SUBSECRETARIA DE EDUCACIN MEDIA SUPERIOR

DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN TECNOLGICA INDUSTRIAL.

CBTis 171 Mariano Abasolo

Manual de tcnicas inmunolgicas

Nombre del Alumno: ngeles Fernanda Vzquez Vzquez
Materia: Realiza anlisis inmunolgicos
Nombre del Maestro: QFB. Beatriz Carreo Aguilera
Numero de lista: 51
Fecha de entrega: 26 de Marzo del 2014












Manual de tcnicas inmunolgicas


NDICE


Prueba de Acido rico

Prueba de Antistreptolisina
Prueba de Elisa
Prueba de Factor reumatoide
Prueba de Fijacin del complemento
Prueba del Grupo Sanguneo
Prueba de Hepatitis
Prueba de fosfatasa alcalina











Manual de tcnicas inmunolgicas

Introduccin:
La inmunologa clnica es el estudio de las enfermedades causadas por los
trastornos del sistema inmunitario (fallo, accin anormal y crecimiento maligno de
los elementos celulares del sistema). Tambin involucra enfermedades de otros
sistemas, donde las reacciones inmunitarias juegan un papel en los rasgos
clnicos y patolgicos.
Las enfermedades causadas por los trastornos del sistema inmunitario se dividen
en dos amplias categoras:
Inmunodeficiencia, en la cual partes del sistema inmunitario fallan en proveer
una respuesta adecuada (p. ej. en el sida).
Autoinmunidad, en la cual el sistema inmunitario ataca las clulas del propio
organismo (p. ej. lupus eritematoso sistmico, artritis reumatoide, enfermedad
de Hashimoto y miastenia gravis).
Otros desrdenes del sistema inmunitario incluyen diferentes grados
de hipersensibilidad, en los que el sistema responde inapropiadamente a
componentes inofensivos (asma y otras alergias) o responde con excesiva
intensidad.
La enfermedad ms conocida que afecta al sistema inmunitario es el sida,
causado por el VIH. El sida es una inmunodeficiencia caracterizada por la prdida
de clulas T CD4+ ("helper") y macrfagos, que son destruidos por el VIH.
Los inmunlogos clnicos tambin estudian las formas de prevenir el rechazo a
trasplantes, en el cual el sistema inmunitario destruye los algenos o xengenos.
La especificidad del enlace entre antgeno y anticuerpo ha creado una herramienta
excelente en la deteccin de las sustancias en una variedad de tcnicas
diagnsticas. Los anticuerpos especficos para determinado antgeno pueden ser
conjugados con un radio-marcador, marcador fluorescente, o
una enzima reveladora (por escala de color) y son usados como pruebas para
detectarlo.
La especificidad del enlace entre antgeno y anticuerpo ha creado una herramienta
excelente en la deteccin de las sustancias en una variedad de tcnicas
diagnsticas. Los anticuerpos especficos para determinado antgeno pueden ser
conjugados con un radio-marcador, marcador fluorescente, o
una enzima reveladora (por escala de color) y son usados como pruebas para
detectarlo.
Existen diversos mtodos (tecnicas) basados en procedimientos distintos para
visualizar la unin Ag-Ac . As tenemos:
I.-Tcnicas de aglutinacin. Cuando el antgenos e encuentra unido o formando
parte de clulas, bacterias o partculas, la reaccin Ag-Ac se puede detectar y
cuantificar por el aglutinado celular o bacteriano formado.
Manual de tcnicas inmunolgicas


II.- Tcnicas de fluorescencia y citometra de flujo. Para la realizacin de estas
tcnicas el anticuerpo se marca con un fluorocromo detectndose la formacin del
complejo Ag-Ac por la fluorescencia emitida.

III.- Tcnicas de radioinmunoensayo. En estas tcnicas al anticuerpo se une un
istopo radiactivo siendo posible la cuantificacin del complejo Ag-Ac a travs de
la radiactividad emitida.

IV.- Cromatografa de afinidad. La especificidad de la unin Ag-Ac puede utilizarse
para obtener Acs y Ags puros.

V.- Inmunoprecipitacin e inmunoblotting. Permite detectar la presencia y cantidad
de antgenos y anticuerpos especficos.

Objetivo
1. Conocer el fundamento de la reaccin antgeno-anticuerpo mediante la
utilizacin de algunas tcnicas inmunolgicas, lo cual es de gran utilidad
para el diagnostico mdico.
2. Poner en evidencia la reaccin Ag-Ab mediante una prueba inmunolgica
rpida.








Manual de tcnicas inmunolgicas

Prueba de Acido rico

Objetivo: Realizarla para obtener las concentraciones de acido rico.
Introduccin:
En la sangre humana, la concentracin de cido rico comprendida entre 2,5 a
6 mg/dl para la mujer y hasta 7,2 mg/dl para el hombre es considerada normal por
la Asociacin Mdica Americana, aunque se pueden encontrar niveles ms bajos
en los vegetarianos.
La gota en el ser humano est asociada con niveles anormales de cido rico en
el sistema.
La saturacin de cido rico en la sangre humana puede dar lugar a un tipo
de clculos renales (nefrolitiasis) cuando el cido cristaliza en el rin. Un
porcentaje considerable de enfermos de gota llegan a tener clculos renales de
tipo rico.
El aumento de los niveles de cido rico en la sangre no slo puede estar
relacionado con la gota, sino que puede ser simplemente unahiperuricemia, que
presenta algunos de los sntomas anteriores o puede ser asintomtica. Sin
embargo cuanto mayor es el aumento de cido rico en sangre mayores son las
posibilidades de padecer afecciones renales, artrticas, etc.
La prueba de cido rico se realiza para determinar la cantidad de cido rico
presente en la orina. Se recoge orina durante un perodo de 24 horas y luego se
enva al laboratorio para ser examinada. Por lo general, los niveles de cido rico
se miden para diagnosticar o tratar la gota, debido a que esta condicin es
causada por la cristalizacin del cido rico en las articulaciones. Algunos clculos
renales tambin pueden estar compuestos de cido rico
Tambin se puede realizar en sangre, los mdicos solicitan anlisis de cido rico
en sangre si sospechan que hay niveles elevados de cido rico en el torrente
sanguneo porque el cuerpo est descomponiendo clulas con demasiada rapidez
o no est expulsando el cido rico como debiera. Algunos nios que padecen
leucemia u otros tipos de cncer pueden presentar niveles elevados de cido rico
(hiperuricemia).
El anlisis de cido rico en sangre tambin ayuda a los mdicos a controlar a los
nios que reciben tratamientos de quimioterapia o de radiacin. Estos tratamientos
Manual de tcnicas inmunolgicas

