TCNICAS DE ESTUDIO GENTICO EN HEMATOLOGA

COORDINADORES: J.M. HERNNDEZ. Hospital La Fe. Salamanca J.R. MARTNEZ. Hospital de La Princesa. Valencia

APLICACIONES CLNICAS DE LAS NUEVAS TCNICAS DE CITOGENTICA MOLECULAR EN HEMATOONCOLOGA

M.D. SNCHEZ-IZQUIERDO1, M.D. ODERO, F. SOL Y N.C. GUTIRREZ
1

Servicio de Oncologa y Hematologa. Hospital Clnico de Valencia.

cuenta el elevado coste que supone el realizar estos anlisis, la complejidad de la interpretacin de los resultados, las dicultades en la estandarizacin y en el control de calidad, y la necesidad de personal especializado para el uso de unas tcnicas que en la mayora de los casos no sustituyen a los estudios citogenticos clsicos sino que los amplan y complementan. Todo ello hace recomendable una reexin en profundidad de la necesidad actual y futura de estas nuevas tecnologas en los laboratorios de hemato-oncologa de nuestro pas.

La revolucin tecnolgica est teniendo un impacto importante en el rea de la biomedicina, y dentro de ella la gentica est siendo objeto de un desarrollo espectacular. Las nuevas tecnologas aplicadas al anlisis gentico ofrecen una serie de ventajas con respecto a tcnicas anteriores, como son una mayor rapidez, especicidad, sensibilidad y la posibilidad de automatizacin, lo que las hace especialmente atractivas en el estudio citogentico y molecular de los pacientes con neoplasias. De este modo, la uorescencia con hibridacin in situ (FISH), el cariotipo multicolor, la hibridacin genmica comparada (CGH), y ms recientemente los microchips de ADN forman parte ya de la mayora de laboratorios dedicados a la citogentica hematolgica. Sin embargo, el avance tecnolgico no est siendo paralelo a la implantacin real de los nuevos sistemas en el anlisis rutinario de los pacientes. Por ello, sus indicaciones y aplicaciones clnicas son en la actualidad arbitrarias, confusas y en muchos aspectos ligadas al rea de la investigacin. Hay que tener en
Tabla 1. Aplicaciones de la FISH en oncohematologa Deteccin de alteraciones cromosmicas numricas y estructurales Identicacin de cromosomas marcadores Monitorizacin de la enfermedad residual postratamiento Deteccin temprana de recadas Identicacin de los clones celulares despus del trasplante Identicacin de la estirpe de la clula neoplsica Mapeo de alta resolucin de alteraciones citogenticas Conrmacin de alteraciones genmicas en la HGC

Fluorescencia con hibridacin in situ (FISH)

Esencialmente, la tcnica de FISH consiste en la deteccin de secuencias de ADN previamente marcadas con fluorescencia sobre cromosomas o ncleos celulares jados sobre un portaobjetos, usando para ello un microscopio de fluorescencia y un sistema de captura y procesamiento de imgenes. Esta tcnica ofrece numerosas aplicaciones en onco-hematologa, tanto en el diagnstico clnico como en la investigacin bsica y aplicada, que se resumen en la tabla 1. A diferencia de la citogentica convencional, la mayora de las tcnicas de FISH no precisan de clulas tumorales en divisin, por lo que es de gran ayuda en neoplasias con bajo ndice mittico. Ms an, puede aplicarse directamente sobre clulas extendidas de sangre perifrica o medula sea, improntas de tejido en fresco o congelado, y tejido seccionado y paranado1-4. Sondas para FISH En la actualidad se dispone de un gran nmero de sondas comercializadas para el estudio de las alteraciones genticas frecuentes en las leucemias y linfomas. Estas sondas estn marcadas directamente con fluorforos, lo que facilita su uso y permite una deteccin rpida y ecaz de los reordenamientos tanto en metafase como en interfase celular. Muchas de estas sondas deberan formar parte del estudio gentico rutinario de algunas enfermedades hemato-oncolgicas, junto con la citogentica convencional y otras tcnicas de biologa molecular. En otras ocasiones es preciso analizar una alteracin cromosmica concreta, o bien localizar una determinada secuencia gnica para la cual no exis-

