Ana Claudia Oliveira Carreira, Gabriel Levin, Tatiane Maldonado Coelho,

Gustavo Gross Belchior, Mari Cleide Sogayar

Instituto de Qumica, Departamento de Bioqumica, NUCEL-NETCEM-Faculdade de Medicina,
Universidade de So Paulo.
Autor para correspondncia: ancoc@iq.usp.br
GENTICA E SOCIEDADE
U
m conjunto de metodologias e abordagens experimentais
foi desenvolvido nas ltimas dcadas e sua compreenso
fundamental para o entendimento de como o conhecimento na
rea de Biologia Molecular produzido e de como ele vem sendo
utilizado de maneira aplicada para a gerao de medicamentos
produzidos em organismos vivos, os biofrmacos.
Biofrmacos:
sua importncia
e as tcnicas utilizadas
em sua produo
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Gentica na Escola ISSN: 1980-3540
GENTICA E SOCIEDADE
B
iofrmacos so medicamentos produ-
zidos por tcnicas biotecnolgicas com
a utilizao de um sistema vivo. Podem ser
extrados de rgos e tecidos, microrganis-
mo, uidos animais ou a partir de clulas e
microrganismos modicados geneticamente.
So mais ecazes do que os medicamentos
convencionais obtidos por processos de ori-
gem qumica, possibilitando o tratamento
de doenas crnicas nas quais h a ausncia,
diminuio ou perda de funo de uma de-
terminada protena.
Os biofrmacos so muito similares ou
idnticos s protenas humanas sendo uti-
lizados para reposio destas protenas no
paciente. Uma das principais vantagens do
uso de Biofrmacos em relao ao uso de
protenas puricadas a partir de amostras
VETORES DE CLONAGEM
Um vetor de clonagem um pequeno pedao de DNA proveniente de vrus,
bactria ou de clulas eucariticas, capaz de ser mantido de modo estvel no
organismo, e no qual um fragmento de DNA pode ser inserido. Para serem
usados em clonagem, os vetores devem possuir caractersticas especialmente
desenhadas que permitam:
(a) a insero e a retirada de fragmentos de DNA, ou seja, a presena de
stios de restrio em locais adequados;
(b) a replicao independente daquela do cromossomo da clula hospedeira;
(c) a identicao e a seleo das clulas portadoras de vetores portadores de
insertos, por meio de marcas especcas.
Existem diferentes tipos de vetores de clonagem e eles so escolhidos de acor-
do com o tamanho do fragmento de DNA a ser clonado e de acordo com a
clula que ser utilizada para replicar o DNA recombinante. Um dos tipos
de vetores de clonagem mais utilizados uma pequena molcula circular de
DNA extracromossomal denominado plasmdeo, encontrado no interior de
diversos tipos de clulas. Outro vetor frequentemente utilizado fago , um
vrus bacterifago, que replica seu material gentico utilizando a maquinaria
celular de clulas de Escherichia coli. Em ambos os vetores, o DNA de interes-
se replicado dentro da clula hospedeira.
Vetores podem ser especialmente preparados para possibilitar a expresso do
segmento de DNA clonado, ou seja, o vetor modicado para conter sequn-
cias regulatrias que atuam como promotores, permitindo a transcrio es-
pecca do gene nele inserido e sua posterior traduo. Por isso, os vetores de
expresso so ferramentas bsicas para a produo de protenas importantes
usadas em tratamentos mdicos, como a insulina, por exemplo.
biolgicas humanas, como ocorre no caso
de fatores sanguneos de coagulao usados
para hemoflicos, que estes medicamentos
so muito mais homogneos e seguros, no
apresentando o risco de possuir algum vrus
ainda desconhecido, e que no foi detecta-
do pelos testes disponveis atualmente. A
vantagem se deve ao fato destas protenas
serem produzidas dentro de um processo
rigidamente controlado e com o mnimo de
variabilidade entre os lotes, de forma a gerar
estruturas proteicas completas e homog-
neas, que minimizam ao mximo possveis
reaes imunolgicas nos pacientes. O pri-
meiro biofrmaco desenvolvido para uso
humano foi a insulina, produzida na bact-
ria Escherichia coli e aprovado para comer-
cializao nos Estados Unidos em 1982. O
primeiro biofrmaco produzido em clula
de mamfero foi o ativador de plasminog-
nio tecidual (tPA), em 1986, para uso em
pacientes com infarto agudo do miocrdio.
