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Universidad Autnoma de Baja California Bioingeniero Facultad de Ingeniera Mexicali

Bioqumica Manual de Prcticas de a!oratorio "ra Asenet# $errera Martne%


"r Fernando Amlcar &ols "omngue%
M'I' &usana (or%agara) Plasencia
*

Practica No. 6
Extraccin de ADN genmico
Competencia
Aplicar la metodologa de Bioqumica experimental para extraer ADN de muestras biolgicas mediante
una metodologa econmica y ecolgicamente sustentable.
Introduccin:
La extraccin y purificacin de cidos nucleicos constituye la primara etapa de la mayora de los
estudios de biologa molecular y de todas las tcnicas de recombinacin de ADN. anto la calidad y la pure!a
de los cidos nucleicos son factores muy importantes para reacciones subsecuentes "e#. $%&'.
(xiste una gran )ariedad de mtodos de extraccin y purificacin de cidos nucleicos* la seleccin de
la tcnica ms adecuada depende de )arios criterios* entre los que podemos mencionar+ el organismo del
que se extraer* material de inicio ",ablando de plantas por e#emplo* si la extraccin se ,ar de ,o#a* semilla*
material transformado* races* tallos* frutos'* resultado deseado "rendimiento* pure!a* tiempo que requiere la
purificacin'* uso posterior "$%&* clonacin* marcado* transferencia* &-$%&* etc.'.
Mtodos de extraccin
$ara extraer los cidos nucleicos del material biolgico es necesaria una lisis celular* inacti)ar las nucleasas
de la clula y separar los cidos nucleicos de los restos celulares. (l procedimiento de lisis idneo es un
equilibrio de tcnicas y ,a de ser suficientemente fuerte para romper el material inicial "(#. un te#ido'* pero
suficientemente sua)e para preser)ar el cido nucleico de inters "ADN o A&N'. (ntre los procedimientos
usuales de lisis figuran los siguientes.
-Da/o mecnico "trituracin* lisis ,ipotnica* etc.'
-ratamiento qumico "detergentes* agentes caotrpicos* reduccin con tioles* etc.'
-Digestin en!imtica "$roteinasa 0* etc.'.
(s posible romper la membrana celular e inacti)ar las nucleasas intracelulares al mismo tiempo. $or
e#emplo* una misma solucin puede contener detergentes que solubilicen las membranas celulares y sales
caotrpicas fuertes que inacti)en las en!imas intracelulares. ras la lisis celular y la inacti)acin de las
nucleasas* los restos celulares se eliminan fcilmente por filtracin o precipitacin.
Mtodos de purificacin
1eneralmente los mtodos de purificacin de cidos nucleicos de extractos celulares son combinaciones
de ms de dos tcnicas.
-extraccin2precipitacin* -cromatografa*
-centrifugacin* -separacin por afinidad.


Universidad Autnoma de Baja California Bioingeniero Facultad de Ingeniera Mexicali
Bioqumica Manual de Prcticas de a!oratorio "ra Asenet# $errera Martne%
"r Fernando Amlcar &ols "omngue%
M'I' &usana (or%agara) Plasencia
+

Material e!uipo " sustancias
3aterial biolgico para extraccin de ADN
",gado de res* brcoli o c,c,aros'
Licuadora
4isopos
ami! de malla reducida
ubos de ensaye
5 )asos de precipitados
Detergente lquido
Agua destilada
Alco,ol etlico
Na%l
Ablandador de carne o #ugo de pi/a
Metodolog#a experimental
E$%&ACCI'N &(DIMEN%A&IA DE ADN
6. Adicionar 57 g del material seleccionado para la extraccin de ADN* 8 g de Na%l y 79 ml de agua
,elada en una licuadora.
5. Accionar la licuadora a mxima )elocidad durante 67 s. (n esta etapa se rompe por da/o mecnico
el te#ido del material seleccionado.
8. $asar por un tami! de malla reducida "colador' la me!cla obtenida y colectarla en un recipiente de
plstico o en un )aso de precipitados.
:. A/adir 67 ml de detergente lquido a la me!cla anterior* me!clar ligeramente e incubar a temperatura
ambiente por 69 min.
7. $asar a tubos de ensaye ; ml de la me!cla obtenida en el paso anterior.
<. Adicionar unos grnulos de ablandador de carne "en!ima' a cada tubo y me!clar sua)emente para
no da/ar el ADN.
;. Adicionar alco,ol etlico* de#ndolo desli!arse por las paredes del tubo* ,asta obtener el doble del
)olumen inicial. "(l alco,ol es menos denso que el agua por lo que se mantendr en la superficie'. (n
esta etapa se obser)ar un material fibroso color blanco en la interfase del agua y el alco,ol* ste es el
ADN.
=. &etirarlo del tubo usando un ,isopo.
)i*liograf#a
6. 4ot!el* 4.* 3>ller* ?. y @ac,se* 0. "6AAA'. &eco)ery and c,aracteri!ation of residual DNA from beer as a
prerequisite for t,e detection of genetically modified ingredients. (uropean Bood &esearc, ec,nology
59A* 6A5-6A<.
5. Ceitsc,rift f>r Lebensmittel-Dntersuc,ung und -Borsc,ung A 59<* 598-59;. Lipp* 3.* Blut,* A.* (yquem* B.*
0ruse* L.* @c,immel* 4.* Ean den (ede* 1. y AnFlam* (. "5996'. Ealidation of a met,od based on
polymerase c,ain reaction for t,e detection of enetically modified organisms in )arious processed
foodstuffs. (uropean Bood &esearc, ec,nology 565* :A;-79:.
8. Lipp* 3.* Brodmann* $.* $ietsc,* 0.* $auGels* H. y AnFlam* (. "6AAA'. ID$A% collaborati)e trial study of a
met,od to detect genetically modified soy beans and mai!e in dried poGder. Hournal of AJA%
International =5* A58KA5=.
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