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Ciencia del Animal de Laboratorio

Captulo 1.

La ciencia del animal de laboratorio y el procedimiento experimental

ALBERTO GIRLDEZ DVILA Miembro Real Academia de Farmacia, Madrid JESS MARTN ZIGA Dir. Servicio Produccin y Experimentacin Animal. Centro de Instrumentacin Cientfica Universidad de Granada

DESARROLLO HISTORICO Orgenes Perodo Preclsico Perodo Clsico Edad Media Edad Moderna Renacimiento Ilustracin Siglo XIX Siglo XX Los roedores LA CIENCIA DEL ANIMAL DE LABORATORIO Definiciones Animal de laboratorio Experimentacin animal Significacin de la experimentacin animal Investigacin y organismos relacionados Desarrollo de la investigacin Organismos e instituciones RESUMEN BIBLIOGRAFIA

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La utilizacin de animales como modelos experimentales de observacin de fenmenos biolgicos ha evolucionado con el hombre. En este captulo, de carcter introductorio, pretendemos dar una visin general de las consideradas primeras referencias histricas, hasta nuestros das, pasando por momentos y personajes que pueden considerarse claves. En la segunda parte se hace referencia a los principales conceptos y a la significacin en trminos cuantitativos y cualitativos de la denominada ciencia del animal de laboratorio, que engloba todo lo relacionado con el animal de experimentacin. Por un lado, el estudio del animal en s: los tipos y especies utilizadas, sus caractersticas y peculiaridades zootcnicas, genticas, sanitarias, y los mtodos de produccin, obtencin, manejo o mantenimiento. Por otro lado, como rea de conocimiento, aborda el amplio conjunto de procedimientos, mtodos y tcnicas que se utilizan en el animal propiamente dicho durante el proceso de investigacin. En el resto de los captulos nos referimos constantemente a estos conceptos y trminos bsicos. DESARROLLO HISTORICO Orgenes Perodo Preclsico Es de suponer que desde el principio de la Humanidad, ya en sus etapas anteriores al Homo sapiens, los homnidos procuraran mejorar sus dolencias bien por puro instinto, al igual que otras especies animales, o bien imitando las prcticas de algunas de ellas, como frotarse o lamerse las zonas corporales lesionadas, calmar el dolor introducindose en agua fra o cubriendo el miembro dolorido con fango, evitar la molestia de los exoparsitos despiojndose mutuamente, o comer ciertos tipos de plantas de accin emtica o purgante; a estas prcticas seguiran otras maniobras cada vez ms elaboradas, como detener las hemorragias aplicando presin en el lugar lacerado. Por otra parte, los hombres primitivos, al despiezar los animales que cazaran para nutrirse, observaran la disposicin de sus rganos y as llegaran a comprender que comparten con ellos las mismas estructuras internas. Esos conocimientos los plasman luego en las pinturas, tal es el caso del mamut representado en la cueva del Pindal (Cantabria), en el que aparece una mancha en forma de corazn en el lugar adecuado del animal, o los grabados de los pueblos primitivos australianos, donde en las figuras de los canguros se representan sus rganos internos, por lo que se han llamado de estilo rayos X (en Oenpelli, Australia). Pero el Homo sapiens, por el extraordinario desarrollo del sistema nervioso central, que le capacita para pensamientos e ideas muy elaboradas, ha llegado a intuir que pueden existir fuerzas que sean superiores a sus sentidos (hecho que no parece presentarse en otras especies animales). Esto ha dado lugar a la aparicin de creencias de tipo mgico o religioso, a lo que se suma la interpretacin de la enfermedad como un castigo, hecho que tiene como consecuencia el tratamiento de las mismas mediante frmulas basadas en la magia o en invocaciones religiosas; tal interpretacin constituy la base de muchas de las prcticas mdicas durante civilizaciones enteras, prcticas que han llegado incluso hasta nuestros das y no slo entre pueblos todava muy primitivos: tales ideas siguen vigentes en grupos y personas que viven en un mbito cultural desarrollado. Es entonces cuando aparece la figura del hombre de medicina que interviene en ceremonias mgico religiosas, que predice el futuro observando la disposicin de las entraas de los animales (considerados unos como benficos y otros como malficos) y que distribuye amuletos para la prevencin de enfermedades y desgracias, muchos de ellos con figuras zoomorfas. De este modo, se dan interpretaciones fantsticas de los rganos, como el situar la fuente de la vida en el hgado o los sentimientos en el corazn, en este caso por el simple hecho de que se acelere su ritmo ante las emociones. En otras ocasiones, se emplea como tratamiento de un rgano lesionado la aplicacin del correspondiente de un animal benfico; por ejemplo, el ojo de un cangrejo para la curacin de enfermedades oculares.

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En el Cdigo de Hammurabi (1.700 a.C.), adems de muchas prcticas de tal tipo, tambin aparece la descripcin de enfermedades y de su curacin mediante tratamientos con sustancias, tanto vegetales como animales, que se aplican en ungentos, fumigaciones, vapores, por va oral, en enemas, supositorios y otras formas sencillas. Perodo Clsico La civilizacin griega, origen de la cultura occidental, se ha distinguido por su actitud racional ante la interpretacin del cosmos, y en el terreno que nos ocupa, es donde aparece el personaje que podemos considerar como el primer experimentador biolgico del que tengamos noticia histrica: se trata de Acmaeon de Crotona, el cual demostr la funcin del nervio ptico al seccionarlo provocando la ceguera de un animal, en el ao 450 a.C. En los escritos de la escuela de Hipcrates que fueron elaborados alrededor del ao 300 a.c. y han sido recogidos en el denominado Corpus Hipocraticus, se describe una experiencia en la que para comprobar el proceso de la deglucin, se seccion la garganta a un cerdo al que se dio a beber agua teida con un colorante. De esa poca, la gran figura de Aristteles (384-322 a.C.), hijo de mdico, pero dedicado a la filosofa y a la descripcin de la Naturaleza, quien elabora una obra enciclopdica recopilando todo el saber de su tiempo en la que se incluye la Historia animalium, con sus diversos libros: De partibus animalium, De motu animalium y De ambulatione animalium. En el primer libro, sienta las bases de la validez de la experimentacin animal, con afirmaciones como: ...en muchos casos, los atributos descritos para distintas especies son similares, tanto en el caballo, como en el perro y en el ser humano, y ms adelante: los atributos en muchas especies son idnticos y no se observan diferencias. En Alejandra florece durante un largo perodo una escuela mdica de gran prestigio en la que se practica la diseccin de animales, de forma que Herfilo (330-250 a.C.) demostr la diferencia funcional entre nervios y tendones. Al mismo tiempo, Erasstratos (305-240 a.C.) justifica la viviseccin para poder observar el funcionamiento de los seres vivos antes de que aparezcan los fenmenos posmortem, con lo que pudo establecer la diferencia entre los nervios sensitivos y los motores. Ms adelante, Mitrdates VI, rey del Ponto, apodado El Grande (131-63 a.C.) y temeroso de ser vctima de envenenamiento orden a su mdico Cratevas (124-64 a.C.), efectuar una serie de ensayos, en animales, de la accin txica de los venenos y su proteccin mediante antdotos, con lo que viene a ser el iniciador de la toxicologa experimental. En el Imperio Romano la gran figura fue, sin lugar a dudas, Galeno (130-210 d.C.), a quien se debe una mejora sustancial de las tcnicas de diseccin, ya que las practic en abundancia realizndolas en muchas especies diferentes: animales domsticos y salvajes, como leones y hasta elefantes, pero especialmente en el mono de Berbera; tales prcticas eran efectuadas en pblico y presenciadas con admiracin por el pueblo romano, al cual instrua. Fruto de sus experiencias fue el establecimiento de que los vasos sanguneos nacen del corazn y los nervios salen del cerebro y la mdula espinal, as como una mejor descripcin de los nervios sensitivos y motores. Pero no slo describe la anatoma sino que interpreta gran cantidad de funciones como la de los pulmones y la del corazn. De hecho, la autoridad de Galeno se impuso durante ms de un milenio como definitiva, aunque en realidad cometi algunos errores al generalizar las observaciones hechas en una especie a otras y, principalmente, al suponer que la sangre pasaba del ventrculo derecho al izquierdo a travs de finos poros inapreciables a la vista, que supona deban estar en el tabique interventricular. Tambin se consider una gran autoridad, durante casi mil quinientos aos, a Plinio el Viejo (23-79 d.C.), que escribi sobre zoologa, botnica, medicina y otras diversas ciencias; sin embargo, en su obra Historia Naturalis, que comprende 37 libros, junto a descripciones acertadas (no fue experimentador) recoge un sinnmero de falsos conceptos y relatos fabulosos, como el mal de ojo por lo que su prestigio secular no fue justificado.

