Microbiologa General

Organizacin y enfoque de la asignatura

Contenidos: estructura, gentica, diversidad microbiana, crecimiento bacteriano y su control. Integracin de las actividades tericoprcticas Nivel creciente de exigencia, profundidad e integracin de contenidos Observacin, investigacin, realizacin de informes, planteo y resolucin de problemas prcticos Anlisis crtico de la informacin recibida

Objetivos
Que los alumnos aprendan: Principios generales de estructura y funcin de clulas procariticas Principios generales de clasificacin y diversidad de microorganismos, procesos bioqumicos que ocurren en ellos y bases genticas del crecimiento y evolucin microbiana Mecanismos de intercambio y adquisicin de informacin gentica en bacterias; causas, consecuencias y uso de las mutaciones. Mtodos de control del crecimiento microbiano. Antibiticos y resistencia Usos de microorganismos en alimentacin, agricultura, procesos industriales y biotecnolgicos. Relacin husped-parsito, evasin de la respuesta inmune y patogenia

Organizacin y enfoque de los Trabajos Prcticos

Fundamentos tericos

Seminarios de Trabajos Prcticos

Discusin de cuestionarios y trabajos cientficos Explicacin de metodologas

Ejercicios de Laboratorio
Parcialitos

Instrucciones detalladas Grupos de trabajo

Evaluacin

Informes de Trabajos Prcticos Parcial de laboratorio

Ciencia

biolgica bsica: suministra algunas de las herramientas de investigacin ms verstiles para determinar la naturaleza de los procesos caractersticos de la vida. Ya que las clulas microbianas comparten con los organismos pluricelulares muchas propiedades bioqumicas, alcanzan elevadas densidades de poblacin y son fcilmente manipulables para estudios genticos, lo que los convierte en modelos adecuados para comprender funciones celulares en animales y plantas
Ciencia

biolgica aplicada: en campos diversos como medicina, salud pblica, agricultura e industria (empleo de microorganismos cultivados a gran escala en la elaboracin de productos comerciales de alto valor agregado), microbiologa alimentaria etc.

Etapas histricas de la Microbiologa

Perodo especulativo (desde la antigedad hasta primeros microscopios) Primeros microscopistas (1675 mediados del s. XIX) Cultivo de microorganismos (hasta finales del siglo XIX) Siglo XX hasta la actualidad: Disciplinas y ciencias relacionadas: Inmunologa Virologa, etc

Perodo especulativo
Enfermedades

infecciosas miasmas humores Lucrecio (s. I a. C.): semillas de enfermedad Frascatorius (1546): grmenes vivos Alimentos y bebidas fermentados (queso, leches fermentadas, vino, cerveza, etc)

Los primeros descubrimientos

Antonij van Leeuwenhoek: Microscopio simple Descubrimiento de los microorganismos (animlculos en gota de estanque, 1675) Describe bacterias (1683) Describe protozoos Robert Hooke: Microscopio compuesto Describe hongos filamentosos (1667)

Primeros dibujos de bacterias (Leeuwenhoek, 1683)

El debate sobre la generacin espontnea

Aristteles Redi

(1668): experimentos que descartan la generacin espontnea de animales Omne vivo ex ovo Spallanzani vs. Needham Los experimentos se interpretan errneamente (Needham) como que al calentar los frascos el aire pierde su fuerza vital (vitalismo)

La solucin de Pasteur

Experimentos con frascos abiertos al aire dotados de largos cuellos curvados (cuellos de cisne). Una vez llevados a ebullicin, solamente aparecen microorganismos si el lquido alcanza el cuello curvo

Las fermentaciones

Dos teoras sobre el origen de las fermentaciones: qumica y biolgica Pasteur (1857) es llamado a resolver un problema de las destileras de Lille 1857: bacterias que producen ferm. lctica 1860: levaduras producen ferm. alcohlica Descubre la fermentacin butrica y la vida en ausencia de aire (anaerobiosis) Reconciliacin de las dos teoras: Buchner asla un preparado libre de clulas (zimasa) de levadura

Cultivos puros

Dos teoras sobre forma de microorganismos: pleomorfismo y monomorfismo Su resolucin dependi de cultivos puros (laboratorio de Robert Koch) Medios slidos a base de rodajas de papa Medios slidos a base de gelatina Medios slidos a base de agar-agar Petri (en el laboratorio de Koch) inventa la placa que lleva su nombre Medios de enriquecimiento y medios diferenciales (Beijerink, Winogradsky

