PRACTICA 1

I. METODOLOGIA MICROSCOPIA JUSTIFICACION El conocimiento de las estructuras del ser vivo est basado casi totalmente en el estudio con el microscopio. El microscopio ptico es un instrumento que permite la observacin de objetos y detalles de estructuras tan pequeas que no podran ser obse rvadas a simple vista. Con l, nuestro grado de visibilidad se ampla en cientos o m iles de veces, gracias a un conjunto de lentes, dispuestos convenientemente. Las principales dificultades en la observacin y estudio de estructuras biolgicas son su REDUCIDO TAMAO Y SU TRANSPARENCIA a la luz visible. Dado que el microscopio pe rmite superar estas dos dificultades, su uso y el conocimiento de los principios y tcnicas en microscopa, resultan fundamentales para el desarrollo de la investig acin en ciencias biolgicas. OBJETIVOS. La presente prctica tiene por objetivos: 1. Identificar las partes del microscopio y comprender sus caractersticas y la vi sin con l. 2. Manejar el microscopio correctamente. 3. Realizar una observacin con este instrumento.

TIPOS DE MICROSCOPIO A USAR EN EL DESARROLLO DE LAS PRACTICAS En el desarrollo de las prcticas sern usados 2 tipos de microscopios: 1. El microscopio estereoscpico, el cual es binocular, con aumentos de 4 a 40 veces, permite observar muestras opacas y realizar disecciones de estructur as en organismos pequeos, ya que en l puede manipularse la muestra mientras se obs erva. Proporciona una imagen tridimensional. 2. El microscopio compuesto, que puede ser monocular o biocular, permite obtener aumentos de 100 a 1500 veces. Los objetos a observar deben ser muy pequ eos o cortados en lminas tan delgadas que la luz pueda atravezarlos.Estos se coloc an en lminas de vidrio especiales denominadas porta-objetos y cubre-objetos. Las imgenes que se obtienen son bidimensionales e invertidas. PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO 1. PARTE MECANICA. Comprende los siguientes dispositivos. 1.1 Pie. Base que da soporte y estabilidad al microscopio. 1.2 Columna. Estructura que une el pie con la platina y el tubo. Sostiene adems el condensador y el diafragma.

1.3 Platina. Superficie plana para sostener el porta objetos y e l cubre-objetos que contienen a las preparaciones. 1.4 Tubo. Proporciona soporte a los lentes oculares y objetivos. 1.5 Cremallera. Asociada a dos tornillos, permite el movimiento vertical del tubo o de laplatina para obtener la distancia a la cual el objeto p uede ser observado ntidamente; es decir, el enfoque preciso para el observador. 1.6 Tornillo macromtrico. Permite movimientos muy cortos en un aj uste fino del enfoque para lograr una observacin precisa. 1.7 Revlver. Sistema giratorio relacionado con el tubo, que porta los lentes objetivos para diversos aumentos, pudiendo utilizarlos alternativame nte. 1.8 Pinzas. Par de lminas rectangulares, situadas sobre la platin a, para mantener al porta-objetos. 2. PARTE OPTICA: Comprende los lentes oculares, los lentes objet ivos y los dispositivos de iluminacin. 2.1 Oculares. Lentes dispuestos en la parte superior del tubo ce rcano al ojo del observavador. Su aumento puede ser de 6X, 10X y 15X. 2.2 Objetivos. Son lentes de diferentes aumentos situados en el otro extremo del tubo, en el revlver. El de menor aumento es ms corto (3.2X,4X, 8X y 10X) y el de mayor aumento es ms largo (40X y 44X). Puede existir adems un obje tivo de inmersin de 100 a 150 aumentos. 2.3 Condensador. Lente que concentra el haz luminoso hacia la pr eparacin. 2.4 Diafragma. Abertura que regula la cantidad de luz que ingres a hacia la preparacin. 2.5 Espejo o luz incorporada. Proporciona la luz que llega hasta el objeto a estudiar y el sistema ptico del microscopio. Existe un espejo plano por un lado y cncavo por el otro, para ser usados cuando se disponga de abundante o escasa luz, respectivamente. La luz incorporada corresponde a un foco de luz elctrica adaptado en el lugar que ocupa el espejo.

