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QUE ES?

Es el conjunto de tcnicas y mtodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeez estn fuera del rango de resolucin del ojo normal.

HISTORIA : EL NOMBRE
La palabra microscopio fue utilizada por primera vez por la "Accademia dei Lincei Micro=pequeo Scopein=ver

ANTONY VAN LEENWENHOEK


En el siglo XVII un comerciante holands, utilizando microscopios simples de fabricacin propia describi por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glbulos rojos

MICROSCOPIO DE LEEUWENHOEK

CARACTERSTICAS DEL MICROSCOPIO DE LEEUWENHOEK

El primitivo microscopio de Leeuwenhoek tena dos lupas combinadas con las que lleg a alcanzar 200 aumentos

1. http://youtu.be/GBIw1qAOBjA

HISTORIA: EL INVENTO

Se invent, hacia 1610, por Galileo, segn los italianos, o por Jansen, en opinin de los holandeses

GALILEO GALILEI
La Accademia dei Linceii era una sociedad cientfica a la que perteneca Galileo y publicaron un trabajo sobre la observacin microscpica del aspecto de una abeja

MALPIGHI
Las primeras publicaciones importantes aparecen en 1660 y 1665 cuando Malpighi observa los capilares sanguneos y Hooke publica su obra Micrographia

ERNST ABBE
Las mejoras mas importantes de la ptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teora del microscopio

CARL ZEISS
Mejora la microscopa de inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro lo que permite obtener 2000 aumentos

MICROSCOPIOS DEL SIGLO XVIII

EVOLUCIN DEL MICROSCOPIO

EVOLUCIN DEL MICROSCOPIO

INTERACCIN

LA MICROSCOPIA IMPLICA

SUJETO DE ESTUDIO / MUESTRA

RADIACIN INCIDENTE

DIFRACCIN
Una onda puede rodear un obstculo en su propagacin alejndose del comportamiento de los rayos rectilneos.

2. http://youtu.be/CV0Pt2LExMs

REFLEXIN

3. http://youtu.be/kJlXqby_5lY

La reflexin es el cambio de direccin de un rayo o una onda que ocurre en la superficie de separacin entre dos medios, de tal forma que regresa al medio inicial. Ejemplos comunes son la reflexin de la luz, el sonido y las ondas en el agua.

REFRACCIN
Es el cambio de direccin que experimenta una onda al pasar de un medio material a otro. La refraccin se origina en el cambio de velocidad de propagacin de la onda.

4. http://youtu.be/-QhFpaLcjos

EXCEPTUANDO

Tcnicas especiales
Iones Fuerza en atmica campo
Efecto tunel

FUNDAMENTO DE LA MICROSCOPA
Cuando el observador se acerca el objeto se agranda Pero a menos de 25 cm no se ve con claridad Si se aumenta el ngulo visual se ve con claridad

ESQUEMA DEL MICROSCOPIO


Un tubo cilndrico aloja el sistema ptico ocular/objetivo. Una platina de original diseo permite observar las preparaciones, que son iluminadas por un espejo cncavo que concentra la luz sobre el objeto a estudiar.

ESCALA ENTRE UNA CELULA VIVA Y LOS ATOMOS

PARMETROS PTICOS
Aumento Poder de resolucin N de campo Profundidad de foco Contraste

AUMENTO (X)
Se calcula multiplicando el aumento del objetivo por el aumento del ocular

PODER DE RESOLUCIN
Distancia para que dos puntos se diferencien. Mayor, cuando menor es la longitud de onda. Mayor, cuanto mas grande es la apertura numrica. Mayor, con aceite de cedro.

NMERO DE CAMPO
Es el dimetro de la imagen observada a travs del ocular, expresado en milmetros

PROFUNDIDAD DE CAMPO

CONTRASTE
Diferencia de absorcin de luz entre el objeto y el medio Puede aumentarse con las tinciones

BUENOS PARMETROS

MICROSCOPIO OPTICO (MO)


Usa luz visible Crea una imagen aumentada del objeto.

El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta (15 veces). Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores (hasta 2000 veces)

MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO PARTES

Microscopio ptico (MO)


MO compuesto: Tiene dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes

PARTE MECNICA QUE SE PUEDE DESMONTAR


Estativo

Cabezal

Tornillos de la platina

Oculares Objetivos Condensador

SISTEMA DE SOPORTE O ESTATIVO


Tubo Platina

Brazo

Pe

SISTEMA DE AJUSTE
Anillo de ajuste de los oculares Tornillo que permite mover el cabezal

Tornillos del condensador

Palanca de cierre del diafragma

Tornillos reguladores de la platina

SISTEMA DE ENFOQUE
Freno

Tornillo macromtrico

Tornillo micromtrico

PLATINA

Pinza

Escala

PARTE PTICA
Sistema de iluminacin: fuente de luz, condensador y diafragma
Lentes: objetivos y oculares

SISTEMA DE ILUMINACIN: FUENTE DE LUZ


Suele ser una lmpara halgena de intensidad graduable Se enciende y apaga con un interruptor En el exterior puede tener un filtro
Lmpara

Filtro

Interruptor y graduacin de la luz

CONDENSADOR Y DIAFRAGMA
Condensador: concentra la luz de la lmpara en un punto de la preparacin Diafragma o iris (est dentro del condensador):si se cierra mejora el contraste, pero empeora la resolucin

