Son compuestos de carcter acidico formados por C, H, O, N y P que se encuentran en
todos los seres vivos. Se llaman as porque al principio se crey que se encontraban solamente en los ncleos celulares. Pertenecen a la categora de macromolculas formadas por polimerizacin de cadenas lineales, de gran nmero de unidades estructurales llamadas nucletidos. Son polinucletidos. Poseen rango biolgico altsimo pues: 1. Son depositarios de la informacin gentica y responsables de su transmisin de padres a hijos o sea de una generacin celular a otra. 2. Tienen un papel fundamental en la sntesis de las protenas y dirigen el ensamble correcto de aminocidos en secuencias definidas.
Nucletidos Los nucletidos estn formados por la unidad de: 1. Una base nitrogenada 2. Un monosacrido de cinco tomos de C, una aldopentosa 3. cido ortofosfrico Las bases son compuestos derivados de dos ncleos heterocclicos el de la piridina y el de la purina Cinco bases derivadas de estos ncleos son las ms frecuentes en la formacin de los cidos nucleicos: tres son pirimidicas y dos son puricas Pirimidicas: Timina (T) Citosina (C) Uracilo (U) Puricas: Adenina (A) Guanina (G) Eventualmente los cidos nucleicos pueden contener pequeos cantidades de otras bases, en general derivadas de las anteriores.
Aldopentosas Por hidrlisis de los cidos nucleicos se obtiene un monosacrido que puede ser la d- ribosa o la d-2-desoxiribosa. Segn los glcidos que participan tenemos los cidos ribonucleico (ARN) y desoxirribonucleico (ADN), las Aldopentosas de los cidos nucleicos adoptan la forma furansica y el C 1 es de configuracin . La ribosa o la desoxirribosa se unen al nitrgeno 9 de una cadena purica o al nitrgeno 1 de una base pirimidica, mediante enlaces glicosidicos , es decir, el C1 de la pentosa, de configuracin , es el participante de la unin. El compuesto formado por la unin de una base nitrogenada, purica o pirimidica se llama nuclesido. Un nucletido se forma cuando se esterifica con cido ortofosfrico y el hidroxilo de C5 de la ribosa o de la desoxirribosa de un nuclesido. Los nucletidos pueden unirse entre s para formar molculas polimricas, hacindolo por esterificacin entre el fosfato de un nucletido y el hidroxilo de C3 de la pentosa del nucletido adyacente. El fosfato forma una especie de puente entre el C5 de la pentosa de un nucletido y el C3 de la pentosa del nucletido anterior. Se trata de un enlace fosfodiester. El primer nucletido de la cadena tiene libre su fosfato, mientras que la pentosa del ltimo nucletido tiene libre el hidroxilo de C3, se habla as del de extremo 5 y el extremo 3 de la cadena, teniendo en cuenta que la notacin prima () referida a los nucletidos, indica numeracin de los carbonos de la pentosa y que el uso de nmeros corrientes se reserva para los tomos de las bases nitrogenadas. Esta estructura bsica de la cadena es vlida para todos los tipos de cidos nucleicos.