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te una sonda comercial. En este caso es posible adquirir tales sondas (PAC, BAC, YAC, o csmidos) de las diferentes genotecas humanas actualmente disponibles. La diferencia entre estos vectores radica en la cantidad de ADN que son capaces de albergar y, por tanto, la regin de ADN que cubren y la intensidad de la seal que pueden generar. Existen protocolos especficos para la extraccin del ADN, siendo los ms utilizados los kits basados en columnas con resinas, ya que con ellos se obtiene un ADN de gran pureza. Una vez extrado, este ADN debe marcarse, para lo que existe una gran variedad de fluorforos y sistemas de marcaje (nick translation, DOP-PCR, random primer) que deben optimarse en cada caso. La hibridacin simultnea de varias sondas marcadas con distintos fluorocromos permite estudiar ms de una secuencia en un nico experimento, lo que se denomina multi-FISH. Basndonos en nuestra experiencia, el marcaje directo en dos colores de PAC y BAC con, por ejemplo, Spectrum Green y Spectrum Orange (Vysis, Downers Grove, IL, US) usando nick translation, es la estrategia ms cmoda y eficaz para la mayora de estudios de uso rutinario en hemato-oncologa, tanto en tejidos frescos como parafinados5. Otro aspecto importante a considerar es qu estructuras son capaces de detectar estas sondas en el ncleo celular o en metafase: 1. Sondas que identican una estructura especca del cromosoma. 2. Sondas que hibridan con mltiples secuencias del cromosoma. 3. Sondas que hibridan con una nica secuencia de ADN. En el primer caso las secuencias y satlite adyacentes al centrmero y que varan de un cromosoma a otro permiten detectar cromosomas concretos a nivel del centrmero e identificar alteraciones de tipo numrico, especialmente monosomas y trisomas y otras aneuploidas tanto en leucemias como en tumores slidos. El segundo caso corresponde a las sondas de pintado cromosmico que se obtienen mediante separacin cromosmica por citometra de ujo y se marcan directamente mediante DOP-PCR. Slo son adecuadas para su uso en metafase y sirven para detectar fundamentalmente translocaciones difciles de identicar con la citogentica convencional, como la t(12;21)(p12;q22) en LLA. Las sondas de secuencia nica permiten sobre todo detectar reordenamientos estructurales de genes o de regiones cromosmicas concretas. Este hecho tiene como consecuencia la necesidad de conocer a priori la regin candidata a estudio en cada patologa. Su aplicacin fundamental es la deteccin de translocaciones cromosmicas tales como la t(9;22)(q34;q11) o la t(14;18)(q32;q21), deleciones de genes concretos (p53, RB1, ATM), y amplicacin gnica (MYC, BCL2).

Aplicaciones actuales de la FISH Desde su inicio hace ya ms de 10 aos, las aplicaciones de la FISH en hemato-oncologa se han ido perfilando gradualmente1-4. Actualmente existen una larga serie de sondas comercializadas que incluyen la mayora de alteraciones citogenticas relevantes y frecuentes en hematologa y oncologa. A continuacin se exponen algunos ejemplos: Leucemia linfoblstica aguda 1. t(9;22)(q34;q11) (reordenamiento BCR-ABL) 2. t(4;11)(q21;q23) (sonda anqueante del gen MLL en 11q23). 3. t(12;21)(p13;q13) (reordenamiento TEL-AML1) Estas sondas son de gran ayuda en LLA, dado el alto ndice de fracasos de la citogentica convencional. La deteccin de pacientes con reordenamiento de BCR-ABL o MLL permite identificar subgrupos con muy mal pronstico, mientras que aquellos pacientes con t(12;21)(p12;q22), la cual es indetectable con citogentica de bandas, presentan un mejor pronstico. Leucemia mieloide aguda 1. Translocaciones cromosmicas caractersticas: t(8;21)(q22;q22), t(15;17)(q21;q21), inv(16)(p13q22), y reordenamientos de MLL. 2. Alteraciones numricas o deleciones de los cromosomas 5/5q y 7/7q, y trisoma 8. Aunque el estudio citogentico es posible en la mayora de casos de LMA, la aplicacin combinada de FISH es de gran ayuda, especialmente para detectar reordenamientos con inters diagnstico y pronstico en pacientes con cariotipos complejos. Leucemia mieloide crnica 1. Reordenamiento BCR-ABL: permite el diagnstico y monitorizacin de la respuesta al tratamiento, lo que facilita enormemente el seguimiento de pacientes con IFN o STI con respecto a la citogentica convencional. Leucemia linftica crnica 2. Trisoma 12, del(13)(q14), del(17)(p13) (gen P53), y del(11)(q22-q23) (gen ATM). Dado el bajo ndice mittico de las clulas de LLC-B, quiz la principal indicacin del FISH en hematologa sea la LLC-B, ya que permite identificar alteraciones citogenticas en interfase celular permitiendo la estraticacin de los pacientes en subgrupos clnico-biolgicos con diferentes evoluciones clnicas y teraputicas. Existen sondas comerciales de las tres primeras, pero no de ATM. Linfomas no hodgkinianos 1. t(14;18)(q32;q21), t(8;14)(q24;q32), t(11;14) (q13;q32), y translocaciones de BCL6. 2. Translocaciones de IGH (sondas anqueantes en 14q32.3).