Biofrmaco Tratamento Ano de Aprovao
Insulina Diabetes 1982
Interferon Leucemia 1986
Ativador de plasminognio tecidual (tPA) Infarto 1986
Hormnio do crescimento humano Defcincias no crescimento 1987
Eritropoitina Anemia 1989
G-CSF Neutropenia 1991
Interleucina 2 Carcinoma renal 1992
Protena morfogentica ssea (BMP2) Reparo sseo 1992
Fator de coagulao VIII Hemoflia A 1994
Hormnio folculo estimulante (FSH) Infertilidade feminina 1995
Interferon Esclerose mltipla 1996
Fator de coagulao IX Hemoflia B 1999
Anticorpo monoclonal Cncer de mama 1998
Anticorpo monoclonal Leucemia 2001
Anticorpo monoclonal Asma 2003
Em sequncia, outros biofrmacos passaram
a ser produzidos em diferentes organismos
para diversas doenas complexas conforme
alguns exemplos descritos na tabela abaixo.
No mundo, cerca de 300 milhes de pacien-
tes j utilizaram biofrmacos para o trata-
mento de diversas doenas crnicas causan-
do um grande impacto para a sade humana,
no tratamento de doenas que no tinham
cura ou que no era bem sucedido, ou para
a preveno de outras. Foi possvel desenvol-
ver produtos seguros para a cura da doena
de Alzheimer, cncer, apneia do sono, artri-
te reumatide, ataques cardacos, cncer de
mama, cncer renal, dermatite atpica, dia-
betes, doena do Crohn, esclerose mltipla,
brose cstica, hemolia, hepatite, enfarte
cerebral ou apoplexia, insucincia cardaca,
lepra, leucemia, leucemia linfoctica crnica,
linfomas, lpus, tumores cerebrais e fraturas
sseas. Muitas das vacinas recombinantes
utilizadas atualmente, tanto em sade huma-
na quanto em sade animal, so produzidas
pelas mesmas tcnicas usadas para a produ-
o de biofrmacos. Como exemplos podem
ser citadas as vacinas recombinantes para
uso humano para preveno de Hepatite B,
cncer de colo de tero, contra o Papilomav-
rus (HPV) e gripe (Inuenza A); o uso em
animais, para raiva, cinomose, leishmaniose
visceral canina, dentre outras. Enquanto a
maioria dos biofrmacos, aprovados para
uso humano, consistem de uma cpia el de
alguma protena de interesse, denominados
Biofrmacos de primeira gerao e utiliza-
dos como protena de reposio, um nmero
cada vez maior de molculas, chamadas de
Biofrmacos de segunda gerao, vm con-
quistando uma fatia cada vez maior do mer-
cado farmacutico. Esta segunda gerao de
biofrmacos consiste em anlogos ou cpias
produzidas com o uso de tcnicas de enge-
nharia gentica da protena inicial, de modo
que esta tem maior atividade biolgica, es-
tabilidade, ao mais rpida ou mais lenta,
tempo de absoro diferente devido mo-
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Gentica na Escola ISSN: 1980-3540
GENTICA E SOCIEDADE
dicao da molcula. As modicaes dos
biofrmacos podem-se alterar diretamente
a sequncia de aminocidos da protena em
questo, a quantidade e o tipo de glicosilao
na protena, ou adicionar um grupo qumico
para aumentar a estabilidade. Uma terceira
classe de biofrmacos envolve os Biofrma-
cos de terceira gerao que so os anticorpos
monoclonais e protenas de fuso. Pode-se
anexar protena uma molcula como, por
exemplo, um quimioterpico, e assim torn-
-la com uma funo nica e muito mais espe-
cca para combater determinada patologia.