ADN Se encuentra en casi la totalidad de los ncleos celulares, ms precisamente en el material que forma la cromatina. Existe tambin una pequea cantidad en mitocondrias y cloroplastos. Todas las clulas somticas de los individuos de una misma especie tienen igual contenido de ADN, estas cantidades no se modifican ni por la edad ni por condiciones ambientales. (Nota: 2 tipos de clulas: las somticas y las sexuales. las clulas somticas son todas las clulas que forman los tejidos y los rganos conformando el cuerpo de los seres vivos, se originan a partir de la clula madre y tras el proceso de diferenciacin celular forman todos los otros tipos de clulas. son clulas diploides, es decir que contienen 2 pares de cromosomas, a diferencia de las sexuales (o germinales) q solo contienen 1 par(se reproducen por meiosis) y su funcin es la reproduccin. las clulas somticas se reproducen por mitosis, un proceso de divisin y multiplicacin celular por el cual se forman 2 clulas idnticas a la progenitora con el mismo nmero de cromosomas (en los humanos 46, 2 pares de 23). La molcula de ADN es lineal, sin ramificaciones y forma hebras de gran longitud llegando a veces a medir centmetros, o sea magnitudes microscpicas. En cambio su eje transversal mide solo 20 A (o sea 20 micrones), debido a esto la hebra se corta fcilmente durante su manipuleo para separarla, purificarla, etc. Es casi imposible obtenerla entera. En los cromosomas la molcula de ADN se encuentra densamente empaquetada, por ejemplo el cromosoma humano ms pequeo posee una molcula de ADN cuya masa es alrededor de 30000 millones de daltons y una longitud de 1,4 cm. Se estima que si se colocaran extendidas una continuacin de otra, las molculas de ADN de los 46 cromosomas de una clula somtica humana, alcanzaran una extensin de dos metros. Las bases puricas que constituyen el ADN son adenina y guanina, las pirimidicas son la timina y la citosina. Las proporciones de las distintas bases en un cido nucleico, son caractersticas para cada especie, pero se dan relaciones fijas entre las bases, que se determinan en todas las muestras de ADN a que se mantienen cualquiera sea su origen. Por ejemplo, el contenido molar de bases puricas es siempre igual al de las bases pirimidicas, es decir, la suma de las molculas de adenina ms las de guanina es igual a la suma de las molculas de timina ms las de citosina (A + G T + C), adems las relaciones A/T y G/C son siempre iguales a 1, es decir existe igual nmero de molculas de adenina que de timina (A=T) y tambin es igual el nmero de guanina y citosina (G=C). Observaciones como estas y el anlisis por difraccin de rayos X sirvieron para que Watson y Crick elaboraran en 1953 su modelo molecular del ADN. Esta estructura est de acuerdo con todos los estudios que se fueron realizando y adems permite explicar la capacidad de esta molcula de duplicarse durante la reproduccin celular y servir como depositaria de la informacin gentica.
Estructura molecular del ADN La molcula est formada por dos cadenas polinucletidicas enrolladas alrededor de un mismo eje, por ello se dice que el ADN est constituido por una doble hlice, en cada una de esas hlices, la hebra continua que forma el enrollamiento, est constituida por las desoxirribosas y los fosfatos extendidos como puente entre el C5 de la pentosa y el C3 de la anterior.
Las bases puricas y pirimidicas que son molculas planas, estn orientas hacia el interior de la hlice, en direccin perpendicular al eje central. De este modo los glcidos y los fosfatos que son hidrofilicos quedan situados hacia el exterior y toman contacto con el medio que es acuoso. Las bases muy poco polares, se dirigen hacia el interior alejndose del disolvente agua. En representacin esquemtica (fig 1) imitada de la original de Watson y Crick, la doble hlice est indicada como dos cintas que representan las cadenas formadas por la sucesin de desoxirribosa y fosfatos. Los travesaos perpendiculares al eje central y dispuestos como peldaos de una escalera caracol representan las bases puricas y pirimidicas. Cada vuelta de la hlice tienen una extensin de 34 A y cada base est a 3,4 A de distancia una de otra. Figura 1
Esto significa que cada vuelta completa de la hlice comprende diez bases nitrogenadas. La seccin transversal de la molcula, o sea el dimetro de la hlice es de 20 A. Si imaginramos mirar la molcula desde cualquiera de sus extremos comprobaramos que el enrollamiento se hace en el sentido de rotacin de las agujas del reloj, por lo que se dice que es derecha o dextrgira. La cadena de polinucletidos se construye por la unin que forman los fosfatos entre el C 5y el C 3de dos desoxirribosas de nucletidos vecinos. En el ADN las cadenas antiparalelas, es decir siguen una direccin opuesta. En una, las uniones van del C 5al C 3y en la otra van del C 3al C 5, de este modo en cada punta de la molcula se encuentran el extremo C5de una cadena y el extremo del C3de la otra.
