Ao de la Unin Nacional frente la crisis externa

UNIVERSIDAD NACIONAL JOS FAUSTINO SNCHEZ CARRIN

INFORME DE PRCTICA N 1 ACCIN DE SOLUCIONES BUFFER IN VITRO

INDICE INTRODUCCION.........3 OBJETIVOS.........4 MARCO TEORICO...5 DISEO METODOLOGICO...9 RESULTADOS.......10 CONCLUSIONES...12 ANEXOS..13 BIBLIOGRAFIA.........30

I.

II.

III.

IV.

V.

VI.

VII.

VIII.

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.- INTRODUCCIN
El control del pH de los lquidos corporales se lleva a cabo principalmente en los pulmones y en los riones. Estos rganos eliminan el exceso de H+ ,que es un producto intermediario obligado en el metabolismo. La mayora de los procesos biolgicos son dependientes del pH; un pequeo cambio en el pH produce un gran cambio en la velocidad del proceso .Los diferentes organismos mantiene un pH especifico y constante, que conserva a las biomoleculas en su estado inico optimo, normalmente cerca de pH 7. El pH se mantiene constante principalmente gracias a sistemas amortiguadores o tampones biolgicos que son mezcla de cidos dbiles y de sus bases conjugadas. Para verificar el comportamiento de los sistemas buffer o tampn, llevamos a cabo experimentos en el laboratorio para demostrar in vitro la accin amortiguadora de la solucin buffer fosfato. Loa sistemas tampn proporcionan la primera lnea de defensa del organismo contra los cambios de pH interno, por lo tanto se comprobara la resistencia de una solucin amortiguadora (in vitro) cuando se agreguen determinadas cantidades de acido o base. De esta manera damos a conocer las propiedades de regulacin de pH de los sistemas amortiguadores que logramos observar en el proceso de experimentacin, frente a la adicin de soluciones de pH cidos y bsicos

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II.- OBJETIVOS

Demostrar la accin amortiguadora del sistema buffer fosfato in Vitro.

Demostrar la importancia de la ecuacin de Henderson-Hasselbalch para los clculos matemticos en la determinacin del PH de una solucin buffer amortiguadora, as como las relaciones entre las concentraciones del cido o base. Calcular la cantidad de cido que puede amortiguar el buffer fosfato a una determinada concentracin antes de cambiar su pH; mediante la tcnica de Titulacin y el uso del indicador, anaranjado de metilo.

III. MARCO TEORICO

El producto inico del agua, kw, constituye la base de la escala de pH. El pH constituye una forma conveniente de designar la concentracin de H+ (y por consiguiente de OH-) en cualquier solucin acuosa entre 0.1m de H+ y 0.1 m de OH- . El trmino pH se define mediante la expresin: (1) pH= -Log [H+]
(1)

(2)

Son cidos o bases fuertes los que al disociarse lo hacen de forma total. Ejemplo:

Clorhdrico, sulfrico, en el caso de los cidos (2) HCl -------------> Cl- + H+ H2SO4 -------------> SO42- + 2H+ UNJFSC FMH EAP MH III- Ciclo 3

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Sosa y potasa en el caso de las bases (2) NaOH ----------> Na+ + OHKOH ----------> K+ + OH2.2 Los cidos y bases dbiles se disocian de modo parcial. El actico y el carbnico, respecto a los cidos dbiles HCH3COO <---------------> CH3COO- + H+ H2CO3 <---------------> HCO3- + H+ El hidrxido de amonio, respecto a las bases dbiles NH4OH <---------------> NH3+ + OH(2) (2) (2)

Ejemplo:

El pH de los medios biolgicos es una constante fundamental para el mantenimiento de los procesos vitales. La accin enzimtica y las transformaciones qumicas de las clulas se realizan dentro de unos estrictos mrgenes de pH. En humanos los valores extremos compatibles con la vida y con el mantenimiento de funciones vitales oscilan entre 6,8 y 7,8; siendo el estrecho margen de 7,35 a 7,45 el de normalidad. Tambin en el trabajo de laboratorio, es imprescindible el mantenimiento de un pH para la realizacin de muchas reacciones qumico-biolgicas. Los sistemas encargados de evitar grandes variaciones del valor de pH son los denominados amortiguadores, buffer, o tampones. Son por lo general soluciones de cidos dbiles y de sus bases conjugadas o de bases dbiles y sus cidos conjugados. Los amortiguadores resisten tanto a la adicin de cidos como de bases. (3) En el caso de la disociacin de un acido dbil de la forma HA en H+ y A-, la ecuacin de Henderson-Hasselbalch puede deducirse de la forma siguiente: (4) Ka = Despejando primero [H+]: [H+] = Ka. [HA] [A-] Tomando logaritmo negativo en ambos miembros: -Log [H+] = -Log Ka - [HA] [A-] Sustituyendo -Log [H+] por pH y -Log Ka por pKa: pH = pKa - [HA] [A-] Invirtiendo ahora Log [HA]/ [A-], lo que implica cambiar su signo, se obtiene la ecuacin de Henderson-Hasselbalch: (4) [H+][A-] [HA]

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pH = pKa + Log [A-] [AH] Que se enuncia de forma ms general: pH = pKa + Log [aceptor de protones] (4) [dador de protones]