A grande maioria dos biofrmacos possui
algum tipo de modicao na estrutura pro-
teica, sendo a adio de uma cadeia de acar
sequncia polipeptdica (processo denomi-
nado glicosilao) a mais comum delas. Estas
modicaes so fundamentais para a ativi-
dade biolgica de certos biofrmacos, contri-
buindo para o reconhecimento do receptor,
meia-vida, estabilidade no plasma e dobra-
mento correto da protena para que ela se
ligue ao seu receptor na superfcie da clula.
A produo de biofrmacos necessita de ob-
servao constante em diversas etapas do pro-
cesso para que no haja nenhuma mudana
que possa comprometer a eccia do medi-
camento ou causar algum efeito adverso no
paciente, j que o produto produzido por or-
ganismos vivos. um processo extremamente
caro comparado produo de medicamentos
convencionais. Entretanto, permite a produ-
o de medicamento para doenas de grande
incidncia e de grande complexidade.
No Brasil, a Agncia Nacional de Vigilncia
Sanitria (Anvisa) a responsvel por apro-
var e regulamentar a produo de biofrma-
cos com regras rgidas e baseadas nas regu-
lamentaes da agncia regulatria Amrica,
o FDA (Food and Drug Administration) e
da Europa, a EMEA (European Medicines
Agency).
O processo de produo de um biofrmaco
complexo pois a molcula difcil de ser
copiada e caracterizada. Envolve quatro di-
ferentes fases:
(1) construo do DNA recombinante de
interesse e desenvolvimento da linhagem
de clula ou microrganismo;
(2) cultivo da clula para produo do bio-
frmaco;
(3) puricao do biofrmaco - etapa que
envolve o isolamento da protena pura
sem nenhum outro contaminante da c-
lula;
(4) formulao e envase do biofrmaco para
comercializao.
A escolha da clula para expressar o biofr-
maco tem profunda inuncia sobre estas
propriedades do medicamento. Os siste-
mas de produo mais utilizados para a
produo de biofrmacos incluem clulas
de mamfero, especialmente a clula CHO
(Chinese Hamster Ovary), e bactrias, como
Escherichia coli. Clulas de mamfero so
preferencialmente utilizadas para a produ-
o de biofrmacos mais complexos, consis-
tindo de mais de uma cadeia polipeptdica
e contendo modicaes ps-traducionais,
tais como glicosilao. J as bactrias so
utilizadas para produzir biofrmacos mais
simples, que no precisam de modicaes
complexas para ter atividade biolgica, ou
para a produo de peptdeos. Outros or-
ganismos bastante comuns e de menor
custo para a expresso de biofrmacos so
leveduras, tais como Saccharomyces cerevisae
ou Pichia pastoris, clulas de inseto trans-
formadas com baculovrus, sendo a Spo-
doptera frugiperda (lagarta-do-cartucho) a
mais utilizada, alm de plantas (folhas de
tabaco), animais transgnicos e em uidos
de animais como, por exemplo, na urina, no
sangue ou leite de cabras ou coelhos.
Outra estratgia bastante utilizada na fa-
bricao dos biofrmacos modernos a
construo de protenas de fuso, quando
as sequncias codicadoras para duas prote-
nas distintas so clonadas lado a lado, sob
o controle de uma nica regio promoto-
ra, de modo que o produto proteico nal
constitudo por duas protenas unidas e com
funes complementares. Um exemplo desta
tecnologia o medicamento Etanercept, uti-
lizado no tratamento da artrite reumatide.
Ele composto por um fragmento do re-
ceptor para TNF (fator de necrose tumoral,
uma protena pr-inamatria muito pre-
sente nas articulaes afetadas) ligado a um
fragmento de IgG humano (Imunoglobulina
G, um anticorpo). Este biofrmaco compe-
te com o TNF produzido pelo paciente, di-
minuindo assim a resposta inamatria. A
poro do anticorpo anexo a este biofrmaco
tem, por funo, o aumento da meia-vida do
medicamento.