La estructura primaria de estas cadenas, es decir, el ordenamiento o secuencia de los nucletidos es de gran importancia, pues en una molcula de tan grandes dimensiones (muchas veces constituida por miles de unidades) las posibilidades de formar ordenamientos diferentes con las cuatro bases (A, G, T y C) son muy grandes. La informacin gentica, est precisamente contenida en la molcula de ADN cifrada o codificada en su secuencia de bases. As el ordenamiento de nucletidos en los trozos de ADN correspondientes a los genes, indican la secuencia por la cual habran de disponerse los aminocidos al construir una protena dada. La secuencia se puede indicar en forma abreviada con las iniciales de los nuclesidos constituyentes separados por una p para indicar los fosfatos de unin, p ej: pApGpCpTpApT.o ms sencillamente sin necesidad de la las p AGCTACT
Tal como en las cadenas polipeptdicas los aminocidos se nombran en el sentido que va desde el extremo N-terminal al extremo C-terminal, en los polinucletidos las unidades se mencionan comenzando por el extremo 5. Las bases puricas y pirimidicas que en cada cadena se dirigen perpendicularmente hacia el eje central, se enfrentan y aparecen en forma definida. El espacio comprendido entre las dos hlices no es suficiente para ubicar dos cadenas puricas en un par y resulta demasiado grande para dos cadenas pirimidicas que quedaran muy alejadas para establecer uniones o atracciones entre ellas. El espacio o luz entre las dos hebras, es el adecuado para acomodar un par formado por una base purica y una base pirimidica. Las bases se unen entre s por enlaces tipo puentes de hidrgeno y se mantienen enfrentadas. La A y la T pueden aparearse y formar dos uniones hidrgeno. La G y la C establecen entre si tres enlaces de H (Fig 1), estos son los nicos apareamientos posibles, de este modo cada adenina de una de las cadenas est siempre enfrentada a una timina de la otra y cada citosina frente a una guanina. La doble hlice es una estructura muy estable debido a los enlaces de hidrgeno entre las bases. Estas fuerzas dbiles, resultan significativas al multiplicarse a lo largo de pares de bases que constituyen la molcula. Otras fuerzas importantes que contribuyen a la estabilidad de la doble hlice son interacciones hidrofbicas en los pares de bases apilados en el interior de la molcula. Si bien la doble hlice es un conjunto compacto, tiene flexibilidad, lo que le permite arquearse y hasta enrollarse sobre si misma o sobre otras estructuras. Esta propiedad le permite amoldase e interaccionar con otras molculas y tambin empaquetarse en muy pequeos volmenes. De todo esto se debe destacar dos aspectos fundamentales para la estructura y funcin del ADN: 1. Las dos cadenas que constituyen el ADN no son idnticas, sino complementarias, o sea que para que se produzcan los apareamientos de A-T y G-C. es necesario que una cadena posea adenina exactamente en frente a timina de la otra, y guanina de una frente a citosina de la otra, etc. 2. Las dos cadenas son antiparalelas, una marcha en sentido 5- 3y la otra en sentido 3-5. Estos principios de complementariedad y de antiparalelismo se aplican a todos los procesos en los que participan estas molculas, como los de duplicacin o replicacin, transcripcin, traduccin, etc. Como consecuencia del enrollamiento de las dos cadenas de desoxirribosas y fosfato se forman dos surcos o estras en la superficie de la molcula, paralelos a los giros de la hlice. Uno de los surcos es mucho ms ancho que el otro. En el fondo de estos surcos se encuentran componentes de bases puricas y pirimidicas que pueden formar enlaces de hidrgeno con otras molculas. Fundamentalmente a nivel del surco mayor se establecen interacciones con protenas y otras sustancias capaces de modificar el funcionamiento del ADN. La propiedad de arquearse que tiene la doble hlice facilita el acceso de molculas reguladoras. La estructura del ADN propuesta por Watson y Crick, corresponde a la llamada conformacin B, la ms frecuente de la doble hlice. Existe otra conformacin llamada A, ms ancha y ms corta que la hlice B. Al parecer no tiene importancia fisiolgica. Conformacin Z: por diversos mtodos se han sintetizado cadenas cortas de ADN (oligonucletidos). Esto permiti estudiar la conformacin de dobles hlices con determinadas secuencias de bases. Se pudo comprobar que cadenas formadas por la sucesin alternada de guaninas y citosinas (GC-CG) pueden adoptar una conformacin muy diferente de la B. La doble hlice se hace levgira en lugar de dextrgira. El surco menor es ms profundo y el mayor prcticamente desaparece. La molcula es ms delgada y ms largada presentando 12 pares de bases por vuelta en lugar de 10, como la B. La cadena de desoxirribosas y fosfatos dibuja una lnea zigzag, de all el nombre de configuracin Z. El conocimiento de la estructura del ADN permite afirmar que sta molcula no slo almacena la informacin gentica sino que su estructura posee las seales necesarias para el control de su propia actividad.
