UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE QUIMICA EQUIPO 2 ABSORCIN DE GLUCOSA EN EL INTESTINO DELGADO DE LA RATA.

INTEGRANTES:
ARGANIS RAMREZ CARLOS ANDRS ________________ CASTAEDA DE LA PORTILLA BRENDA _______________ RIVERA ANSASTIGUIN YESICA ______________________ SORIANO JUREZ DULCE OLIVIA ____________________

FECHA DE ENTREGA: 29/ABRIL/2014

Introduccin: El intestino delgado forma parte del sistema digestivo, es la parte del tubo digestivo que principia en donde el estmago concluye y finaliza en la parte conocida como ciego del colon, el intestino delgado concretamente consta de tres segmentaciones conocidas como duodeno, yeyuno e leon. En el intestino delgado se lleva a cabo cada da la absorcin de los nutrientes necesarios para el cuerpo humano, como son carbohidratos, aminocidos, iones, agua y grasas. En el intestino ocurren diversos procesos para la absorcin de los alimentos, los cuales se van descomponiendo en fracciones cada vez ms pequeas y finalmente los enterocitos, los cuales revisten las vellosidades del intestino delgado y contienen cuatro enzimas: lactasa, sacarasa, maltasa y -dextrinasa, descomponen los disacridos de lactosa, sacarosa y maltosa, as como los otros pequeos polmeros de glucosa, en sus monosacridos constituyentes, los cuales son transportados por distintas enzimas mediante difusin facilitada. La glucosa se transporta por un mecanismo de cotransporte con el sodio, este se divide en dos etapas, la primera consta del transporte activo de los iones sodio, que cruzan las clulas del epitelio intestinal hacia la sangre, esto desencadena el descenso de la concentracin intracelular del ion, como segundo lugar, la reduccin del sodio intracelular induce el paso de sodio procedente de la luz intestinal hacia el interior de la clula epitelial a travs del borde en cepillo, por medio de una difusin facilitada; para esto la glucosa y el sodio se combinan con la misma protena de transporte, de manera tal que ambos se transportan juntos hasta el interior de la clula; en si la menor concentracin de sodio en el interior de la clula desplaza por difusin, al ion y a la glucosa que lo acompaa al interior del enterocito, una vez dentro otras protenas de transporte y enzimas promueven la difusin de la glucosa hacia el espacio paracelular a travs de la membrana basolateral, y de all a la sangre. (Guyton, 1992) Las protenas encargadas del transporte sodio-glucosa son protenas transmembranales situadas en el lado apical de la clula; son una familia de transportadores de glucosa que se encuentran en la mucosa intestinal del intestino delgado (SGLT1) as como en las clulas del tbulo proximal de las nefronas (SGLT1 y SGLT2). Como ya se mencion su funcin es ingresar sodio y glucosa desde la luz tubular hacia el interior de las clulas peritubulares. La energa para atraer al ion sodio se obtiene del gradiente que genera una bomba sodio-potasio en la membrana basal de la clula, as se entiende que son secundariamente activos, estas protenas se clasifican en varios tipos, a nivel renal existen dos sumamente importantes SGLT1 y SGLT2. SGLT1 se encuentra principalmente en los dos primeros sectores del tbulo proximal, presenta baja afinidad por la glucosa y elevada tasa de transporte; por lo tanto brinda una reabsorcin rpida. Por otro lado SGLT2 se encuentra principalmente en sector tres del tbulo proximal, tiene elevada afinidad por la glucosa y baja tasa de transporte, por lo que proporciona reabsorcin completa.

HIPOTESIS Si la glucosa del interior celular al torrente sanguneo, atraviesa la membrana basolateral por medio de la protena GLUTs por el mecanismo de difusin facilitada, independiente del transporte de Na+, entonces por la carencia de una carga neta, al igual que los aminocidos, el transporte no se ve influenciado por el potencial de membrana y depende nicamente del gradiente de concentracin. Si el mecanismo de absorcin en los tbulos renales es realizado de la misma manera que en el epitelio intestinal de absorcin. Entonces la glucosa se toma de la orina mediante un sistema de transporte activo secundario Na+-acoplado y pasa a las clulas del tbulo proximal. Si mediante la absorcin de Na+, atraviesa a la membrana, entonces podemos afirmar que se llev acabo por un mecanismo de transporte en el cual interviene la Na+-K+ATPasa. Metodologa:
Absorcin de glucosa en el intestino delgado de rata

Preparacin
Se sacrifica una rata; Abrir abdomen mediante una incisin en la lnea media

Experimento control
Colocar el saco intestinal dentro de la camara y llenarlo con solucin tyrode a 37C y Despus de verificar que el saco no presenta fugas este se sumerge en una solucin tyrodeglucosa a 37C

Toma de muestra
Tome una muestra, tiempo cero tanto de la solucin interior como de la exterior del saco utilice una cnula conectada a una jeringa o una pipeta Pasteur; Utilizando las tiras reactivas determine la concentracin de glucosa en las muestras

Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin de glucosa & Efecto de la ausencia de oxgeno en la absorcin de glucosa

intestinal
Localizar y extraer el intestino delgado, obtener un fragmento del duodeno de 2 a 3 cm de longitud y colocarlo en solucin tyrode fria con aeracin Insertar una cnula en la luz del segmento intestinal y por medio de una jeringa que contenga solucin tyrode lavar los segmentos Llevar a cabo la inversin de los segmentos y Anudar con hilo uno de los extremos del segmento de manera que quede ocluido completamente

Seguir el mismo procedimiento del experimento toma de muestra solo que esta vez la solucin se mantiene sin adaptar el sistema de aeracion

Tener cuidado que la solucin interior como exterior no rebasen el borde superior del saco atado a la varilla e inmediatamente acoplar el sistema de aeracin; la preparacin debe estar en bao mara

Deje pasar 10 min y mida nuevamente la concentracin de glucosa solo de una muestra del interior del saco Hacer determinaciones cada 15 min hasta completar 5, en el tiempo de la ltima determinacin mida nuevamente la concentracin de glucosa en el exterior del saco

Seguir el procedimiento del experimento de toma de muestra solo que esta vez el saco se colocara en una solucin de tyrode-glucosa con 2-4 dinitroferol

Con ayuda de una varilla de vidrio se impulsa el extremo ocluido hacia el extremo abierto deslizndolo por la varilla Sostener con unas pinzas el saco intestinal e introducir por su extremo abierto el tubo de vidrio de la camara de rganos aislados

Se amarra cuidadosamente este extremo a la varilla y se coloca el saco intestinal en la camara de rganos aislados

Resultados Se emplearon 3 fragmentos del intestino de la rata (porcin del duodeno) a los cuales se sometieron a experimentacin para medir el efecto de la privacin de oxgeno y a su vez el efecto del 2,4-dinitrofenol. Concentracin de glucosa en el medio externo al inicio del experimento: (1000 mg/dl) o (55 mmol/L)

Tiempo (minutos)

Concentracin interna de glucosa; experimento control (mmol/L)

Concentracin interna de glucosa; experimento con privacin de oxigeno (mmol/L) 0 2.8 5.5 5.5 5.5

Concentracin interna de glucosa; experimento con 2-4 dinitrofenol (mmol/L) 0 5.5 17 17 17

0 10 20 30 40

0 5.5 17 55 55

Tabla 1 Concentraciones internas de las 3 cmaras La absorcin de glucosa en el experimento control con respecto al tiempo se representa en la siguiente grfica:

Grfica 1 (Experimento de control) Comportamiento de la concentracin de glucosa en el interior del Intestino

Se presenta una grfica comparativa de la absorcin de glucosa en el interior del intestino con respecto al experimento control de las cmaras 2 y 3; observese la diferencia de absorcin de glucosa comparativamente al cambiar las variables de privacin de oxgeno y el uso de 2-4,dinitrofenol

Grafica 2 (Comparacin de la absorcin de glucosa en los 3 experimentos)

Concentracin de glucosa en el medio externo del experimento control al finalizar el procedimiento: (100 mg/dl) o (5.5 mmol/L)

Discusin de Resultados

(Experimento control) La principal funcin del intestino delgado es la absorcin de los nutrientes necesarios para el cuerpo humano y para el cuerpo de otros animales, en este experimento colocamos un saco intestinal dentro de la cmara y lo llenamos con solucin salina de Tyrode a 37 C y activamos la bomba de aire (similares a las condiciones internas del organismo). Se midi la concentracin de glucosa cada 10 minutos. Y se observ que el fragmento del duodeno present una absorcin exponencial, proporcional a la concentracin de glucosa dela solucin de tyrode, ya que al tener todos los elementos necesarios para realizar el proceso, este pudo continuar ininterrumpido, y se toma este como medida de referencia.