Atualmente, em torno de 350 biofrmacos
esto em fase de testes clnicos para a apro-
vao e comercializao, sendo muitos deles
biossimilares (cpias do produto referncia).
O mercado de biofrmacos representa apro-
ximadamente 10% das vendas do mercado
farmacutico mundial e tende a crescer em
torno de 10 a 15% ao ano nos prximos anos,
com novos e inovadores produtos sendo lan-
ados anualmente. Os produtos proteicos
tendem a estar dentre os cinco produtos
mais lucrativos de toda a indstria farmacu-
tica. No entanto, muito ainda necessrio
ser feito em termos de regularizao destes
produtos, especialmente quando o mercado
dos mesmos est crescendo em pases con-
sumidores economicamente emergentes, tais
como a ndia e a China. O foco atual desta
indstria so os produtos produzidos por
organismos geneticamente modicados, es-
pecialmente aqueles contendo modicaes
complexas que conferem maior atividade
biolgica ao medicamento. Desta maneira,
investimentos em pesquisa e inovao nesta
rea to prspera tendem a trazer ao merca-
do produtos cada vez mais tecnolgicos, com
melhores respostas dos pacientes e a preos
mais acessveis.
Apesar das diculdades na aprovao dos
novos produtos e dos altos preos que limi-
tam uma expanso do consumo, o setor de
biofrmacos representa uma parcela signi-
cante e crescente das vendas do setor farma-
cutico. Dentre os biofrmacos mais vendi-
dos encontram-se, Anticorpos Monoclonais
(MAbs) para o tratamento de diversos tipos
de cncer, e anti-TNF (Fator de necrose
tumoral ) para o tratamento de doenas
auto-imunes reumatolgicas. O prximo
grupo de biofrmacos mais lucrativos inclui
insulina e seus anlogos, utilizados no trata-
mento de diabetes, seguido por eritropoieti-
na (EPO), que estimula a produo de gl-
bulos vermelhos do sangue, requisitada no
tratamento de diversas patologias. Outros
biofrmacos na lista dos mais vendidos in-
cluem fatores de coagulao sanguneos, va-
cinas e hormnios reprodutivos. No Brasil,
atualmente, so produzidos 14 biofrmacos
que so utilizados para tratamentos de do-
enas comohemolia,esclerose mltipla, ar-
trite reumatoide e diabetes. O Ministrio da
Sade do Brasil gasta, em mdia, 43% da sua
verba anual (cerca de 4 bilhes de reais) para
a compra de biofrmacos. O governo tem in-
vestido na produo nacional de outros bio-
frmacos e pretende atingir a produo de
25 at 2017, inserindo novos medicamentos
que so muito necessrios para o tratamen-
to de cncer de mama, leucemia, diabetes,
problemas oftalmolgicos, cicatrizao em
procedimentos cirrgicos e decincias no
crescimento.
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Gentica na Escola ISSN: 1980-3540
GENTICA E SOCIEDADE
ENTENDENDO AS TCNICAS
USADAS NA PRODUO
DE BIOFRMACOS
A Engenharia Gentica atravs do uso da
tcnica de DNA recombinante permitiu a
gerao de medicamentos produzidos em
organismos vivos, os chamados biofrmacos,
que tm como princpio ativo uma protena.
Por isso, os segmentos de DNA que codi-
cam as protenas de interesse devem ser ma-
nipulados, caracterizados e expressos para a
obteno dos produtos desejados.
