Universidad Autnoma de Baja California Bioingeniero Facultad de Ingeniera Mexicali

Bioqumica Manual de Prcticas de a!oratorio "r Fernando Amlcar #ols "omngue$

M%I% #usana &or$agara' Plasencia
(

PRCTICA 10
AISLAMIENTO DE GLUCGENO Y OBTENCIN DE GLUCOSA
Competencia
Utilizar las la metodologa de bioqumica experimental para la extraccin de glucgeno a partir de
tejido animal.
Int!o"#cci$n
El glucgeno es un polmero a travs del cual los animales
almacenan glucosa. El glucgeno puede ser sintetizado o
degradado en la mayora de las clulas animales y solo
dos tejidos lo contienen en grandes cantidades: msculo e
gado. En el gado puede ocupar asta un !"# de su
peso y en msculo$ un !#. En situacin de ayuno$ el
glucgeno es la primera reserva que se moviliza para
mantener la glucemia$ al menos durante dos oras.
El glucgeno consta de cadena de glucosa unidas por
enlaces glucosdicos %!&'( y rami)icaciones$ cada * !"
unidades de glucosa$ mediante enlaces glucosdicos %!&
+(.
,ara extraer glucgeno del gado se debe realizar una
omogeneizacin del tejido y ruptura celular$ seguido de
una extraccin y eliminacin de las protenas
%desproteinizar( para evitar inter)erencias en los an-lisis
posteriores.
,ara la obtencin de glucosa %an-lisis cualitativo( ay que
someter al precipitado de glucgeno a una idrlisis
-cida$ de esta )orma se rompen los enlaces glucosdicos y
se libera glucosa.
.a valoracin cualitativa de la cantidad de glucosa
presente en cada idrolizado se realizar- con una sal de
cobre %//( en medio alcalino %0eactivo de 1elson($
aprovecando el car-cter reductor que tienen todos los
monosac-ridos.
.a reaccin que tiene lugar ser-:
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%& 'MATERIALES Y REACTI(OS
Mate!ia)e*
2ubos de ensayo de pl-stico translcido o
vidrio.
2ubos de vidrio graduados
,ipetas
3entr)uga de mesa
,apel indicador de p4
Reacti+o*
564 al 7"#
1a896' !:#
;lcool etlico
4896' :1 y !1
1a64 :1
<enol)talena %en etanol(
2ampn )os)ato "$8 =$ p4>?.'
9olucin salina de 1a3l %@ gAl(
3u96' al !#
1a8367 al 8# en 1a64 !=.
7. & PROCEDIMIENTO E,PERIMENTAL
-&1& E.t!acci$n "e) /)#c$/eno "e #na m#e*t!a 0ep1tica 2!e*ca 3!at$n& po))o o !e*4&
!. ,esar aproximadamente ! g de gado. En el caso de gados de animales en ayuno$ se cuidar- que
el peso sea ligeramente superior a ! g. 0egistrar el peso exacto de la muestra de gado.
8. /ntroducir los )ragmentos de gado en dos tubos de ensayo %de !" ml$ de vidrio o de pl-stico
translcido(.
7. ;Badir a cada tubo 8 ml de 564 al 7"#.
'. /ncubar los tubos en un baBo de agua irviendo durante !: minutos con agitacin ocasional$ asta la
completa digestin del tejido %que no queden partculas en suspensin(.
:. 3entri)ugar : minutos a 7""" rpm para eliminar los restos de tejido no digerido.
+. ,asar cuidadosamente los sobrenadantes %con una pipeta o por decantacin( a dos tubos de vidrio
graduado y previamente pesados$ a los que se les aBaden "$8 ml de 1a896' al !:#$ y ' ml de alcool
etlico.
?. ;gitar cuidadosamente la mezcla para poner en contacto a todos los componentes.
*. Cejar reposar en ielo durante un periodo de !: a 8" minutos$ para provocar la precipitacin del
glucgeno extrado.
@. 3entri)ugar : minutos a 7""" rpm para sedimentar el glucgeno.
!". Cesecar con cuidado el sobrenadante y retener el precipitado o sedimento de color marrn&blanco$
que es el que contiene el glucgeno.
Nota.- La purificacin completa del glucgeno implicara tres o cuatro precipitaciones alcohlicas y una
precipitacin cida, pero en esta prctica haremos slo una precipitacin alcohlica.
!!. 9ecar cuidadosamente con papel )iltro y pesar el precipitado de glucgeno de cada tubo. ;notar el
resultado.
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-&%& 5i"!$)i*i* 1ci"a "e) *e"imento "e /)#c$/eno
!8. ;l sedimento de glucgeno obtenido en el tubo graduado$ se le aBade ! ml de 4896' :1 para
proceder a su idrlisis -cida y para ello se calienta la disolucin cuidadosamente a !""D3 durante ':
minutos. 3omo el -cido puede saltar en la ebullicin$ es conveniente poner en la parte superior del
tubo papel )iltro enrollado$ para que absorba el -cido si ste salta y evitar riesgos. 2ener en cuenta que
en este tratamiento es donde se est- obteniendo la glucosa que despus se puede valorar$ por lo cual
no conviene perder muestra.
!7. ;justar a 8 ml con agua destilada y aBadir de 8 a 7 gotas de )enol)talena como indicador para la
posterior neutralizacin.
!'. ;Badir gota a gota 1a64 :1 y agitar bien asta que se obtenga un p4 * o superior. 9e debe
comprobar el p4 de la muestra con papel indicador.
!:. ;notar el volumen de la disolucin$ idrolizado de glucgeno$ puesto que es la disolucin problema
donde se va a comprobar la presencia de glucosa proveniente del glucgeno extrado.
-&-& Me"i"a c#a)itati+a "e) conteni"o "e /)#co*a
!+. 9e disponen de dos tubos de pl-stico en los que se introduce "$: ml del idrolizado de glucgeno de
cada muestra. 9e aBade a cada uno "$: ml de sul)ato de cobre. 6bservar y anotar lo que ocurre en
cada tubo.
0e)erencias.
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