Esta ecuacin se ajusta a la curva de titulacin de todos los cidos dbiles y nos permite deducir una serie de relaciones cuantitativas importantes.
(4)

Los aminocidos y protenas son electrolitos anfteros, es decir, pueden tanto ceder protones (cidos) como captarlos (bases) y, a un determinado pH (en su pI), tener ambos comportamientos al mismo tiempo. La carga depende del pH del medio. En un medio muy bsico se cargan negativamente, mientras que en el fuertemente cido lo hacen positivamente. Desde el punto de vista fisiolgico este tipo de amortiguador es resulta de especial inters a nivel tisular. (5) El tampn hemoglobina es un tampn fisiolgico muy eficiente debido tanto al cambio de pK que experimenta al pasar de la forma oxidada a la reducida, como a la gran abundancia de esta protena en la sangre (15 % del volumen total sanguneo). La oxihemoglobina (pK= 7,16) es un cido ms fuerte que la desoxihemoglobina (pK= 7,71). Los valores de pK son tales que determinan que en la disociacin siguiente, el valor x sea, aproximadamente, 0,7. (5) HbH+x + O2 HbO2 + xH+ Esta propiedad de la hemoglobina, de cambiar su valor de pK, demuestra el efecto tampn, permite el transporte de una determinada cantidad de CO 2 liberada en los tejidos. La hemoglobina oxigenada que llega a los tejidos se disocia liberando O2, un proceso que est favorecido por el estado de los tejidos (baja pO2, menor pH y alta pCO2). (5) 0,7H+ + HbO2 HbH+0,7 + O2 El tampn acido carbnico /bicarbonato est constituido por H2CO3 y HCO3-. Aunque su valor de pK (6,1) est algo alejado del pH fisiolgico de la sangre (7,4), es un sistema muy eficaz debido a que: 1) La relacin HCO3-/ H2CO3 es muy alta (20/1), lo que le proporciona una alta capacidad tampn frente a los cidos; 2) es un sistema abierto, con lo que el exceso de CO 2 puede ser eliminado por ventilacin pulmonar de manera rpida; y 3) adems, el HCO3puede ser eliminado por los riones mediante un sistema de intercambio con solutos. (5) Respecto al origen y formacin de este sistema carbnico/bicarbonato, resaltaremos lo siguiente: En el plasma el CO2, procedente del metabolismo celular, se encuentra como:

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Bioqumica Mdica -CO2 disuelto, que segn la ley de Henry es directamente proporcional a la presin parcial del gas (PCO2) -HCO3-, que es la fraccin ms importante, y -Formando compuestos carbamnicos con los grupos NH2 de la hemoglobina. Alrededor del 10% es transportado en el eritrocito en forma de carbaminohemoglobina. El CO2 disuelto es hidratado a H2CO3 en una reaccin reversible y muy eficiente catalizada por la anhidrasa carbnica: (5) CO2 + H2O H2CO3 H2CO3 HCO3- + H+ _______________________________ CO2 + H2O HCO3- + H+ En este sistema acoplado, todo el CO2 disuelto es considerado como la forma cida del tampn (H2CO3). La concentracin de CO2 disuelto (CO2d) depender de su constante de solubilidad y de la presin parcial de CO2. (5) K solubilidad = 3 x 10-5 M. mm Hg-1. As pues CO2d = (3 x 10-5) . PCO2 Aplicando la ecuacin de Henderson-Hasselbalch al tampn bicarbonato: pH = pK + log HCO3-/ CO2d pH = 6,1 + log HCO3- / (3 x 10-5) . PCO2 El contenido total de CO2 sera igual al CO2 disuelto ms el HCO3-, esto es: CO2 Total = CO2 d + HCO3Este contenido total de CO2 de una muestra de plasma se determina a partir de la medida del volumen de CO2 liberado por acidificacin con un cido fuerte. Lo que ocurre al aadir cido es que desplazamos el equilibrio de disociacin hacia la izquierda, y al ser el sistema bicarbonato un sistema abierto, el CO 2 formado se desprende en forma de gas. Dado que el CO 2 es un gas no ideal, 1 mmol ocupa 22,26 ml en condiciones estndar de presin y temperatura (0C y 760 mmHg 101,33 kPa). La temperatura en el laboratorio suele ser de 22C y la presin atmosfrica de 750 mmHg (100 kPa), por lo que corrigiendo para las condiciones estndar tendremos: (5) VCO2 x 750/760 x 273/275 = ml CO2 en condiciones estndar. ml CO2 en condiciones estndar/22,26 = mmol CO2. Teniendo en cuenta estas consideraciones, la ecuacin de HendersonHasselbalch para el tampn bicarbonato se puede escribir de la siguiente forma: pH = 6,1 + log ( HCO3-/ 0,0301 x pCO2)

