MATERIAL Y MTODO:

DIAGRAMA DE FLUJO DEL PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

PREPARACIN DE SACOS INTESTINALES

sacrificar a la rata administrndole pentobartital seguida de traseccin de la mdula espinal.

abrir el abdomen por inscisin en la lnea media abdominal

lavar los segmentos intestinales con ayuda de una jeringa que contenga Tyrode. Verificar que no tenga perforaciones el intestino.

Proceda a hacer la inversin de los segmentos intestinales

anuda con un hilo uno de los extremos del segmento, con una varilla de vidrio impulsar el extremo ocluido hacia el extremo abierto, deslizandolo por la varilla.

sostener con ua pinzas el saco intestinal e introducir por el extremo abierto el tubo de vidrio de la camara de rganos aislada hasta que sobrepase 5 mm

cortar tramos de intestino (2 a 3 cm de longitud) e insertar una cnula en la luz del segmento intestinal

extraer el intestino delgado y colocarlo en una caja de petri con solucion Tyrode fra

amarrar ste extremo a la varilla. Introducir el intestino al sistema

Experimento control

Introducir el saco intestinal dentro de la camara y llenarlo con solucin Tyrode a 37C con ayuda de una cnula acoplada a una jeringa.

verificar que el saco no presente fugas si este no es el caso, sumergir en solucin de Tyrode-Glucosa (37C)

Acoplar el sistema de aeracin que es una bomba de aire para pecera, esta debe estar en bao mara (Temperatura constante)

tener cuidado que la solucin interior y exerior no sobrepasen el borde superior del saco atado a la varilla

Toma de muestra

tomar muestra en tiempo cero tanto de solucion exterior como de la interor del saco intestinal.

utilizando las tiras reactivas determine la concentracion de glucosa en las muestras

en el tiempo de la ltima determinacin volver a medir la concentracion del glucosa en el exterior del saco.

Hacer determinaciones cada 10 minutos hasta completar 5.

dejar pasar 15 minutos y volver a medir la concentracion de glucosa, solo de un muestra del interior del saco.

Verificar las condiciones de aeracin y temperatura, estas deben ser constantes durante todo el experimento.

Efecto de la ausencia de oxgeno en la absorcin intestinal de glucosa

colocar un saco intestinal que contenga en sus interior solucin Tyrode a 37C

esta debe estar dentro de una cmara que contenga solucin salina de TyrodeGlucosa 37C

esta debe estar sin adaptar el sistema de aeracin pero manteniendo constante la temperatura.

hacer determinaciones de glucosa de la solucin interior y exterior del saco cada 10 minutos hasta completar 5.

Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinal de glucosa

colocar un saco intestinal en una cmara de rganos aislados

llenar el saco intestinal con solucin Tyrode a 37C

este saco se colocar en una solucin de Tyrode-Glucosa con 2-4 dinitrofenil (solucin exterior)

Obtener una gota de solucin problema del interior o exterior del saco intestinal

Determinacin de glucosa por medio de tiras reactivas.

realizar 5 determinaciones cada 10 minutos

medir la concentacin de glucosa en el tiempo cero dentro y fuera del saco intestinal

colocar la gota dicha gota e la zona reactiva de la tira y se deja reaccionar durante 30 segundos

el cambio de color sera de acuerdo con la concetracion de glucosa presente en la muestra

compara con la escala cromtica que esta en el recipiente de las tiras bajo las condiciones de buena luz

no confiar en los resultados que aparecen despues de 3 minutos o solo en los bordes de la zona de prueba

RESULTADOS Escala de indicador de glucosa para los experimentos realizados:

Experimento control Se trabaj con el yeyuno de la rata. La concentracin de glucosa que absorbi fue aumentando al pasar el tiempo, llegando a 56 mmol/L como mximo.

