Cultivo e identificacin de

Microrganismos relacionados a la
enfermedad de caries.

Integrantes: Scarlett Antivilo
Francisca Meneses
Carolina Moraga
Vctor Osorio
Sebastin Rojas
Pamela Sandoval
Docente: Hctor Monardes
Seccin: C-32
Fecha: 10/10/2013

Introduccin:

En el presente trabajo se abordara el tema de la microflora oral de la superficie del
esmalte dental, adems de su comportamiento, diferenciando entre metabolismo
de S. Mutans y S. no Mutans y su relacin con el inicio y progresin de la lesin
cariosa.
Adems aremos una descripcin macro y microscpica de la flora relacionada con
la enfermedad de caries indicando los principales microrganismo relacionados
con este proceso criognico y detectaremos sus principales mecanismos de
patogenicidad.
Tambin podemos mencionar que La principal caracterstica de este tipo de lesin
est dada por la existencia de un desequilibrio entre los procesos de
desmineralizacin y remineralizacin del esmalte dental.
Para conocer el tipo de flora bacteriana presente en la caries, se tomara una
muestra de un paciente que presente algn tipo de lesin cariosa y se llevara a
cabo un cultivo, que ser introducido en una cmara de anaerobiosis, que luego
en base a la observacin de las colonias, principalmente con microscopia ptica
utilizando tincin diferencial de Gram, podremos identificar el tipo de bacteriana y
su pertenencia o no al grupo de los S. Mutans.












Marco Terico:

El biofilm dental produce cidos a partir de los carbohidratos que dan lugar a la
caries. La microflora en las superficies del esmalte clnicamente sano contiene
principalmente Streptococos no mutans y Actinomyces, en que la acidificacin es
leve e infrecuente. La mayora de las bacterias de la placa supragingival
metabolizan diversos azucares y producen cidos a travs de la va glucoltica
comn. Cuando el azcar es suministrado en exceso, Streptococos oral,
incluyendo Streotococo Mutans y Streptococos no mutans, pueden almacenar los
azcares extras como polisacridos intracelulares, y ellos pueden utilizar estos
polisacridos como fuente de energa para producir cidos cuando el azcar es
limitado, como ocurre entre las comidas.
La acidificacin de la microflora de la placa dental debido al consumo frecuente de
azcar o secrecin salival escasa puede ser una fuerza impulsora para aumentar
la acidogenicidad y aciduramiento de las bacterias no mutans, dando como
resultado el establecimiento de un medio ambiente ms cido. Incluso si ocurre
una adaptacin inducida por cidos, las bacterias no mutans tales como
Streptococos no mutans y Actinomyces son aun tan heterogneas, con respecto al
aciduramiento, que la poblacin de cepas ms acidricas, es decir, bacterias no
mutans de bajo pH, que aumentaran selectivamente en este medio. La adaptacin
microbiana inducida por cidos (cambio fenotpico de la microflora) as como la
seleccin inducida por cidos (Cambio genotpico de la microflora) producirn un
cambio en el potencial acidognico de la microflora, el cual, dispone que el
equilibrio de desmineralizacin/ remineralizacin se altere durante un periodo
prolongado de tiempo, que puede conducir a la iniciacin/progresin de la caries
dental.

Agar mitis salivarius:
Agar Mitis salviarius se utiliza para diferenciar entre las especies de Streptococcus
y el Enterococcus (anteriormente en el gnero Streptococcus) que son flora en la
boca. Estos organismos son muy comunes en la boca, y se han asociado con la
caries dental, as como los agentes de endocarditis. Los azcares en este medio
son sacarosa y glucosa, as como los colorantes azul de tripano y cristal violeta.

Tincion de Gram:

La tincin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en microbiologa
para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe su
nombre al bacterilogo dans Christian Gram, que desarroll la tcnica en 1884.
Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como para
poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana,
considerndose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color
moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo.
La tincin Gram se utiliza para clasificar las bacterias en base a su forma, tamao,
morfologa y color. Este tipo de tincin nos es til para poder tener un
acercamiento al diagnstico de los agentes infecciosos presentes en los cultivos.
Las bacterias pueden ser Gram positivas o Gram negativas, esto va a depender
de la composicin de la pared y arquitectura celular.
Las bacterias Gram positivas al tener una gruesa capa de peptidoglucano y gran
cantidad de acidos teicoicos que no son afectados por la decoloracin con y/o
acetona, reteniendo el colorante inicial acomplejado con iodo y visualizndose en
distintos grados de tonos desde el azul violeta al azul claro, dependiendo de si la
naturaleza de su pares celular est intacta o daada.
Las bacterias Gram negativas por su parte tienen en su pared celular una delgada
capa de peptidoglucano ligada una membrana externa por molculas de
lipopolisacaridos. Esta membrana externa es daada por el alcohol y/o acetona de
la decoloracin, permitiendo que el primer colorante acomplejado con iodo escape
y sea reemplazado por el contra colorante.