pueden incrementar la cantidad de cido rico presente en la sangre, por lo tanto
el anlisis ayuda a asegurarse de que los niveles no sean demasiado elevados.
Excepcionalmente, el exceso de cido rico en los nios puede provocar gota, una
inflamacin sumamente dolorosa provocada por la acumulacin de cristales de
cido rico en el lquido sinovial (el lquido presente en las articulaciones). La gota
afecta con ms frecuencia las articulaciones de los tobillos, los pies y los dedos
del pie.
El anlisis de cido rico en sangre tambin se puede realizar en nios que
presentan sntomas de insuficiencia renal. El ayuno prolongado y algunas
afecciones mdicas pueden ir acompaados de niveles bajos de cido rico en la
sangre (hipouricemia).
Material y equipo:
Espectofometro
Tubos de ensayo
Pipetas
Agua destilada
Incubadora
Guantes
Cubrebocas
Bata




Manual de tcnicas inmunolgicas

Procedimiento:


Conclusin:
Esta prueba es muy importante pues, ya que nos ayuda a determinar
enfermedades de gran importancia como la enfermedad de la gota y as tambin
con esta prueba podremos prevenirla.
Resultados:









Fuentes de consulta:
http://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_%C3%BArico
www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003476.htm

kidshealth.org

Atemperar el
reactivo a
temperatura
ambiente
Pipetear en
tubos de
ensayo
Agitar e
incubar a 25
grados
centgrados
por 10 min.
Leer
absorcin de
la muestra a
520 nm
frente al
blanco
Manual de tcnicas inmunolgicas

Prueba de Antiestreptolisina

Objetivo: Identificar la antiestretolisina en el suero de personas con infecciones
por estreptococos del grupo A para as poder tener un resultado seguro de que
se trata de dicha bacteria.
Introduccin:
El ttulo de antiestreptolisinas ASLO es la medicin de anticuerpos anti-
Estreptococo betahemolticos del tipo A. Esta bacteria produce una enzima
llamada estreptolisina O, que puede destruir los hemates y el cuerpo reacciona
contra ella produciendo anticuerpos especficos antiestreptolisina O.La medicin
de estos anticuerpos es lo que refleja el anlisis de antiestreptolisinas O ASLO.
La presencia de ttulos altos de antiestreptolisinas O ASLO, indican una
infeccin por la bacteria Estreptococo betahemolticos del tipo A, que puede
producir una glomerulonefritis, una fiebre reumtica, una endocarditis bacteriana o
una escarlatina.La elevacin de ASLO aparece a la semana de la infeccin por el
estreptococo, los valores ms elevados se dan en la tercera semana de la
infeccin y es cuando pueden aparecer las enfermedades secundarias a esta
infeccin (glomerulonefritis, una fiebre reumtica, una endocarditis bacteriana o
una escarlatina) pero no son especficos de ninguna de ellas. Deben ser
diagnosticadas cada una de ellas por la clnica o por otros estudios diagnsticos.
El ASLO puede mantenerse elevado a los 6 meses en el 30% de los casos. Para
realizar este anlisis NO se precisa estar en ayunas.Los niveles de ASLO pueden
ser enmascarados por los antibiticos y por los corticoides. Tambin un aumento
de la betalipoprotena puede inhibir la estreptolisina O y producir ttulos falsos de
elevacin de ASLO. Se puede realizar la toma en un lugar apropiado (consulta,
clnica, hospital) pero en ocasiones se realiza en el propio domicilio del paciente.
Para realizar la toma se precisa de localizar una vena apropiada y en general se
utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La persona encargada de tomar
la muestra utilizar guantes sanitarios, una aguja (con una jeringa o tubo de
extraccin).
Le pondr un tortor (cinta de goma-ltex) en el brazo para que las venas retengan
ms sangre y aparezcan ms visibles y accesibles. Limpiar la zona del pinchazo
con un antisptico y mediante una palpacin localizar la vena apropiada y
acceder a ella con la aguja. Le soltarn el tortor.
Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizar una aspiracin (mediante
la jeringa o mediante la aplicacin de un tubo con vaco).Al terminar la toma, se
extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de algodn o similar para
favorecer la coagulacin y se le indicar que flexione el brazo y mantenga la zona
presionada con un esparadrapo durante unas horas.
Manual de tcnicas inmunolgicas

La sangre extrada se traslada al laboratorio de anlisis en un tubo especial para
bioqumica, que contiene un producto anticoagulante. En general no suelen ser
necesarios ms de 10 mililitros de sangre para una batera estndar de
parmetros bioqumicos.
Material y equipo:
Gradilla metlica
Tubo de ensaye de 13 x 100 mm
Tubo vacio de ensaye vacio sin anticoagulante
Tubo de ensaye de 4 ml
Pipetas pasteur con bulbo de goma
Adaptador para vacutainer
Aguja para vacutainer
Torundas con alcohol
Ligadura
Centrifuga
Bao mara elctrico
Refrigerador
Solucin salina al .85 %
Solucin salina amortiguadora
Estreptolisinas
Hidrosulfito de sodio
Suero
Suspensin de glbulos rojos al 5%

Procedimiento:










Conclusin:

Esta prueba es de gran importancia ya que nos ayuda a saber si estamos
contagiados de estreptococos y nos brinda un diagnostico para su previo
tratamiento.