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Edad Media A lo largo de toda la Edad Media es en verdad sorprendente no slo el parn, sino el retraso de los conocimientos que haban sido ya establecidos, en mayor medida por los griegos, en todo lo referente a la Naturaleza y al Cosmos; as es que se perdi por completo la nocin del movimiento de la Tierra alrededor del Sol, la esfericidad de la misma, la longitud del ecuador (que haba sido calculada con gran aproximacin) y otros conocimientos cosmolgicos. Lo mismo sucedi con la medicina y los estudios anatmicos y fisiolgicos, quedando como verdades establecidas lo que haban escrito las autoridades clsicas, fundamentalmente: Hipcrates, Aristteles, Galeno y Plinio, que se consideraron indiscutibles y definitivos, de forma que no hubo ya incentivos para continuar estudios experimentales; tanto es as, que las instrucciones y dictados de Galeno se siguieron al pie de la letra, pero no sus disecciones ni experiencias en animales. Tres fueron las causas, segn los historiadores, de tan extrao fenmeno: la cada del Imperio Romano de Occidente y la sabidura heredada en gran parte de los griegos, la invasin de los Brbaros procedentes de las oleadas asiticas de tribus de culturas propias mucho menos desarrolladas que la greco-romana y la difusin del cristianismo que atenda principalmente a principios ms espirituales que corporales y que consideraba irrespetuosa la diseccin de cadveres; aunque en realidad, se siguieron realizando algunas autopsias pero en muy escaso nmero. La llegada del Islam al sur de Europa tampoco aport nada a la experimentacin biolgica y s a rescatar los escritos clsicos en especial los aristotlicos; pero tampoco el islamismo era partidario de tomar a los cadveres como objeto de manipulacin. Se puede mencionar, sin embargo, la importante Escuela Salernitana de Medicina que influy grandemente en toda Europa, en especial en los siglos del IX al XII, donde se practicaba una medicina cientfica siguiendo exclusivamente los mtodos de Galeno y prescindiendo por entero de las prcticas mgicas y religiosas. Sus enseanzas estn recogidas en el denominado Cdigo de Breslau, que consta de 35 tratados, en uno de los cuales se describen disecciones realizadas en el cerdo por ser el animal ms parecido al hombre, segn se puntualiza. Ya en el siglo XIV renace la prctica de las autopsias, pero no tanto para estudios anatmicos sino ms bien para dilucidar el origen de las causas de la muerte, con fines que hoy llamaramos mdico-legales. As y todo, el renacimiento de esta prctica fue mejorando tcnicas y preparando el terreno para los estudios de la poca siguiente. Edad Moderna Renacimiento Los estudios anatmicos derivados de las autopsias practicadas por los cirujanos impulsaron los conocimientos del cuerpo humano, ello condujo a que se pasara a investigar las funciones de los distintos rganos y miembros para lo cual se comenz a practicar de nuevo la experimentacin animal. Tal es el caso del excelente cirujano de Bolonia Jacopo Berengario di Carpi (1470-1530), que fue a su vez un riguroso e incluso artstico dibujante de sus hallazgos, dejando para la posteridad magnficas y detalladas lminas anatmicas de humanos y otros animales. Esta prctica da origen a la costumbre de plasmar en minuciosos grabados las observaciones efectuadas, como los precisos dibujos de esqueletos de las ms variadas especies realizados por el holands Volcher Coiter (1534-1576) que estudi en Bolonia, continuador de la tradicin de Carpi, como lo hizo ms adelante el tambin bolos Carlo Ruini, cirujano veterinario, del que se public pstumamente en 1598 su minuciosa Anatomia del cavallo, infirmit e suoi remedi. En esta tradicin de anatmicos descuella el profesor de Pdua Andrea Vesalio (1514-1564) con su magna obra De homini corporis fabrica publicada en 1543, que se constituye en un verdadero clsico; adems, Vesalio a continuacin de las autopsias y con el fin de demostrar las funciones fisiolgicas de las

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estructuras observadas por los alumnos, realizaba experiencias en animales, si bien, en general se conform con repetir las descritas con anterioridad por Galeno. Esta metodologa, que se fue extendiendo, produce la cristalizacin de la idea de que la experimentacin en animales es imprescindible para el conocimiento de las funciones corporales y da origen a que se constituya la actividad de investigar, en tal sentido, para alcanzar resultados originales. De hecho, el discpulo de Vesalio y su sucesor en la ctedra, Mateo Realdo Colombo (1516-1559) realiza nuevas experiencias que van ms all de las ya conocidas, llegando a aportar conceptos que contradicen a los de Aristteles y Galeno, como la descripcin de la circulacin pulmonar en su obra De re anatomica, afirmando que la sangre en el corazn no pasa directamente del ventrculo derecho al izquierdo, como crea Galeno. Esta observacin coincidi en el tiempo con lo que sostena Miguel Servet (1511-1553). En Inglaterra, el eminente pensador Francis Bacon (1561-1626) pondera en sus escritos la experimentacin en animales ya que afirma que es recomendable para el avance de la ciencia en vista del gran uso que se hace de sus observaciones, como aparece en Proficience and Advancement of Learning Divine and Humane, publicado en 1605. Nuevamente se corrige otro concepto de Galeno, el relativo a la absorcin intestinal de los alimentos que se crea era efectuada nicamente por el sistema venoso, al publicarse pstumamente, en 1627, la obra de Gaspar Aselli (1581-1626) en la que se describen los vasos linfticos observados en el mesenterio de un perro. El descubrimiento tuvo gran trascendencia y difusin, lo que dio lugar a una larga serie de experiencias como las de Jean Pecquet (1622-1674) en Montpelier, que describe el conducto torcico en el perro, as como los trabajos de Thomas Bartholinus (1616-1680) en Copenhague y Olof Rudbeck (1630-1702) en Uppsala. La cumbre de las enseanzas mdicas en Europa se centra en Pdua donde se contina la tradicin de Gabriello Falopio (1523-1562) y de su discpulo Fabricius de Acquapendente (1537-1619); all va a formarse el joven ingls William Harvey (1537-1657), quien queda impresionado por el descubrimiento de las vlvulas venosas que haba hecho su maestro Fabricius. De vuelta a Londres, Harvey contina su investigacin sobre el sistema cardiovascular y al observar que el corazn aislado de un animal se contrae como un msculo se da cuenta de su funcin de bomba impelente, abandonando la interpretacin de Galeno que supona que el corazn aportaba a la sangre un impulso vital. En otras experiencias en oreja de ovejas vivas, sienta el principio de la circulacin sangunea, y realizando viviseccin en serpientes esclarece el que la sangre afluye al corazn por la vena cava y es luego expelida por la arteria aorta, con lo que realiza el importantsimo aporte a la medicina de explicar correctamente la mecnica del aparato circulatorio, lo cual publica en 1628 bajo el ttulo de Exercitatio Anatomica de Motu Cordis et Sanguis in Animalibus. Una de las consecuencias de los estudios de Harvey fue que en 1665 es practicada por Richard Lower (1631-1691) la primera transfusin de sangre de perro a perro, con lo que se empieza a vislumbrar la aplicacin teraputica de los descubrimientos fisiolgicos y as se pasa a transfundir sangre de perro a humanos, pero en este caso con fatales consecuencias. Otras de las aplicaciones que se entrevn es la de la administracin de frmacos por va intravenosa, que se consigui mediante un canuto de pluma de ave cortado en bisel y sujeto a una pequea vejiga; de tal forma fue inyectada en la vena de un perro una buena dosis de vino de Jerez, observndose inmediatamente sntomas claros de embriaguez. Todo ello va cambiando drsticamente la mentalidad de mdicos y experimentadores de forma que el discpulo de Lower, Johan Jakob Hander (1656-1711), llega a escribir que los resultados experimentales son de mayor certeza que las oscuras y contradictorias afirmaciones de los autores clsicos de la Antigedad (en Apiarium observationibus medicis centum, 1687). De hecho, la publicacin de resultados originales comienza a considerarse un gran orgullo para los experimentadores, tradicin que no ha cesado hasta el presente.