Microscopa y tinciones
Koch colabora con la industria alemana del vidrio (Schott) y pide ayuda a expertos en ptica (Abb, Zeiss) Lentes acromticas mejoradas Iluminacin inferior con condensador Objetivo de inmersin (1878) Koch colabora con industria qumica BASF: Tinciones para observar bacterias (azul de metileno, fuchsina, violeta de genciana, etc), 1877 y siguientes Ziehl y Neelsen: tincin diferencial AAR (1883) Hans C. Gram: tincin diferencial Gram (1884)

Teora microbiana de las enfermedades

Pasteur es llamado a Provenza para resolver una enfermedad del gusano de seda (pebrina) En 1869 identifica al protozoo Nosema bombycis como el responsable Davaine (1863-1868): la sangre de ganado afectado por carbunco contiene grandes cantidades de microorganismos

Teora microbiana de las enfermedades

Koch (1876): con su tcnica de cultivo puro asla y propaga experimentalmente por primera vez una bacteria patgena (la responsable del carbunco o ntrax) Primeras microfotografas de Bacillus anthtracis teido con azul de metileno Confirma que esta bacteria presenta una fase resistente (endosporas) La enfermedad se puede reproducir experimentalmente al reinocular bacilos a animales de laboratorio

Teora microbiana de las enfermedades: postulados de Koch (1882)

El agente patgeno debe estar presente en los individuos enfermos El microorganismo debe poder aislarse del husped enfermo en cultivo puro El microorganismo crecido en cultivo puro, al inocularse en animales sanos, induce en ellos la enfermedad De estos animales experimentales inoculados y ya enfermos, se puede volver a aislar el microorganismo

La escuela de Koch asla numerosos agentes patgenos

Clera

(1883) Difteria (1884) Ttanos (1885) Neumona (1886) Meningitis (1887) Peste (1894) Sfilis (1905)

Robert Koch

Asepsia, quimioterapia

La introduccin de anestesia (mediados siglo XIX) trae infecciones quirrgicas Lister introduce el uso del fenol y de sales de mercurio (asepsia en quirfano) Paul Ehrlich: idea de las balas mgicas

Colabora con industria qumica y descubre el salvarsn, contra la sfilis Quimioterapia

Domagk (1935): rojo de prontosilo contra neumococos

poca de las sulfamidas

Antibioticoterapia

Fleming (1929): extracto crudo de penicilina (del hongo Penicillium notatum) Chain y Florey (1940): purificacin penicilina. Uso en 2 Guerra Mundial Descubrimiento estreptomicina (Waksman, 1944) de Streptomyces griseus Tras la Guerra, se descubren numerosos antibiticos, producidos sobre todo por Actinomicetos

Auge de la microbiologa general: litotrofa y autotrofa

Sergei Winogradsky 1888: Bacterias del hierro crecen en medios minerales 1889: Bacterias del azufre oxidan sulfuros o S y obtienen energa de ello litotrofa 1890: Bacterias nitrificantes fijan CO2 con la energa de la oxidacin del amonio o nitrato quimiolito-autotrofa

Los microorganismos dentro de la clasificacin de los seres vivos

Mitad del s. XX: la organizacin celular de las bacterias y algas verdeazuladas es muy diferente al del resto de seres vivos 8 edicin del Manual Bergeys (1974) Reino Prokaryotae, dividido en Cyanobacteria (antiguas cianofceas) Bacteria Reino Eukaryotae En los aos 70 se descubre que los procariotas constan de dos grupos muy distintos: Eubacterias (hoy Bacteria) Arqueobacterias (hoy Archaea)

Caractersticas generales de los procariotas

Estructura y organizacin del citoplasma Procariota Membrana citoplasmtica

Eucariota Generalmente con esteroles, ausencia de hopanoides Complejas; Retculo endoplasmtico, aparato de Golgi 80 S (salvo en mitocondrias y cloroplastos)

Habitualmente sin esteroles, pueden existir hopanoides

Membranas

internas

Sencillas, limitadas a grupos especficos 70 S

Ribosomas

Estructura y organizacin del citoplasma Procariota Orgnulos membranosos

Sistema

Eucariota Varios En mitocondrias

Ausentes
En membrana citoplasmtica En membranas internas o Clorosomas

respiratorio

En cloroplastos

Pigmentos

fotosintticos

Procariota
Pared

Eucariota

Presente en plantas, celular Generalmente presente, con algas, hongos peptidoglucano, otros Sin peptidoglucano polisacridos, protenas, glicoprotenas Protemas homlogas: FtsZ MreB Filamentos de Actina y microtbulos de Tubulina

Citoesqueleto

FtsZ: a- localizacin del anillo Z en la zona central de B. subtilis b- filamentos autoensamblados inducidos por GTP; c- comparacin de estructuras tridimensionales.