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En donde 0,0301 hace referencia a los moles de CO2 disuelto por litro de plasma y por mm de Hg. (5) A pH fisiolgico, las especies del fosfato con capacidad de tamponar son H2PO4- y HPO42- ya que su valor de pK es de 6,8. As pues, para el tampn fosfato: (5) pH = 6,8 + log HPO42- / H2PO4A pH fisiolgico de 7,4, la concentracin de HPO42- (un 80%) es 4 veces superior a la de H2PO4- (un 20%). As pues, el tampn fosfato es un sistema muy eficaz para amortiguar cidos. La concentracin de fosfato en la sangre es baja (2 mEq/L) por lo que tiene escasa capacidad de tamponar si lo comparamos con otros tampones (ejemplo el bicarbonato). En cambio, a nivel intracelular, las concentraciones de fosfato son elevadas lo que le convierte en un tampn eficiente. Las grandes cantidades de fosfato dentro de las clulas corporales y en el hueso hacen que el fosfato sea un depsito grande y eficaz para amortiguar el pH. (5)

(1) (4)

Nelson D. Cox M. Lehninger Principios de Bioqumica.cuarta edicin. Editorial ediciones omega.2006 Edicin en espaol de la edicin original en ingls por W.H Freeman and company, New York.2005
(2) (3) (5)

I. Tnez. A. Galvn. E. Fernndez. pH y amortiguadores: Tampones fisiolgicos. Crdoba.2006 Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, 1Facultad de Medicina, Avda. Menndez Pidal s/n, 14004-Crdoba, 2 Campus Universitario de Rabanales, Edificio Severo Ochoa, 14071-Crdoba

IV.- DISEO METODOLGICO

La demostracin in Vitro de la accin amortiguadora del buffer fosfato se llev a cabo en los laboratorios de la Facultad de Bromatologa de la ciudad universitaria Jos Faustino Snchez Carrin. En el trabajo de laboratorio se realizo un estudio de tipo experimental, ya que el objetivo trazado est sujeto a la observacin, verificacin y posible modificacin por parte del estudiante. En la metodologa usada para la elaboracin de la solucin buffer se utiliza el mtodo clculo terico matemtico y para demostrar el poder amortiguador en

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Bioqumica Mdica la solucin buffer, se emplea el mtodo de titulacin usando el indicador de fenolftalena y el anaranjado de metilo. Cuadro N01

Erlenmeyer/reactivo HOH destilada (ml) Buffer fosfato 0,1M Buffer fosfato 0,2M Anaranjado de metilo 1% Fenoltaleina 1% Titular con HCl 0,1M Titular con NaOH 0,1M

1 5,0 . 3gts . Erl 1 .

2 .. 5,0 . 3gts . Erl 2 ..

3 .. .. 5,0 3gts Erl 3 .

4 5,0 3gts

Erl 4

V.- RESULTADOS Y DISCUSIN

Preparacin de solucin amortiguadora En la preparacin de las soluciones de sistemas buffer se obtuvo los siguientes resultados descritos a continuacin:

Cuadro N02 Volumen 100ml 100ml Peso Molecular Base=156.01 Acido=142.07 Base=156.01 Acido=142.07 Masa Base=0.53986 g. Acido=0.967 g. Base=1.0868 g. Acido=1.9267 g.

Buffer Fosfato 0.1M Buffer Fosfato 0.2M

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Titulacin con HCl al 0.1M Al realizar la titulacin con la solucin de HCl al 0.1M se pudo detallar su gasto por cada matraz los cuales se muestran en el cuadro siguiente:

Cuadro N03 Matraz Gasto de HCl 0.1M Matraz 1 3ml Matraz 2 6.8ml Matraz 3 11ml

En el matraz 1 observamos que el gasto de HCl a 0.1M era de 3 ml, puesto que el agua destilada pura no acta como un buffer o tampn; el cambio de color de esta solucin se da, ya que al utilizar el anaranjado de metilo 1%(indicador de PH alcalino) y al pasar de una solucin neutra a una acida se va a cambiar de un color anaranjado a un color rojizo de manera inmediata. En el matraz 2 y en le matraz 3observamos que los gastos respectivos son de 6.8 ml y 11ml respectivamente lo cual indica que los dos poseen propiedades buffer, pero de acuerdo a sus concentraciones es que van a variar su poder amortiguador. Con respecto al cambio de color se utilizo el mismo indicador (anaranjado de metilo) pero el buffer fosfato de 0.2M demoro mas tiempo para pasar aun color rojizo, puesto que su poder amortiguador es mayor que del primero; luego ambas soluciones se vuelven acidas.

Titulacin con NaOH al 0.1M Al efectuar la titulacin con la solucin de NaOH al 0.1M se pudo detallar el gasto por un matraz el cual se muestra :

Cuadro N04 Matraz Gasto de NaOH 0.1M Matraz 4 1.5 ml

En el matraz 4 se observo que el gasto de NaOH a 0.1M era de 1.5 ml, ya que el agua destilada pura que se encuentra a un pH neutro no posee propiedades amortiguadoras (buffer); la solucin cambia inmediatamente de un tono incoloro a un tono rosado, ya que se utilizo la fenolftalena 1%(indicador de pH acido).