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Por otra parte, tambin otros cientficos hacen incursiones en la experimentacin biolgica, as el notable fsico ingls Robert Boyle (1627-1691) estudiando el estado gaseoso construy la llamada bomba pneumtica campana en la que haca el vaco y al introducir en ella seres vivos, como un gato o aves, demostr que el aire es imprescindible para el mantenimiento de la vida. Dicha experiencia caus gran sensacin social y se puede decir que se puso en boga el realizarla durante la segunda mitad del siglo XVII y an en el siguiente, ya que se hizo habitual entre los educadores e incluso se hicieron demostraciones en las cortes reales. Una de sus consecuencias fue que Robert Hooke (1635-1703) tuviera la idea de construir una bomba de respiracin artificial, para un perro, mediante dos balones elsticos. Tambin los filsofos se interesan e intervienen, de suerte que el famoso Ren Descartes (1596-1650) sigui con gran inters las experiencias de Harvey, presenci las demostraciones que las confirmaban y l mismo experiment en animales, recogiendo en sus escritos estudios anatmicos y fisiolgicos. Descartes sent la teora de que los animales y el hombre son mquinas automticas que obedecen a leyes mecnicas (acuando el concepto de reflejo), pero distingue al humano por tener inteligencia, que atribuye al alma, lo que le lleva a sostener que los animales al carecer de alma son simples mquinas, y de ah deduce que no pueden padecer verdadero dolor. Esta teora suscit gran cantidad de discusiones y diatribas sobre el dolor en los animales, lo que promovi entre los adversarios de dicha teora cartesiana que comenzaran las opiniones sobre la crueldad de la viviseccin, circunstancia que hasta entonces prcticamente no se haba tenido en cuenta. Ilustracin En el siglo XVIII se multiplican las experiencias por toda Europa y con ellas perdura la discusin entre quienes han cobrado conciencia del sufrimiento de los animales y los que creen prioritaria la necesidad de los estudios que en ellos se realizan. De tal forma que el gran fisilogo alemn Albrecht von Haller (1708-1777) en uno de sus ms divulgados escritos, que dirigi a la Real Academia de Ciencias de Gtingen, deca: desde el ao 1751 he experimentado en 190 animales, lo que me produce una sensacin de crueldad por la que siento rechazo, ello se puede soportar slo por el deseo de contribuir al beneficio de la especie humana y lo puedo excusar por el mismo motivo que induce a las personas de temperamento ms humanitario a comer cada da cebados e inocentes animales (en A dissertation on the Sensible and Irritable Parts of Animales, 1755). Igualmente, en Francia, Henri Duhamel Dumenceau (1700-1782) cuyos estudios versaban sobre la reconstruccin de los huesos traumatizados, eleva un informe de los mismos a la Real Academia de Ciencias francesa, en el que abunda en igual concepto: cada da mueren ms animales para satisfacer nuestro apetito que los que pueden ser sacrificados por el escalpelo de los anatmicos, los cuales lo hace con la til finalidad de que redunde en la conservacin de la salud y en la curacin de las enfermedades (en Observations sur la Runion des Fractures des Os, 1741). Por otra parte, James Ferguson (1710-1776), un popular conferenciante pblico que trataba temas de astronoma, mecnica y fsica, en 1760 propuso que en la clebre bomba pneumtica de Boyle, que todava causaba expectacin, se sustituyeran los pulmones de los animales por vejigas lo que viene a ser la primera propuesta de una Tcnica Alternativa! (en Lectures on Selected Subjects in Mechanics, Pneumatics, Hydrostatics and Optics, 1764). En todo caso, en este siglo las actividades cientficas de todo orden progresan de una forma inusitada y los investigadores de una u otra ciencia intercambian y complementan sus observaciones dando un sentido cada vez ms racional a la interpretacin de los fenmenos naturales. El considerado como padre de la qumica, el eminente qumico francs Antoine Laurent de Lavoisier (1743-1794), al estudiar el fenmeno de la combustin por combinacin del oxgeno con otros

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elementos, dedic parte de sus experiencias a comprobar cmo era utilizado dicho gas por los animales y en los humanos, llegando a la conclusin de que los animales que respiran son verdaderos cuerpos combustibles que arden y se consumen, en su conocido trabajo Memoires sur le chaleur que fue publicado en 1784. Justamente en sus estudios sobre la respiracin y transpiracin de los animales colabor nada menos que el astrnomo y bilogo Pierre Simon Laplace (1749-1827) quien, como es bien sabido, fue autor de teoras de gran influencia sobre la Ciencia como las relativas a la atraccin universal, en controversia con Isaac Newton, y la de evolucin biolgica de las especies, que un siglo ms tarde sera superada por Charles Darwin.

Este era el ambiente de los descubrimientos, entrecruzamientos de observaciones, hiptesis, discusiones y grandes adelantos cientficos de la poca de la Ilustracin, de lo que es un buen ejemplo el descubrimiento de Galvani que evidenci los fenmenos electro-biolgicos. Luigi
Galvani (1737-1798) fsico y mdico, cirujano y toclogo, profesor de anatoma en Padua, en el ao de 1789 haba decapitado y despellejado unas ranas y las dej cerca de una mquina elctrica, por casualidad observ que al tocar una de ellas con un objeto metlico se contrajo su musculatura. Galvani se interes en el fenmeno y comenz una larga serie de experiencias muy demostrativas cuyos resultados recogi en su obra De viribus electricitatis in motu musculari, denominando al fenmeno observado como electricidad animal, lo que luego fue conocido como galvanismo (Fig. 1.1.).

Figura 1.1. Laboratorio de Galvani, en el siglo XVIII, donde realiz sus estudios de biopotenciales, en ranas.

En realidad, Mesner en 1774 haba sugerido que exista una especie de fluido elctrico al que llam magnetismo animal, por lo que cuando Galvani se enter de ello le reconoci la primaca. Lazzaro Sapalanzani (1729-1799), hombre de saber enciclopdico y que entre otros muchos estudios dedic una especial atencin al sistema gastroentrico, analizando el jugo gstrico de diversas especies de animales y de los humanos, lleg a la conclusin de que en cada especie su composicin era la oportuna

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para digerir los alimentos propios de la misma; dichas experiencias eran realizadas con cidos, bases y trozos de estmagos en tubos de ensayo, por lo que se le puede considerar como el iniciador de las pruebas de laboratorio in vitro. Siglo XIX En el filo entre los dos siglos, XVIII y XIX, se dan dos hechos de singular importancia, por un lado, la novedosa prctica teraputica de prevencin de enfermedades mediante un tratamiento que produce la inmunizacin del individuo por aplicacin al ser humano de un producto proveniente del animal que ha dado nombre a todo el sistema de tal proteccin: las vacunas; efectivamente, en 1798 el mdico ingls Edward Jenner (1748-1822) consigui inmunizar a las personas frente al terrible azote de la viruela al extraer el lquido de las lesiones producidas en las vacas por dicha infeccin, iniciando uno de los mayores xitos de la medicina como ha sido el erradicar de la Humanidad tan grave enfermedad. Por otra parte, la fundacin en 1790 de la Escuela de Veterinaria de Alfort (Francia) da origen a la implantacin de verdaderas escuelas de investigacin biolgica en ese pas, el cual va a liderar los estudios fisiolgicos y farmacolgicos durante todo el siglo. En Pars, los herederos del notable bilogo Georges Cuvier (1769-1832) forman una escuela de experimentacin en el Museo de Historia Natural. De gran influencia en toda Europa son las Escuelas Mdicas de Montpelier y especialmente la de Pars, de la cual destaca la figura de Franois Magendie (1783-1885), que publica el manifiesto Quelques ides genrales sur les phnomnes particuliers aux corps vivants. Convencido de que las funciones de los rganos slo pueden ser estudiados con experimentos sus propias palabras lucha enrgicamente contra la teora vitalista que aceptaba un espritu vital como causa ltima de las funciones fisiolgicas, por ello se le ha considerado como el iniciador de la verdadera fisiologa cientfica. Asimismo, por ser quien comenz tambin de forma cientfica el estudio en animales de los efectos de la aplicacin de sustancias exgenas, ha sido denominado padre de la farmacologa experimental. Le cupo el gran mrito de ser el maestro del ms insigne de los fisilogos del siglo, que sin duda fue Claude Bernard. En realidad Italia fue pionera en experimentacin farmacolgica, ya que Luigi Scarenzio (1797-1869) haba fundado y dirigido en el Ateneo de Pava el primer Laboratorio de Farmacologa. Claude Bernard (1813-1878), dedic su vida por entero a la experimentacin en el laboratorio de la Escuela Mdica de Pars; perfeccion las tcnicas de la viviseccin, en la que form gran cantidad de discpulos, e interpret de forma rigurosa sus observaciones, llegando a definir conceptos tan bsicos en fisiologa como el medio interno y su consecuencia la homeostasis. Gran parte de estas importantes investigaciones estn reunidas en el libro que public bajo el ttulo de Introduction letude de la mdicine experimentale, aparecido en 1865. Por otra parte, en Rusia destaca Ivan Pavlov (1849-1936) que estudi en Alemania y luego desarroll en su laboratorio de Mosc las clebres experiencias de secrecin salivar en perros adiestrados a reconocer seales acsticas, estableciendo la teora de los reflejos condicionados; por otra parte, son notables sus aportaciones sobre el sistema digestivo, las funciones hepticas, del pncreas y del aparato cardiovascular. En Estrasburgo se form en farmacologa experimental el estadounidense John J. Abel (1857-1938) de gran importancia pues al regresar a su pas funda la primera ctedra de farmacologa en la Universidad de Ann Arbor (Michigan) y luego se traslada al Johns Hopkins Hospital; sus conocimientos qumicos le llevan a aislar la adrenalina en 1900 y a purificar y cristalizar la insulina en 1926. Rpidamente, las enseanzas de las ciencias experimentales biomdicas se extienden por todo el pas, preludiando el extraordinario auge que cobrarn en el siglo que comenzaba.

