MANUAL PRCTICO DE MICROBIOLOGA - Tomo II: Microbiologa Ambiental II
Manacorda A. M., Cuadros D. P y lvarez A. S. Ao 2007
Captulo 8
MICROORGANISMOS DE LA CORROSIN
Objetivo
Interpretar las tcnicas de anlisis bacteriolgico utilizadas para determinar la presencia y recuento de bacterias causantes de corrosin de caeras.
Introduccin
La corrosin en general es un fenmeno de destruccin de los materiales de construccin, principalmente de los metales, causado por un proceso de xido-reduccin.
Existen muchas causas de corrosin. Una de ellas es la corrosin microbiolgica la cual ocurre como resultado directo o indirecto de la actividad de los organismos vivos. Los organismos productores de corrosin pueden ser hongos, algas y bacterias.
El grupo de los microorganismos llamados colectivamente bacterias del hierro y del azufre no es homogneo desde los puntos de vista morfolgico y fisiolgico, pero puede caracterizarse por su capacidad para transformar o depositar cantidades significativas de hierro o azufre, en general en formas de cieno.
Los microorganismos de este grupo se pueden clasificar en filamentosos o unicelulares, auttrofos y hetertrofos, aerobios y anaerobios.
La importancia de su estudio en el caso de las bacterias del hierro est dada por el potencial de provocar suciedad y cegamiento de los pozos y sistemas de distribucin, y en el caso de las reductoras de sulfato por dar lugar a aguas herrumbrosas o tuberculizacin de las conducciones, adems de malos olores y sabores, espumas, coloraciones y aumentos en la turbidez de las aguas.
La corrosin microbiolgica puede ser representada por los siguientes tipos de fenmeno:
1. Produccin de metabolitos cidos. Los microorganismos pueden excretar cidos orgnicos y/o inorgnicos. 2. Corrosin debida a la produccin de celdas de aireacin diferencial. Estas celdas se presentan cuando el metal recibe ms oxgeno en unas zonas que en otras causando la oxidacin de las zonas menos aireadas. 3. Destruccin de cubiertas protectoras sobre el metal, que son metabolizadas por los microorganismos. 4. Consumo de las sustancias inhibidoras de la corrosin y facilitando de esa forma la accin de iones agresivos presentes en el medio o producidos por el metabolismo bacteriano.
El agua siempre contiene bacterias, an cuando su suministro se haga a travs de modernas redes de distribucin. Existen ciertas bacterias que pueden soportar dosis muy fuertes de cloro, como es el caso de las sulfatorreductoras, que no sufren alteraciones al estar en contacto con concentraciones de 20 ppm de dicho elemento.
El agua destinada al uso domstico contiene menor cantidad de estos microorganismos que las aguas de extraccin industrial, sin embargo no es extrao encontrar bacterias de corrosin en agua potable, las cuales pueden provenir de sitios de bombeo o de las tuberas mismas en el momento de las instalaciones de stas.
Las bacterias sulfatorreductoras (BRS) pertenecen a la nica Familia Spirillaceae cuyo representante es Desulfovibrio desulfuricans. Se encuentran bajo las capas de herrumbre que se hallan en contacto con el metal debido a que son anaerobias obligadas. Estas bacterias
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transforman los sulfatos en cido sulfhdrico, el cual se combinar con las sales ferrosas para dar un sulfuro negro.
Las bacterias del hierro son capaces de metabolizar el hierro reducido existente en el hbitat acutico y depositarlo en forma de xido frrico sobre secreciones mucilaginosas. Estos microorganismos que obtienen su energa de la oxidacin del hierro son: Gallionella, Thiobacillus ferrooxidans y Ferrobacillus ferrooxidans.