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VI.- CONCLUSION
En base a la prctica se demostr la capacidad amortiguadora de las soluciones buffer fosfato IN VITRO al comprobar, que al titular con el cido, el gasto de titulacin fue mayor en las sustancias tampones de mayor molaridad. La ecuacin de Henderson-Hasselbalch sirvi para determinar las concentraciones del cido y la base para as poder calcular la cantidad en gramos de las sales de fosfato monobsico y dibsico. Se calcul que para las sustancias buffer fosfato 0.1M el gasto de titulacin con sustancia acida es 6.8 ml; mientras que para la sustancia buffer fosfato 0.2 M se titulo con 11 ml de acido; demostrndose que a mayor concentracin de una solucin buffer amortiguadora se necesitar mayor cantidad de cido; existiendo correlacin entre una mayor concentracin le corresponde un aumento en la donacin de protones.

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VII.- ANEXOS
CLCULOS MATEMTICOS:

1. PREPARACION DE LA SOLUCION AMORTIGUADORA BUFFER FOSTATO Preparar 100ml de una solucin buffer fosfato 0.1 M de pH 7.0, usando las sales fosfato monobsica y bibsica, teniendo como referencia el valor de: pKa= 7.21 Clculos: Datos: A.- NaH2PO4.2HOH (M0 156.01 g/mol) B.- Na2HPO4 (M= 142.07g/mol) -Molaridad del buffer: 0,1 M NaH2PO4.2HOH (sal monobsica) y Na2HPO4 (sal dibsica) Donde: A + B = 0,1 A = 0,1 B

Utilizando la ecuacin de HENDERSON HASENBALCH pH = pKa + log B/A = 7.21 + log B/A -log B/A = 0.21

Resultado del anti log: 0,62 = B/A Por lo tanto Reemplazando en: B = 0,62

B = 0,1 - A

0,62 A = 0,1 - A 0,62 + A = 0,1 1,62 A = 0,1 A = 0,0062 M B = 0,1 -0,0062 B = 0,038 M

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Cunto de acido debemos pesar y cuanto de base, si quirenos preparar 100 ml de cada una de las soluciones?

156, 01 g-------------1000ml-------------1, 0 M x g ------------1000ml-----------0,062 M x = 9.67 g/ 1000 ml 9, 67 ------------1000 ml ----------0.0062 M X -------------100 ml ----------0.0062 M

x = 0.967 g NaH2PO4.2HOH

142.07 g ------------1000 ml-----------1.0 M X ------------1000 ml---------0.038 M X = 5.398 g /1000 ml 5.398 g------------1000 ml----------0,038 M X --------------100 ml ----------0,038 M

X = 0.5398 g Na2HPO4 Preparar 100ml de una solucin buffer fosfato 0.2 M de pH 7.0, usando las sales fosfato monobsica y bibsica, teniendo como referencia el valor de: pKa= 7.21 Clculos: Datos: A. - NaH2PO4.2HOH (M0 156.01 g/mol) B.- Na2HPO4 (M= 142.07g/mol) -Molaridad del buffer: 0.2 M NaH2PO4.2HOH (sal monobsica) y Na2HPO4 (sal dibsica) Donde: A + B = 0.2 A = 0.2 B

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Utilizando la ecuacin de HENDERSON HASENBALCH pH = pKa + log B/A 7 = 7.21 + log B/A -log B/A = 0.21 Resultado del anti log: 0,62 = B/A Por lo tanto Reemplazando en: B = 0,62

B = 0.2 - A

0,62 A = 0.2 - A 0,62 + A = 0.2 1,62 A = 0.2 A = 0.12 M B = 0.2 0.12 B = 0.08 M Cunto de acido debemos pesar y cuanto de base, si quirenos preparar 100 ml de cada una de las soluciones?

156, 01 g-------------1000ml-------------2.0 M x g ------------1000ml-------------0.12M x = 9.36 g/ 1000 ml 9.36 -------------1000 ml ---------- 0.12 M X -------------100 ml ----------- 0.12 M

X = .936 g NaH2PO4.2HOH

142.07 g ------------1000 ml-----------2.0 M X ------------1000 ml--------- 0.08 M X = 5.68 g /1000 ml 5.68 g------------1000 ml---------- 0.08 M X --------------100 ml ----------0.08 M X = 0.568 g Na2HPO4

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CUESTIONARIO
1.- Mediante formulas calcule la ecuacin de Henderson - Hasselbalch ECUACIN DE HENDERSON-HASSELBACH

En el caso de la disociacin de un acido dbil de la forma HA en H+ y A-, la ecuacin de Henderson-Hasselbalch puede deducirse de la forma siguiente: Ka = Despejando primero [H+]: [H+] = Ka. [HA] [A-] Tomando logaritmo negativo en ambos miembros: -Log [H+] = -Log Ka - [HA] [A-] Sustituyendo -Log [H+] por pH y -Log Ka por pKa: pH = pKa - [HA] [A-] Invirtiendo ahora Log [HA]/ [A-], lo que implica cambiar su signo, se obtiene la ecuacin de Henderson-Hasselbalch: pH = pKa + Log [A-] [AH] Que se enuncia de forma ms general: pH = pKa + Log [aceptor de protones] [dador de protones] [H+] [A-] [HA]

Esta ecuacin se ajusta a la curva de titulacin de todos los cidos dbiles y nos permite deducir una serie de relaciones cuantitativas importantes.

