QUMICA NOVA, 23(4) (2000) 457

COMPLEXAO DA TETRACICLINA, DA OXITETRACICLINA E DA CLORTETRACICLINA COM O CATIO

COBRE (II). ESTUDO POTENCIOMTRICO.
Cristina M. C. M. Couto, M. Conceio B. S. M. Montenegro e Salette Reis*
CEQUP - Departamento de Qumica Fsica - Faculdade de Farmcia do Porto - Rua Anbal Cunha, 164 - 4050 - Porto - Portugal
Recebido em 20/4/99; aceito em 17/11/99
TETRACYCLINE, OXYTETRACYCLINE AND CHLORTETRACYCLINE COMPLEXATION
WITH COPPER (II). POTENTIOMETRIC STUDY. Stability constants of complexes formed by
copper (II) with three different tetracyclines (tetracycline, oxytetracycline and chlortetracycline)
have been determined potentiometrically with an automatic system in aqueous medium at 25,0
0,2
o
C and I = 0,1 mol L
-1
NaNO
3
. The protonation constants of the three tetracyclines were also
determined under the same conditions. The distribution of the complexes was then simulated at
therapeutic levels of the drugs.
Keywords: tetracycline; copper (II); complex formation.
ARTIGO
INTRODUO
As Tetraciclinas (TC) representam uma das mais importantes
famlias farmacolgicas e, tendo em conta o seu largo espectro
de aco antibacteriano, so usadas, como tratamento de primei-
ra escolha, nas infeces bacterianas causadas por chlamydia,
rickettsia, mycoplasma, brucella e spirochaeteae
1
. So ainda
frequentemente utilizadas em medicina veterinria, em nutrio
animal e em aditivos alimentares destinados a uso pecurio.
As Tetraciclinas constituem um grupo de substncias cris-
talinas de natureza anfotrica, que contm um esqueleto co-
mum, hidronaftacnico (Figura 1). Devido ao facto de, na sua
estrutura qumica, existir um grande nmero de possveis lo-
cais de ligao, as TC em soluo formam, com grande faci-
lidade, complexos metlicos. Como tal, nos fluidos biolgi-
cos, o seu mecanismo de aco fortemente dependente da
presena de ies metlicos
2
. Alguns trabalhos anteriormente
descritos na literatura mostram que, a presena de co-factores
(ies metlicos) deve ser considerada na avaliao do meca-
nismo de aco das TC em sistemas biolgicos, embora o seu
papel no desenvolvimento da aco antibacteriana ainda no
esteja bem definido. O conhecimento das interaces sofridas
por estes antibiticos com metais poder ajudar a melhor
compreender a sua actuao em mecanismos fisiolgicos es-
pecficos, bem como a planear mtodos de doseamento mais
eficazes e rpidos, que possam competir favoravelmente com
os mtodos oficiais
3,4
.
A importncia do estudo das interaces desta famlia de
compostos com o catio cobre deve-se ao facto de este metal
estar presente em concentraes apreciveis, quer nos flui-
dos biolgicos quer em preparaes multivitamnicas, usual-
mente administradas durante tratamentos com antibiticos.
Alm disso, o recurso a mtodos de doseamento, baseados
na formao de complexos corados das TC com o catio Cu
(II) tem sido frequentemente proposto
5-8
. As propriedades
complexantes desta famlia de drogas tm sido muito estu-
dadas anteriormente contudo, os valores das constantes de
estabilidade correspondentes formao de complexos entre
o io cobre (II) e as TC descritos na literatura no so con-
cordantes
9-11
e nem sempre consideram a existncia das
mesmas espcies em soluo aquosa razo, pela qual estas
devem ser reavaliadas.
O trabalho apresentado teve como objectivo a determina-
o das constantes de estabilidade dos complexos formados
pelo catio Cu (II) e trs tetraciclinas (tetraciclina - TCH,
oxitetraciclina - OTCH e clortetraciclina - CTCH). As cons-
tantes de estabilidade foram determinadas por titulao po-
tenciomtrica usando um elctrodo de vidro em condies
experimentais anlogas s utilizadas na determinao das
constantes de acidez de cada uma das tetraciclinas. Os da-
dos experimentais foram analisados com os programas
Superquad
12
e Best
13
.