Materiales
Para esta tcnica se utilizan los caldos marca MAG 1 Abreviaturas: BAT: bacterias aerobias totales BRS: bacterias reductoras de sulfato BRS-10: medio para recuento de bacterias reductoras de sulfato BRS-10-B: medio, con clavo, para recuento de bacterias reductoras de sulfato BRS-20: medio para deteccin de presencia o ausencia de bacterias reductoras de sulfato CHA: Citrato hierro amoniacal CHA-10: medio para recuento de bacterias precipitantes del hierro CHA-20: medio para deteccin de presencia o ausencia de bacterias precipitantes del hierro BAnT: bacterias anaerobias totales
1. Para anlisis de agua de pozo 6 tubos con caldo BAT : caldo rojo de fenol glucosa modificado diluido 1:2. 1 tubo con caldo BRS-20 : caldo de Postgate modificado. 1 tubo con caldo CHA-20: caldo citrato de hierro amoniacal, de aspecto amarillo-verdoso
2. Para anlisis de agua de inyeccin 7 tubos con caldo BAT - 7 tubos con caldo BRS-10-B
3. Para anlisis de torre de enfriamiento 7 tubos con caldo BAT 1 tubo con caldo BRS-20 1 tubo con caldo CHA-20
Procedimiento
Recuento de bacterias hetertrofas aerobias totales (BAT) a) Se utiliza la tcnica de dilucin por extensin (Fig. 1) que consiste en inocular una serie de frascos que contienen 9 ml de medio de cultivo. b) Se obtiene 1 ml de la muestra utilizando una jeringa descartable, estril, de 1 o 2 ml de capacidad. Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el mismo, se invierte y se retira 1 ml que se inocula en el 2 frasco. c) Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco 2 previamente agitado y se inocula el frasco 3 y as sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada frasco. d) Si no existe informacin previa de la cantidad de bacterias por ml de la muestra suelen sembrarse 6 frascos. e) La manifestacin del crecimiento bacteriano se observa por la turbidez del medio de cultivo que se compara por transparencia con un frasco sin inocular. f) Las muestras son incubadas a 35 C durante 7 das.
1 Miguel ngel Gariboglio
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Los resultados se expresan como bacterias /ml; por ejemplo si los frascos inoculados presentan turbidez hasta el frasco 4, inclusive, el resultado se expresa como: 1000-10000 bact/ml o tambien 10 3 -10 4 bact/ml.
Recuento de bacterias anaerobias totales (BAnT) Se utiliza la misma tcnica descripta en el punto anterior. La positividad se manifiesta por turbidez y la expresin de los resultados es igual.
Recuento de bacterias reductoras de sulfatos (BRS) Las muestras son inoculadas en caldos BRS-10 Se utiliza la misma tcnica descripta para BAT. Excepto la incubacin, los frascos sembrados en BRS son incubados a 35 C durante 21 das. La positividad se manifiesta por ennegrecimiento del caldo del frasco (ver Fig. 2). La expresin de los resultados es igual a BAT.: bact/ml.
Los problemas ms comunes en la interpretacin del crecimiento bacteriano cuando se utiliza la tcnica de dilucin por extensin son los siguientes: Todos los frascos muestran crecimiento: Si esto sucede no es posible estimar la poblacin, si se trata de una serie de 6 tubos inoculados se debe informar >/=10 6. bact/ml. Para el prximo anlisis de esta muestra habra que considerar el empleo de ms diluciones. Un frasco no denota crecimiento y el resto s: algunas veces uno de los frascos permanece sin cambios mientras que los ubicados anterior y posteriormente en la serie inoculada muestran positividad. Es decir hay un salto en los tubos positivos. Ese salto debe ser anotado y se informar la concentracin bacteriana correspondiente al frasco de mayor numeracin que result positivo. Frascos que se manifiestan positivos inmediatamente: si el primer frasco con un medio de cultivo para BRS se ennegrece dentro de las dos horas de haber sido inoculado con 1 ml de agua muestra, este ennegrecimiento no es producto del crecimiento bacteriano dentro del frasco; el color negro es debido al SFe proveniente de altos niveles de SH 2 en la muestra de agua que reaccion con el Fe disuelto en el caldo de cultivo: en este caso se puede seguir de dos formas: 1. Proceder con las diluciones seriadas .Los frascos de 2 a 6 permanecern generalmente sin cambios. 2. Colectar por lo menos 50 ml de agua en un frasco estril y agregarle una tableta de Alka- Seltzer que puede despojar la mayora del SH 2 de la muestra. Cuando la tableta cesa de burbujear, retirar 1 ml de agua con la jeringa estril y llevar a cabo el procedimiento habitual de las diluciones seriadas.