Tiempo (segundos)

Concentracin de glucosa control

Concentracin de glucosa sin oxigeno

Concentracin de glucosa 2-4 dinitrofenol 0 0 5.6 5.6 5.6

0 10 20 30 40

0 5.6 14 28 56

0 0 0 0 0

Grfica 1. Concentracin vs tiempo para la absorcin de glucosa

RESULTADOS

EFECTO DE 2-4 dinitrofenol En la prueba donde se administr 2,4-dinitrofenol. En comparacin

con el control, en este experimento se trabaj con el leon del intestino de la rata y se observ que si hubo una absorcin de glucosa pero muy baja de 5.6 mmol/L

EFECTO DE LA AUSENCIA DE OXIGENO Se denomin tubo B a aquel donde se realiz el experimento en ausencia de oxgeno. A comparacin con el control, en este experimento se trabaj con el leon del intestino de la rata y la concentracin de glucosa fue nula en el intervalo de tiempo medido

ANLISIS DE RESULTADOS:

Experimento control La principal funcin del intestino delgado es la absorcin de los nutrientes necesarios para el cuerpo humano y para el cuerpo de otros animales, en este experimento colocamos un saco intestinal dentro de la cmara y lo llenamos con solucin salina de Tyrode a 37 C y activamos la bomba de aire (similares a las condiciones internas del organismo). . Fuimos midiendo la concentracin de glucosa cada 5 minutos. Como era esperado nuestro tubo problema presento una absorcin exponencial, proporcional a la concentracin de glucosa dela solucin de tyrode, ya que al tener todos los elementos necesarios para realizar el proceso, este pudo continuar ininterrumpido, en adelante para el anlisis de resultados tomaremos este como medida de referencia. Efecto de la ausencia de oxgeno en la absorcin intestinal de la glucosa En la tabla se presentan los valores obtenidos de concentracin de glucosa en los diferentes tiempos para que sean comparables con los resultados con los obtenidos en el experimento control. Podemos afirmar que la falta de oxgeno si afecta la absorcin ya que en nuestro experimento en la ausencia de este no presento un incremento ni aumento y esto concuerda con lo que la literatura nos dice en ausencia de oxigeno la absorcin se inhibe. (Guyton, 1992) Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinal de glucosa En la tabla se presentan los valores obtenidos de concentracin de glucosa en los diferentes tiempos para que dichos valores se puedan comparar con los resultados obtenidos en el experimento control. Nuestros resultados concuerdan con la teora puesto que en este tubo se observ una disminucin considerable en la absorcin de glucosa, debido a una interrupcin del ciclo de fosforilacin oxidativa, sin el cual la clula no tiene ATP con los cuales trabajar. (Ganong, 2011) DISCUSION DE RESULTADOS Experimento control Observamos que la concentracin de glucosa fue aumentando tomando como referencia la escala cromtica de las tiras reactivas. Esto es posible debido a que la rata con la que trabajamos era jven por lo que su intestino delgado absorbi rpidamente la glucosa empezando desde una concentracin de 0 hasta 56 mmol/litro, al estar el intestino volteado y ver que dentro de l no haba glucosa, podemos explicar que mediante osmosis ste empieza a absorber glucosa por lo que con el paso del tiempo vemos que aumenta,