CARACTERISTICAS DE LA VISION CON EL MICROSCOPIO 1. Grado de Aumento: Es la magnificacin total que sufre la imagen del obj eto debido al efecto de los lentes oculares y objetivos. Se obtiene multiplicand o el nmero de veces que aumenta el lente ocular por el nmero de veces que aumenta el lente objetivo. Si el objetivo aumenta la imagen de un objeto 40 veces, sta al pasar por la lente ocular ser nuevamente aumentada. Si el ocular aumenta 10 veces, la magnificacin total en este caso ser: 10X x 40X = 400X.

Este resultado permite saber cuantas veces ms grande estamos viendo la im agen de un objeto. 2. Poder de Resolucin. Es la posibilidad de distinguir separados dos punt os muy cercanos entre s. Cuanto mmayor sea el poder de resolucin, menor ser la dist ancia entre dos puntos a la cual pueden distinguirse como tales. La distancia lmi te en la cual dos puntos pueden ser todava distinguibles se denomina Lmite de Reso lucin. El poder de resolucin de un microscopio compuesto depende de la longitud de onda de la fuente luminosa y de la apertura numrica (propiedad ptica de la lente) . Puede ser calculado mediante la siguiente frmula: LAMBDA = Longitud de onda de la fuente luminosa LAMBDA P.R. = ------2 A.N. Donde: LAMBDA = Longitud de onda de la fuente luminosa A.N. = Apertura numrica de la lente. Existe una correspondencia entre el aumento de un objeto y su apertura n umrica, de tal modo que las lentes con mayores aumentos generalmente tendrn mayore s aperturas numricas. El poder de resolucin es quiz la caracterstica ms importante de un buen microscopio ya que de nada sirve una imagen muy grande del objeto, si st a se ve borrosa y no puede distinguirse en sus detalles.

3. Distancia de Trabajo. Es la distancia que existe entre el objeto en o bservacin y el lente objetivo. Esta distancia variar segn el aumento de la lente ob jetivo con la cual se trabaje. Es inversamente proporcional al grado de aumento; es decir, cuanto mayor sea el aumento del lente objetivo menor ser la distancia de trabajo. Cuando se trabaje con un lente de inmersin la distancia de trabajo se r mnima. En estos casos es necesario usar aceite de inmersin entre el lente objetiv o y la preparacin debido a que el ndice de refraccin para este tipo de lente es la del aceite y no la del aire. Esto permite obtener una imagen de gran tamao y al m ismo tiempo de gran nitidez.

MANEJO DEL MICROSCOPIO 1. Limpiar el espejo, condensador y los lentes del microscopio. a. Eliminar el polvo mediante un soplete de aire o pincel fino. b. Frotar sin presionar, con papel de lente, usando este solo una vez. 2. Comprobar si el lente objetivo de menor aumento est a continuacin del t ubo; si no es as, debe colocarse en dicha posicin haciendo girar el revolver hasta alcanzar un "tope" que lo indique. 3. Abrir completamente el diafragma y observando a travs del ocular, move r el espejo orientndolo de modo que la luz reflejada se observe en un crculo unifo rmemente iluminado.Este constituye el "campo ptico". Una vez obtenida la iluminac

in mxima, NO SE DEBE CAMBIAR LA POSICION DEL MICROSCOPIO. Con luz incorporada no h ay espejo. 4. Ubicar y sujetar el porta-objetos en la platina, procurando que la pr eparacin se halle en el centro de la abertura circular. 5. Mover el tornillo macromtrico para acercar el lente objetivo de menor aumento hacia la preparacin, hasta llegar a un tope. 6. Observando por el lente ocular, mover nuevamente el tornillo macromtri co en el sentido inverso hasta que aparezca la imagen. 7. Una vez enfocada la imagen girar el tornillo hasta que sea ntida. Nunc a se debe usar el tornillo micromtrico para grandes desplazamientos, para ello es t el tornillo macromtrico. 8. Cuando los tornillos macro y micromtrico se encuentren incorporados en un solo dispositivo, el ajuste fino se hace solo despus de haber realizado el av ance rpido de acercamiento a la preparacin. 9. Antes de pasar al siguiente aumento verificar que la imagen a observa r se encuentre en el centro del campo, hacer girar el revolver cambiando el lent e objetivo hasta llegar al "tope" y accionar solamente el tornillo micromtrico ha sta obtener la nueva imagen. 10. Para observar una muestra con el objetivo de inmersin, se coloca una gota de aceite de cedro encima de la lmina de la preparacin antes de girar el revo lver. Esto pemite que la imagen se vea con nitidez para realizar la observacin ya que este tipo de lentes requiere que el ndice de refraccin sea similar al del vid rio. 11. Terminada la observacin, girar el revlver para colocar el objetivo de menor aumento en la primera posicin de trabajo. 12. Retirar la preparacin y dejar limpio el microscopio, secando la plati na con cuidado. 13. Si us el objetivo de inmersin, debe limpiarse inmediatamente despus de su uso con ayuda del papel de lente. Quitar el grueso del aceite con una hoja, l uego limpiar con una segunda impregnada en xylol y finalmente con una tercera, s ecar el lente. No usar cantidades excesivas de solvente pues pueden disolver el cemento de los componentes de los lentes. 14. Mantener cubierto o guardado el microscopio cuando no est en uso. 15. En sitios con excesiva humedad ambiental deber guardarse el microscop io en una campana de vidrio con un desecante como carbonato de calcio.