Temporizar
los reactivos y
la muestra
Depositar
gota de
muestra y en
cada uno de
los controles
dobre circulos
Homogenizar
suavemente
Situar el
portaobjetos sobre
el agitador rotatorio
de 80 a 100 r/m
durante 2 min
Observar si se
produce aglutinacin.
Manual de tcnicas inmunolgicas

Resultados:



























Fuentes de consulta:

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003522.htm

www.georgetownhospitalsystem.org/stw/Page.asp?PageD...













Manual de tcnicas inmunolgicas

Prueba de Elisa

Objetivo: Aprender la tcnica para poderla llevar a cabo, y as determinar
infecciones causada por hongos, virus, bacterias o parsitos.

Introduccin:
Es una tcnica de inmunoensayo en cual un antgeno inmovilizado se detecta
mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto
detectable como cambio de color o algn otro tipo; en ocasiones, con el fin de
reducir los costos del ensayo, nos encontramos con que existe un anticuerpo
primario que reconoce al antgeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo
secundario que lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparicin
de colorantes permite medir indirectamente mediante espectrofotometra el
antgeno en la muestra.
Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo particular est
presente en la muestra de sangre de un paciente. Aunque el procedimiento es
rutinario y sencillo, involucra a un gran nmero de variables, tales como selecin
de reactivo, temperatura, medicin de volumen y tiempo, que si no se ajustan
correctamente puede afectar a los pasos sucesivos y al resultado de la prueba.
La interaccin antgeno-anticuerpo en el laboratorio puede ser utilizada para
determinar si un paciente tiene una infeccin o una enfermedad autoinmune. Pero
como prueba diagnstica, posee diversas limitaciones que conviene conocer:
-En primer lugar, un resultado positivo que confirma la presencia de anticuerpos
no significa necesariamente que el paciente est enfermo. El cuerpo de una
persona que ha estado enferma y que ya se ha recuperado, puede seguir
produciendo anticuerpos. Esto originara un falso positivo.
-En segundo lugar, hay personas que producen una baja cantidad de anticuerpos,
por lo que stos pueden pasar desapercibidos y no ser medidos, dando lugar a un
falso negativo. Sera el caso, por ejemplo, de personas que padezcan una
inmunodeficiencia, o que se encuentren en el periodo ventana de la infeccin en el
momento de realizar la prueba, o que estn infectadas por una cepa extraa.
-En tercer lugar, pueden aparecer falsos positivos cuando se da inespecificidad
entre antgeno-anticuerpo.
En estos casos de diagnstico de enfermedad es recomendable la eliminacin
(mediante centrifugacin) de clulas de la sangre que puedan interferir con el
ensayo y pueda ocasionar un resultado falso positivo, careciendo aqul de
especificidad. Tambin, debemos tener en cuenta que cuando se trata de
diagnosticar una enfermedad que posee un valor predictivo positivo bajo en una
determinada poblacin, es decir, que esa enfermedad tiene muy baja incidencia en
dicha poblacin, es necesario volver a confirmar el resultado positivo mediante
otro mtodo de diagnstico independiente. Normalmente, se lleva a cabo un
Manual de tcnicas inmunolgicas

western blot donde se detecta la presencia de varios anticuerpos,
simultneamente, frente a la misma infeccin en una muestra. El resultado del
western se considera positivo cuando aparecen al menos 5 bandas, que indica
que 5 anticuerpos diferentes estn presentes en el sujeto frente a esa infeccin.
Entonces es cuando se diagnostica como positivo a dicho paciente.
Este principio tiene muchas de las propiedades de un inmunoensayo ideal: es
verstil, robusto, simple en su realizacin, mediante el uso de la fase slida, una
separacin fcil entre la fraccin retenida y la fraccin libre.
Adems se han propuesto y desarrollado diferentes mtodos de amplificacin de
la seal (luminiscentes, cascadas enzimticas...) que han permitido elevar la
sensibilidad de algunos ELISA a la obtenida en el RIA (radioinmunoensayo)
hormonal.
Este mtodo ha tenido una enorme aplicacin en todos aquellos campos en los
que se precisaba la cuantificacin de productos mediante anticuerpos: diagnstico
clnico, deteccin viral, clasificacin de anticuerpos en isotipos, bsqueda
de anticuerpos monoclonales, etc.

Material y equipo:

Lavador de microplacas ELISA
Lector de microplacas de ELISA
Guantes de latex desechables
Solucin de hipoclorito de sodio al 5%
Guardapolvo manga larga
Cronometro de laboratorio
Agua destilada
Papel toalla
Incubadora
Refrigeradora
Kit ELISA para: VIH 1-2, HTLV 7 HBsAg, ANTI-HBc, HVC
Micropipetas unicanal de rango fijo y/o variables (0.5-10, 2-20-200, 100-
1000 ul)
Micropipetas multicanal de rango fijo y/o variable de acuerdo a lo indicado
en el inserto del kit
Tips puntas) universales de 200 ul
Tipos (untas) universales de 1000 u
Reservorios para micropipeta multicanal
Lentes protectores de laboratorio
Mascarillas desechables





Manual de tcnicas inmunolgicas


Procedimiento:





































Conclusin:

Con esta tcnica se pudo determinar si se encuentra este virus y asi poder
diagnosticar un tratamiento.




