de un plantas medicinales; proporcionando as al pas desarrollo cultural, econmico y farmacutico.

2.

MARCO METODOLOGICO

2.1. ENFOQUE O TIPO DE ESTUDIO Por su enfoque este trabajo es de carcter cuantitativo y experimental porque se procede a la manipulacin activa y sistemtica de las variables independientes. Por los fenmenos observados el estudio es de

Por lo que es importante realizar estudios que permitan renovar, rescatar y validar los conocimientos de nuestra flora medicinal boliviana, para su anlisis en lo referente a la informacin sobre el uso, modo de empleo biolgica. En conclusin se puede determinar que los recursos vegetales que no constituyen han sido una lo parte de la biodiversidad, suficientemente y especialmente sobre su composicin qumica; as como tambin sobre su actividad

carcter descriptivo y longitudinal. En el estudio longitudinal de seguimiento se trabaj en condiciones similares y constantes tanto para el grupo control y el grupo de prueba; es decir con lotes de seis ratas Wistar de similar peso, edad y sexo, pertenecientes a cepas del bioterio del Programa de Alimentos de la Facultad de Ciencias y Tecnologa de la UMSS. 2.2. UNIDAD EXPERIMENTAL Para comprobar la accin gastroprotectora del

estudiados, por lo tanto la potencialidad que guardan en su interior es muy grande y antes de correr el riesgo de seguir perdiendo especies promisorias, es importante enfrentar investigaciones que deben comprender desde la localizacin de las especies vegetales medicinales, utilizando la etnobotnica, es decir el estudio de estas plantas en base al uso por las comunidades nativas o por los curanderos, as tambin, es necesario realizar estudios sobre la composicin qumica de estos recursos, siendo el aislamiento de los metabolitos un paso muy importante, as como los mtodos de anlisis que se debe realizar. estos Por otra parte la transformacin de activos en fitomedicamentos Los animales deben ser preparados 24 hrs. antes de la prueba, privndoles de toda alimentacin dejndoles solo con agua ad libitum. y principios Lotes de seis ratas Wistar cuya edad debe fluctuar entre 2 y 3 meses y cuyo peso debe oscilar entre 150 y 200 g. 2.2.1. Grupo Estudio Plantago major se utilizaron como animales de experimentacin a ratas Wistar que renan los siguientes criterios de inclusin.

constituye un proceso importante para que esos

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despus se procedi ha agitar enrgicamente y dejar 2.2.2. Material y Mtodos reposar por 48 horas. 3.4.2. Extracto Acuoso

Todo el material empleado en la realizacin de la tesis; as como los reactivos utilizados se encuentran detallados a continuacin: 2.2.3. Material Vegetal

Se procedi de la misma manera que el extracto etanlico, con la diferencia que el disolvente es solo agua. 3.5. Filtracin de los extractos de llantn Con la ayuda de un papel filtro y un embudo se realiz la filtracin de los extractos obtenidos en la etapa anterior. Este filtrado constituye la solucin del DEL EXTRACTO DE extracto. 3.6. Concentracin del Extracto

En el presente trabajo se utiliz como material vegetal a ser evaluado, hojas de llantn (Plantago major), recolectado al azar de diferentes lugares del Valle Bajo de Cochabamba. 3. PREPARACIN LLANTN 3.1. Cosecha y Recoleccin

Para esto se rota evapor el extracto a presin El material vegetal se recolect de la zona de Villa Moderna de Quillacollo, seleccionando el material sano y cosechando solo la parte que interesa, sea las hojas. 3.2. Lavado y Secado El lavado de las hojas se realiz con abundante agua, procediendo a una desinfeccin con Hipoclorito de sodio a una concentracin de 80 ppm. El secado se realiz a la sombra para mantener sus propiedades qumicas y farmacolgicas. 3.3. Molienda Pmuestra
inicial

reducida y controlando que el bao Maria se encuentre a una temperatura menor o igual a 51 C hasta lograr un extracto de consistencia blanda. Conservar refrigerado el extracto. 3.7. Determinacin de Slidos Totales y Humedad Para la determinacin del porcentaje de slidos totales se procedi a un secado del material hasta peso constante. Pcmuestra seca Pcvacia

S.T. =_________________________x 100 La molienda de las hojas se realiz con la ayuda de un piln en un mortero metlico; luego se coloc el producto resultante de la molienda en un recipiente y se tamiz el material molido. 3.4. Obtencin del Extracto por Maceracin Para el trabajo se prepar un extracto etanlico y un extracto acuoso de acuerdo al procedimiento descrito a continuacin: 3.4.1. Extracto Etanlico pulverizada, se Pcmuestra inicial - Pcmuestra seca Humedad= _________________________ x 100 Pmuestra inicial

Es decir: HUMEDAD = 100 - S. T.