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Todava en el siglo XIX, ya han surgido como ciencias la bacteriologa y la inmunologa, descollando tres grandes figuras: Louis Pasteur (1822-1895), qumico, que experiment las vacunas del antrax en las ovejas, del clera en las gallinas y de la rabia en perros. Robert Koch (1842-1919) revoluciona completamente la bacteriologa y describe el bacilo que llev su nombre, causante de la tuberculosis. Paul Erlich (1854-1919) estudi la meningitis y la sfilis, hizo progresar de forma notable la histologa y formul su clebre teora de la llave y la cerradura relativa a la inmunidad, que le acredita como verdadero impulsor de la inmunologa. A finales del mismo siglo, R. Magnus aporta una nueva tcnica experimental de gran trascendencia en los posteriores estudios farmacolgicos, consistente en mantener vivo un rgano aislado en el denominado bao de rganos.

Siglo XX En el siglo XX ha tenido lugar una enorme expansin de todas las ciencias biomdicas experimentales; entre los avances de todo orden habidos, uno que ha facilitado en gran manera el uso de animales vivos pero sin el grave inconveniente de causarles sufrimientos, indudablemente ha sido el contar con anestsicos que permiten las experiencias indoloras in vivo. De entre la multitud de valiosos cientficos del siglo son dignos de destacar algunas figuras de investigadores que por la importancia de sus aportaciones han sido merecedoras del Premio Nobel, considerado el ms valioso en el rea biolgica. Las tcnicas histolgicas han recibido un enorme impulso gracias a los trabajos de dos Premios Nobel: Santiago Ramn y Cajal (1852-1934) y Camillo Golgi (1884-1923), que lo reciben conjuntamente en 1906, por la descripcin e interpretacin de la estructura y funciones cerebro-espinales. Los principales trabajos de Cajal se recogen en su libro Textura del Sistema Nervioso del Hombre y de los Vertebrados. Mediante la metodologa del rgano aislado, el cientfico francs Alexis Carrel (1873-1944) lleg a mantener el corazn de un pollo latiendo durante meses, lo que le proporcion gran fama. Este investigador emigr a Norteamrica en 1909 y realiz experiencias de injertos vasculares, primero, y de rganos despus, que le valieron la concesin del Premio Nobel en 1912. Otra tcnica novedosa por la que fue galardonado en 1924 con el aludido Premio el holands Willem Einthoven (1860-1927) consisti en la deteccin desde la superficie corporal de los biopotenciales correspondientes a rganos internos; al inicio, fueron registrados los del corazn, dando lugar a una transcendental tcnica de diagnstico: el electrocardiograma. Este mtodo aplicado a animales que padecan patologas cardacas ha sido una importante ayuda para el conocimiento, diagnstico y tratamiento de las mismas. En 1936 reciben el Premio Nobel conjuntamente dos farmaclogos: el ingls Henry Dale (1875-1968) y el austraco Otto Loewi (1873-1961), ambos por su contribucin al conocimiento de la transmisin qumica de los impulsos nerviosos. El primero de ellos a principio de siglo describi el fenmeno de la inversin de la accin de la adrenalina, que ha dado lugar a que luego se establezca la hiptesis de los receptores celulares y a la diferenciacin de las sustancias agonistas y antagonistas. El suizo-italiano Daniel Bovet obtuvo el preciado galardn en el ao 1957 por sus trabajos en el desarrollo de antihistamnicos y por la introduccin de los curarizantes en la prctica quirrgica. A partir de sus estudios sobre el mecanismo de accin de las hormonas, Earl Sutherland llega a la conclusin de que sus efectos son debidos a la formacin de sustancias intermedias, como el AMPc, a las que denomina

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segundos mensajeros, lo que le vale el Premio Nobel en 1971. Tres investigadores: S. K. B. Bergstroem, B. I. Samuelsson y J. R. Vane reciben dicho Premio en 1982 al haber descrito distintos aspectos de la presencia estructura y acciones biolgicas de las prostaglandinas y sustancias afines. El campo de la experimentacin biomdica se ha extendido en gran medida por la posibilidad de estudios a nivel molecular mediante tcnicas in vitro, lo que ha propiciado el advenimiento de la biotecnologa, de la ingeniera gentica y de la terapia gnica, que es el prometedor futuro que ya estamos viviendo. Los roedores Hasta aqu se ha seguido el hilo conductor de la experimentacin animal, pero haciendo principal hincapi en el tipo de experiencias y en los investigadores que las llevaron a cabo, pero cul es la historia de los animales de laboratorio o de experimentacin?. Ya se han citado diversas especies; sin embargo se sabe que la mayor parte de los animales que se utilizan en el laboratorio corresponde a los roedores: cundo se convirtieron en sujetos de eleccin para multitud de experiencias? A principio del siglo XIX se pusieron de actualidad aunque ms adelante fueron prohibidas las peleas de perros terrier; pues bien, como cebo para estos animales se comenz a criar la rata, y de sus distintas variantes se seleccion la albina. De esa utilizacin se pas a la del laboratorio, de forma que antes de 1850 ya se haban establecido algunos criaderos de ratas albinas con tal fin especfico, como lo demuestran los estudios de Savoy realizados en 1863 en Inglaterra, que determinaba el valor nutritivo de las protenas en ratas negras, pardas y blancas. Sin embargo, unos aos antes Philipaux, en Francia, ya usaba exclusivamente las albinas, en las que practic la suprarrenalectoma. En Alemania, el primer criadero de ratas albinas se sita alrededor del ao 1877, mientras que en los EEUU no se cran hasta la dcada de los noventa, cuando el profesor suizo Adolf Meyer llev consigo al Instituto de Neurologa de Nueva York, al que se incorpor, unos cuantos ejemplares provenientes del Departamento de Zoologa de la Universidad de Ginebra y de esa colonia fue que el investigador Donaldson (1857-1938) adquiri cuatro parejas para el Instituto Wistar de Filadelfia, las cuales dieron origen a la bien conocida estirpe que lleva el nombre de dicha institucin. En los aos siguientes se extendi con rapidez la cra y utilizacin experimental de las ratas tal como hoy las conocemos; fue ms adelante, en 1925, que el profesor Robert W. Dawley (1897-1949), de Wisconsin, cra y tipifica la cepa que lleva su apellido al que antepuso el de su esposa Sprague. En realidad, el ratn fue animal de experimentacin desde mucho antes; ya en el siglo XVIII el descubridor del oxgeno Joseph Priestley (1733-1804) lo utiliz en sus experiencias que dieron lugar a la clebre teora del flogisto y el qumico Lavoissier para sus estudios sobre la respiracin. Igualmente que lo sucedido con la rata, durante el siglo XIX se generaliz su uso en la investigacin seleccionndose tambin la variedad albina que haba sido muy til en la comprobacin de las leyes de la herencia establecidas por Mendel en vegetales. Del otro roedor de gran difusin, el cobayo, no se conoce bien cmo fue introducido en el laboratorio, pero ya a principios del siglo XX su gentica fue estudiada por W.E. Castle (1905) y S. Wright (1915), hasta que se establece la lnea Dunkin-Hatley en 1926.