PARTE EXPERIMENTAL
Reagentes e solues
Todas as solues foram preparadas com gua bidesionizada,
isenta de CO
2
, (condutividade especfica < 0,1S cm
-1
) e com
reagentes de qualidade pro-anlise ou semelhante, sem qual-
quer purificao adicional.
A soluo de HNO
3
, de concentrao 0,1000 mol L
-1
foi
obtida a partir de ampola Titrisol (Merck 9973). As solues
de NaOH, isentas de carbonato, foram mantidas em atmosfera
de N
2
e padronizadas por titulao potenciomtrica.
As solues me das Tetraciclinas (TC), obtidas na forma
de cloridratos (Sigma), foram preparadas diariamente por pesa-
gem rigorosa do respectivo slido, sendo mantidas, entre os
ensaios, no frigorfico ao abrigo da luz.
A soluo de nitrato de cobre foi preparada a partir de uma
soluo padro de cobre, de concentrao 0,1 mol L
-1
da
ORION (Ref. 942906). e-mail: shreis@ff.up.pt
Figura 1. Estrutura qumica da tetraciclina (TC).
458 QUMICA NOVA, 23(4) (2000)
Determinao potenciomtrica das constantes
de acidez e estabilidade
As medidas potenciomtricas foram efectuadas num sistema
automtico constitudo por um potencimetro Crison 2002 (sen-
sibilidade de 0,1 mV), uma microbureta Crison 2031, coman-
dados por um micro-computador que permitia o controlo dos
ensaios e a aquisio dos dados e ainda o tratamento matemti-
co dos dados experimentais. A clula electroltica usada era
constituda por um elctrodo de dupla juno AgCl / Ag, ORION
90-00-02 (como soluo de referncia externa usou-se uma so-
luo de NaNO
3
0,1 mol L
-1
) e um elctrodo de vidro, Russel
SWL. A temperatura dos ensaios foi mantida constante a 25
0,2
o
C fazendo circular gua termostatizada por uma cuba de
dupla parede, Crison. Todas as titulaes foram efectuadas em
atmosfera de azoto, fazendo borbulhar inicialmente o azoto na
soluo a titular. A calibrao do sistema foi feita usando, o
mtodo de Gran
14
, em termos da concentrao de ies
hidrognio, por titulao de cido forte/base forte [HNO
3
(0,001
mol L
-1
)/NaOH isento de carbonato (0,01 mol L
-1
)] com fora
inica ajustada a 0,1 mol L
-1
com NaNO
3
.
As constantes de acidez das TC foram determinadas por
titulao de 20,00 mL de uma soluo aquosa (I = 0,1 mol
L
-1
com NaNO
3
) de Tetraciclina (7x10
-4
mol L
-1
em TC e
1x10
-3
mol L
-1
em HNO
3
) com uma soluo de NaOH
0,02 mol L
-1
. As constantes de estabilidade dos complexos
Cu (II) / TC foram determinadas por titulao potenciom-
trica de 20,00 mL de uma soluo aquosa (I=0,1 mol L
-1
,
NaNO
3
) de Tetraciclina (7x10
-4
mol L
-1
em TC, 1x10
-3
em Cu(NO
3
)
2
e 1x10
-3
mol L
-1
em HNO
3
) com uma soluo
de NaOH 0,02 mol L
-1
. Foram efectuados ensaios varian-
do a razo de concentraes Cu / TC (1:1; 1:2 e 2:1).
Os clculos foram efectuados com os dados obtidos em pelo
menos seis titulaes independentes, cada uma das quais com
pelo menos 20 pontos experimentais usando os programas para
computador Superquad
12
e Best
13
. Em todos os modelos utiliza-
dos para os clculos considerou-se a existncia dos equlibrios
correspondentes s protlises dos ligandos e do io cobre (II).