Desnaturalizacin del ADN El mantenimiento de la doble hlice se produce por las uniones de hidrgeno en los pares de bases y tambin por interacciones hidrofbicas de las apiladas en el interior de la molcula. Estas fuerzas se hacen compacta y algo rgida. Ciertos agentes como el calentamiento, las bases y cidos fuertes y algunas sustancias como la urea, etc., llegando a debilitar las uniones y hacen que las dos cadenas se desenrollen y se separen. Este proceso es llamado desnaturalizacin. Las hebras polinucletidicas liberadas son flexibles y adoptan una disposicin al azar. La desnaturalizacin del ADN puede seguirse espectrofotomtricamente midiendo la absorcin de U.V. a 2600 A, pues sta aumente a medida que avanza la desnaturalizacin, es decir a medida que se separan las hebras. Si se somete una solucin de ADN a un calentamiento lento y se registra la absorcin de U.V. a distintas temperaturas, se puede graficar.
Al aumentar la temperatura aumenta la absorcin de U.V., fenmeno que se llama efecto hipercrmico. Al llegar al mximo de desnaturalizacin, la densidad ptica no aumenta ms con el incremento de temperatura debido a que las cadenas se han separado totalmente. La temperatura a la cual se desnaturaliza la mitad del ADN resulta indicada por el punto de inflexin de la cursa y es llamada temperatura de fusin o Tm, cuyo valor es caracterstico para cada ADN en definidas condiciones de pH y concentracin salina (oscila entre los 80 y 100C para distintos organismos). La determinacin de Tm es til para conocer con aproximacin la composicin en bases de un ADN. Como el par G-C, est unido por 3 puentes de hidrgeno y el par A-T por 2, cuanto mayor sea el contenido de G- C, el ADN resultar ms resistente a la desnaturalizacin y mayor su temperatura de fusin.
Renaturalizacin El proceso de desnaturalizacin del ADN es reversible en condiciones controladas. Si se enfra lentamente una solucin en donde el ADN se ha desenrollado totalmente, se va produciendo la reasociacin de las cadenas y se completa la estructura original de doble hlice. Este proceso se puede seguir midiendo la absorcin de U.V. a 2600 A y se obtiene una curva inversa a la de desnaturalizacin. Este cambio producido a baja temperatura se llama templado del ADN. Tiene inters la velocidad de Renaturalizacin y se determina generalmente el tiempo medio, que es el requerido para la de renaturalizacin de la mitad del ADN en una muestra. Si en un determinado ADN se encuentran muchas zonas de igual secuencia (o sea secuencias repetitivas) el tiempo de templado es menor, pues ser ms fcil que una cadena dada encuentre un trozo complementario con el cual asociarse. Tambin se puede producir la asociacin del ADN desnaturalizado de dos organismos diferentes, formando as doble hlices hibridas, lo cual depende de la proximidad o distancia evolutiva de dos especies diferentes. Dos especies cercanas en la escala biolgica, forman dobles hlices hibridas en mayor proporcin que otras ms alejadas, lo que permite diversos estudios.