MATERIALES De Laboratorio: - Microscopio Compuesto. - Microscopio Estereoscpico. - Muestras de Agua Estancada.

- Goteros. Del alumno: - Gua de Estudio. - Lminas porta-objetos. - Lminas cubre-objetos. - Servilleta de algodn, sin almidonar. MEDICIONES AL MICROSCOPIO Para medir objetos que se observan en el campo visual de un microscopio (Metodol oga microscpica), se utiliza un micrmetro ocular. Este consiste de una placa de cri stal con una escala grabada, que se inserta en un ocular microscpico, quedando la escala enfocada por encontrarse en el plano de la imagen real intermedia. Es preferible contar con un ocular micromtrico con la placa permanentemente insta lada (especialmente si el microscopio es monocular), el cual reemplaza al ocular visual para hacer mediciones. Para mayor precisin se puede utilizar un tipo de o cular micromtrico que tiene una escala exterior adicional en un tornillo micromtri co que en cada vuelta completa desplaza un trazo perpendicular un intrvalo de la escala grabada. Desde que los aumentos de los microscopios varan (cuando son de l a misma serie y marca pueden variar ligeramente), las escalas de micrmetros ocula res no representan medidas convencionales, sino simples unidades. Para determinar la distancia lineal que representa cada unidad (el valor micromtr ico), se debe hacer calibraciones para cada aumento de un microscopio (o sea los productos de los aumentos de cada combinacin ocular-objetivo) utilizando un micrm etro de platina (un micrmetro objetivo). Los micrmetros de platina son similares a una lmina portaobjetos y tienen grabadas escalas que representan medidas exactas y convencionales. Comnmente se utiliza un micrmetro de platina cuya escala mtrica es de un milmetro (1000 micras), dividida en 10 unidades con 10 subdivisiones de 10 micras cada una (la unidad ms pequea representada).

Determinacin de Valores Micromtricos 1. Colocar el micrmetro en el ocular del microscopio (o sustituir un ocul ar por el ocular micromtrico). 2. Enfocar la escala del micrmetro de platina a travs del microscopio. 3. Girar el ocular micromtrico hasta que las dos escalas estn paralelas. 4. Mover el micrmetro de platina hasta que el comienzo (extremo izquierdo ) de su escala coincida con el de la escala del micrmetro ocular. 5. Ubicar la lnea del micrmetro ocular ms distante del comienzo de la escal a que coincida con una lnea de la escala del micrmetro de platina o calcular el la rgo en micras de la distancia representada en el micrmetro de platina, que corres ponde al largo total del micrmetro ocular o de contar con un tambor micromtrico de splazar el trazo perpendicular hasta que coincida con una lnea distante del comie nzo de la escala de la platina. Determinar las unidades que stas representan en ambas escalas.

6. Clculo del valor micromtrico ( V.M.) en micras Medida micrmetro de platina, en micras V.M. = Unidades micrmetro ocular 7. Repetir el clculo para cada objetivo, usando aceite para el objetivo d e inmersin. 8. Preparar una etiqueta con la informacin adquirida, la cual se adhiere al microscopio, ejemplo: Objetivo V.M. (micras) 10X 16.70 45X 3.70 93X 1.65 9. Para medir objetos en el campo del microscopio, hacer coincidir un ex tremo o divisin mayor de la escala del micrmetro ocular con un extremo del objeto a medir. Contar el nmero de unidades que representa.