100 ml del ag
diluido en buffer
carbonato en
cada uno de los
pozos de la placa
Incubar a 40
grados
centgrados por
18 hrs
Lavar placa no
menos de cinco
veces
Incubar la placa
con una sin de PBS-
Tween 0,05% y
leche descremada
al 5% por una hora
a 37C
Lavar placa Se aadi en
cada pozo de la
placa 100 ml de
cada uno de los
sueros
Incubar a 37 C
por una hora
Lavar Placa
Se aadi en
cada pozo de la
placa 100 ml del
conjugado
peroxidasa de
carnero
inmunoglobulina
anti-IgG
100 ml del ag
diluido en buffer
carbonato en
cada uno de los
pozos de la placa
100 ml del ag
diluido en buffer
carbonato en
cada uno de los
pozos de la placa
Se procedi a
lectura de la
densidad ptica en
espectrofotmetro
a 492 nm.
Manual de tcnicas inmunolgicas

Resultados:

Reactivo: en el reactivo se detecta la presencia de antgeno y/o anticuerpos del
agente etiolgico correspondiente.
No reactivo: en no reactivo no se detecta la presencia de antgeno y/o anticuerpos
del agente etiolgico correspondiente.
Zona gris: en zona gris los valores comprendidos inmediatamente por debajo del
valor de corte de la prueba de acuerdo a lo indicado en el inserto.

Fuentes de consulta:

www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003538.htm
www.geosalud.com/sida/PruebasVH.htm


































Manual de tcnicas inmunolgicas

Prueba de factor reumatoide

Objetivo: Con esta prueba se pretender determinar anticuerpos antinucleares, y
anticuerpos factor reumatoide.

Introduccin:
Es un examen sanguneo que mide la cantidad de anticuerpo del factor
reumatoideo en la sangre. La mayora de las veces, la sangre se extrae
tpicamente de una vena localizada en la parte interior del codo o el dorso de la
mano.
En bebs o en nios pequeos, se puede utilizar un instrumento puntiagudo
llamado lanceta para punzar la piel.
La sangre se recoge en un tubo pequeo de vidrio llamado pipeta, en un
portaobjetos o en una tira reactiva.
Se coloca un vendaje sobre el sitio para detener cualquier sangrado.
Generalmente, no se requiere tomar medidas especiales antes de este examen.
Usted puede sentir un ligero dolor o una picadura cuando se introduce la aguja.
Tambin puede experimentar algo de sensacin pulstil en el sitio despus de que
se extrae la sangre.
Este examen se usa con mayor frecuencia para el diagnstico de la artritis
reumatoidea o el sndrome de Sjogren.
Los resultados generalmente se reportan en una de dos formas:
Menos de 40-60 u/mL
Ttulo menor de 1:80
Un nmero bajo (resultado normal) por lo regular significa que usted no tiene
artritis reumatoidea o el sndrome de Sjogren. Sin embargo, algunas personas que
en realidad padecen estas afecciones an tienen un factor reumatoideo (FR) bajo
o "normal".
Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes
laboratorios. Hable con el mdico acerca del significado de los resultados
especficos de su examen.
Un resultado anormal significa que el examen es positivo, lo cual quiere decir que
se han detectado niveles ms altos del factor reumatoideo en su sangre.
Manual de tcnicas inmunolgicas

La mayora de los pacientes con artritis reumatoidea y casi todos los
pacientes con el sndrome de Sjogren obtienen resultados positivos en los
exmenes del factor reumatoideo.
Cuanto ms alto sea el nivel, mayor ser la probabilidad de que se presente
una de estas afecciones. Tambin hay otras pruebas para estos trastornos
que ayudan a hacer el diagnstico.
No toda persona con niveles ms altos de factor reumatoideo tiene artritis
reumatoidea o sndrome de Sjogren.
El mdico puede hacer otro examen de sangre (anticuerpo anti-PCC) para ayudar
a diagnosticar la artritis reumatoidea.
Las personas con las siguientes enfermedades tambin pueden tener niveles ms
altos del factor reumatoideo.
Esclerodermia
Lupus eritematoso sistmico
Enfermedad de Still del adulto
Dermatomiositis
Sarcoidosis
Los niveles del factor reumatoideo superiores a los normales se pueden ver en
personas con otros problemas de salud. Sin embargo, dichos niveles ms altos del
FR no se usan para diagnosticar estas otras afecciones:
SIDA, hepatitis, influenza, mononucleosis infecciosa y otras infecciones
virales
Ciertas enfermedades del rin
Endocarditis, tuberculosis y otras infecciones bacterianas
Infecciones parasitarias
Leucemia, mieloma mltiple y otros cnceres
Enfermedad pulmonar crnica
Enfermedades crnicas del hgado
En algunos casos: las personas que son saludables y no tienen ningn otro
problema mdico tendrn un nivel de FR superior a lo normal.
Material y equipo:

Una gradilla metlica para tubo de ensaye
Tubo vacutainer sin anticoagulante
Aguja para vacutainer no. 21
Ligadura
Torundas con alcohol al 70%
Dos tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Pipeta pasteur con bulbo
Aplicadores de madera
Manual de tcnicas inmunolgicas

Placa de vidrio
Torundas con alcohol
Centrifuga
Refrigerador
Agitador para placas
Frasco con 5 ml de ltex sensibilizado
Frasco con 60 ml de solucin amortiguadora
Frasco con suero control positivo
Frasco con reactivo control negativo
Suero

Procedimiento:

a) Cuantitativo:

































Preparar una
serie de
disoluciones
usando como
factor 2. Si la
ultima disolucin
del suero
continuara
mostrando
aglutinacin se
sugiere utilizar
un factor.
Colocar una gota
de cada dilucin
del suero en las
reas marcadas
en la laminilla.
Colocar una gota
del diluyente del
suero como
control de este
ultimo
Mezclar el frasco que
contiene el reactivo de ltex
reumaclin hasta obtener una
suspensin homognea y
aadir 1 gota del reactivo en
cada una de las reas de la
laminilla
Comenzando con el
control del
diluyente y con la
dilucin ms alta
hasta la ms baja,
mezclar y extender
las reas marcadas
en la laminilla
Proceder como el paso 7
y 8 del mtodo
cualitativo
Manual de tcnicas inmunolgicas

b) Cualitativo:













Conclusin:
Esta prueba es muy eficaz ya que es de gran importancia para los mdicos por su
eficacia.
Resultados:
Mtodo cuantitativo:
1.- La aglutinacin del ltex sensibilizado con gamma globulinas indica que el
suero probado contiene factor reumatoide.
2.- En la prueba cuantitativa el titulo esta dado por la reciproca de la mxima
dilucin del suero que muestra aglutinacin.
3.- La ausencia de aglutinacin indica una reaccin negativa.