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LA CIENCIA DEL ANIMAL DE LABORATORIO Definiciones Animal de laboratorio En la definicin de animal de laboratorio se debera incluir a cualquier tipo de ser vivo, con independencia de su categora filogentica, o taxonmica incluyendo tanto invertebrados como vertebrados, utilizados en experimentacin animal y otros fines cientficos. En la legislacin actual se define animal sin otro calificativo, a cualquier ser vivo vertebrado no humano, incluidas las formas larvarias autnomas capaces de reproducirse, con exclusin de formas fetales o embrionarias. Los animales de experimentacin son los destinados a ser utilizados en experimentos. Las ciencias fundamentales en las que se utilizan son la biologa (biomedicina), veterinaria y agropecuaria, dentro de las siguientes reas: a) Estudios biolgicos (incluidos los mdicos fundamentales) b) Desarrollo y control de calidad de productos y aplicaciones para medicina humana y veterinaria, fabricacin de productos farmacuticos o alimenticios y pruebas de eficacia o seguridad. c) Diagnstico y prevencin de enfermedades alteraciones de la salud, prevencin de anomalas o sus efectos, diagnstico y tratamiento de stas d) Valoracin, deteccin normalizacin o modificacin de las condiciones fisiolgicas en el hombre, los animales vertebrados, invertebrados o plantas. e) Proteccin del hombre, los animales y el ambiente por toxicologa u otras evaluaciones de seguridad. f) Educacin y formacin g) Otros (ejemplo estudios ecolgicos, investigacin mdico-legal y forense) Por tratarse de un sujeto experimental, se acua el concepto de reactivo biolgico: animal de experiencia, en funcin del tema de estudio, capaz de dar una respuesta fiable y reproducible. Su pureza debe ser vigilada, controlada y contrastada lo mismo que otro reactivo (qumico o fsico), sin olvidar su posible contaminacin tanto bitica como abitica, que puede generar un efecto distorsionador sobre los resultados esperados y/o observados en el proceso experimental. Por otra parte, la posibilidad de reproducir las experiencias est limitada por su propia variabilidad, sobre esta base el empleo de animales homogneos asegura la fiabilidad de la respuesta esperada. Nace as el concepto de homogeneidad del reactivo biolgico, estableciendo diferentes tipos relacionados entre s:

Homogeneidad somtica: Igualdad de sexo, peso, edad. Fcil en roedores y difcil en animales grandes (carnvoros, primates, herbvoros) (ver cap. 2.). Homogeneidad gentica: Obtenida por una tasa de consanguinidad elevada (ver cap. 6.). Homogeneidad sanitaria: Tendente a evitar posibles perturbaciones debidas a estados patolgicos no deseados, que influyen en la expresin gentica del animal (genotipo), condicionando a largo plazo el fenotipo y a corto plazo el dramatipo (estado fsico). El grado de homogeneidad sanitaria establece los tipos o categoras de los animales de laboratorio y las instalaciones donde se producen o mantienen (ver cap. 5., 7. y 8.).

El objetivo final es la obtencin de animales biolgicamente estandarizados, es decir genticamente uniformes, mediante seleccin colectiva en relacin con determinadas caractersticas anatmicas, fisiolgicas, ecolgicas y sanitarias. Los animales estandarizados deben estar sometidos a un control gentico, nutricional, higinico y epidemiolgico constante. A este concepto habra que aadir el de estandarizacin de las variables ambientales del espacio vital ocupado por el animal: temperatura, ventilacin, humedad, luz y las variables de ndole etolgico o de comportamiento (territorialidad, agresividad, hacinamiento, etc.). Los factores que alteran tanto la estandarizacin del animal y como

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consecuencia los resultados experimentales, se reflejan en el Cuadro 1-1. Buena parte de este libro se dedica al anlisis de cmo se puede controlar este amplio conjunto de factores. Otro trmino bsico es el de los centros dedicados a la obtencin de animales de laboratorio (animalarios, bioterios, estabularios o unidades de produccin y/o experimentacin animal). Las funciones de estos centros van, desde la produccin de reactivos biolgicos de alta calidad, hasta el mantenimiento de especies o cepas no producidas en sus instalaciones. En ellos se debe evitar la intromisin de animales y personas incontroladas y llevar una permanente vigilancia de las poblaciones, garantizando la constitucin gentica y el perfecto estado sanitario. Sirven de suministrador a los investigadores y/o mantienen los animales en fase experimental, asesorando a otros centros productores o a los usuarios, en las fases pre/post-experimental (eleccin del modelo, tamao de muestra, consulta bibliogrfica, bienestar y salud en fase experimental, anlisis de alteraciones en relacin al modelo). En ellos se puede realizar la centralizacin de otros elementos relacionados con el animal (material y equipamiento) y el desarrollo de investigacin relacionada con el animal de experimentacin, adems de la formacin y/o especializacin de profesionales. Muchos de estos centros actan como empresas o forman parte de los servicios tcnicos de apoyo a la investigacin o centros de instrumentacin cientfica de universidades, hospitales, centros de investigacin o laboratorios. Las caractersticas de este tipo de establecimientos se comentan ampliamente en el cap. 5. Experimentacin animal Por un lado, se define como una actividad que tiene como misin evidenciar o aclarar fenmenos biolgicos sobre especies animales determinadas. Pero a la vez se define como todo acto experimental o cientfico que entrae un ataque al estado de bienestar del animal, susceptible de causarle dolor, sufrimiento, angustia o agravio. Este doble concepto, destacando el enfoque proteccionista est incluido en la Directiva del Consejo 86/609/CEE relacionada con este tema. En el trmino experimento se incluye toda actuacin que de manera intencionada o casual pueda dar lugar al nacimiento de un animal destinado a experimentacin. Quedan excluidos los mtodos admitidos en la prctica moderna para el sacrificio (mtodos eutansicos) e identificacin de los animales. Se entiende que un experimento comienza en el momento en que se inicia la preparacin de un animal para su utilizacin y termina cuando ya no se va a hacer ninguna observacin ulterior a dicho experimento. Se considera asimismo, experimento a la utilizacin de animales, an cuando se eliminen el dolor, sufrimiento, lesin o estrs prolongados, mediante el empleo de anestesia, analgesia u otros mtodos.

En la significacin de la experimentacin animal existen dos ideas bsicas. La primera es que la importancia de la interpretacin de los resultados y la apreciacin de la transposicin de stos de una especie a otra, depende del modelo experimental utilizado; sera la nocin de competencia o actuacin, es decir qu fenmeno y cmo lo queremos explicar. La segunda idea, es que no existe un modelo perfecto transponible al hombre, pero puede haber una infinidad de modelos experimentales, cuyas repuestas fragmentarias al converger, incrementan la significacin biolgica del fenmeno observado. En este sentido el modelo animal experimental, debe reproducir un efecto proveniente del sujeto original, poseer una estructura, una lgica propia y realizar actos determinados. Los diferentes tipos de modelos se establecen en base a la multiplicidad de especies zoolgicas, sistemas metablicos, sistemas fisiolgicos, numerosas malformaciones espontneas, mutaciones patolgicas obtenidas por seleccin y patologas provocadas o experimentales.

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CONTROL DE LOS FACTORES QUE ALTERAN A LOS ANIMALES Y AL EXPERIMENTO

Factores
Efectos biolgicos, por ejemplo: Genotipo Endoflora, parsitos Grmenes ambientales Aire Alimento y cama Agua Plantilla, personal Insectos Parsitos (endo y ecto) > > > > > > > > >

Control de los factores (definir los PNTs)

Endogamia, exogamia, perfil gentico, esquemas de rotacin, esquemas de reproduccin asistida por ordenador Animales gnotobiticos, SPF, convencionales, tcnicas gnotobiticas, transferencia de embriones, descontaminacin biolgica Barrera higinica efectiva, apropiado diseo de las instalaciones Filtros de aire (filtros de polvo, HEPA), renovaciones Pasteurizacin, esterilizacin, irradiacin, PNT definidos Pasteurizacin, esterilizacin, acidificacin, filtracin Air-lock de paso, cambio de ropa, higiene, zoonosis, alergias Barreras y apropiado diseo de las instalaciones Apropiado diseo de construccin profesional Cuarentena, barreras y medidas higinicas de contencin efectiva

Otros animales y roedores > salvajes Efectos no biolgicos, por ejemplo: Unidad animal, habitacin Clima, T, humedad, aireacin, presin del aire, de gases Luz, perodo, intensidad, color Sonido, ruido, intensidad, frecuencia Jaulas Alimento Cama Experimento animal, por ejemplo: Eleccin del modelo, tamao de muestra, diseo estadstico Administracin de sustancias, tratamientos, operaciones quirrgicas > > > >

Planificacin, diseo y construccin de las instalaciones Sistema de climatizacin, diseo apropiado, basado en la produccin de calor de los animales, ajuste automtico de los valores preseleccionados. Encendido peridico automtico, reduccin gradual, ultravioleta Aislamiento, prevencin del sonido originado durante el trabajo, insonorizacin del equipo e instalaciones Superficies suaves, conductividad de la temperatura, bienestar Formulacin de la dieta, dieta con ingredientes naturales, dieta purificada, dieta definida qumicamente, control de calidad Libre de polvo, hecha de material no tratado qumicamente, poder de absorcin adecuado, intervalo de cambio Consultas bibliogrficas, diseo y planificacin previa Mtodos definidos o estandarizados, PNT definidos

> > > > >

Cuadro 1-1. Factores que alteran la calidad del reactivo del biolgico y los resultados experimentales, y formas de control. PNT: procedimientos Normalizados de Trabajo. SPF: del ingls specific pathogen free (libres de patgenos especficos); HEPA: del ingls high efficiency particulate air (filtro de partculas de alta eficacia).