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APLICACIN DE LA ECUACIN DE HENDERSON-HASSELBACH El pH de una mezcla amortiguadora se puede conocer mediante la ecuacin de Henderson-Hasselbalch. En la disociacin del cido actico:

La constante de equilibrio es:

Si tomamos logaritmos:

Y cambiando de signos:

O lo que es lo mismo:

Y reordenando,

Que es la frmula conocida como la ecuacin de Henderson-Hasselbalch. Teniendo en cuenta que el cido actico es muy dbil y, por tanto, el equilibrio de disociacin est casi totalmente desplazado hacia la izquierda (desplazamiento favorecido por la presencia de cantidades notables de acetato) podremos sustituir en la ecuacin de Henderson-Hasselbalch, sin introducir errores, la concentracin de actico libre por la de actico total ([AcH]=[cido]).

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Bioqumica Mdica Anlogamente, como el acetato sdico est completamente disociado podemos considerar que la concentracin del in acetato coincide con la concentracin de sal ([Ac-]=[sal]). Con estas modificaciones podemos expresar la ecuacin de HendersonHasselbalch de una forma vlida para todos los amortiguadores (no slo para el actico/acetato):

2.- Mediante clculos matemticos calcule el valor del pH de la sangre partir de la ecuacin de Henderson - Hasselbalch .si la concentracin normal de bicarbonato en el plasma es 24 mmol/l , asimismo considere valor del pK del sistema bicarbonato/ CO2 a 37C es de 6.1 La concentracin real de cido carbnico en el plasma es tan pequea que la podemos ignorar. La concentracin de CO2 disuelto en el plasma es proporcional a su presin parcial por la constante de solubilidad del CO 2 en el agua, que a 37C tiene un valor de 0.03, expresndola en mmHg y la pCO2 arterial normal es de 40 mmHg.

3.-Sistemas buffer en el organismo humano mecanismo de accin Los tres tampones principales del organismo son el bicarbonato, el fosfato y las protenas. Cada uno de ellos realiza importantes funciones tampn en diferentes situaciones. 3.1. El tampn bicarbonato El sistema del bicarbonato no es un tampn muy poderoso por dos motivos. En primer lugar, el pH del lquido extracelular es de 7.4, mientras que el pK del bicarbonato es de 6.1. Esto significa que hay aproximadamente 20 veces ms in bicarbonato que anhdrido carbnico disuelto. Por este motivo, el sistema funciona en una porcin de su curva de tamponamiento poco eficaz. En segundo lugar, las concentraciones de anhdrido carbnico y de bicarbonato no son muy altas. A pesar de esto, es el tampn ms importante del organismo, porque sus dos componentes fundamentales pueden ser estrechamente regulados, el anhdrido carbnico, por los pulmones, y el bicarbonato por los riones. En consecuencia, el pH de la sangre puede ser modificado por estos sistemas reguladores.

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Bioqumica Mdica Un sistema tampn bicarbonato tpico consiste en Una mezcla de cido carbnico (H2CO3) y bicarbonato sdico (NaHCO3) en la misma solucin. Hay que sealar que el cido carbnico es un cido dbil, por lo que su capacidad de disociarse en iones hidrgeno y bicarbonato es poco importante en comparacin con la de otros muchos cidos. 3.2. El tampn fosfato El tampn fosfato acta de forma muy similar al bicarbonato, pero sus elementos fundamentales son el H2PO4- y el HPO4-. Cuando se aade un cido fuerte a la mezcla de estas dos sustancias, tiene lugar la siguiente reaccin: HCl + Na2HPO4 ------ NaH2PO4 + NaCl El resultado neto es que el acido clorhdrico desaparece, formndose en su lugar fosfato monosdico. Este fosfato monosdico es un cido dbil, produciendo slo pequeas variaciones del pH. Por el contrario, cuando se aade una base fuerte como el hidrxido sdico, la reaccin que ocurre es la siguiente: NaOH + NaH2PO4 ------ NaH2PO4 + H20 En ella, el hidrxido sdico se descompone para formar agua y fosfato disdico. Es decir, una base fuerte es sustituida por una base dbil, modificando discretamente el pH hacia la alcalosis. El tampn fosfato tiene un pK de 6.8, que no est muy lejos del pH de 7.4 de los lquidos orgnicos; esto permite al sistema operar cerca de su mximo poder tampn. Sin embargo, a pesar del hecho de que este sistema tampn funciona en una zona razonable de su curva de tamponamiento, su concentracin es el lquido extracelular es doce veces menor que la del bicarbonato. As pues, su poder de tamponamiento total es mucho menor que el del bicarbonato. Por otra parte, el tampn fosfato es muy importante en los tbulos renales por dos razones: en primer lugar, su concentracin aumenta significativamente a nivel tubular, incrementando por tanto la capacidad tampn del sistema fosfato en la orina. En segundo lugar, el lquido tubular se acidifica mucho ms que el lquido extracelular, acercando su pH al pK del tampn fosfato, por lo que ste funciona con ms eficacia. El tampn fosfato es tambin muy importante en el espacio intracelular, porque la concentracin de fosfato a ese nivel es muy superior a la del liquido extracelular y porque el pH intracelular se encuentra muy prximo al pK del tampn fosfato.