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Figura 1. Utilizacin de sondas anqueantes del gen BCL6 en 3q27 marcadas en dos colores para diagnstico en LNH en interfase celular: a) patrn normal; b) patrn de translocacin de BCL6; c) patrn de trisoma del cromosoma 3; d) patrn de translocacin de BCL6 con trisoma.

3. t(2;5)(p23;q35) (NMP-ALK). La FISH en LNH-B es actualmente indispensable para la identicacin de los reordenamientos especcos de los distintos subgrupos anatomoclnicos. Estas sondas pueden aplicarse tanto en tejidos frescos como parafinados, y su incorporacin al diagnstico rutinario de estas enfermedades debiera ser objetivo prioritario (g. 1). Mieloma mltiple 1. Translocaciones de IGH (sondas anqueantes en 14q32.3). 2. Delecin de 13q y reordenamientos de 11q. La FISH permite identicar translocaciones de IGH en la mayora de MM, especialmente las t(4;14) (p16;q32) y t(14;16)(q32;q23), muy difciles de detectar mediante citogentica. La deteccin de deleciones del cromosoma 13q y de reordenamientos de 11q se ha asociado con enfermedad clnicamente agresiva. Ventajas e inconvenientes de la FISH La FISH es una tcnica extendida en la actualidad, la cual presenta una serie de ventajas e inconvenientes que se presentan en la tabla 2.

Spectral karyotyping (SKY)

La tcnica de spectral karyotyping (SKY) permite la deteccin e identificacin simultnea de todos los cromosomas humanos mediante la combinacin de 5 uorocromos. La sonda que se utiliza para hibridar las clulas tumorales en metafase es una mezcla de sondas de pintado cromosmico (painting) de los 24 cromosomas, cada uno marcado con una combinacin de uorocromos diferente. Se necesita un equipo y un software especial para detectar y

discriminar las diferentes sondas de ADN que se hibridan simultneamente. Por lo tanto, esta tcnica combina la sensibilidad del FISH con la gran ventaja del anlisis citogentico convencional: obtener una visin global de todas las alteraciones cromosmicas en un nico experimento. Este mtodo es un instrumento muy til en el anlisis de pacientes con neoplasias hematolgicas. Ha permitido detectar translocaciones crpticas, en algunos casos recurrentes y, sobre todo, analizar cariotipos complejos e investigar los orgenes genticos del material implicado en cromosomas marcadores o en adiciones6-8. Por ejemplo, se ha podido detectar el origen de las adiciones en el brazo largo del cromosoma 14, tan frecuentes en neoplasias linfoides. El principal inconveniente del SKY es que no permite detectar inversiones ni pequeas deleciones. En la actualidad se siguen desarrollando nuevas tcnicas que permitan superar estas limitaciones9. Los resultados de esta tcnica pueden abrir campos a nuevas investigaciones, pero adems puede tener un signicado pronstico, ayudando a identicar alteraciones genticas recurrentes que identifiquen subtipos especcos de una enfermedad. En las LMA el SKY ha permitido la deteccin de translocaciones crpticas en cromosomas que el anlisis mediante bandas G detectaba como delecionados, proporcionando una herramienta para que en el futuro se puedan denir mejor los grupos de mal pronstico8. Cuando se desarroll la tcnica, se pens que el SKY podra detectar alteraciones en los pacientes con neoplasias hematolgicas pero que presentaban cariotipo normal. Algunos trabajos recientes muestran que el SKY detecta alteraciones crpticas en un porcentaje muy bajo de estas muestras10. Estos resultados, junto con el hecho de que es una tcnica laboriosa y cara, sugieren que probablemente el SKY no es la tcnica de eleccin para el estudio de casos con un resultado citogentico normal. Las distintas tcnicas genticas no se excluyen, son complementarias unas de otras. Lo importante es valorar qu tipo de estudio se debe utilizar en cada caso. Esto se aplica tambin al SKY, que siempre se debe utilizar como un mtodo complementario del anlisis de bandas G. El cariotipo convencional permite analizar un mayor nmero de metafases y proporciona una descripcin ms exacta de las bandas implicadas en las reordenaciones. Despus del anlisis mediante SKY es conveniente volver al cariotipo de bandas G para definir los puntos de rotura. En conclusin, el SKY puede representar un importante instrumento en el anlisis citogentico, especialmente en casos con cariotipos complejos. Cada vez es ms claro el signicado clnico de los estudios genticos. La capacidad de discernir diferencias genticas entre poblaciones de clulas leucmicas similares morfolgica e inmunolgicamente est