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En lneas generales se establecen dos tipos de modelos: el tipo pragmtico o global, que cumple como requisito poseer una amplia zona de actuacin, posiblemente comn al sujeto inicial, pero explicando fenmenos difciles. Por ejemplo un estudio cancergeno in vivo (accin carcinognica de un producto); y el tipo explicativo o especfico, el cual presenta un rea de similitud con el sujeto inicial lo ms reducida posible, permitiendo explicar un mecanismo de accin especfico. Por ejemplo un estudio cancergeno in vitro (test de AMES) sobre estructuras celulares o tisulares concretas. Se han descrito ms de 4500 modelos de animales de laboratorio (Festing, 1987) en el mundo, nmero que se ha incrementado sustancialmente con la aparicin, en el ltimo decenio, de los animales transgnicos e inmunodeprimidos. Podramos citar distintos ejemplos de importantes diferencias anatmicas, fisiolgicas, bioqumicas y hematolgicas segn la especie. En el caso del sistema digestivo, la difusin y absorcin de un producto es muy diferente en especies con estmago simple, intestino corto y ciego reducido como los carnvoros (gato), frente a los lagomorfos o rumiantes. La tolerancia congnita a un medicamento es muy variable, segn la especie, el conejo es muy resistente a la accin de la atropina y la morfina. La rata es muy resistente a la accin de los hetersidos digitales, mientras que el gato es muy sensible a ese tipo de drogas. Significacin de la experimentacin animal La significacin de la utilizacin de animales como reactivos biolgicos, en el contexto de la investigacin cientfica, vendra dada por los beneficios derivados de su uso y por la importancia cuantitativa (nmero de animales utilizados). El National Research Council (EEUU), hace un resumen en (2), de la importancia que ha tenido para la humanidad el uso de animales destinados a experimentacin. Han contribuido de manera directa y junto con los cambios en higiene y calidad de nutricin, a incrementar la esperanza de vida del hombre, en 25 aos desde 1900 a 1990. Intervienen activamente en la tecnologa de produccin y validacin de vacunas, destacando el caso de la poliomielitis (en EEUU, 58.000 personas afectadas en 1952 y slo 4 casos registrados en 1984). En el estudio de las enfermedades de imnudeficiencia adquirida, como el SIDA. Se descubren enfermedades del hombre similares en animales (ej. en primates, el caso del Lentivirus Tlinfotrpico en gato, de igual morfologa, pero con diferentes antgenos que el HIV). En este sentido los animales de experimentacin han actuado como modelos para conocer diferentes enfermedades en el hombre (diabetes, cncer). La experimentacin animal ha favorecido el avance de la cardiologa, permitiendo las operaciones a corazn abierto, los trasplantes y el implante de marcapasos o similar. Ms del 80% de las patologas cardacas han sido tratadas previamente en animales. Desarrollo de la biologa/tcnica de trasplantes y por aadidura de la inmunologa: corazn, rin dilisis- (en EEUU ms de 30.000 personas/ao son transplantadas), igualmente en los transplantes de crnea, retina, piel, etc. Los animales de laboratorio han permitido poner a punto la metodologa clnica y tcnica, como la tomografa axial computarizada, la resonancia magntica o los tratamientos radiolgicos, probados previamente en modelos animales. El conocimiento de las funciones del cerebro: actividad locomotora y sus disfunciones (epilepsia, esclerosis mltiple) y la relacionada con la prdida de la visin o la memoria (afecta a un 5% de ancianos de ms de 65 aos, Alzehimer y otras enfermedades). Drogadiccin, regeneracin de las clulas nerviosas, aprendizaje, dolor, etc. Otro factor importante es el beneficio para otras especies animales, contribuyendo al desarrollo de vacunas, antibiticos, anestesias o similar de aplicacin directa a los animales domsticos. En la actualidad y dentro de reas prioritarias de investigacin como es el caso de la biotecnologa, la experimentacin animal sigue desempeando un papel de primer orden:

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En agroalimentacin: aislamiento y caracterizacin de genes de inters agronmico y su utilizacin en el diseo de plantas transgnicas; aplicacin de las tcnicas de ingeniera gentica al estudio de las interacciones entre plantas y otros organismos que propicien el desarrollo de una agricultura ms respetuosa con el ambiente; diseo de mtodos de diagnstico de organismos perjudiciales para las plantas y desarrollo de nuevos marcadores moleculares. En sanidad humana y animal: desarrollo de metodologas para el diagnstico de enfermedades, puesta a punto de estrategias y mtodos para la obtencin de vacunas. En el diseo de vacunas especficas para la proteccin humana o animal. En la obtencin de nuevos modelos para el tratamiento de enfermedades o el anlisis de frmacos e identificacin y caracterizacin molecular de dianas de accin farmacolgica. En el desarrollo de procesos biotecnolgicos: mejora de sistemas biolgicos de produccin de protenas o metabolitos mediante el uso de organismos modificados por ingeniera gentica, analizando su estabilidad y bioseguridad. En investigacin del medioambiente: nuevas metodologas biolgicas para la deteccin de contaminantes. En estudios para mejorar la bioseguridad en los procesos que impliquen la liberacin al medio ambiente de organismos modificados genticamente. En investigacin genmica: anlisis estructural y funcional de genomas con especial relevancia en la salud o con trascendencia econmica para los sectores agroalimentario o industrial. En el mapeo fsico y gentico de genomas, la secuenciacin total o parcial de los mismos y/o transcritos, nuevas tecnologas para el anlisis funcional de genomas, los anlisis globalizados de expresin gnica (ADN chips). En el desarrollo de tecnologas para la identificacin de nuevos genes implicados en enfermedades y su utilizacin como dianas en el diseo de diagnsticos y terapias. Desarrollo de modelos animales de enfermedades humanas. Diagnstico molecular de enfermedades de origen gentico. En el rea de salud y farmacia, los animales intervienen en procesos experimentales relacionados con la caracterizacin molecular de enfermedades genticas, la manipulacin y terapia gnica somtica y el desarrollo de vectores de transferencia gnica. Igualmente en la aparicin de nuevos modelos, con especial nfasis en modelos de patologa molecular y el desarrollo de tecnologa e ingeniera biomdica para el diagnstico clnico, principalmente en las tecnologas no invasivas. Otra rea prioritaria es la de xenotransplantes (rganos, piel) de cerdo y primates a humanos con los problemas de aceptacin de rganos e introduccin de virus zoonticos no deseados (retrovirus endgenos y SIV). En investigacin en cncer: estudio de los mecanismos implicados en la progresin tumoral. Control de la proliferacin, diferenciacin y muerte celular. Invasin y metstasis. Desarrollo de nuevos marcadores de progresin. Nuevas estrategias teraputicas. Factores de crecimiento: desarrollo y utilizacin para el control de la progresin tumoral. Identificacin y caracterizacin de antgenos tumorales. Activacin de respuestas antitumorales. Eficacia, efectos y resistencia de la inmunoterapia, radioterapia y quimioterapia. Factores celulares y moleculares predictores de radiosensibilidad. Prevencin del cncer: genes de susceptibilidad y alteraciones genticas inducidas; desarrollo de procedimientos para el diagnstico precoz. En investigacin sobre enfermedades infecciosas: a) Enfermedades bacterianas: mecanismos de resistencia a antibiticos. Investigacin sobre tuberculosis y brucelosis: caracterizacin molecular; validacin de nuevos mtodos de diagnstico rpido. Persistencia del patgeno y su relacin con estados de inmunosupresin. b) Enfermedades vricas: virus de la hepatitis: mecanismos de dao heptico; factores de evolucin a cronicidad, cirrosis y hepatoma; nuevas estrategias teraputicas. Virus de la inmunodeficiencia humana:

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evolucin del virus en el individuo infectado; papel del husped en la progresin de la enfermedad; terapias combinadas de inmunomodulacin y antivirales. Implicaciones patognicas del sistema inmune en las enfermedades infecciosas. Bases moleculares y celulares de la respuesta inflamatoria Factores solubles y receptores de interaccin celular. Aspectos patognicos de la respuesta inmune como responsables de dao somtico en infeccin y posibles pautas de control especfico. Diversas enfermedades de primer orden de origen bacteriano, vrico o parasitario, estn siendo investigadas en diferentes modelos animales. Destaca la leishmaniosis, el paludismo, el Hanta Virus, enfermedad de Chagas. En investigacin de neurociencias: bases moleculares y celulares de las enfermedades neurodegenerativas, con especial atencin a desarrollos teraputicos. Mecanismos de regeneracin y reparacin del tejido nervioso: factores neurotrficos, mecanismos de reinervacin. Mecanismos del dolor: bases moleculares de la tolerancia a opiceos. Nuevas estrategias teraputicas. Procesos de envejecimiento y oxidacin celular. Deteccin de los mecanismos de desarrollo de la memoria y genoterapia (humana) para uso en reas como la demencia. En investigacin sobre enfermedades cardiovasculares: biopatologa de la pared vascular. Aterognesis, progresin y regresin de la lesin. Trombosis arterial. Regulacin de la respuesta vascular a los procedimientos de revascularizacin. Cardiopata isqumica. Proteccin miocrdica. Fisiopatologa de la isquemia y reperfusin miocrdica. Bases celulares y moleculares de la hipertensin arterial a nivel vascular y miocrdico. En investigacin farmacutica: diseo, sntesis y accin biolgica de nuevos agentes teraputicos de inters farmacutico. Farmacologa y toxicolologa de nuevos productos de inters farmacutico. Vas y productos de biotransformacin de nuevos frmacos y txicos. Nuevas formulaciones para la vehiculizacin y liberacin selectiva de frmacos en rganos y tejidos. Nuevos mecanismos de accin a nivel molecular y celular de frmacos y biomolculas con inters teraputico ya demostrado. En la actualidad la experimentacin animal relacionada con las principales enfermedades humanas est integrada dentro del estudio de los aspectos moleculares, celulares y clnicos e igualmente se est incentivando el desarrollo y validacin de modelos moleculares y celulares alternativos al uso de animales, fundamentalmente en farmacologa y toxicologa (ver cap. 16, 17 y 18). El segundo aspecto de la significacin de la experimentacin animal es el nmero de animales destinados a la investigacin cientfica. En el Cuadro 1-2 se citan algunos datos para diferentes pases, aportados con cautela. Destaca el dato aportado por Evelyn Mesquida que calcula unos 200 millones en todo el mundo. En EEUU, se calcula entre 17-22 millones, los animales designados a experimentacin, frente a los 5 billones que anualmente se destinan para alimentacin, obtencin de pieles o como animales de compaa (unos 110 millones de perros y gatos domsticos, segn datos del U.S. Department of Agriculture, 1985). EEUU es el pas de mayor consumo, con una tendencia a la reduccin del nmero de animales empleados entre 1967 y 1987. Destaca el incremento de primates no humanos. En educacin slo 53.000 animales/ao, para 1986.

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NUMERO DE ANIMALES UTILIZADOS EN EXPERIMENTACION ANIMAL

PAIS EEUU UE REINO UNIDO FRANCIA ITALIA PAISES BAJOS SUECIA FINLANDIA SUIZA ESPAA animales/ao 30.000.000 14.500.000 3.181.768 3.645.708 2.000.000 876.058 447.542 400.000 1.992.794 558.823 CONSIDERACIONES 1986 de 20 a 40 millones Datos de 1990-93 Ao 1991, 20% ms que en 1981 Valor estimado para 1991 Datos de 1989, 1.234.560 en 1991 Valor estimado para 1991 Valor estimado para 1989 Datos para 1989 solo 14 monos, no en cosmtica Datos para 1983, reduccin en un 12% en 1984 Valor estimado para 1991

Cuadro 1.2. Utilizacin de animales de laboratorio en diferentes pases. Se aportan datos de diferentes aos, segn la informacin estadstica disponible. Vase cuadro 12-5, para datos detallados de la unin Europea en 1991 y 1996.

En la Unin Europea (UE) entre 12-14 millones (COM-88-CEE), el 20% de los cuales se utilizan para cumplir exigencias reglamentarias, y el resto (80%) en investigaciones acadmicas o en actividades de desarrollo e investigacin industrial. El pas con ms control estadstico es el Reino Unido, se estim para 1988 en 3.5 millones de animales. En la actualidad unos 2.6 millones (segn el Home Office, una reduccin del 50% respecto a la dcada de los 70). Estas cifras no coinciden con las aportadas por otras fuentes, que estiman que no estn incluidos los ms de 5 millones de ratones utilizados por ao en la tecnologa de transgnicos (BBC Science's Sumit Bose: "Science is trying to get its own house in order", September 7, 1999). A modo de ejemplo, en Italia se utilizaron 2 millones de animales en 1989, un 11.8% menos que en 1988, que supone el 13.8% de los utilizados en Europa Occidental: 14.500.000. La tendencia de reduccin se mantiene para 1991 (ver tab. 1.2) En este caso el 94.1% son rata y ratn, en un porcentaje similar al del resto de Europa, EEUU, Suiza, Canad y Japn. Los datos de la tab. 1.2., para los pases de la UE corresponden a 1991, ao de la publicacin de la primera estadstica. Para Espaa el Ministerio de Agricultura Pesca y Alimentacin (MAPA) aporta un valor inferior al real, estimando un consumo de 650.000 a 700.000 al ao. En general se observa una reduccin en el nmero de animales en todos los pases de la UE. Destaca Holanda con una reduccin entre 1991 a 1996 del 14%. Investigacin y organismos relacionados con la ciencia del animal de laboratorio Las perspectivas de futuro de la ciencia del animal de laboratorio se fundamentan en dos principios: a) Mayor especializacin al estandarizar el reactivo biolgico y obtencin de nuevos modelos, especialmente por las tcnicas de transgenizacin (ver cap. 6.). b) Restriccin en su uso por razones etolgicas y ticas, a medida que se vayan poniendo a punto tcnicas capaces de sustituirlo, como el perfeccionamiento de cultivos celulares y tisulares, la tecnologa de diagnsticos serolgicos (radioensayo e inmunoensayos), que contribuyen a la reduccin en el uso, junto con el desarrollo de los modelos matemticos y de simulacin por ordenador (ver cap. 16, 17 y 18). La produccin y estandarizacin de los animales de laboratorio, se encuentra en pleno desarrollo y perfeccionamiento, ante las investigaciones cada vez ms sofisticadas en los campos de la inmunologa, histoqumica, control de ambiente, pruebas de medicamentos, aditivos, cosmticos. Terapia de enfer-

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medades bsicas (cardiovasculares, neurolgicas, obesidad, geriatra, diabetes) y sobre todo la etiopatologa del cncer, el SIDA y otras enfermedades vricas o bacterianas. Por otra parte con la aparicin de la tecnologa de generacin de animales transgnicos (AT), el hombre ha tenido acceso a la creacin de nuevos biomodelos experimentales insospechados hace slo una dcada. De esta manera, se han creado ratones que sobreexpresan o carecen de genes especficos y otros que portan genes heterlogos para la especie. Tambin se ha logrado la transformacin gentica de animales de granja o de mediana importancia econmica con fines experimentales o para la produccin en los fluidos corporales de los AT, de frmacos de alta demanda. Ejemplos destacables son los transgnicos para la diabetes, hipertensin, o el caso de ratones que sobreexpresan el gen de la hormona de crecimiento humana (hGH) , el antgeno de superficie del virus de la hepatitis del tipo B (HBsAg). Se calcula, que para el primer decenio del 2000 aparecern frmacos eficaces contra enfermedades degenerativas como la esclerosis mltiple, artritis y demencia senil (3). Aparecern nuevos analgsicos narcticos de eficacia similar a la morfina, pero sin adicin; terapias no txicas en enfermedades trpicales, anorticos activos y controladores del peso corporal, antihistamnicos no sedantes y otras sustancias en la actualidad en fase de Investigacin y Desarrollo (I+D). Desarrollo de la investigacin La investigacin se centra en el animal de laboratorio, con el objeto de establecer condiciones normalizadas de cra, mantenimiento, salud y manipulacin tcnica (flora controlada), cuyo objetivo final sera la consecucin de un reactivo biolgico lo ms puro posible, satisfaciendo los requerimientos y necesidades del mtodo cientfico, optimizando el uso de los animales y mejorando la calidad de la investigacin mdica y biolgica. En este sentido existen al menos once publicaciones peridicas a nivel mundial que renen los ltimos avances en investigacin relacionada con el animal de laboratorio (ver tab. 1.3.). Destacan por su ndice de impacto Laboratory Animal Science, revista oficial de la Asociacin Americana de la Ciencia del Animal de Laboratorio (AALAS) y Laboratory Animals de la Federacin Europea de Asociaciones de la Ciencia del Animal de Laboratorio (FELASA). Organismos e instituciones En el Cuadro 1-3 se indica un listado de asociaciones nacionales e internacionales relacionadas con los animales de laboratorio. El ICLAS (International ccouncil for Laboratory Sciences) dependiente de la OMS (Organizacin Mundial de la Salud) incluye a ms de 40 pases diferentes, con el objetivo general de promover la colaboracin internacional en el campo de la ciencia del animal de laboratorio (edita peridicamente monografas) y sobre todo, apoya a los pases menos favorecidos para que consigan el estndar requerido, tanto para realizar investigaciones de alta calidad como para el empleo humanitario de los animales. Financia intercambios, actividades y cursos de formacin en Latinoamrica, Asia, Africa y pases del Este de Europa. FELASA engloba a las principales asociaciones de los pases de la UE, includa la SECAL. Esta federacin por medio de grupos de trabajo de expertos de todos los pases establece las guas directrices y criterios de trabajo en diferentes temas (bienestar, condiciones de mantenimiento y/o alojamiento, procedimientos experimentales, mtodos de analgesia, anestesia, eutanasia, etc.). Las principales funciones de estas asociaciones u organismos (ver Cuadro 1-3) se pueden resumir en: Mantenimiento de los recursos en modelos animales Investigacin y control de las enfermedades y patologas del animal Incremento de recursos y perfeccionamiento de instalaciones y equipos Formacin y perfeccionamiento del personal tcnico e investigador Criterios y guas de produccin, manejo y cuidado del animal de experimentacin Perfeccionamiento y desarrollo de las tcnicas alternativas y/o complementarias Investigacin entorno a zoonosis, alergias y zoopatas