Mtodo cualitativo:
1.- La aglutinacin de las partculas de ltex indica una reaccin positiva.
Preparar una
disolucin 1:20
del suero
problema,
diluyendo 0.1 ml
del suero con 1.9
ml de solucin
amortiguador
Una gota del
suero diluido en
las reas
marcadas en las
laminillas
Colocar 1 gota
(aprox 0.05 ml)
de suero control
positivo y control
negativo en las
reas marcadas
en las laminillas
Mezclar el reactivo de
latex reumaclin hasta
tener una suspensin
homognea y aadir una
gota de reactivo de latex
a cada unos de los
sueros controles
Mezclar con un
aplicador
diferente para
cada area
Mover en un
ngulo de 45 la
laminilla por 2
min.
Observar
Manual de tcnicas inmunolgicas

2.- La no aglutinacin o una ligera aparicin de granulosidad que no exceda a la
observada en el control negativo indica un resultado negativo.
3.- La sensibilidad del reactivo de ltex es de 3ul/ml.

Fuentes de consulta:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003548.htm
www.arthritis.org/.../la.../pruebas.../tengo-artritis-pruebas-analisis-sangre/
www.rochereumatologia.es/...reumatoide.../pruebas_diagnosticas_en_la_... }

















Manual de tcnicas inmunolgicas

Prueba de fijacin del complemento

Objetivo: Esta prueba se realiza con el fin de encontrar anticuerpos que acten
contra los constituyentes de nuestra propia sangre.
Introduccin:
Se utiliza como prueba de laboratorio exponiendo el suero del paciente al
antgeno, al complemento y a hemates sensibilizados para el diagnstico de
infecciones como la sfilis y enfermedades vricas. V. tambin complemento;
inmunidad; inmunitario, sistema; Wassermann, prueba de.
Es un examen de sangre que busca anticuerpos contra el hongo Coccidioides
immitis. Este hongo causa la enfermedad denominada coccidioidomicosis.
Forma en que se realiza el examen
La sangre se extrae tpicamente de una vena, por lo general de la parte interior del
codo o del dorso de la mano. El sitio se limpia con un desinfectante (antisptico).
El mdico envuelve una banda elstica alrededor de la parte superior del brazo
con el fin de aplicar presin en el rea y hacer que la vena se llene de sangre.
Luego, el mdico introduce suavemente una aguja en la vena y recoge la sangre
en un frasco hermtico o en un tubo pegado a la aguja. La banda elstica se retira
del brazo. Una vez que se ha recogido la muestra de sangre, se retira la aguja y
se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado.
En bebs o en nios pequeos, se puede utilizar un instrumento puntiagudo
llamado lanceta para punzar la piel y hacerla sangrar. La sangre se recoge en un
tubo pequeo de vidrio llamado pipeta, en un portaobjetos o en una tira reactiva.
Finalmente, se puede colocar un vendaje sobre el rea si hay algn sangrado.
El examen de fijacin del complemento examina la porcin lquida y clara de la
sangre, llamada suero, para ver si el cuerpo ha producido anticuerpos para un
antgeno especfico, en este caso Coccidioides immitis. Si los anticuerpos estn
presentes, stos se pegan "o se fijan" al antgeno, razn por la cual el examen se
denomina "fijacin".





Manual de tcnicas inmunolgicas


Material y equipo:
Guantes
Bata
Cubre boca
Suero
Placas de cloruro
Carbonato-bicarbonato pH 9,6
Incubadora
Procedimiento:











Resultados:
Determinacin del ttulo de anticuerpos a punto final a Adenovirus (TPF) grafiando
el logaritmo natural del valor de corte del UMEISA (0,366) en la lnea de regresin,
se obtiene directamente el valor del logaritmo natural del TPF, el cual fue
analticamente calculado por la ecuacin de regresin.
El rango de ttulos para estos 90 sueros (r2= 0,98), coincidi con el obtenido
mediante diluciones seriadas de las muestras de suero. Determinacin del titulo de
anticuerpos a Adenovirus en el UMELISA utilizando una sola dilucin de las
muestras de suero. Los ttulos de cada suero fueron calculado utilizando una sola
Suero de carnero
normal al 5 %,
fueron incubadas
sobre placas de
cloruro de
polivinilo
En estos 2 pasos
las placas fueron
incubadas 30 min
a 37 C en
cmara hmeda
Incubar placa 30
min a en cmara
hmeda y la
fluorescencia
resultantes fue
estimada en un
fluorimetro
Delta M: diferencia de la
fluorescencia obtenida
con el antgeno y el
control de antgeno para
las muestras de suero
Delta P: diferencia de la
fluorescencia obtenida
con el antgeno y el
control de antgeno
para el suero control
positivo.
Manual de tcnicas inmunolgicas

dilucin de las muestras de suero. Los ttulos de cada suero fueron calculado
utilizando una curva patrn de 90 sueros cuya ecuacin de regresin resulto en: Y
= -1,2467 + 0, 53814X.
Con un r= 0,90 y un r2 = 0,81 para el cual los valores de F correspondan con la
dilucin 1:40 de las muestras de suero, Los valores de r2 ara el resto de las curvas
consideradas (1:80, 1:160 y 1:320) fueron respectivamente 0,91 y 0,82; 0,95 y
0,90 y 0,93 y 0,86.
Fuentes de consulta:
https://www.buenastareas.com/join.php?redirectUrl=%2Fensayos%2FFijacion-Del-
Complemento%2F3512031.html&from=essay
pendientedemigracion.ucm.es/info/saniani/troncales/.../Tema%2013.pdf
