Os erros associados aos valores das constantes apresentados neste
trabalho foram calculados pelo mtodo proposto por Albert e
Sergeant
15
no qual o erro igual diferena mxima entre o
logaritmo da mdia dos logaritmos dos valores de constantes
calculados nos vrios ensaios e os seus valores individuais.
RESULTADOS E DISCUSSO
Constantes de acidez das TC
As constantes de acidez determinadas para a TCH, OTCH e
CTCH nas condies experimentais referidas anteriormente nes-
te trabalho e o intervalo de pH usado na aquisio dos dados so
apresentadas na Tabela 1. Para as tetraciclinas estudadas
(LH
3
+
Cl
-
representa a forma protonada) os dados experimentais
foram obtidos no intervalo de pH de 2,5 a 10,0. Os valores de
pK
a
para a TCH e seus derivados so extensivamente descritos
na literatura (Tabela 2) e os valores descritos so muito seme-
lhantes aos apresentados neste trabalho
11,16-19
. As constantes de
acidez destes compostos so usualmente atribudas dissociao
do grupo tri-carbonil metano (sistema amdico) (A) para pK
a1
,
dissociao do sistema fenol-dicetona (B) para pK
a2
e ionizao
do grupo dimetil amnio (C) para pK
a3
(Figura 1)
11,16
.
Complexos de Cobre (II) com as TC
Muitos tm sido os trabalhos realizados anteriormente com
o objectivo de conhecer e quantificar as propriedades comple-
xantes desta famlia de drogas de forma a relacion-las com a
actividade biolgica contudo, os valores das constantes de es-
tabilidade correspondentes formao de complexos entre o
io cobre (II) e as TC descritos na literatura no so concor-
dantes e nem sempre consideram a existncia das mesmas es-
pcies em soluo aquosa, pelo que devem ser reavaliadas
9-11
.
Tabela 1. Constantes de acidez e complexao calculadas para solues aquosas de Cobre (II) / TC.
Io p q r Espcies pH log
Possveis
CTCH OTCH TCH
H
+
1 0 -1 [H
2
L] 2,5-10,0 0-3,290,03 0-3,340,02 0-3,420,02
1 0 -2 [HL]
-
2,5-10,0 -10,540,02 -10,740,03 -11,010,02
1 0 -3 [L]
2-
2,5-10,0 -19,620,06 -19,890,06 -20,100,07
Cu
2+
1 1 -1 CuH
2
L 2,8-7,5 -10,730,06 ___ 0-0,480,09
1 1 -2 CuHL 2,8-7,5 0-2,930,06 0-2,840,05 0-2,600,08
1 1 -3 CuL 2,8-7,5 0-9,270,06 0-9,400,05 0-8,550,06
2 1 -2 CuH
4
L
2
2,7-9,0 -00,850,10 0-0,700,07 0-0,510,09
2 1 -3 CuH
3
L
2
2,7-9,0 0-2,550,10 0-3,330,09 0-2,550,09
2 1 -4 CuH
2
L
2
2,7-9,0 0-7,530,09 0-7,580,08 0-7,520,08
2 1 -5 CuHL
2
2,7-9,0 -15,900,10 -17,350,08 -14,820,08
2 1 -6 CuL
2
2,7-9,0 ___ -26,370,09 ___
Os smbolos p, q e r so usados nos programas para indicar os coeficientes estequiomtricos associados com os possveis equil-
brios em soluo.: p, coeficiente do ligando, q, cobre (II), e r, protes.
Tabela 2. Constantes de acidez das tetraciclinas CTCH, OTCH
e TCH.