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En la actualidad estn apareciendo asociaciones e instituciones cada vez ms especializadas, en temas concretos: de productores de animales (EFAT), expertos en mtodos alternativos (European Centre for the Validation of Alternative Methods, ECVAM) y el ICCVAM (Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods), de veterinarios relacionados con el animal de laboratorio (European Society of Laboratory Animal Veterinarians, ESLAV), de animales gnotobiticos (AAG) y un sinfn de grupos de expertos (en transgnicos, en ciruga, mtodos no invasivos, etc). Otra asociacin de gran transcendencia es la European Biomedical Research Association (EBRA) que agrupa a un importante colectivo de investigadores en experimentacin animal. Relacionadas indirectamente con el animal de laboratorio el Eurogroup for Animal Welfare y la Universities Federal Animal Welfare (UFAW), tienen como misin fundamental velar y fomentar el bienestar de los animales y la reduccin del dolor, sufrimiento o agravio. En gran medida han sido los promotores de la legislacin sobre animales de experimentacin y otros fines cientficos (Decisin del Consejo de Europa, de 23 de marzo de 1998, relativa a la celebracin por la Comunidad del Convenio Europeo sobre la Proteccin de los Animales Vertebrados Utilizados para Experimentacin y otros Fines Cientficos, 99/576/EC). En EEUU un equivalente a las anteriores es la American Anti-vivisection Society (AAVS). Direcciones, lneas y pginas web de estas y otras asociaciones aparecen en el anexo 2. REVISTAS
Laboratory Animal Science Lab Animal ILAR News Journal of Experimental Animal Science Experimental animals, JALAS Scandinavian Journal Laboratory Animal Science Sciencies et Techniques de l`Animal de Laboratoire Animales de Experimentacin

DIRECCION
AALAS. 70 Timber Creek Drivesuite 5, Cordova.tn 38018 65 Bleecker st. New York, NY 10012-2467 Institute of Laboratory Animal Resources. National Research Council 2101 Constitution Ave., NW. Washington, DC, Dpt. Gustav Discher Verlag JENA,. Villengang 2, Jena, D-06900 c/0 Kinokuniya Company ltd, 3-17-7. Shinjuku, Shinjuku-ku, Tokio 160-91 (Sacnd LAS NYT). Editorial Office, National Food Agency Morkho Jby Gade 19, DK-2860, Soborg Centre de Bioexperimentation Valbex. 43,BD DU 11November-1918 69622 Villeebanne, Cedex

PAIS
EEUU EEUU EEUU Alemania Japn Dinamarca

Francia

Apdo. postal 27-281, 06761. Mxico, DF ASOCIACIONES International Council for Laboratory Animal Science (ICLAS) American Veterinary Medical Association (AVMA) American College of Laboratory Animal Medicine (ACLAM) Association for Laboratory Animal Science (AALAS) American Association for Accreditation of Laboratory (AAALAC) Animal Care (AALAC) Food and Drug Alimentation (FDA) Federation European of Laboratory Animal Sciences (FELASA) Association of Applied Gnotobiotics (AAG) European Federation of Animal Technicians (EFAT) Federation of European Laboratory Animals Breeders (FELABA) University Federal Animal Welfare (UFAW) Sociedad Espaola Ciencia del Animal de Laboratorio (SECAL) Sociedad Espaola de Experimentacin Animal (SEEA) Colegio Brasilero de Experimentaao Animal (COBEA) Asociacin Centroamericana, Caribe y Mxico del Animal de Laboratorio (ACCMAL)

Mxico PAIS MUNDIAL EEUU

EUROPA

ESPAA

BRASIL CENTRO AMRICA Cuadro 1-3. Principales publicaciones peridicas (revistas y monografas) y asociaciones cientficas relacionadas con el animal de experimentacin. En el caso de asociaciones slo se indican las ms representativas.

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Ciencia del Animal de Laboratorio

RESUMEN A lo largo de toda la historia de la Humanidad se vienen buscando remedios para las enfermedades; en tal empeo han sido siempre imprescindibles las observaciones hechas en los animales con la doble finalidad, por un lado, adquirir conocimientos sobre la organizacin de los seres vivos, especialmente de los ms cercanos filogenticamente a la especie humana; por otro, comprobar los efectos de las sustancias de posible aplicacin como medicamentos, para poder definir sus propiedades y aplicaciones, as como sus mecanismos y lugares de accin. La ciencia del animal de laboratorio ha evolucionado en lnea con la biomedicina con importantes aportaciones al desarrollo de la medicina y la investigacin bsica y aplicada de las ramas relacionadas. Sobre esta base los esfuerzos se han dirigido a la obtencin de animales cada vez ms estandarizados desde el punto de vista biolgico, gentico y sanitario. Son numerosas las revistas especializadas, asociaciones e instituciones relacionadas con el animal de experimentacin. BIBLIOGRAFA Barona JL: La Fisiologa. Origen histrico de una ciencia experimental. Ediciones Akal, Torrejn de Ardoz (Madrid), 1991 Baker H.J., Lindsey JR, Weisbroth SH: The laboratory rat. Academic Press, 1979 Bellver, C.: Desarrollo de la investigacin en la industria farmacutica. IV Congreso de la SECAL. Universidad de Granada. 1996 Boylan J.W.: Founders of experimental physiology. JF Lehmanns Verlag, Munich, 1971 Cannon W.B.: The way of an investigator. Hafner Publishing Co, New York, 1968 Fenn W.O.: History of the international congresses of physiological sciences 1889-1968. Waverly Press, Baltimore, 1968 Festing, M. F.: International index of laboratory animals. Laboratory Animal Ltd. London. 1987 National Institute Council: Use of laboratory animals in biomedical and behavioral research. C.D. National Academic Press. 102 pp. 1988 Foster H.L., Small J.D., Fox JG: The mouse in biomedical research. Academic Press, 1981 Guerra F.: Historia de la medicina. Ediciones Norma, Madrid, 1985 Krayer O.: Rudolf Boehm and his school of pharmacology. Ed. Reiter, Mnchen, 1998 Lan P: Historia universal de la medicina. Salvat Medicina, Barcelona, 1998 Raskov H., Uvns B.: History of the international union of pharmacology. IUPH 8, Congress, Tokyo, 1980 Royo, R.: Actualidad de Luigi Galvani en la biologa y la medicina moderna. Quaderni dellIstituto Italiano di Cultura in Spagna IV. Madrid, 1941 Rupke, N.A.: Vivisection in historical perspective. Routlege, London, 1987 Owen S., Thomas C., West P., Wolfensohn S., Wood M.: Report on primate supply for biomedical scientific work in the UK. EUPREN UK Working Party. University of Oxford, University Laboratory of Physiology, UK. Lab Anim Oct;31(4):289-97, 1997 Poole, T.: Happy animals make good science. Lab Anim Apr;31(2):116-24,1997 Santos, A.: Avances en la ciencia a travs del Premio Nobel. Realigraf. Madrid, 1998 Singer, C.: A short history of anatomy & physiology from the Greeks to Harvey. New York, 1957