Streptococcus mutans:

es una bacteria Gram positiva formada por cocos en hileras, anaerobia facultativa
que se encuentra normalmente en la cavidad bucal humana, formando parte de la
placa bacteriana o biofilm dental. Es acidfilo porque vive en medio con pH bajo,
acidognico por metabolizar los azcares a cidos y acidrico por sintetizar cidos
a pesar de encontrarse en un medio de tales condiciones. Metaboliza la sacarosa
para producir polisacridos extracelulares e intracelulares























Metodologa:

Para la obtencin de la muestra se selecciono un alumno con presencia de carie
en una fisura de la pieza 4.7; se sec el area con una trula y posteriormente se
recogi la muestra con un cono de papel estril ayudado por una pinza, con este
mismo se realiz la siembra en agar Mitis Salivarius mediante tcnica de
agotamiento y se incub a 37 C en condiciones de anaerobiosis durante 48
horas.
Posteriormente se realiz tincin de Gram, siguiendo para ello todos los pasos de
esta tincin diferencial y procedimientos de acuerdo a las normas de bioseguridad
y se observ al microscopio ptico para determinar el tipo de bacteria presente en
la muestra.

Resultados:

Transcurrido una semana, se observo crecimiento positivo de colonias en la
placa, Figura 1A, cuyas caractersticas macroscpicas se encuentran resumidas
en la Tabla N1.

Caractersticas observadas

Colonia 1
Forma Circular
Borde Irregular
Elevacin Convexa
Superficie Lisa
Consistencia Cremosa
Color Azul - Celeste
Luz reflejada Brillante
Diametro 3mm.
Tabla N1: resumen caractersticas macroscpicas de la colonia observada.



Despus de realizar la tincin de Gram y observar la muestra bajo el microscopio
se determin que la bacteria de estudio tiene una morfologa de tipo coco y se
agrupa en disposicin lineal por lo que se estableci que es de tipo estreptococo y
las colonias se tieron de color azul-prpura manifestando su caracter Gram
positivo.














Discusin:

De acuerdo a la realizacin experimental y principalmente al anlisis de los
resultados pudimos primeramente observar que la bacteria productora de la
caries mantena una morfologa correspondiente a estreptococos pues mantienen
una forma cocacea agrupados en cadenas y son gram positivos, lo que redujo la
muestra total de bacterias potencialmente productoras de caries a tan solo 5 ,
estreptococos mutans , o estreptococos no mutans ; estreptococos mitis,
estreptococos salivarius, estreptococos sanguis, estreptococos oralis , frente a
esto se decidi comprobar la consistencia de la muestra , al hacerlo se comprob
que mantena una consistencia pegajosa , que se condijo con la consistencia que
mantiene la colonia de estreptococos mutans , esto se debe a la secrecin de
exopolisacaridos que le permiten lograr la adhesin , la agregacin y co-
agregacin de microorganismos , esta consistencia que es esencial para la
discriminacin entre los estreptococos se condice con resultados como los
obtenidos por la Dra. Maria Jesus Cabronero Fernandez Madrid, 1991,expuestos
en un estudio realizado por la Universidad Veracruzana referente a la
determinacin de polisacridos extracelulares en cepas aisladas en nios de la
escuela primaria Ignacio Ramirez que sostienen que el 75 % de los polisacridos
que fueron secretados por cepas de estreptococos mutans aisladas, son
polisacridos insolubles , por ende utilizados para lograr la adhesin de este
microorganismos .Adems es necesario destacar que los resultados se condicen
con la regin en donde se extrajo la muestra, debido a que esta presentaba
lesiones cariosas ,y que por ende se condice con resultados como los concluidos
en La revista nacional de la odontologa en donde tras la realizacin de una
revisin sistemtica de la literatura que relacionan a la presencia de estreptococos
mutans y la caries dental , pues, este estudio concluye que parece ser
concluyente en que la presencia de estreptococos mutans est relacionada con
altos ndices de caries y , en consecuencia, puede ser un factor de riesgo para la
aparicin de nuevas lesiones cariosas.

Conclucion:

Debemos saber que el agar mitis salivarius es imprescindible a la hora de
determinar el tipo de bacteria en la cavidad oral gracias a sus azcares (sacarosa
y glucosa) y a sus colorantes, azul de tripano y cristal violeta es que podemos
saber si hablamos de bacterias mutans o no mutans adems podemos hacer la
distincin por el contenido de exopolisacaridos de las colonias mutans que le
otorgan esa consistencia pegajosa.
Adems debemos mencionar que es fundamental saber que este tipo de bacterias
no esta presente en toda la cavidad bucal si bien los microrganismos mutans son
encontrados en puntos y fisuras de piezas posteriores no son encontrados en
zonas subgingivales esto debido a sus requerimientos nutricionales.
En cuanto a los mtodos de remocin del biofilm y prevencin contra las caries
sabemos que existen diversos mtodos tales como pastas, colutorios, barnices
.etc. sin embargo estos no son efectivos por si solo devn ser complementarios
de la remocin mecnica que lejos es la manera mas eficiente de remocin.















Bibliografia:

(1) Negroni, M. (2009). Microbiologa estomatologca, fundamentos y gua
prctica (2 edicin). Buenos Aires: Panamericana. (pp. 263-273).
(2) Pedro Alarcon, Diagnstico Mibrobiolgico del gnero Streptococcus,
MINSAL, recuperado el 10 de octubre de 2013:
http://www.sochinf.cl/sitio/templates/sochinf2008/documentos/presentacione
s_microbiologia_cli_2011/9_sr_Alarcon.pdf
(3) Cabronero, M. (1991), Estudio De Strentococcus Mutaus En Un Modelo
Experimental. Aportaciones Etiopatogenicas. Universidad Complutense De
Madrid, recuperado el 09 de octubre de 2013:
http://biblioteca.ucm.es/tesis/19911996/X/3/X3011301.pdf