So muitas as tcnicas desenvolvidas nas
ltimas dcadas que permitem o estudo de
trechos especcos do DNA. Um requisito
importante que permite a realizao de tais
estudos a obteno, em grandes quantida-
des, do segmento especco de DNA que se
deseja estudar. A tcnica mais utilizada para
este m a da clonagem molecular, tam-
bm chamada genericamente de tcnica do
DNA recombinante ou engenharia gentica
ou ainda de clonagem gnica, quando o seg-
mento a ser amplicado corresponder a um
gene. A clonagem molecular, resumidamente
apresentada na Figura 1, um conjunto de
mtodos usados para construir molculas
de DNA recombinante e fazer com que elas
se dupliquem dentro de organismos hospe-
deiros. O DNA recombinante originado a
partir de DNA de diferentes organismos e
sua construo possvel graas ao fato do
DNA de todos os seres vivos possurem a
mesma estrutura qumica.
Mas, como conseguir o segmento de DNA que
se deseja clonar? Uma das possibilidades, usa-
da principalmente quando no se tem informa-
es sobre a sequncia do DNA a ser clonado,
a digesto do DNA genmico por uma en-
zima de restrio, o que gera uma coleo de
fragmentos com extremidades iguais. Todos os
fragmentos gerados na digesto podem ento
ser misturados a molculas de um vetor de
clonagem (ver box), tambm digeridos com
a mesma enzima de restrio. Isto garante que
todas as molculas envolvidas no processo de
clonagem tenham as extremidades compat-
veis e possam ser covalentemente unidas entre
si pela enzima DNA ligase.
Figura 1.
Tcnica de construo de DNA recombinante. O fragmento de DNA de interesse (1) inserido no vetor de clonagem, um plasmdio, molcula de
DNA circular que possui uma origem de replicao independente do DNA genmico (2). Tanto o vetor de clonagem quanto o segmento de DNA
a ser clonado devem ter extremidades compatveis, isto , devem ter sido digeridos pela mesma enzima de restrio. Por ao da enzima ligase, o
DNA de interesse ligado ao DNA do vetor de clonagem gerando uma molcula de DNA recombinante (3). A molcula recombinante inserida em
uma clula bacteriana hospedeira (4) utilizando um mtodo denominado transformao bacteriana que aumenta a ecincia de entrada do material
gentico (5). O material gentico introduzido no se insere no genoma da clula hospedeira e passa a se replicar de modo independente deste. As
clulas transformadas so colocadas para se multiplicarem em meio de cultura apropriado permitindo assim a obteno de grande quantidade de
clulas contendo o DNA recombinante. O passo seguinte a extrao do DNA plasmidial contendo o material gentico de interesse.
Outra maneira de se obter DNA para clona-
gem isolar inicialmente os fragmentos es-
peccos de DNA aps a digesto do DNA
com enzima de restrio e separao dos
fragmentos gerados por meio de eletroforese
(Figura 2).
DNA ligase uma enzima que
realiza a ligao de tas de
DNA catalizando a formao
da ligao fosfodiester. Em
organismos vivos ela realiza
reparo de DNA de uma das
tas da molcula de DNA e
algumas formas podem reparar
tambm a quebra das duas
tas da molcula. DNA ligase
pode tambm ser usada in vitro
nos processos de clonagem
molecular.
As enzimas de restrio
cortam o DNA em locais
especcos, conhecidos como
stios de restrio. Para cortar
o DNA, as enzimas fazem duas
incises no esqueleto de acar-
fosfato de cada uma das tas
do DNA. Os cortes de diferentes
enzimas ocorrem sempre em
sequncias palindrmicas
produzindo extremidades que
so compatveis, ou seja, podem
ser unidas covalentemente por
ao da DNA ligase. A seguir,
dois exemplos de locais de corte
por enzimas de restrio. A
enzima EcoRI corta nos locais
indicados em verde na gura
e produz as extremidades
coesivas: AATTC e TTAAG
(complementares entre si).
G A AT T C
C T T A A G
A enzima Sma I corta na
sequncia indicada na gura e
gera extremidades retas, que
tambm podem ser religadas.