(Ausencia de oxgeno) En la tabla se presentan los valores obtenidos de concentracin de glucosa en los diferentes tiempos para que sean comparables con los resultados con los obtenidos en el experimento control. Podemos afirmar que la falta de oxgeno si afecta la absorcin ya que en nuestro experimento en la ausencia de este presento un incremento menor en la capacidad de absorcin de glucosa del fragmento de intestino, lo cual concuerda con lo descrito en la literatura: en ausencia de oxigeno la absorcin se inhibe. (Guyton, 1992) Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinal de glucosa En la tabla se presentan los valores obtenidos de concentracin de glucosa en los diferentes tiempos para que dichos valores se puedan comparar con los resultados obtenidos en el experimento control. Nuestros resultados concuerdan con la teora puesto que en este tubo se observ una disminucin considerable en la absorcin de glucosa, debido a una interrupcin del ciclo de fosforilacin oxidativa, sin el cual la clula no tiene ATP con los cuales trabajar. (Ganong, 2011) DISCUSION DE RESULTADOS Experimento control Observamos que la concentracin de glucosa fue aumentando tomando como referencia la escala cromtica de las tiras reactivas. Esto es posible debido a que la rata con la que trabajamos era jven por lo que su intestino delgado absorbi rpidamente la glucosa empezando desde una concentracin de 0 hasta 56 mmol/litro, al estar el intestino volteado y ver que dentro de l no haba glucosa, podemos explicar que mediante osmosis ste empieza a absorber glucosa por lo que con el paso del tiempo vemos que aumenta, mientras que la concentracin fuera del saco intestinal disminuy casi totalmenta al final del experimento. (Barret, 2013). Efecto de la ausencia de oxgeno en la absorcin intestinal de la glucosa En estas condiciones la absorcin de glucosa, se vio disminuida considerablemente con respecto al tubo prueba, puesto que las tiras reactivas siempre mostraron el mismo color que indicaba que la reaccin enzimtica de la glucosaoxidada especfica para glucosa no manifest un cambio de concentracin. Ya que su ausencia, impide la respiracin celular interrumpiendo la formacin de ATP con el que las clulas del moco intestinal sigan funcionando y por lo tanto interrumpiendo su metabolismo, especficamente la absorcin de glucosa, es decir; el oxgeno disminuye el suministro de energa en la clula, por lo que inhibe el transporte de glucosa. Cuando el oxgeno se termina la respiracin ya no se lleva a cabo y por lo tanto no se realiza absorcin esto se debe a que cuando la glucosa que llega a las clulas es degradada, en un proceso denominado gluclisis, necesita la ayuda del oxgeno, cuya principal funcin es la de combustionar la glucosa, como producto de

este proceso se reconvierte en agua (que eliminamos o reutilizamos) y anhdrido carbnico (que exhalamos por medio de la respiracin). (Guyton, 1992) Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinal de glucosa En comparacin con el experimento control notamos que si hubo una absorcin de glucosa pero esta fue muy baja, solo de 5.6 mmol/L en 25 minutos. El 2,4-dinitrofenol es un agente desacoplante, es decir, desacopla la cadena de transporte de electrones de la fosforilacin oxidativa inhibiendo la produccin de ATP al no generarse el gradiente de pH, pero si permite que la cadena de transporte de electrones contine funcionando, por lo que vemos disminuido la absorcin de glucosa. (Guyton, 1992) Debido a que este agente desacoplante asla el flujo de electrones (en la fosforilacin oxidativa), lo que significa que este flujo no se puede usar para la formacin de ATP). Transporta protones a travs de la membrana interna de manera que no se forme (disipa) el gradiente de concentracin de protones ni el potencial elctrico de membrana, es decir; no hay bombeo de protones a travs de la ATP-sintasa con produccin de ATP Por ello, al no existir un gradiente, no puede llevarse a cabo la absorcin por medio de los transportadores. (Fox. 2011) Efecto de la oxigenacin en la absorcin de glucosa A condiciones naturales la absorcin de glucosa se da ininterrumpida, y de manera exponencial, ya que las clulas tiene el oxgeno necesario para realizar respiracin celular y continuar funcionando as como la ausencia de sustancias que impidan su funcionamiento normal.

CONCLUSIONES:
La digestin es el proceso en el cual los compuestos orgnicos complejos como carbohidratos son degradados hasta convertirse en unidades pequeas fciles de absorberse en el intestino delgado.

El intestino delgado tiene tres regiones llamadas duodeno, yeyuno e leon pero es en stas ltimas dos es donde fundamentalmente tiene lugar la absorcin de los alimentos digeridos. El transporte activo es el principal mecanismo de la absorcin de nutrientes en el intestino delgado por lo que la absorcin de glucosa ocurre por medio de un trasporte activo secundario desde la luz del intestino hacia la sangre y transporte que depende del sodio en la luz intestinal. El oxgeno es indispensable para una buena absorcin de las sustancias a travs de intestino, ya que a falta de este inhibe parcialmente la eficiencia en la absorcin de glucosa. La presencia de oxgeno y la temperatura a 37C son factores que favorecen la absorcin de glucosa mientras que el 2,4-dinitrofenol, impide la absorcin correcta de glucosa as como su utilizacin como fuente de energa dentro de las clulas. El duodeno tiene un revestimiento especializado en la absorcin de carbohidratos y protenas. Su gran cantidad de vellosidades permite que exista una mayor superficie de contacto y absorcin de glucosa, entre otras cosas, la solucin Tyrode fue importante debido a que permite simular un ambiente parecido al de las condiciones normales del intestino as como tener una concentracin de glucosa en el exterior para observar la absorcin de la misma y comprender el proceso de transporte

Guyton, Artur C. Fisiologa Medica, Editorial Interamericana Mc Graw Hill, 8a edicin, 1992. Pp.800- 815, Barret K, Barman S, Boitano S. y Brooks H. Fisiologa Mdica, Editorial Interamericana Mc Graw Hill, 24a edicin, pp.479-486 Fox, Stuart I. Fisiologa Humana, Editorial Interamericana Mc Graw Hill, 12a edicin, 2011. pp 613-627