Manual de tcnicas inmunolgicas

Prueba de grupos sanguneos

Objetivo: Determinaremos los grupos sanguneos en una persona de acuerdo a
su composicin sangunea.
Introduccin:
Es un mtodo para decirle cul es el tipo especfico de sangre que usted tiene. El
tipo de sangre que usted tenga depende de si hay o no ciertas protenas, llamadas
antgenos, en sus glbulos rojos.
La sangre a menudo se clasifica de acuerdo con el sistema de tipificacin ABO.
Este mtodo separa los tipos de sangre en cuatro categoras:
Tipo A
Tipo B
Tipo AB
Tipo O
Su tipo de sangre (o grupo sanguneo) depende de los tipos que haya heredado
de sus padres.
La sangre se extrae de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del
dorso de la mano. El sitio de puncin se limpia con un antisptico y luego se
coloca una banda elstica alrededor del antebrazo con el fin de ejercer presin y
hacer que las venas se llenen de sangre.
Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco
hermtico o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira la banda para
restablecer la circulacin y, una vez que se ha recogido la sangre, se retira la
aguja y se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado.
En los bebs o nios pequeos, el rea se limpia con un antisptico y se punza
con una aguja o lanceta puntiaguda. La sangre se puede recoger en una pipeta
(tubo pequeo de vidrio), en una lmina portaobjetos, en una tirilla de examen o
en un recipiente pequeo. Finalmente, se puede aplicar un vendaje en el sitio de la
puncin si hay algn sangrado.
El examen para determinar el grupo sanguneo se denomina sistema o tipificacin
ABO. Su sangre se mezcla con anticuerpos contra sangre tipo A y tipo B, y la
muestra se revisa para ver si los glbulos sanguneos se pegan o aglutinan. Si
dichos glbulos se aglutinan, eso significa que la sangre reaccion con uno de los
anticuerpos.
Manual de tcnicas inmunolgicas

El segundo paso se llama tipificacin o prueba inversa. La parte lquida de la
sangre sin clulas (suero) se mezcla con sangre que se sabe que pertenece al tipo
A o al tipo B. Las personas con sangre tipo A tienen anticuerpos anti-B y las que
tienen sangre tipo B tienen anticuerpos anti-A. El tipo de sangre O contiene ambos
tipos de anticuerpos. Estos dos pasos pueden determinar con precisin el tipo de
sangre de una persona.
La determinacin del grupo sanguneo tambin se hace para decir si usted tiene o
no una sustancia llamada factor Rh en la superficie de los glbulos rojos. Si uno
tiene la sustancia se considera Rh+ (positivo) y los que no la tienen Rh- (negativo).
La tipificacin del Rh utiliza un mtodo similar al sistema ABO.
Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un
dolor moderado, mientras que otras slo sienten un pinchazo o sensacin
punzante. Posteriormente, puede haber una sensacin pulstil o una contusin en
el sitio donde se insert la aguja.
Este examen se hace para determinar el tipo de sangre de una persona. Los
mdicos necesitarn conocer su tipo de sangre cuando le vayan a hacer una
transfusin de sangre o un trasplante, debido a que no todos los tipos de sangre
son compatibles entre s. Por ejemplo:
Si usted tiene sangre tipo A, nicamente puede recibir sangre tipo A y tipo
O.
Si usted tiene sangre tipo B, nicamente puede recibir sangre tipo B y tipo
O.
Si usted tiene sangre tipo AB, puede recibir sangre tipo A, B, AB y O.
Si usted tiene sangre tipo O, nicamente puede recibir sangre tipo O.
La sangre tipo O se le puede dar a alguien con cualquier tipo de sangre, razn por
la cual las personas con este tipo de personas son llamadas donantes de sangre
universales.
La determinacin del grupo sanguneo es especialmente importante durante el
embarazo. Si se detecta que la madre tiene sangre Rh negativa, entonces el padre
tambin debe ser evaluado. Si el padre tiene sangre Rh positiva, entonces la
madre necesita recibir un tratamiento para ayudar a prevenir el desarrollo de
sustancias que le pueden hacer dao al feto. Ver: incompatibilidad Rh
Si usted es Rh+, puede recibir sangre Rh+ o Rh-, pero si es Rh-, nicamente
puede recibir sangre Rh-.
Tipificacin ABO:
Si sus glbulos sanguneos se pegan o aglutinan al mezclarse con:
Manual de tcnicas inmunolgicas

Suero anti-A, usted tiene sangre tipo A.
Suero anti-B, usted tiene sangre tipo B.
Sueros anti-A y anti-B, entonces usted tiene sangre tipo AB.
Si los glbulos sanguneos no se pegan o aglutinan cuando se agrega suero anti-A
y anti-B, usted tiene sangre tipo O.
Prueba inversa:
Si la sangre se aglutina nicamente cuando se agregan clulas B a la
muestra, usted tiene sangre tipo A.
Si la sangre se aglutina nicamente cuando se agregan clulas A a la
muestra, usted tiene sangre tipo B.
Si la sangre se aglutina cuando se agregan cualquiera de los tipos de
clulas a la muestra, usted tiene sangre tipo O.
La falta de aglutinacin de los glbulos sanguneos cuando la muestra se mezcla
con ambos tipos de sangre indica que usted tiene sangre tipo AB.
Tipificacin del Rh:
Si los glbulos sanguneos se pegan o aglutinan al mezclarlos con suero
anti-Rh, usted tiene sangre de tipo Rh positivo.
Si la sangre no coagula al mezclarse con suero anti-Rh, usted tiene sangre
de tipo Rh negativo.
Los riesgos asociados con la toma de una muestra de sangre pueden ser:
Desmayo o sensacin de mareo
Punciones mltiples para localizar las venas
Sangrado excesivo
Hematoma (acumulacin de sangre debajo de la piel)
Infeccin (un riesgo leve en cualquier momento que se presente ruptura de
la piel)
Existen muchos antgenos adems de los mayores (A, B y Rh). Muchos antgenos
menores no se detectan rutinariamente durante la determinacin del grupo
sanguneo. Si no se detectan, usted puede an experimentar una reaccin al
recibir ciertos tipos de sangre, incluso si los antgenos A, B y Rh son compatibles.
Un proceso llamado pruebas cruzadas, seguido de una prueba de Coombs, puede
ayudar a detectar estos antgenos menores y se realiza de manera rutinaria antes
de las transfusiones, excepto en situaciones de emergencia.