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Tabla 2. Ventajas e inconvenientes de las tcnicas de citogentica molecular Ventajas FISH No requiere clulas en divisin Rapidez Anlisis de gran nmero de clulas Alta sensibilidad y especicidad Aplicable a muestras almacenadas (paranadas, congeladas), o con pocas clulas Requiere una pequea cantidad de ADN No requiere clulas en divisin Permite estudiar material archivado (congelado, en parana) Permite detectar ganancias y prdidas de ADN en todo el genoma Inconvenientes Restringido por la disponibilidad de las sondas Slo estudia una o pocas alteraciones en un experimento Limitaciones en parana

Hibridacin genmica comparada

Slo se detectan alteraciones citogenticas que impliquen ganancias y prdidas de ADN Requiere una inltracin tumoral mnima del 50 % No permite cuanticacin de las ganancias o prdidas No detecta ganancias de ADN menores de 4-5 Mb ni prdidas de 10-20 Mb Requiere clulas en divisin No detecta alteraciones estructurales dentro de un mismo par cromosmico No detecta alteraciones estructurales de ADN menores de 500-1.500 kb Requiere clulas en divisin No detecta alteraciones estructurales de ADN menores de 500-1.500 kb

SKY FISH multicolor

Permite obtener informacin de todos los cromosomas Muy til para descifrar cariotipos complejos Permite obtener informacin de todos los cromosomas Muy til para descifrar cariotipos complejos Detecta alteraciones estructurales dentro de un mismo par cromosmico

RxFISH

ayudando a establecer las bases para una revisin de la clasicacin de neoplasias hematolgicas. La utilizacin conjunta de estas tcnicas est aportando datos a una investigacin dirigida a identicar factores pronsticos en estos pacientes.

Aplicaciones de la tcnica de cross species color banding (RXFISH) en neoplasias hematolgicas

La tcnica de hibridacin in situ (HIS) permite detectar y localizar secuencias especficas de cidos nucleicos (ADN o ARN) sobre preparaciones cromosmicas, extensiones celulares, cortes de tejido y cortes ultrafinos utilizados para el estudio al microscopio electrnico. La utilizacin de las tcnicas de HIS ha aumentado en los ltimos aos como complemento de las tcnicas de citogentica convencional. La ventaja de la citogentica convencional radica en la visualizacin de todos los cromosomas, pero presenta varias limitaciones: es necesario que existan clulas en divisin y en ocasiones se pueden valorar pocas metafases (menos de 20). Por otra parte, los cromosomas pueden presentar unas bandas cromosmicas poco definidas siendo imposible determinar el cariotipo debido a una calidad morfolgica deciente. En este caso, no ser factible la deteccin de alteraciones cromosmicas que

afecten a regiones genticas muy pequeas. Para complementar las tcnicas citogenticas convencionales, actualmente disponemos de las tcnicas de HIS. Recientemente han aparecido nuevas tecnologas de HIS, con el mismo fundamento, con la intencin de resolver las carencias de las sondas convencionales y aportar una mayor informacin en el conocimiento del cariotipo. Dichas metodologas comprenden la tcnica de Hibridacin Genmica Comparada (HGC), Multicolor-FISH (M-FISH) y Spectral Karyotyping (SKY) y la tcnica de Multibanding-FISH11,12. Por otra parte, tambin se han desarrollado una serie de tcnicas que combinan la identicacin celular con la HIS de forma que permiten asociar una alteracin cromosmica a un linaje celular concreto. Las tcnicas M-FISH o SKY se basan en la cohibridacin de 24 sondas de pintado cromosmico marcadas con uorescencia sobre metafases. El resultado de la hibridacin permite visualizar simultneamente cada par cromosmico de un color diferente. Estas tcnicas son muy tiles para determinar de forma inequvoca cariotipos complejos y cromosomas no identicables con las tcnicas de bandeo (cromosomas marcadores). Esta tcnica presenta una limitacin en aquellas patologas con un