LENTES: OBJETIVOS
Estn colocados en el revolver Tienen un sistema de amortiguacin Un anillo coloreado indica los aumentos Son de 4, 10, 40 y 100 (inmersin) aumentos

OBJETIVOS

Rojo 4x

Amarillo 10x

Blanco 100x

Azul 40x

Amortiguacin

LENTES: OCULARES

Ajuste de la distancia interpupilar

Oculares

OCULARES: 10x, 15x, 20x

TETRAOCULARES / CMARA

MATERIAL NECESARIO: PORTAS Y CUBRES

ACEITE DE INMERSIN
Hoy no son de madera de cedro, sino sintticos Los hay de baja, media y alta viscosidad Su empleo es imprescindible con el objetivo de inmersin (100x)
CARL ZEISS

MANEJO DEL MICROSCOPIO


No poner la preparacin al revs Regular la luz a intensidad media Ajustar condensador y diafragma al medio Empezar por poco aumento Mirando por fuera subir la platina Enfocar y ajustar Pasar al siguiente aumento y enfocar Al acabar retirar la preparacin Apagar la luz

CONSERVACIN DEL MICROSCOPIO


Ponerle su funda al guardarlo Limpieza de lentes con papel de gafas El exceso de xilol al limpiar las lentes desgasta el cemento Usar pincel y pera de aire

TIPOS DE MICROSCOPIOS
Microscopio ptico Simple Microscopio ptico Microscopio ptico Compuesto Lupa M.O. Normal Campo oscuro Contraste de fases Fluorescencia

Tipos de microscopios

Microscopio electrnico

Transmisin Barrido Digital Efecto tnel o cuntico

MO / ME

PODER DE OBSERVACIN DEL MICROSCOPIO

VARIANTES DE OBSERVACIN EN (MO).


Microscopa ptica normal (de campo brillante coloreado):

El material a observar se colorea con colorantes especficos que aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera

Clula de Pisum, coloracin: safranina-fast-green

MICROSCOPA DE CAMPO OSCURO


Utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen.
El campo de visin del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y slo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espcimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minsculos que se estn analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin manchas, invisibles con iluminacin normal.

MICROSCOPA DE CAMPO OSCURO

Treponema pallidum

MICROSCOPA DE CONTRASTE DE FASES


Microscopa en contraste de fase: se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las clulas sin colorear. Es ideal para especmenes delgados, o clulas aisladas. Este tipo de microscopio es muy til a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biologa y medicina

Microscopa diferencial de contraste de interferencia (DIC): Utiliza dos rayos de luz polarizada y las imgenes combinadas aparecen como si la clula estuviera proyectando sombras hacia un lado. Fue diseado para observar relieves de especimenes muy difciles de manejar, es muy utilizado en los tratamientos de fertilizacin in-vitro actuales. DIC se usa cuando el espcimen es muy grueso para usar contraste de fases

MICROSCOPA DE CONTRASTE DE FASES

Fertilizacin in vitro

Clulas epiteliales

MICROSCOPA DE CONTRASTE DE FASES


Phase contrast image of cultured epithelial cells using a 20X objective
Nomarski, microscopa diferencial de contraste de interferencia Clulas epiteliales 200X

MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA
Una sustancia natural en las clulas o un colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energa absorbida como rayos luminosos: esto se conoce como fluorescencia. La luz fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera directamente del colorante.
Clulas epiteliales , triple coloracin: ncleo (azul), microtubulos (verdes), actina (rojo)

MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA

Clulas epiteliales 200 x

MICROSCOPIO ELECTRONICO
Utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imgenes de objetos diminutos.

Permiten alcanzar una capacidad de aumento muy superior a los microscopios convencionales (hasta 2 aumentos comparados con los de los mejores microscopios pticos) debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles".

PRIMER MICROSCOPIO ELECTRONICO


Utiliz un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de barrido (SEM).

ERNST RUSKA
El microscopio electrnico de transmisin (T.E.M.) consigui aumentos de 100.000 X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931

PRIMER M.E. EN ESPAA (1949)

MICROSCOPIO ELECTRNICO

MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO


SEM (Scanning Electron Microscopy), es aquel que utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz para formar una imagen.
Tiene una gran profundidad de campo, la cual permite que se enfoque a la vez una gran parte de la muestra. Tambin produce imgenes de alta resolucin, que significa que caractersticas espacialmente cercanas en la muestra pueden ser examinadas a una alta magnificacin. La preparacin de las muestras es relativamente fcil pues la mayora de SEMs slo requieren que estas sean conductoras.

MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO

M.E. DE TRASMISIN
Un microscopio electrnico de transmisin (TEM, por sus siglas en ingls, o MET, en espaol) es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto, debido a que la potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la longitud de onda de la luz visible. Lo caracterstico de este microscopio es el uso de una muestra ultrafina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces.

M.E. DE TRASMISIN

Bacilos en divisin

Comparacin de la formacin de la imagen en un microscopio de transmisin ptica, un microscopio electrnico de transmisin (TEM), un microscopio electrnico de barrido (SEM) y un tubo de rayos catdicos (CRT) de pantalla TV

M.E DE BARRIDO

Glbulo rojo

M.E. DE BARRIDO

Glbulo blanco

Bacterias en la punta de un alfiler. MER

ALGA FILAMENTOSA

HONGOS

AVISPA

ESPERMATOZOIDE

CAROS

NIEVE

POLEN

OVULO

VENTOSAS DE UN CALAMAR