Cromatina El ADN nuclear de las clulas eucariotas, se encuentra asociado a protenas, formando la cromatina. Su organizacin es muy compleja y experimenta cambios durante el ciclo celular. En la interface se evidencia en el ncleo slo un retculo irregular de cromatina. Al iniciarse la mitosis, la cromatina se condensa en formas discretas llamadas cromosomas. Las nucleoprotenas cromatimicas tienen un ADN como grupo prosttico y protenas bsicas llamadas histonas. Adems se encuentra una pequea proporcin de protenas cidas. Las histonas tienen ms del 20% de sus aminocidos como lisina y arginina. Los grupos libres ionizables de estos aminocidos se cargan positivamente, ejercindose atracciones electrostticas con los grupos negativos de los fosfatos de las cadenas de ADN. Se producen as interacciones entre molculas policatinicas con molculas polianinicas. Se conocen cinto tipos diferentes de histonas que se designa as: H 1 , H 2a , H 2b , H 3 y H 4 . Su masa molecular oscila entre 11000 y 21000 daltons. Con difraccin con rayos X y microscopa electrnica se puede explicar cmo una molcula de tal longitud puede empaquetarse en un cromosoma (recordar que, en trmino medio, cada cromosoma humano aloja una doble hlice de 4 cm de longitud). A intervalos regulares, la molcula de ADN se enrolla dando dos vueltas sobre un ncleo formado por un octmero de histonas: dos unidades de: H 2a , H 2b , H 3 y H 4 . Cuando una hlice se enrolla sobre un eje, da una estructura llamada superhlice. Las vueltas de la superhlice sobre el carretel que forman las histonas, abarcan una longitud de 146 pares de bases. El ncleo de histonas y la superhlice constituyen una partcula llamada nucleosoma. El ADN una vez que ha dado las vueltas sobre el ncleo de histones, se extiende en un trozo de 50 a 60 pares de bases (el ADN espaciador) y luego forma otra superhlice alrededor de otro octmero de histonas y as sucesivamente. Una unidad de histona H 1
est asociada a la doble hlice del ADN, en el lugar donde empieza y termina el enrollamiento alrededor del octmero. El conjunto de nucleosomas se ve al microscopia electrnico en forma de rosario sobre la hebra de ADN. Al iniciarse la mitosis se empaquetan. El rosario se enrolla formando un solenoide de 6 unidades por vuelta. Las histonas H 1 deben jugar un papel en esta condensacin, pues quedan en el interior formando el centro del solenoide.
ADN circular La informacin gentica de una bacteria procariota se encuentra en un solo cromosoma constituido por una doble hlice de ADN que no tiene extremos libres. La molcula se cierra sobre si misma formando un crculo. Al parecer el ADN bacteriano no est organizado en nucleosomas, aunque se observan acmulos de material gentico. Al principio se crey que no estaba asociado a protenas y se considerado un ADN desnudo. Sin embargo, se han aislado varias protenas de masa molecular pequea, semejantes a la histona, que tienen capacidad para formar complejos con el ADN de bacterias. El cromosoma de Escherichia coli ha sido muy estudiado, comprobndose que tiene 4.000.000 de pares de bases (o sea 4.000 kilobases). Su tamao es menor que el del cromosoma de clulas de animales superiores. Si el anillo se extiende sobre un plano formando un crculo, se dice que el ADN est relajado. Ms comn es encontrarlo enrollado sobre s mismo formando superhlices o superenrollamientos.
Plsmidos Adems del cromosoma nico en el cual se almacena la casi totalidad de la informacin gentica, muchas bacterias poseen otras molculas de ADN circular, de menor tamao que el del ADN cromosmico, tiene entre 2 y 200 kilobases. Este ADN se duplica independientemente y contiene informacin gentica accesoria. A estas pequeas molculas de ADN extracromosmico se les llama plsmidos. Es comn que los genes responsables de la resistencia a los antibiticos estn contenidos en estos plsmidos y que pueden ser transferidos de una bacteria a otra a travs de las paredes celulares, por lo que los genes incluidos en ellos, se han difundido, ampliamente. Ciertas tcnicas permiten separar los plsmidos de una preparacin de bacterias y obtenerlos puros, libres del ADN cromosnal. En mitocondrias y cloroplastos se ha aislado el ADN circular con ciertas semejanzas al del cromosoma bacteriano. Es un ADN de menor tamao que el cromosnal de aproximadamente 15 kilobases.
cido ribonucleico (ARN) Es un polinucletido que tiene las siguientes diferencias con el ADN: 1. El azcar presente es la D-ribosa y no la D-2-desoxirribosa 2. En el ARN no existe la base pirimidica timina, en cambio se encuentra uracilo (U). las bases restantes son las mismas: adenina, guanina y citosina. En ARN, adenina- guanina son puricas y citosina-uracilo son pirimidicas. 3. La molcula de ARN est formada por una sola cadena polinucletidica, no dos como en el ADN, sin embargo a veces la cadena del ARN se dobla en horquilla y se enrolla sobre s misma formando, en algunos segmentos de la molcula una estructura que asemeja la doble hlice del ADN. Debido a que la molcula tiene una sola cadena no se cumplen las relaciones molares en purinas y pirimidicas que se observan en el ADN. La cantidad de guanina no es necesariamente igual a la de citosina, ni la de adenina a la de uracilo. En las clulas existen tres tipos principales de ARN: el ARN mensajero (ARN m ), el ARN ribosmico (ARN r ) y el ARN de transferencia (ARN t ).