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ndice proliferativo bajo debido a la necesidad de obtener clulas en divisin. As mismo, estas tecnologas no permiten el reconocimiento de algunos puntos de rotura como aquellos asociados con deleciones, inserciones, adiciones y translocaciones de pequeo tamao (inferiores a 500-1.500 kb), para los cuales es necesario utilizar sondas de locus especco. Recientemente se ha descrito la tcnica de multibanding-FISH o cross species color banding (RxFISH)11,12, tcnica similar a las de M-FISH o SKY, que permite la generacin de un patrn de bandas de distintos colores para cada cromosoma. Dicha metodologa se basa en las homologas genmicas que existen entre la especie humana y diferentes especies de mono. Las ventajas que ofrece respecto a las de M-FISH o SKY radica en que la de Rx-FISH permite la identificacin de alteraciones estructurales dentro de un mismo cromosoma (inversiones y translocaciones) y en que los puntos de rotura de los posibles reordenamientos pueden ser localizados con mayor exactitud. As mismo, permite determinar cariotipos complejos y cromosomas no identicables con las tcnicas de bandeo (cromosomas marcadores), pero tiene la limitacin, como M-FISH y SKY, de necesitar clulas en divisin. Esta tcnica an est en fase de desarrollo y experimentacin por lo cual no existen demasiadas referencias en la literatura13-15. Se presentar la aplicacin de la tcnica de RxFISH, basada en nuestra experiencia en una serie de pacientes con neoplasias hematolgicas (linfoma esplnico de la zona marginal, sndromes linfoproliferativos crnicos tipo T y lneas celulares de pacientes con linfoma no Hodgkin) sobre los que se ha aplicado la tcnica de citogentica convencional y la tcnica de RxFISH. Mediante esta tcnica se han podido demostrar y detectar nuevas alteraciones citogenticas.

Hibridacin genmica comparada (HGC)

La hibridacin genmica comparada (HGC) es una tcnica de citogentica molecular, basada en tcnicas de hibridacin in situ uorescente de doble color que permite realizar un anlisis global de las ganancias y prdidas de material genmico en una nica hibridacin. Consiste en la hibridacin competitiva entre ADN tumoral (test) y ADN normal (referencia) sobre metafases normales en presencia de un exceso de ADN Cot-1 humano16. Previamente, el ADN tumoral y el ADN normal han sido marcados con dos fluorocromos diferentes (por ejemplo, el ADN tumoral con un fluorocromo verde y el ADN normal con uno rojo) lo que permitir su posterior identificacin en colores verde y rojo mediante un microscopio de uorescencia. El anlisis digital de las metafases capturadas cuantifica la proporcin de verde y de rojo en todos los cromosomas de manera que si existe una ganancia de material genmico en una determinada regin cromosmica se producir