C C C G G G
GGG C C C
Fragmentos de DNA, cuja sequncia de
bases conhecida, podem ser obtidos em
grande quantidade pela tcnica da PCR
(iniciais da sigla em ingls Polymerase Chain
Reaction). A PCR, est esquematizada na
Figura 3. Milhes de cpias da molcula de-
sejada podem ser obtidas muito rapidamen-
te, em cerca de 2 horas. A sequncia que se
deseja amplicar deve estar localizada entre
dois iniciadores sintticos de duplicao de
DNA, denominados primers. Tais iniciado-
res delimitam assim o trecho da molcula de
DNA genmico que se deseja amplicar.
Para a obteno de milhes de molculas
so necessrios vrios ciclos de replicao de
DNA. Cada ciclo consiste da desnaturao
da molcula de DNA pelo calor, permitin-
Figura 2.
A eletroforese de DNA uma tcnica que permite a separao de molculas de diferentes tamanhos em um gel ou matriz, quando submetida
a um campo eltrico. As amostras de DNA (A) so aplicadas em pequenos poos existentes na parte superior da matriz ou gel, como
esquematizado na parte esquerda da gura. Tais amostras geralmente so compostas por fragmentos de DNA de diferentes tamanhos que sero
separados de acordo com seus tamanhos. Uma vez que o DNA apresenta carga negativa, a migrao ocorre sempre na direo do polo positivo
e a velocidade de migrao depender do tamanho dos diferentes fragmentos. Aps um tempo de migrao, possvel observar bandas no gel
ou matriz. Cada banda, representada no esquema por uma faixa azul, corresponde a um conjunto de molculas que tm como caracterstica
comum o tamanho. Geralmente, na margem esquerda da matriz so aplicadas amostras de DNA compostas por fragmentos cujos tamanhos so
conhecidos e que servem de referncia para a estimativa dos fragmentos de DNA gerados aps digesto e migrao eletrofortica. Tais amostras
so denominadas marcadores e alguns dos tamanhos de tais marcadores (M) esto representados na gura. A foto direita contm apenas uma
banda de DNA humano com cerca de 800 pares de bases (pb). A tcnica de eletroforese pode ser visualizada em detalhes no vdeo situado no
endereo: http://www.youtube.com/watch?v=TZ-K13Y4ffw
do assim que as tas abertas da dupla-hlice
possam servir de molde para as novas mo-
lculas que sero sintetizadas pela enzima
Taq polimerase, tendo como locais de
incio de duplicao os dois iniciadores (pri-
mers). Desse modo, apenas o trecho entre
os dois iniciadores ser duplicado. Aps di-
versos ciclos de replicao, a coleo de frag-
mentos resultantes pode ser visualizada e
separada do restante do genoma utilizando
a tcnica de eletroforese em gel de agarose
(Figura 3).
Aps o isolamento do inserto de DNA, este
deve ser inserido em um vetor de clonagem
(Ver BOX), e, para isso, so utilizadas en-
zimas capazes de ligar covalentemente o in-
serto ao vetor, denominadas DNA ligases.
As polimerases do DNA so
enzimas capazes de realizar
a duplicao desta molcula.
A Taq polimerase uma
polimerase do DNA que atua
em altas temperaturas, ou seja,
em temperaturas em que outras
polimerases seriam degradadas
pelo calor. Ela est presente na
bactria Thermus aquaticus,
que vive em temperaturas
extremas de giseres e fontes
termais.
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GENTICA E SOCIEDADE
INSERO DO DNA
RECOMBINANTE NA CLULA
O DNA recombinante pode ser introdu-
zido na clula por uma srie de mtodos, a
citar os mais utilizados por choque eltrico
(eletroporao) ou choque trmico (eleva-
-se a temperatura a 42 C), permitindo as-
sim a entrada do transgene por estes, pela
Figura 3.
Reao de PCR. Na gura esto apresentados 2 ciclos da reao de PCR. A cada ciclo de amplicao, o DNA copiado de forma exponencial.