Se peso 10 g de la planta seca y

coloc en un vaso de precipitacin y se aadi 100 cc de etanol: agua (7:3), licuando durante 5 minutos,

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3.8.

EVALUACIN DE ACTIVIDAD GASTROPROTECTORA.

Lote 3 (problema), tratado con el extracto de la planta objeto de estudio; en nuestro trabajo con extracto de llantn a una concentracin de 500 mg/kg peso. (Fig.1) Los productos se administraron va oral media hora antes de la administracin del agente necrosante, en

Para la determinacin de la actividad gastroprotectora se sigui el mtodo recomendado por el CYTED (1981). 3.8.1 Ulcera Gstrica Aguda Inducida por Etanol Absoluto Material Biolgico. Se utilizaron ratas Wistar, cepa Novergicus rattus de 175 200 g de peso. Los animales se mantuvieron en ayunas durante 24 horas antes de comenzar la experiencia, dejndolos nicamente con agua ad libitum. Agente Ulcerognico. por animal. Previamente a esta dosificacin se procedi a estandarizar la cantidad de agente necrosante administrarse, probndose dosis de 1,5 y 2 cc. Sin embargo dichas dosis resultaron muy altas, ya que produjeron la muerte de los animales de experimentacin. Preparacin del Patrn. Se disolvi en agua Para la produccin de

una proporcin de 1 ml/ 200 g de peso de animal, tal como reporta la fase de estandarizacin. Transcurrida una hora de la administracin del etanol, los animales fueron sacrificados por asfixia con cloroformo, e inmediatamente se les efectu la laparotoma de media Fig. 2. Laparotoma abdominal abdominal, extrayndose el estmago que fue abierto por la curvatura mayor, lavndose cuidadosamente con una corriente suave de agua. Se extendieron los estmagos sobre una tabla de plastoformo mediante alfileres. La severidad de las lesiones gstricas se analiz por observacin al microscopio estereoscopio, procedindose a su valoracin, midiendo el tamao de las lesiones en milmetros; as como contando el nmero de los la en lnea

lceras se utiliza etanol absoluto a la dosis de 1ml

el tercio anterior

destilada la cantidad necesaria de omeprazol para administrar una dosis de 20 mg /kg. Como parte de la estandarizacin se utiliz

mismos en cada caso (Fig. 2 y 3)

inicialmente como vehculo agar, no encontrndose un buen resultado por lo que se procedi a cambiar por otro vehculo como es el agua destilada, con el que se encontr un mejor resultado. Descripcin de la Tcnica. forma: Lote 1 tratado nicamente con el Los resultados se expresaron en porcentaje de inhibicin respecto al ndice de ulceracin del lote control. agua destilada. Lote 2 ( patrn), tratado con el omeprazol. medicamento, vehculo, Fig. 3 Lesiones gstricas en extendido de de estmago. (control), El material biolgico

se distribuye en lotes de 6 animales de la siguiente

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3.9.

FORMULACION FITOMEDICAMENTO

DE

UN 1. bajo la forma Los resultados del porcentaje de actividad gastroprotectora para el extracto acuoso de llantn en relacin al nmero de lesiones producidas por el agente necrosante es de 64,63 % y el porcentaje de actividad gastroprotectora para el extracto etanlico

Se

elabor

un

fitomedicamento

farmacutica de jarabe a partir del extracto etanlico de llantn (500 mg/kg). 3.10. EVALUACION DE LA ACTIVIDAD

de las mismas es de

92,34 %.

Con

GASTROPROTECTORA DEL FITOMEDICAMENTO Se procedi de la misma forma que para el extracto puro, a partir del mtodo recomendado por el CYTED (1981). 3.11. EVALUACIN FITOQUMICA Para determinar la presencia de metabolitos

respecto al grado de lesiones el porcentaje de actividad para el extracto acuoso es de 90,72 % y para el extracto etanlico es de por el lesiones con 98,00 %. Lo que nos permite concluir que ambos extractos tanto nmero como por el grado de producidas, al no presentan control,