Manual de tcnicas inmunolgicas

Material y equipo:
Solucin anti-A
Solucin anti-B
Solucin anti-D (anti-Rh)
Tarjetas de identificacin
Punzante estril
Algodn
Agua oxigenada
Gota de sangre

Procedimiento:







Conclusiones:
Esta prueba es una de las ms utilizadas ya que es un requisito impotante en
nuestra sociedad conocer el tipo sanguneo.
Resultados:
Si coagula en anti-A es t,s A
Si coagula en anti-B es t,s B
Si coagula en anti-AB es t,s AB
Si no coagula en ninguno es t,s O
Si coagula en anti-D es Rh +
Fuentes de consulta:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003345.htm
Colocar en la
tarjeta una gota
de suero anti-A,
una anti-B, y
una de anti-D
Pinchar la
yema del dedo,
previa
desinfeccin
con alcohol o
agua
oxigenada
Depositar una
gotita de sangre
en cada casilla y
mezclar con los
sueros.
Observar los
resultados.
Manual de tcnicas inmunolgicas

Prueba de Hepatitis

Objetivo: Determinar de cul es el tipo de hepatitis que se encuentra presnete en
el paciente.
Introduccin:
El grupo de pruebas analticas para los virus de la hepatitis corresponde a una
serie de exmenes utilizados para detectar infeccin actual o previa por hepatitis
A, hepatitis B o hepatitis C. Se pueden examinar muestras de sangre para ms de
un tipo de virus de la hepatitis al mismo tiempo.
Las pruebas de antgenos y anticuerpos pueden detectar cada uno de los
diferentes virus de la hepatitis.
Nota: la hepatitis D slo causa enfermedad en personas que tambin tengan
hepatitis B y no se revisa de manera rutinaria en una serie de pruebas analticas
para anticuerpos de la hepatitis.
La sangre se extrae tpicamente de una vena, por lo general de la parte interior del
codo o del dorso de la mano. El sitio se limpia con un desinfectante (antisptico).
El mdico envuelve una banda elstica alrededor de la parte superior del brazo
con el fin de aplicar presin en el rea y hacer que la vena se llene de sangre.
Luego, el mdico introduce suavemente una aguja en la vena y recoge la sangre
en un frasco hermtico o en un tubo pegado a la aguja. La banda elstica se retira
del brazo. Una vez que se ha recogido la muestra de sangre, se retira la aguja y
se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado.
En bebs o en nios pequeos, se puede utilizar un instrumento puntiagudo
llamado lanceta para punzar la piel y hacerla sangrar. La sangre se recoge en un
tubo pequeo de vidrio llamado pipeta, en un portaobjetos o en una tira reactiva.
Finalmente, se puede colocar un vendaje sobre el rea si hay algn sangrado.
La muestra de sangre se enva a un laboratorio para su anlisis. Los exmenes de
sangre (serologa) se utilizan para verificar si hay anticuerpos para cada uno de
los virus de la hepatitis.
No se necesita ninguna preparacin especial.
Algunas personas sienten un dolor moderado cuando se introduce la aguja para
extraer la sangre, mientras que otras slo sienten un pinchazo o una sensacin de
picadura. Posteriormente, se puede experimentar algo de sensacin pulstil.
Manual de tcnicas inmunolgicas

El mdico puede ordenar este examen si usted tiene signos de hepatitis. Se utiliza
para:
Detectar infeccin actual o previa por hepatitis.
Determinar qu tan contagiosa es una persona con hepatitis.
Monitorear a una persona que est recibiendo tratamiento para la hepatitis.
Otras afecciones bajo las cuales se puede llevar a cabo el examen son:
Hepatitis crnica y persistente
Agente Delta (hepatitis D)
Sndrome nefrtico
Un resultado normal significa que no se encuentran anticuerpos contra la hepatitis
en la muestra de sangre, lo cual se denomina resultado negativo.
Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente, dependiendo del
laboratorio que realice el examen. Hable con el mdico acerca del significado de
los resultados especficos de su examen.
Existen diferentes exmenes para la hepatitis A y B. Un examen positivo se
considera anormal.
Un examen positivo puede significar que:
Usted actualmente tiene una infeccin de hepatitis. Puede tratarse de una
nueva infeccin (hepatitis aguda) o puede ser una infeccin que usted ha
tenido durante mucho tiempo (hepatitis crnica).
Usted tuvo una infeccin de hepatitis en el pasado, pero ya no la tiene y no
puede transmitrsela a otros.
Resultados del examen para hepatitis A:
Anticuerpos IgM contra el virus de la hepatitis A (VHA): usted ha tenido una
infeccin reciente con hepatitis A.
Anticuerpos totales (IgM e IgG) contra la hepatitis A: usted tuvo una
infeccin previa o pasada o inmunidad frente a la hepatitis A.
Exmenes para la hepatitis B:
Antgeno de superficie de la hepatitis B (AgHB): usted tiene una infeccin
activa de hepatitis B, ya sea reciente o crnica.
Anticuerpo contra el antgeno central de la hepatitis B (AgHBc): usted tiene
una infeccin reciente o pasada de hepatitis B.
Anticuerpo contra el antgeno de superficie de la hepatitis B (AgHBs):
Manual de tcnicas inmunolgicas