Io p q r Espcies CTCH OTCH TCH
H
+
1 0 -1
a
[H
2
L] 03,36
16
1 0 -2
a
[HL]
-
11,86
16
1 0 -3
a
[L]
2-
22,32
16
1 0 -1 [H
2
L] 02,78
11
1 0 -2 [HL]
-
10,33
11
1 0 -3 [L]
2-
19,81
11
1 0 -1
a
[H
2
L] 03,24
17
03,16
17
03,26
17
1 0 -2
a
[HL]
-
10,49
17
10,53
17
10,04
17
1 0 -3
a
[L]
2- ___ ___ ___
1 0 -1
b
[H
2
L] 03,30
18
03,27
18
03,30
18
1 0 -2
b
[HL]
-
10,74
18
10,59
18
10,98
18
1 0 -3
b
[L]
2- ___ ___ ___
1 0 -1
b
[H
2
L] 03,27
19 ___
03,33
19
1 0 -2
b
[HL]
-
10,59
19 ___
10,03
19
1 0 -3
b
[L]
2- ___ ___ ___
a
Fora inica fixada a 0,1 mol L
-1
b
Valores de pK
a
extrapolados para fora inica zero.
QUMICA NOVA, 23(4) (2000) 459
As TC reagem com o cobre (II) formando complexos est-
veis. O cobre (II), (d9) a forma mais estvel em soluo aquo-
sa tendo o Cu
aq
2+
io uma estrutura octadrica distorcida for-
mando preferencialmente complexos com geometria octadrica,
embora tambm possam existir complexos tetradricos. Nos com-
plexos com o io cobre (II), os tomos doadores dos ligandos
esto, normalmente ligados no plano tetragonal (equatorial) sen-
do menor a tendncia de coordenao nas posies axiais e por
esta razo usualmente coordena com quatro tomos doadores,
embora, por vezes, coordene com cinco tomos, sendo as restan-
tes posies ocupadas por molculas do solvente
20,21
.
Na Tabela 1 esto apresentados os valores das constantes de
estabilidade (log) determinados para os complexos de cobre
(II) com a TCH, OTCH e CTCH, assim como o intervalo de
pH no qual se obtiveram os dados experimentais.
Para o sistema binrio Cu (II) / TC o modelo que melhor
corresponde aos dados obtidos assume a presena em soluo
das seguintes espcies de cobre (II): para TCH e CTCH,
[CuH
2
L]
2+
, [CuHL]
+
, [CuL], [CuH
4
L
2
]
2+
, [CuH
3
L
2
]
+
, [CuH
2
L
2
]
e [CuHL
2
]
-
e para OTCH, [CuHL]
+
, [CuL], [CuH
4
L
2
]
2+
,
[CuH
3
L
2
]
+
, [CuH
2
L
2
], [CuHL
2
]
-
e [CuL
2
]
2-
; nestas frmulas H
2
L
representa a forma neutra das TC.
Os resultados obtidos para as trs tetraciclinas estudadas
so semelhantes entre si, com a excepo da espcie [CuL
2
]
2-
que s foi determinada para a OTCH.
Na Figura 2 representam-se as curvas de titulao potencio-
mtrica com NaOH de uma soluo de TCH de concentrao
7x10
-4
mol L
-1
e de uma soluo de TCH de concentrao
7x10
-4
mol L
-1
e Cu(NO
3
)
2
de concentrao 7x10
-4
mol L
-1
,
ambas com fora inica ajustada a 0,1 mol L
-1
com NaNO
3
. A
diferena existente na variao dos valores de pH ao longo da
titulao para as duas solues deve-se formao de novas
espcies em soluo, resultantes de interaces entre a TCH e o
catio cobre (II), com a consequente libertao de ies H
+
que
se traduz por uma diminuio do pH relativamente curva cor-
respondente soluo de TC na ausncia de Cu (II). Esta dife-
rena comea a ser significativa para os valores de pH prximos
de 2, valor que corresponde ao pH acima do qual h formao
de complexos entre o ligando e o catio cobre (II), como pode
ser observado na Figura 3, que representa o diagrama de distri-
buio das espcies presentes em soluo em funo do pH.
actua provavelmente como monodentado. Maior evidncia para
o comportamento monodentado do ligando na forma neutra
pode ser obtida pela aplicao do mtodo logK
20
, no qual
log log log K K K
Cu(H L)
Cu(H L)
Cu(H L)
Cu
2 2
2
2
=
aos complexos de cobre (II) presentes em soluo. O valor cal-
culado de logK = - 0,5, para TCH, situa-se no intervalo - 0,5
e - 0,8, caracterstico de um tipo de ligao monodentada, en-
quanto que o intervalo dos valores caractersticos para ligandos
bidentados - 1 e -2. O valor da constante de complexao
correspondente formao da espcie Cu(H
2
L) determinado
neste trabalho (3,90) inferior ao descrito na literatura (4,29)
9
.