mientras que la concentracin fuera del saco intestinal disminuy casi totalmenta al final del experimento. (Barret, 2013). Efecto de la ausencia de oxgeno en la absorcin intestinal de la glucosa En estas condiciones la absorcin de glucosa, se vio disminuida considerablemente con respecto al tubo prueba, puesto que las tiras reactivas siempre mostraron el mismo color que indicaba que la reaccin enzimtica de la glucosaoxidada especfica para glucosa no manifest un cambio de concentracin. Ya que su ausencia, impide la respiracin celular interrumpiendo la formacin de ATP con el que las clulas del moco intestinal sigan funcionando y por lo tanto interrumpiendo su metabolismo, especficamente la absorcin de glucosa, es decir; el oxgeno disminuye el suministro de energa en la clula, por lo que inhibe el transporte de glucosa. Cuando el oxgeno se termina la respiracin ya no se lleva a cabo y por lo tanto no se realiza absorcin esto se debe a que cuando la glucosa que llega a las clulas es degradada, en un proceso denominado gluclisis, necesita la ayuda del oxgeno, cuya principal funcin es la de combustionar la glucosa, como producto de este proceso se reconvierte en agua (que eliminamos o reutilizamos) y anhdrido carbnico (que exhalamos por medio de la respiracin). (Guyton, 1992) Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinal de glucosa En comparacin con el experimento control notamos que si hubo una absorcin de glucosa pero esta fue muy baja, solo de 5.6 mmol/L en 25 minutos. El 2,4-dinitrofenol es un agente desacoplante, es decir, desacopla la cadena de transporte de electrones de la fosforilacin oxidativa inhibiendo la produccin de ATP al no generarse el gradiente de pH, pero si permite que la cadena de transporte de electrones contine funcionando, por lo que vemos disminuido la absorcin de glucosa. (Guyton, 1992) Debido a que este agente desacoplante asla el flujo de electrones (en la fosforilacin oxidativa), lo que significa que este flujo no se puede usar para la formacin de ATP). Transporta protones a travs de la membrana interna de manera que no se forme (disipa) el gradiente de concentracin de protones ni el potencial elctrico de membrana, es decir; no hay bombeo de protones a travs de la ATP-sintasa con produccin de ATP Por ello, al no existir un gradiente, no puede llevarse a cabo la absorcin por medio de los transportadores. (Fox. 2011) Efecto de la oxigenacin en la absorcin de glucosa A condiciones naturales la absorcin de glucosa se da ininterrumpida, y de manera exponencial, ya que las clulas tiene el oxgeno necesario para realizar respiracin celular

y continuar funcionando as como la ausencia de sustancias que impidan su funcionamiento normal.

CONCLUSIONES: La digestin es el proceso en el cual los compuestos orgnicos complejos como carbohidratos son degradados hasta convertirse en unidades pequeas fciles de absorberse en el intestino delgado. El intestino delgado tiene tres regiones llamadas duodeno, yeyuno e leon pero es en stas ltimas dos es donde fundamentalmente tiene lugar la absorcin de los alimentos digeridos. El transporte activo es el principal mecanismo de la absorcin de nutrientes en el intestino delgado por lo que la absorcin de glucosa ocurre por medio de un trasporte activo secundario desde la luz del intestino hacia la sangre y transporte que depende del sodio en la luz intestinal. El oxgeno es indispensable para una buena absorcin de las sustancias a travs de intestino, ya que a falta de este se inhibe la absorcin de glucosa. La presencia de oxgeno y la temperatura a 37C son factores qu favorecen la absorcin de glucosa. El 2,4-dinitrofenol, impide la absorcin correcta de glucosa as como su utilizacin como fuente de energa dentro de las clulas, por ello el que fuese utilizado en algn momento como ingrediente para suplementos para bajar de peso. La glucosa puede ser utilizada como fuente de energa, almacenarse en el hgado en forma de glucgeno y en los msculos para cuando se requiera rpidamente. La solucin Tyrode fue importante debido a que permite darle ciertas condiciones al experimento facilitando el proceso de transporte de glucosa. El yeyuno tiene un revestimiento especializado en la absorcin de carbohidratos y protenas. Su gran cantidad de vellosidades permite que exista una mayor superficie de contacto y absorcin de glucosa. BIBLIOGRAFA
Guyton, Artur C. Fisiologa Medica, Editorial Interamericana Mc Graw Hill, 8a edicin, 1992. Pp.800- 815, Barret K, Barman S, Boitano S. y Brooks H. Fisiologa Mdica, Editorial Interamericana Mc Graw Hill, 24a edicin, pp.479-486 Fox, Stuart I. Fisiologa Humana, Editorial Interamericana Mc Graw Hill, 12a edicin, 2011. pp 613627