o usted tuvo una infeccin de hepatitis B en el pasado.
o usted ha recibido la vacuna contra la hepatitis B y es improbable que
resulte infectado.
Antgeno E de la hepatitis B (AgHBe):
o usted tiene una infeccin crnica de hepatitis B.
o usted es ms propenso a contagiar la infeccin a otros a travs del
contacto sexual o por compartir agujas.
Los anticuerpos contra la hepatitis C generalmente se pueden detectar de 4 a 10
semanas despus de que ocurre la infeccin. Se pueden hacer otros tipos de
exmenes para decidir sobre el tratamiento y vigilar la infeccin de la hepatitis C.
Las venas y las arterias varan en tamao. Tomar una muestra de sangre de
algunas personas puede ser ms difcil que de otras.
Otros riesgos asociados con la extraccin de sangre son leves, pero pueden ser:
Sangrado excesivo.
Desmayo o sensacin de mareo.
Hematoma (acumulacin de sangre debajo de la piel).
Infeccin (un riesgo leve cada vez que se presenta ruptura de la piel).
Material y equipo:
Suero del paciente
Prueba de hepatitis
Guantes
Cubre boca
Bata
Procedimiento:







Teniendo nuestro
suero del paciente,
abrimos la prueba
de hepatitis
Sumergimos la tira
hasta la marca
indicada
Dejamos reposar
la tira observando
el resultado
Observamos el
resultado
Manual de tcnicas inmunolgicas

Conclusiones:
Esta es muy importante, ya que la hepatitis es una enfermedad degenerativa del
rin que puede ser mortal si no se trata a su debido tiempo y a diferencia de otra
pruebas es ms fcil de realizar bajo en costo.
Resultados:


Fuentes de consulta:
www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003558.htm

www.hepb.org/pdf/blood_tests_spanish.pdf









Manual de tcnicas inmunolgicas

Prueba de Fosfatasa alcalina

Objetivo: Esta prueba sirve para determinar si hay un mal funcionamiento con
esta enzima o si se cuenta con alguna enfermedad relacionada que este
afectando nuestro organismo.
Introduccin:
La fosfatasa alcalina (FA) es una protena que se encuentra en todos los tejidos
corporales. Los tejidos con cantidades ms altas de FA abarcan el hgado, las
vas biliares y los huesos.
Se puede hacer un examen de sangre para medir el nivel de FA.
Un examen conexo es el examen de isoenzimas de la fosfatasa alcalina.
Forma en que se realiza el examen
Se necesita una muestra de sangre. La mayora de las veces, la sangre se extrae
de una vena localizada en la parte interior del codo o el dorso de la mano.
Preparacin para el examen
Usted no debe comer ni beber nada durante un perodo de 6 horas antes del
examen, a menos que el mdico le indique otra cosa.
Muchos medicamentos pueden interferir con los resultados del examen de sangre.
El mdico le dir si necesita dejar de tomar algunos medicamentos antes de
que le hagan el examen.
No suspenda ni cambie sus medicamentos sin consultar primero con el
mdico.
Lo que se siente durante el examen
Usted puede sentir un ligero dolor o una picadura cuando se introduce la aguja.
Tambin puede experimentar algo de sensacin pulstil en el sitio despus de que
se extrae la sangre.
Razones por las que se realiza el examen
Las razones para hacer este examen abarcan:
Diagnosticar enfermedad del hgado o del hueso.
Verificar si los tratamientos para dichas enfermedades estn funcionando.
Manual de tcnicas inmunolgicas

Como parte de las pruebas de la funcin heptica de rutina.
Valores normales
El rango normal es de 44 a 147 UI/L (Unidades internacionales por litro).
Los valores normales pueden variar ligeramente de un laboratorio a otro, al igual
con la edad y el sexo. Los niveles altos de FA normalmente se observan en nios
que presentan un aumento repentino en su crecimiento y en las mujeres
embarazadas.
Los ejemplos anteriores muestran las mediciones comunes para los resultados de
estas pruebas. Algunos laboratorios usan diferentes medidas o pueden evaluar
diferentes muestras.
Significado de los resultados anormales
Los resultados normales pueden deberse a las siguientes afecciones.
Los niveles de fosfatasa alcalina superiores a los normales:
Obstruccin biliar
Afecciones seas
Tumores seos osteoblsticos, osteomalacia, consolidacin de una fractura
Enfermedad heptica o hepatitis
Ingerir una comida grasosa si usted tiene el tipo de sangre O o B
Hiperparatiroidismo
Leucemia
Linfoma
Enfermedad de Paget
Raquitismo
Sarcoidosis
Los niveles de la fosfatasa alcalina (hipofosfatasemia) inferiores a los normales:
Hipofosfatasia
Desnutricin
Deficiencia de protena
Enfermedad de Wilson
Otras afecciones adicionales para las cuales se puede hacer el examen son:
Enfermedad heptica alcohlica (hepatitis/cirrosis)
Alcoholismo
Estenosis biliar
Clculos biliares
Manual de tcnicas inmunolgicas

Arteritis de clulas gigantes (temporal, craneal)
Neoplasia endocrina mltiple (NEM) II
Pancreatitis
Carcinoma de clulas renales
Material y equipo:
Espectrofotmetro y cubetas
Bao maria
Agua destilada
Pipetas
Estndar de calibracin
Reactivos de ALP

Procedimiento:











Conclusin:
Es muy importante la realizacin de esta prueba pues muchas patologas tienen
que ver con esta enzima.


Colocar en una
cubeta sustrato
reconstruido 2.5
ml
Pre incubar unos
minutos despus
de agregar
Leer absorbencia
inicial en esectro
a 405 nm
disparar
cronometro
Registrar
absorbencias
despus de 1. 2 y 3
min despus de la
primera lectura
Determinar la diferencia
promedio de absorbencia
/ min, restando cada
absorbencia y obteniendo
el promedio
Manual de tcnicas inmunolgicas

Resultados:


Fuentes de consulta:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003470.htm
www.ehowenespanol.com