diferencias estadsticamente significativas respecto medicamento secundarios en los extractos utilizadas se sigui el mtodo recomendado por Olga de Look. 3.12. ANLISIS ESTADSTICO Todos los datos se presentaron por la media - DS. Adems los resultados fueron sometidos a un programa estadstico SPSS con un intervalo de confianza del 95 % y a un test de comparacin a travs de pruebas no paramtricas de Kruskal Wallis. 4. RESULTADOS 1. Se procedi a la estandarizacin de la Tcnica Programa de Ulcera Gstrica Inducida por de Frmacos, Alimentos y Etanol absoluto, en el Laboratorio del Cosmticos de la Facultad de Bioqumica y Farmacia. En primer lugar se procedi a la seleccin del vehculo ms adecuado, probndose primero con agar agar; sin embargo los resultados no fueron los esperados, experimentndose posteriormente con agua destilada, que resulto ser el vehculo ideal. Despus se procedi a la eleccin de la dosis ptima del agente necrosante ha administrarse, etanol absoluto, Grafica No 2. Porcentaje de Actividad Gastroprotectora por Grado de Lesiones. encontrndose la dosis de 1ml por 200 g peso de la rata; ya que dosis mayores (1,5 ml) provocaron la muerte del animal de experimentacin.
Grado de lesin (mm) 120 100 80 60 40 20 0
0. 0 0. 0 +

omeprazol. (Grfica N 1 y 2

Nro de lesiones 120 100 80 60 40 20 0

0. 0 0. 0 95. 87. 4 7 64. 67. 7 6 100. 92. 0 3

Blanc o

Omeprazo l (Control )

Media

Extract o acuoso de Llante n

Extract o etanlico deLlante n

Mediana

Grafica N 1. Porcentaje de Actividad Gastroprotectora por N de Lesiones.

96. 98. 6 8

90. 90. 7 6

98. 100. 0 0

Blanc o

Omeprazo l (Control )

Extract o acuoso de Llante n

Extract o etanlico deLlante n

Media Mediana

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2.

En cuanto al porcentaje de actividad segn el nmero y el grado de lesiones ocasionadas en las ratas objeto de estudio; se observo que ambos extractos, acuoso y etanlico, no presentan diferencias significativas con respecto al medicamento control, omeprazol; es decir que ambos extractos tienen similar una al actividad mencionado gastroprotectora No. 1

as como al screening fitoqumico por fraccionamiento; los componentes presentes en las hojas de llantn son taninos, actividad flavonoides, saponinas son y los alcaloides. taninos y JARABE DE LLANTEN Presumindose que los metabolitos responsable de la gastroprotectora BLANCO

PARMETROS ESTADISTICOS

EXTRACTO ETANOLICO DE LLANTEN

medicamento, principio activo puro. Cuadro

MEDIA MEDIANA

-0.0308 +10.794 - 1.5697 sup. 11.3589Lmite inf.

87.6885 +21.5890 95.3832 110.3448 Lmite sup. 65.0322 Lmite inf. 466.086

92.6131 +12.0391 100.00 107.5617 Lmite sup. 77.6645 Lmite inf. 144.941

Tratamiento % Actividad N lesiones Omeprazol E. Acuoso E. Etanlico Total % Actividad Omeprazol E. Acuoso E. Etanlico Total Grado lesiones

N 6 6 6 18 6 6 6 18

Rango Promedio 10.08 7.00 11.42 10.17 6.75 11.58

INTERVALO DE 11.2974 Lmite CONFIANZA

VARIANZA flavonoides. 5.. El

116.521

fitomedicamento

formulado

presenta

estadsticamente la misma actividad gastroprotectora que el extracto etanlico puro.

a,b Estadsticos de contraste

Chi-cuadrado gl Sig. asintt.

% de Actividad nro de lesiones 2.502 2 .286

% de Actividad grado de lesiones 2.974 2 .226

5. CONCLUSIONES Con este trabajo se logr estandarizar la tcnica de experimentacin (llantn) en animales por la de laboratorio, tradicional determinndose que las hojas de Plantago major utilizados medicina presentan muy buena actividad gastroprotectora. 6. AGRADECIMIENTOS Agradecemos al Programa de Frmacos, Alimentos y Cosmticos de la Facultad de Bioqumica y Farmacia de la Universidad Mayor de San Simn por el apoyo tcnico recibido durante el desarrollo del presente trabajo. 7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. Atal CK, Kapur BM. Cultivos y Utilizacin de

a. Prueba de Kruskal-Wallis b. Variable de agrupacin: MUESTRA

Cuadro N. 1. Prueba No Parametrica de Kruskal Wallis. 4. Con respecto a la marcha fitoqumica preliminar, METABOLITO FLAVONOIDES TANINOS REACCIN SHINODA GELATINA CLORURO FRRICO SAPONINAS ALCALOIDES INDICE DE ESPUMA MAYER DRAGUENDORF + + + RESULTADO ++ ++ ++

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