un aumento de la uorescencia verde a ese nivel, y si lo que hay es una prdida de material genmico se producir una disminucin de la uorescencia verde y por tanto un aumento relativo de la uorescencia roja. El cariotipaje posterior se realiza sobre la base de la tincin con DAPI de los cromosomas. La HGC ha sido la primera tcnica combinada de citogentica e hibridacin in situ uorescente que ha permitido realizar un anlisis global del genoma. Puesto que las alteraciones en el nmero de copias de ADN de determinadas regiones tienen una gran importancia en la patogenia del cncer, la HGC ha despertado gran inters en el estudio de las neoplasias. La HGC ha sido utilizada de forma ms amplia en el estudio de los tumores slidos que de las neoplasias hematolgicas, entre otras razones por la dicultad que entraa obtener mitosis en los tumores slidos, y porque los reordenamientos no recprocos y las amplificaciones gnicas se dan con ms frecuencia en ellos que en las neoplasias hematolgicas. No obstante, puesto que la HGC no requiere metafases de las clulas tumorales y no est afectada por la seleccin clonal inherente a los cultivos celulares, ha motivado tambin estudios relevantes en las hemopatas malignas. Las neoplasias linfoides B representan el grupo ms estudiado, y ms concretamente los linfomas no hodgkinianos (LNH) en los que se ha demostrado que las amplicaciones constituyen una alteracin ms frecuente de lo que se supona, y que se asocian generalmente a linfomas agresivos17-20. Otra aportacin importante de la HGC al conocimiento de la patogenia de los linfomas ha sido la demostracin de que la amplicacin es otro mecanismo que causa sobreexpresin de la protena bcl-2, aadido al ya conocido mecanismo de translocacin. En la tabla 3 se resumen los cambios genmicos detectados en las neoplasias linfoides B. Las aplicaciones clnicas de la HGC dependen de sus potenciales implicaciones diagnsticas, pronsticas y teraputicas y de sus dos principales limitaciones, la no deteccin de alteraciones balanceadas y la necesidad de una infiltracin tumoral mnima del 50 %. Desde el punto de vista diagnstico las aportaciones de la HGC son escasas puesto que las hemopatas malignas constituyen un grupo de neoplasias bien caracterizadas mediante otras metodologas. Respecto a su papel en el pronstico puede considerarse una tcnica complementaria a los estudios de citogentica clsica. Desde que las alteraciones citogenticas se han erigido en un factor pronstico de primer orden, es necesario explorar la presencia de determinadas anomalas cromosmicas con inters pronstico en los casos no informativos mediante tcnicas de citogentica estndar, ya sea por no obtener metafases o por crecimiento de las clulas normales. En este sentido la HGC es til en las hemopatas malignas en las que las ganancias y prdidas de material genmico constituyen un factor pronstico, por ejemplo las leucemias agudas linfo-

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Tabla 3. Cambios genmicos detectados mediante CGH en las neoplasias linfoides B Cambios genmicos Neoplasia hematolgica LLC (n = 71) LNH esplnico de la zona marginal (n = 29) LNH folicular (n = 92) LNH del manto (n = 111) LNH difuso de clula grande mediastnico (n = 69) LNH difuso de clula grande gstrico (n = 58) LNH difuso de clula grande del sistema nervioso central (n = 19) LNH difuso de clula grande sin especicar (n = 52) Mieloma mltiple (n = 87) Ganancias 12 3q, 5q, 12q, 20q X, 7, 8q, 12, 18q 3q, 8q, 15q, 18q 9p, Xq 1q, 3q, 11q, 12 12q, 18q, 22q X, 1q, 3, 7, 8q, 18q 1q, 9, 11q, 15, 19 Prdidas 6q, 11q, 13q 7q, 17p 6q, 17p 1p, 8p 6q, 11q, 13q 2p 6q, 17p 6q 6q, 1p, 8p 13, 16, 6q Amplicaciones

2p 3q, 18q, 7p

9p, 18q 2p, 18q

En negrita se indican los cambios genmicos ms frecuentes. Entre parntesis el nmero de enfermos estudiados.

blsticas o el mieloma mltiple si la inltracin por clulas plasmticas es adecuada. Por otro lado an no hay suciente nmero de trabajos que establezcan una superioridad de los cambios genmicos detectados mediante HGC frente a las alteraciones cromosmicas observadas con otras tcnicas de citogentica, a la hora de predecir la supervivencia de los enfermos con hemopatas malignas. Si esto se demostrara, la utilizacin de la HGC en la prctica clnica adquirira un valor aadido. Por ltimo, la HGC es una herramienta til para denir regiones genmicas con un posible papel en la patogenia y mecanismos evolutivos de las hemopatas malignas y que posteriormente pueden ser estudiadas con detalle mediante tcnicas de biologa molecular con el n de encontrar tratamientos ms especcos. Por todo lo expuesto, estamos asistiendo en primera persona al extraordinario desarrollo de la metodologa de anlisis genmico en nuestro pas. Los diferentes grupos estn aplicando estas innovadoras tcnicas al estudio de las hemopatas malignas. En algunos casos, como el SKY o la RxHIS es an temprano para determinar con exactitud su posible aplicacin en los anlisis rutinarios de las hemopatas malignas. Por el contrario, las tcnicas de FISH, de uno o dos colores, con el nmero cada vez ms creciente de sondas disponibles, se han convertido en una estrategia que se aplica en el momento actual de manera sistemtica en el estudio de los enfermos con hemopatas malignas.

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