Os valores de pK
Cu(H L)
Cu
2 2
encontrados (OCTH 7,38, CTH 8,18 e
TCH 7,35) so semelhantes aos descritos na literatura (OCTH 6,0
e TCH 7,31)
9
. No caso da CTCH no se encontra descrito na
literatura nenhum valor correspondente a esta constante.
No diagrama de distribuio das espcies em funo do
pH (Fig.3), verifica-se tambm, que para valores superiores a
pH = 3 e inferiores a pH = 7 os complexos de cobre (II)
predominantes em soluo so CuHL e CuH
3
L
2
. Os valores
de pK
CuL
Cu
encontrados (OCTH 7,90 e CTH 7,61 e TCH 8,41)
so semelhantes aos descritos na literatura. (OCTH 8,96 e
CTH 7,59 e TCH 8,88)
9
.
A concentrao mxima da espcie CuH
2
L
2
aparece em solu-
o para um valor de pH 6,5. Os valores de pK
Cu(HL)
Cu
2
encontra-
dos (OTCH 13,40, CTH 13,55 e TCH 14,50) so semelhantes aos
descritos na literatura. (CTH 11,36 e TCH 13,26)
9
, no entanto no
aparece descrito na literatura nenhum valor no caso da OTCH.
As trs tetraciclinas actuam provavelmente como ligandos
bidentados estabelecendo-se a ligao atravs do sistema
fenlico - dicetona (C
10
-C
11
-C
12
) (B), formando um quelato de
seis membros
10
. No complexo CuH
2
L
2
, os ligandos (HL) coor-
denam, provavelmente, o io metlico como um ligando
bidentado, originando uma estrutura planar-quadrtica com o
catio cobre na qual duas molculas de gua podero coorde-
nar fracamente nas posies axiais. Alm disso, para confirmar
o comportamento bidentado das tetraciclinas na forma
desprotonada, pode recorrer-se aplicao do mtodo de
logK
20
, no qual
log log log K K K
Cu(HL)
Cu(HL)
Cu(HL)
Cu
2
=
aos seus complexos de cobre presentes em soluo. Os valores
de logK calculados nos trs casos, OCTH logK = - 1,9; para
TCH logK = - 2,32 e para CTH logK = - 1,55, encontram-
se no intervalo 1 e 2 caracterstico da coordenao de
ligandos bidentados com o io cobre.
Os resultados obtidos potenciometricamente, permitem, com
base no conhecimento da estrutura qumica do ligando e do io
Figura 2. Curvas de titulao potenciomtrica com NaOH de uma
soluo de TCH ( 7x10
-4
mol L
-1
) () e de uma soluo de TCH
( 7x10
-4
mol L
-1
) e Cu(NO
3
)
2
( 7x10
-4
mol L
-1
) (I).
Como o valor do pK
a1
da TCH de 3,42, solues aquosas
de pH 3, contm como espcie predominante a TCH na for-
ma neutra (H
2
L) e o complexo com o io cobre (II) que se
forma corresponde a Cu(H
2
L)
2
. Nestas condies, o ligando
Figura 3. Diagrama de distribuio das espcies em funo do pH.
1 - H
2
L; 2- HL
-
; 3-L
2-
; 4-CuHL; 5-CuL; 6- CuH
2
L; 7-CuH
4
L
2
; 8-
CuH
3
L
2;
9-CuH
2
L
2
; e 10 CuHL
2
.
460 QUMICA NOVA, 23(4) (2000)
metlico, fazer alguns comentrios sobre a estrutura dos com-
plexos formados e, embora no exista descrita, uma opinio
consensual quanto ao local de coordenao das TC, relaciona-
los com os referidos na literatura a partir de dados obtidos por
diferentes tcnicas.