Fig.1: Tcnica de recuento de bacterias por el mtodo de dilucin por extensin.
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Fig 2: Recuento de bacterias reductoras de sulfatos (medio BRS-10-B) de agua de inyeccin, Los frascos de las diluciones 1, 2 y 3 presentan crecimiento, por lo tanto la muestra analizada tiene 100-1000 bacterias / ml.
Prueba de presencia / ausencia (P/A) para las BRS Se utiliza el caldo de Postgate modificado (BRS-20) a) La siembra una vez rotulado el frasco, consiste en inyectar con una jeringa descartable estril 10 ml de la muestra; ver Fig. 3. b) Luego se incuba a 35 C hasta 21 das como mximo efectuando lecturas diarias. c) La positividad se manifiesta con un franco ennegrecimiento del lquido que puede observarse como un precipitado negro (SFe) o como un espejado negro en las paredes del frasco. d) El resultado se expresa como P =presencia o A =ausencia.
Prueba de presencia / ausencia (P/A) para las bacterias precipitantes del hierro Se utiliza el caldo Citrato hierro amoniacal La siembra inoculacin y lectura son iguales a lo expresado para BRS. La positividad en este caso se manifiesta como un precipitado color ocre en el fondo del frasco con un lquido sobrenadante incoloro, tambin por la formacin de una pelcula color ocre en la superficie del caldo o por un color rojizo en la totalidad del caldo, que, originalmente es de color amarillo verdoso. Puede suceder, si existe en la muestra BRS en cantidades suficientes, que el caldo CHA-20 se ennegrezca totalmente dando un aspecto de un caldo BRS-20 positivo.
Fig. 3: Prueba presencia / ausencia para detectar BRS y bacterias precipitantes del hierro
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CARACTERSTICAS DE LOS CALDOS DE CULTIVO Denominacin Tcnica Aplicacin Cambios por accin bacteriana Temperatura de incubacin Tiempo de incubacin BAT Recuento de bacterias aerobias totales (BAT) Turbidez 35 C 24-72 hs. Caldo MAG (MFT-10) Recuento de bacterias anaerobias totales (BAnT) Turbidez 35 C 24-72 hs. BRS-20 Deteccin de bacterias reductoras de sulfatos (BRS) Ennegrecimiento 35 C Hasta 21 das CHA-20 Deteccin de bacterias precipitantes no oxidantes del hierro Precipitado de hidrxido frrico. Pelcula sobrenadante pardo-rojiza. Caldo enrojecido. 35 C Hasta 21 das BRS-10-B (con clavo) Recuento de bacterias reductoras de sulfatos (BRS) Ennegrecimiento 35 C Hasta 21 das CHA-10 Deteccin de bacterias precipitantes del hierro Precipitado de hidrxido frrico. Pelcula sobrenadante pardo-rojiza. Caldo enrojecido 35 C Hasta 21 das
Bibliografa
American Public Health Association (APHA), American Water Works Association & Water Pollution Control Federation. 1989. Standard Methods for the examination of Water and Wastewater. 17th ed. APHA, Washington, D.C.USA. Part 9000. Gariboglio M. A., Smith S.A.,1993. Corrosin e incrustacin microbiolgica en sistemas de captacin y conduccin de agua, aspectos tericos y aplicados. Editores CFI. Buenos Aires. Argentina.
Manual de Laboratorio, Microbiologa Aplicada. UAM. Web-site: http://www.azc.uam.mx/cbi/quimica/microbiologia
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