FtsZ: homloga de tubulina, responsable de divisin celular, formacin de anillo Z, reclutamiento de otras protenas en complejos macromoleculares.

Ensamblado en orden (intermediarios estables) o equilibrio dinmico (continuo y rpido intercambio de subunidades con pool citoplasmtico)

MreB y Mbl: homlogos bacteriano de actina, determinantes de la forma celular, autoensamblado en estructuras filamentosas helicoidales (a y b) en B. subtilis. Isoformas: Mbl, MreBH. Bacterias esfricas: no poseen homlogo MreB. ParM: requerida para la separacin activa de plsmidos R1 en E. coli (c)

Estructura y organizacin del citoplasma Procariota

Eucariota Ausentes

Endosporas

Presentes (solo en gneros Gram +) Muy termorresistentes Compuestos de un solo tipo de protena, anclados a pared y membrana, rotacin

Formas de motilidad

Flagelos

Compuestos de microtbulos, rodeados de membrana

No

flagelar

Deslizamiento; Movimieno vesculas de gas ameboide

Comparacin entre clula procaritica y eucaritica

Organizacin del material gentico
Membrana

Procariota
Ausentes

Eucariota

Nucleolo

nuclear y

Presentes
Presente Si

Complejo

DNA/ Histonas
de mitosis

Ausente
No

Desarrollo

Intrones

Raro
gentica Parcial, transferencia unidireccion al de DNA

Frecuente Meiosis y fusin de gametos

Recombinacin

Comparacin clula procariota y eucariota

La importancia de ser pequeo

Microscopa Estudios

y tinciones

poblacionales Browniano

Movimiento Efecto

Tyndall (dispersin de la luz, turbidez)

Aumento

de la viscosidad del medio en campo elctrico

Migracin

Aglutinacin

y precipitacin con elevadas concentraciones salinas

La relacin Superficie/volumen es muy alta Mayor contacto directo con el medio (reciben de modo inmediato las influencias ambientales) Gran tasa de entrada de nutrientes Altas tasas de crecimiento Gran tasa de salida de productos de desecho

Composicin qumica bsica >95% de macromolculas La mitad de las macromolculas son protenas Proporcin de ARN superior a eucariotas En bacterias, macromolculas exclusivas que no existen en eucariotas: Peptidoglucano Lipopolisacrido (en Gram-negativas)

Formas procariotas tpicas

Agrupaciones bacterianas A) Un solo plano de divisin De dos clulas: Diplococos Diplobacilos Cadenas de varias clulas Estreptococos Estreptobacilos B) Dos o ms planos de divisin (en cocos) Dos planos perpendiculares: ttradas Tres planos ortogonales: sarcinas (paquetes cbicos) Muchos planos aleatorios: estafilococos

ESTRUCTURAS SUPERFICIALES DE LA CLULA PROCARITICA

Conceptos generales Composicin qumica y estructura Funciones y papeles biolgicos

Capa S Vainas Botones

Cpsula

(paracristalina) de anclaje

cpsulas en sentido estricto son rgidas e integrales las capas mucilaginosas son flexibles y perifricas glucoclix: capas superficiales compuestas de polisacrido Sirven para adhesin entre clulas, y colonizacin de nichos En muchas patgenas sirven, adems, para protegerse de agentes antibacterianos

Composicin qumica cpsulas polisacardicas heteropolisacridos aninicos heteropolisacridos neutros (levanos, dextranos, celulosa) alginatos cpsulas polipeptdicas (en Bacillus)

Constituyen el antgeno capsular K Su estructura es a base de matriz muy hidratada

Funciones de la cpsula mejora difusin nutrientes proteccin contra la desecacin proteccin frente a la predacin proteccin contra agentes antibacterianos adhesin a sustratos