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Bioqumica Mdica 3.3. El sistema tampn de las protenas El tampn ms abundante en el organismo es el constituido por las protenas celulares y plasmticas, gracias a su elevada concentracin. Los hidrogeniones difunden moderadamente hacia los espacios intracelulares, atravesando las membranas celulares, y el anhdrido carbnico difunde con rapidez, en cuestin de segundos, ya que atraviesa las membranas celulares con mucha facilidad; igualmente, el bicarbonato puede difundir parcialmente hacia el interior de las clulas (los iones hidrogeno y bicarbonato tardan varias horas en llegar a una situacin de equilibrio entre el espacio extracelular y el intracelular en la mayor parte de las clulas, exceptuando los hemates). Esta difusin de hidrogeniones y de los dos elementos del sistema tampn bicarbonato determina que el pH intracelular cambie en un sentido similar v proporcional a los cambios que tienen lugar en el espacio extracelular. As pues, todos los tampones intracelulares pueden contribuir a evitar las variaciones de pH extracelular, si bien a veces tardan varias horas. Dentro de estos tampones intracelulares se pueden incluir los elementos proteicos, cuya concentracin intracelular es muy elevada. De hecho, determinados estudios experimentales han demostrado que aproximadamente las tres cuartas partes de la capacidad tampn total qumica de los lquidos orgnicos es intracelular, dependiendo en su mayor parte de las protenas. Sin embargo, exceptuando los hemates, la lentitud en los movimientos de los iones hidrogeno y bicarbonato a travs de la membrana celular retrasa frecuentemente la capacidad intracelular de tamponar las alteraciones en el equilibrio acido-bsico extracelular durante varias horas. El funcionamiento de los tampones proteicos es similar al del bicarbonato. Hay que recordar que una protena est compuesta por aminocidos que se unen por puentes pepitico, pero algunos de estos aminocidos fundamentalmente la histidina, tiene radicales libres cidos que pueden disociarse para formar bases ms hidrogeniones. Adems los pKs de algunos de estos aminocidos se encuentran prximos a 7.4. Estos hechos contribuyen a ser que los tampones proteicos constituyen el sistema tampn ms poderoso del organismo 4.-Tipos de acidosis y alcalosis

La Acidosis: Es el aumento anormal en la concentracin de hidrogeniones en el organismo, debido a la acumulacin de un cido o a la prdida de una base.

La acidosis metablica: Se produce como resultado de un aumento marcado en la produccin endgena de cidos como ocurre en la cetoacidosis o en las acidosis lcticas, por la prdida de los depsitos de bicarbonato como ocurre en las diarreas o por acumulacin progresiva de cidos endgenos cuya excrecin est alterada por una insuficiencia renal progresiva.

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Acidosis respiratoria: La acidosis respiratoria es debida a aumento del cido carbnico circulante, al no producirse una eliminacin normal del dixido de carbono por va respiratoria como resultado de una hipoventilacin alveolar por insuficiencia respiratoria. Los sntomas de la acidosis respiratoria son disnea, tos y en casos graves confusin, irritabilidad, letargo, coma y muerte por paro cardiorespiratorio

La Alcalosis: Es un trmino clnico que indica un trastorno en el que hay un aumento en la alcalinidad (o basicidad) de los fluidos del cuerpo, es decir, un exceso de base (lcali) en los lquidos corporales.

Alcalosis respiratoria: La alcalosis respiratoria es la ocasionada por niveles bajos de dixido de carbono (CO2). La hiperventilacin (frecuencia respiratoria aumentada) hace que el cuerpo pierda dixido de carbono. La altitud y, en general, cualquier enfermedad que produzca una reduccin de oxgeno en la sangre obligan al individuo a respirar ms rpidamente, menguando los niveles de dixido de carbono, y ocasionando este tipo de alcalosis. Alcalosis metablica: La alcalosis metablica, en cambio, est ocasionada por un exceso de bicarbonato en la sangre. La alcalosis hipoclormica:(baja concentracin del ion cloro en el plasma sanguneo) es aquella causada por una deficiencia o prdida extrema de cloruro (que puede ser debido a vmitos persistentes). En esos casos, los riones compensan la prdida de cloruros mediante la conservacin de bicarbonato. La alcalosis hipocalmica: se debe a la reaccin del rin a una deficiencia o prdida extrema de potasio que puede ser provocada por el uso de algunos medicamentos diurticos. La alcalosis compensada: se presenta cuando el cuerpo ha compensado parcialmente la alcalosis, alcanzando el equilibrio normal cido/bsico, an cuando los niveles de bicarbonato y dixido de carbono permanezcan anormales en trminos absolutos.

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Bioqumica Mdica 5.-Aplicaciones en la medicina de las soluciones buffer Anin restante.Denominando tambin Brecha anicnica o Anin Gap, es una herramienta simple que proporciona datos importantes para el diagnstico y tratamiento de los diferentes trastornos cido-base metablicos. En lneas generales el anin restante, es la diferencia entre los cationes medidos y los aniones medidos en el suero. En vista de que los cationes medidos normalmente exceden a los aniones medibles de rutina, el laboratorio clnico crea una aparente brecha aninica. Es evidente que el sodio y el potasio constituyen una mayora de los cationes extracelulares, mientras que el cloro y bicarbonato constituyen una fraccin menor de los aniones. El anin restante (AR) se calcula mediante la sustraccin de la suma del sodio y potasio de una suma del cloro y bicarbonato.