Em (1) est representado um DNA dupla ta. Com o incio da reao de PCR (2), a temperatura aumentada para 95 C e as tas do DNA
so separadas (desnaturadas). Aps a separao das tas do DNA, a temperatura da reao diminuda para cerca de 50 a 60 C e os primers
so anelados ou emparelhados nos locais da ta molde onde houver complementaridade de bases (3). Na etapa (4), a temperatura da reao
elevada para cerca de 72 C e a enzima Taq polimerase sintetiza a nova cadeia de DNA (representada em azul, no ciclo 1, e em lils no ciclo 2),
estendendo o primer emparelhado na ta que servir de molde para a duplicao do DNA. Ao nal deste processo, o DNA est copiado e foram
obtidas 2 novas tas lhas (em azul), representados no item 5 da gura. As tas mes (em preto) e as tas lhas, resultantes do ciclo 1 de PCR
(em azuis), so submetidas a um novo ciclo. As molculas do ciclo 1 servem como molde para mais sntese de DNA do ciclo seguinte (ciclo 2).
Em (6), as tas so novamente desnaturadas; (7) os primers so anelados na ta a ser copiada; (8) a Taq Polimerase sintetiza novas tas (lils) a
partir das tas mes (preto) e lhas (azul). Todas as tas de DNA (pretas, azuis, lils) serviro como molde para um novo ciclo de PCR. Sugestes
de vdeos: http://www.youtube.com/watch?v=ZmqqRPISg0g; http://www.youtube.com/watch?v=2KoLnIwoZKU
formao de micelas hidroflicas capazes de
se fundir membrana celular (lipofeco) e
por transduo viral. Alm disso, a replica-
o do DNA recombinante pode ocorrer em
uma grande diversidade de clulas, e a esco-
lha desta est relacionada com o objetivo da
clonagem. Dentre as clulas utilizadas para a
replicao e expresso esto: leveduras, clu-
PARA SABER MAIS
MATASCI, M.; HACKER, D.L.; BALDI, L.;
WURM, F.M. Recombinant therapeutic
protein production in cultivated mammalian
cells: current status and future prospects.
Drug Discovery Today: Technologies 5, 1-6,
2008.
MHASHILKAR, A. M.; ATALA, A. Advent
and Maturation of Regenerative Medicine.
Current Stem Cell Research & Terapy, v. 7, n.
6, p 430-45, 2012.
WALSH, G. Biopharmaceutical benchmarks 2010.
Nature Biotechnology, v. 28, p. 917-924, 2010.
WALSH, G.; JEFFERIS, R. Post-translational
modications in the context of therapeutic
proteins. Nature Biotechnology, v. 24, p. 1241-
1252, 2006.
http://pfarma.com.br/noticia-setor-farmaceuti-
co/mercado/461-medicamentos-biofarmaco.
html#ixzz2agENAr8s - Biofrmaco a apos-
ta para o futuro e j so 5 vezes mais testados
que medicamentos qumicos - PFARMA
http://portalsaude.saude.gov.br/portalsaude/
noticia/11454/162/brasil-amplia-produ-
cao-de-medicamentos-biologicos.html -
Brasil amplia produo de medicamentos
biolgicos
Figura 4.
Sistemas de Expresso para Biofrmacos: Vantagens e Desvantagens.
las bacterianas, clulas de mamferos, clulas
de insetos, entre outros (Figura 4). As clu-
las bacterianas normalmente so utilizadas
para replicao do DNA recombinantes por
serem de fcil manipulao, alta taxa de repli-
cao e baixo custo de manuseio com relao
s demais clulas, mas tambm so utiliza-
das para a expresso de biofrmacos menos
complexos, como por exemplo a insulina. J
clulas de mamferos, por exemplo, so fre-
quentemente utilizadas para expresso de
protenas recombinantes, visto que tais pro-
tenas apresentam um padro de modica-
o ps-traducional (modicao que ocorre
aps a sntese da cadeia polipeptdica, proces-
so conhecido como traduo) mais complexo
neste tipo de clulas, e que so fundamentais
para a atividade biolgica destas.
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Gentica na Escola ISSN: 1980-3540