Cpsula: adhesin a sustratos: Sustratos inertes: microcolonias de la misma especie y consorcios de diferentes especies, con ventajas metablicas. Responsables de: corrosin de caeras, formacin de placa dental y caries formacin de biofilms en catteres y prtesis Sustratos vivos: actan como adhesinas efectos benficos: colonizacin de flora autctona en intestino de mamferos en sistemas patolgicos: como factores de virulencia; sirven para escapar del sistema inmune

Capa S
Arreglo cristalino macromolecular de subunidades proteicas, comn en archaeas y bacterias
Compuesta de una nica protena o glicoprotena, recubre la superficie celular Las subunidades se autoensamblan superficies, formando un arreglo regular en solucin o sobre

Representa del 10 al 15% de las protenas celulares totales

Extraccin con agente caotrpico Autoensamble

Dilisis Arreglo regular en superficie

Glicosilacin
La glicosilacin es la principal modificacin en las protenas de capa S Los primeros indicios datan de mediados de la dcada del 70 El grado de glicosilacin en las protenas vara entre 2 y 10% W/W
Residuos glicosdicos Protena de capa S

Funciones de la capa S En arqueas: hace las funciones de la pared celular ( forma y rigidez). En bacterias: tamiz molecular protector frente a ag. Antibacterianos Proteccin frente a fluctuaciones inicas, de pH, etc En algunas patgenas, proteccin frente a fagocitosis

Vainas Tubos a base de heteropolmero, que engloba un conjunto de clulas bacilares que forman cadenas. En Sphaerotilus y Leptothrix se recubren de xidos e hidrxidos de Fe y Mn

Vainas y botones de anclaje

Botones de anclaje acmulos de polisacridos cidos segregados en puntos concretos (como extremos de prostecas o pednculos). Ej. los de Caulobacter.

Visualizacin de la localizacin de cpsula (C), capa S (S) y peptidoglucano (P) en

B. anthracis

Pared celular bacteriana

Pared celular bacteriana: esquema del peptidoglucano

Protoplastos

Pared celular bacteriana: composicin qumica del peptidoglucano

Pared celular bacteriana: entrcruzamiento del peptidoglucano, diferencias entre Gram positivas y Gram negativas.

Pared celular bacteriana: Gram positiva

cidos teicoicos, polmeros de glicerol o ribitol unidos por grupos fosfato. Se unen al PG por enlace covalente con hidroxilo 6 del NAM.

Porinas
Estructura de porina Omp32 de C. acidovorans A- Vista superior y lateral del monmero. Extremo N- terminal en azul, Cterminal en rojo D- Asociacin trimrica, vista superior y detalle del dimetro de poros

BAAR: Mycobacterium

Bacterias sin pared celular: micoplasmas

Membrana citoplasmtica

Membrana citoplasmtica: diferencias entre Bacteria y Archaea

MC: funciones en procariotas

Barrera de permeabilidad selectiva Transporte de nutrientes y residuos Localizacin de muchos procesos metablicos: respiracin, fotosntesis Deteccin de seales ambientales quimiotcticas

Flagelos bacterianos: estructura

Flagelos bacterianos, distribucin y movimiento

A - Polar montrico Vibrio cholerae B- Loftricos Bartonella bacilliforme C- Anftricos Spirillum serpens D- Pertricos Escherichia coli

Membranas internas: Aumentan la superficie para mayor actividad metablica

Nitrocystis oceanus Nitrificante

Ectothiorhodospira mobilis Fotosinttica

Matriz citoplasmtica: cuerpos de inclusin

Almacenamiento de energa: Poli-beta hidroxibutirato (PHB, poliester)

Glucgeno Polifosfatos (grnulos de volutina, metacromticos)

Grnulos de azufre

Matriz citoplasmtica: cuerpos de inclusin

Carboxisomas Magnetosomas Cuerpos parasporales Vesculas de gas (rodeadas de membrana proteica)

Matriz citoplasmtica: cuerpos de inclusin

A- Grnulos de PHB; b- cuerpo parasporal en BT; c- carboxisomas en Anabaena viriabilis; d- Grnulos de azufre en Beggiatoa.

Matriz citoplasmtica: cuerpos de inclusin

TEM de Aquaspirillum magnetotacticum; MP: partculas de magnetita (Fe3O4), rodeadas por membrana. Otras bacterias poseen greigita (Fe3S4) o pirita (FeS2).

Endosporas bacterianas