AR = (Na +K ) - (Cl + HCO3) Ejemplo AR = (140 + 5) - (103 + 25) = 17 Esta diferencia entre cationes y aniones expresa los aniones presentes normalmente en la sangre y que no son determinantes rutinariamente (fosfatos, sulfatos, cidos orgnicos). Los valores del anin restante normal oscila entre 12 y 20 mEq/l.. Dado que el cambio absoluto en mEq/l de la concentracin en sangre del potasio, tanto en estado de saludo como de enfermedad, es mnimo, muchos laboratorios lo suprimen del clculo de la brecha aninica. La importancia del clculo del anin restante reside en su utilidad en el diagnstico y tratamiento de muchos trastornos cido-base metablico. Las causas que pueden aumentar una brecha aninica son: Acidosis metablica Deshidratacin Administracin de sales de cidos fuertes Ciertos antibiticos (Penicilina, Carbenicilina) Alcalosis Allopurinol El aumento del anin gap generalmente se debe a un incremento de los aniones no mensurados. Puede deberse a una acumulacin de cidos fijos, como ocurre con la acidosis lctica o en la cetoacidosis, o tambin puede deberse al aumento de los aniones de cidos inorgnicos tales como el sulfato y el fosfato, como sucede en la uremia. Las causas de disminucin del anin restante se atribuyen a un aumento en la concentracin de cationes no mensurables: hiperkalemia, hipermagnesemia, hipercalcemia o disminucin de los aniones no mensurables, la hipoalbuminemia constituye la causa ms comn. El bicarbonato, un aliado para ver 'en directo' el pH del organismo.- Aqu mostramos los avances cientficos con el bicarbonato. Hasta ahora ya se haban probado varias sustancias capaces de actuar como contraste para visualizar el nivel de pH a travs de tcnicas de imagen como la resonancia magntica nuclear o la tomografa por 20

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Bioqumica Mdica emisin de positrones (PET). Sin embargo, estas sustancias extraas al organismo podan llegar a resultar txicas, lo que ha limitado su uso en la prctica clnica. Para solventar este problema, un grupo de investigadores de la Universidad de Cambridge (Reino Unido) y los Institutos Nacionales de la Salud de EEUU (NIH, segn sus siglas en ingls), ha probado la utilidad que tendra para este fin el bicarbonato, una sustancia que se encuentra de forma natural en el organismo, por lo que no es txica, y que adems acta como un sistema natural de amortiguacin para mantener el equilibrio cido-base en los tejidos. La tcnica, auguran los investigadores, dirigidos por Kevin Brindle, podra servir para ver 'en directo' (es decir, in vivo), el nivel del pH en los tejidos. Esto podra servir, por ejemplo, para ayudar al diagnstico de algunos tumores (en los que el pH es inferior al de los tejidos sanos), as como de patologas del rin, trastornos inflamatorios y otras enfermedades del pulmn. En la Reaccin en cadena de la polimerasa para la deteccin rpida y determinacin del serotipo de virus del dengue en muestras clnicas se utiliza el amortiguador ltico diluido a la mitad de su concentracin normal, para extraer el ARN de las clulas infectadas. El reactivo amortiguador de -GT-SL (R1): una solucin que contiene amortiguador (pH 8.3 a 25C), 100 mmol/L de glicilglicina y un conservador; se usa para la determinacin cuantitativa in vitro de glutamiltransferasa (-GT o GGT) en suero. La -glutamiltransferasa (GT) fue inicialmente purificada y caracterizada por Szewczuk y Baromouski

La -GT cataliza la transferencia del grupo -glutamil de un pptido -glutamil a un aminocido de otro pptido. Las determinaciones de su actividad se utilizan en el diagnstico de enfermedades hepticas como la cirrosis alcohlica y tumores hepticos primarios y secundarios.

6.-Valores de pH de secreciones o fluidos biolgicos FLUIDOS CORPORALES: Plasma sanguneo= 7,36 a 7,44 Sangre= 7,35 a 7,45 Fluido intersticial= 7,4 Fluido intracelular= 6,9 a 7,3 Lquido cefalorraqudeo= 7,35 a 7,45

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SECRECIONES CORPORALES: Orina 4,5 a 8 saliva 6,35 a 6,95 Bilis 7 a 7,6 Jugo gstrico= 1,2 a 3 Jugo pancretico 7,5 a 8 Jugo intestinal 7 a 8

7.-Valores de pK de cidos orgnicos presentes el en organismo humano En el siguiente cuadro se presenta los valores correspondientes de pK de cada acido orgnico presente en nuestro organismo: ACIDOS ORGANICOS Acido Fosfrico Acido formico Acido actico NH4+ Acido carbnico pK 2.15 3.75 4.76 9.25 6.35

8.-Proponga un modelo de practica aplicado a su carrera en el captulo de agua (puede ser de pH , buffer, osmosis etc)