Estudos realizados anteriormente por Day
22
,

usando tcnicas
baseadas em fluorescncia e dicrosmo circular, sugerem que, em
soluo, ocorre quelatao no sistema dicetnico (C
10
, C
11
, C
12
,
Fig.1) das TC. Conover
23
, baseado em dados obtidos por
espectrofotometria, concluiu que o local para ligao das TC a
metais se situava no grupo enolizado -dicetnico em C
11
- C
12
,
hiptese tambm confirmada por estudos de espectrometria de
infra-vermelho realizados por Hassam
10
. Nos trabalhos referidos,
admite-se que as tetraciclinas funcionam como ligandos bidentados
que formam quelatos com o catio cobre (II), e da anlise dos
diagramas de distribuio (Figura 3) infere-se que as espcies cor-
respondentes a este tipo de complexos (CuH
2
L
2
, CuHL
2
) existem
em soluo em concentraes significativas para valores de pH
pKa 1, o que permite admitir que a espcie formada na segunda
protlise est envolvida na formao deste complexo. No mesmo
diagrama de distribuio, verifica-se que para solues de pH
correspondentes terceira protlise (pH9) a concentrao destes
complexos inferior que existe para valores de pH menores, o
que sugere que o grupo dimetilamino no est envolvido nesta
coordenao. A teoria da ligao ao grupo-A proposta por
Mitscher
24
e Doluisio
25
sugere que a quelatao ocorre no grupo
dimetilamino, entre C
4
e o tomo de oxignio do grupo hidroxilo
em C
12a
ou C
3
. De acordo com Baker
26
, baseado em estudos de
espectrometria de reflectncia, o grupo dimetilamino no inter-
vm na coordenao, e a quelatao ocorreria por intermdio dos
tomos de oxignio, provavelmente do sistema (A).
Os valores das constante de complexao correspondentes
formao da espcie CuL (OCTH 10,49 e CTH 10,35) so
semelhantes aos encontrados na literatura: (OCTH 12,44 e CTH
10,68)
9
. Para o caso da TCH o valor encontrado foi de 11,55
no se encontrando descrito na literatura nenhum valor para
efeito de comparao. Esta espcie existe em soluo para
valores de pH superiores a 7,5 pois a estes valores de pH co-
mea a ser significativa a concentrao da espcie totalmente
desprotonada correspondente s tetraciclinas.
Para todas as tetraciclinas estudadas foi determinado o va-
lor da constante de estabilidade correspondente formao de
CuHL
2
e, pela anlise do diagrama de distribuio das espcies
existentes em soluo em funo do pH, verifica-se que a con-
centrao mxima desta espcie em soluo se verifica para
valores de pH prximos de 7,5.
O valor da constante de complexao correspondente for-
mao de CuL
2
para a espcie OTCH determinado (13,41)
inferior ao descrito na literatura (15,34)
9
. Para as outras
tetraciclinas estudadas no aparecem valores na literatura cor-
respondentes a esta constante. Este valor pequeno relativa-
mente ao do complexo CuL, o que poder dever-se formao
dum complexo de cobre (II) com um ligando tridentado, onde
as molculas de gua das posies axiais podero ser substitu-
das por uma das funes do ligando.
AGRADECIMENTOS
C.M.C.M.C agradece a bolsa de doutoramento concedida
(Praxis XXI BD/4072/94).
REFERNCIAS
1. Remingtons Pharmaceutical Sciences, 17
th
Edition, The
Philadelphia College of Farmacy and Sciences, Mack
Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1985.
2. Sachan, N. P.; Gupta, C.M.; Talanta 1980, 27, 457.
3. The British Pharmacopeia, HMSO, London, 1988.
4. The United States Pharmacopoeia, 21
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revision, Easton
PA, Mack Printing Company, (USP XXI) 1985.
5. Paz, J. L. L.; Calatayud, J. M.; J. Pharm. Biomed. Anal.
1993, 11, 1093
6. Saha, U.; J. Assoc. Off. Anal. Chem. 1987, 70, 686
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