MODELO DE PRCTICA DE LABORATORIO Preparacin de una solucin base fuerte Objetivos: Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: 1.- Preparar soluciones a una concentracin Normal o Molar determinada 2.- Establecer la equivalencia entre Normalidad y Molaridad de soluciones monovalentes 3.- Conocer el concepto de titulacin y su utilidad. 4.- Saber qu es peso equivalente, miliequivalente y su aplicacin 5.- Saber qu es un estndar primario y para que sirve. 6.- Determinar experimentalmente la concentracin de una sustancia mediante la tcnica de titulacin directa con estndar primario. 7.- Reconocer los indicadores adecuados para la titulacin de una base fuerte. UNJFSC FMH EAP MH III- Ciclo 22

Bioqumica Mdica 8.- Identificar los datos necesarios para calcular la Normalidad de una sustancia cuando se utiliza un estndar primario. I. Introduccin terica

La preparacin de soluciones de cidos y bases fuertes implica conocer la definicin de unidades de concentracin tales como la molaridad y la normalidad: MOLARIDAD: Se define como el nmero de moles de soluto presentes en un litro de solucin es decir, M= n/V(L) donde M es la molaridad , n el nmero de moles y V el volumen en litros de solucin. NORMALIDAD: Se define como el nmero de equivalentes de soluto presentes en un litro de solucin. Es decir N= eq/V(L) donde N es la normalidad, eq son los equivalentes que para sistemas de cido-base dependen del nmero de iones H+ o de iones OH. En el caso del cido clorhdrico y la sosa los equivalentes son iguales al nmero de moles, por lo que la molaridad es igual a la normalidad. Otro concepto que es importante recordar es la definicin de cido y de base: ACIDO: sustancia capaz de donar iones H+ en solucin acuosa. Un cido se considera fuerte cuando se encuentra totalmente disociado, por ejemplo el HCl, HNO3, H2SO4. BASE: sustancia capaz de donar iones OH- en solucin acuosa. Una base se considera fuerte cuando al disolverse se disocia totalmente, por ejemplo el NaOH, KOH. II. Tcnica

Segunda parte: Preparacin de hidrxido de sodio 1.- Material y reactivos 1 Vaso de precipitados de 50 mL 1 matraz aforado de 500 mL 1 balanza analtica NaOH (lentejas) Agua hervida y fra 2.- Preparacin de hidrxido de sodio, NaOH 0. 1 N (base fuerte) 1. En una balanza granataria pesar un vaso de precipitados de 500 mL. 2. Pesar en el vaso 2.25 g. de NaOH. 3. Disolver cuidadosamente con agua destilada y hervida durante 10 minutos para liberar el CO2. La reaccin es exotrmica.

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Bioqumica Mdica 4. Dejar enfriar la solucin. 5. Transferir a un matraz aforado de 500 mL y aforar con agua destilada.

SU RELACION CON LA MEDICINA Cmo puede perjudicar mi salud el hidrxido de sodio? El hidrxido de sodio es sumamente corrosivo y puede causar quemaduras graves en todo tejido con el cual entra en contacto. Inhalar bajos niveles de hidrxido de sodio en forma de polvos, neblinas o aerosoles puede producir irritacin de la nariz, la garganta y las vas respiratorias. Inhalar niveles ms altos puede producir hinchazn o espasmos de las vas respiratorias superiores lo que puede producir obstruccin y pulso imperceptible; tambin puede ocurrir inflamacin de los pulmones y acumulacin de lquido en los pulmones. La ingestin de hidrxido de sodio slido o lquido puede producir vmitos, dolor del pecho y del abdomen y dificultad para tragar. La lesin corrosiva de la boca, garganta, esfago y estmago ocurre muy rpidamente y puede causar perforacin, hemorragia y reduccin del dimetro del tracto gastrointestinal. Hay casos que indican que la muerte ocurre a causa del shock, la infeccin de los tejidos corrodos, el dao del pulmn o el pulso imperceptible. El contacto de la piel con el hidrxido de sodio puede causar quemaduras graves con ulceraciones profundas. El dolor y la irritacin se manifiestan dentro de los primeros 3 minutos, pero el contacto con soluciones diluidas puede que no produzca sntomas por varias horas. El contacto con los ojos puede producir dolor e irritacin, y en casos graves, opacidad del ojo y ceguera. La exposicin prolongada al hidrxido de sodio en el aire puede producir ulceracin de las vas nasales e irritacin crnica de la piel. No sabemos si la exposicin al hidrxido de sodio puede afectar la reproduccin en seres humanos.

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VIII.- BIBLIOGRAFIA
1. Murray, Granner, Rodwell, Harper. Bioquimica ilustrada 17 edicin Manual Moderno 2. Nelson D. Cox M. Lehninger Principios de Bioqumica. 4 edicin. Editorial ediciones omega.2006 3. Edicin en espaol de la edicin original en ingls por W.H Freeman and company, New York.2005 4. Tnez. A. Galvn. E. Fernndez. pH y amortiguadores: Tampones fisiolgicos. Crdoba.2006 5. Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, 1Facultad de Medicina, Avda. Menndez Pidal s/n, 14004-Crdoba, 2 Campus Universitario de Rabanales, Edificio Severo Ochoa, 14071-Crdoba 6. Biologa Celular y Molecular, de Robertis Hib-Pronzio; duodcima edicin; Librera editorial El Ateneo 1977 Pginas Web: 1. http://www.scielosp.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S102049891998000700001&lng=&nrm=iso&tlng= 2. http://es.wikipedia.org/wiki/Alcalosis

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