ARN m
Constituye aproximadamente el 5% del ARN celular, se distribuye en el ncleo y en el citoplasma, su PM y su composicin en bases es muy variable. Su papel fisiolgico es el de transmitir la informacin gentica desde el ADN nuclear hacia el sistema de sntesis de protenas en el citoplasma y adems sirve de gua para el ensamble en orden correcto de los aminocidos. El ARN m nuclear es muy heterogneo pudiendo alcanzar gran tamao molecular, por encima de 10 millones de daltons. El ARN m del citoplasma es de menor tamao. Se sabe actualmente que el ARN m se sintetiza en el ncleo luego es cortado en trozos que se unen para formar molculas ms pequeas que pasan al citoplasma, en todos los ARN m el extremo terminal 5 se une a la 7-metil-guanosina trifosfato. Este nucletido trifosforado servira como marcador para el reconocimiento del ARN m por parte del sistema de sntesis de protenas, asimismo contribuye a la estabilidad del ARN m
al proteger al extremo 5de la accin de enzimas hidroliticas. El extremo terminal 3fija un polmero constituido por 100 a 250 unidades de cido adenlico a AMP que se denomina poli A, no sabindose bien qu papel juega esta cola de poli A. El ARN m es el ms lbil de los ARN, su vida til en clulas de mamferos es de 8 a 10 horas, en las bacterias es an menor. En el ncleo de las clulas existe otro ARN llamado ARN nuclear heterogneo (ARN nh ), formado por molculas de gran tamao precursoras del ARN m , solo el 20% del ARN nh es transformado en ARN m , el resto es degradado.
ARN t
Este tipo de ARN, llamado tambin soluble, es el de menor tamao molecular, su masa es de alrededor de 25.000 Da, y est constituido por aproximadamente 75.000 nucletidos, este ARN t participa de la sntesis de protenas transportando aminocidos libres del citoplasma hasta el lugar de ensamble de la protena. Acta como una molcula adaptadora que asegura la ubicacin de cada molcula en el sitio correspondiente. En cada clula existen distintas especias de ARN t especficas para cada tipo de aminocido, actualmente se conocen la estructura primaria de ms de 100 ARN t aislados de diferentes organismos. Los primeros estudios indicaron que la molcula de ARN t se asemeja a una hoja trilobulada, la cadena polinucletidica posee segmentos complementarios que la aparean antiparalelamente en ciertos trozos de la molcula. Existen tambin porciones desplegadas de la llamado anticodon que proporciona a la molcula de ARN t su especificidad de aminocidos y sirve para que pueda cumplir las funciones de adaptador que la molcula posee. El aminocido (AA) que se transfiere se une por un enlace tipo ster entre el carboxilo del AA y el hidroxilo del C3de la ribosa de la ltima adenosina.
ARN r
Es el ms abundante y constituye el 80% del ARN contenido en la clula. Es el ncleo prosttico de las ncleo protenas que forman las ribosomas, estos son pequeos grnulos que se encuentran libres en el citoplasma o que se unen en el llamado retculo endoplasmtico rugoso. Ms del 55% del peso del ribosoma corresponde al ARN y el resto son protenas. El ribosoma de organismos eucariotas est constituido por dos partculas, una mayor y otra menor, que se clasifican por un coeficiente de sedimentacin se mide en unidades Svedberg. Las molculas de ARN r presentan plegamientos definidos y numerosos segmentos en doble hlice. El ARN r de cada partcula ribosmica cumple importantes papeles tanto estructurales como funcionales. Se ha confeccionado un modelo tridimensional de los ribosomas que explica cmo estas partculas cumpliran su funcin durante la sntesis de protenas. El microscopio electrnico permite ver conjuntos formados por varios ribosomas unidos a una hebra de ARN r como cuentas de un rosario, los que se denominan polisomas. Otras partculas con ARN existentes en las clulas son la ribonucleoprotenas nucleares pequeos y ribonucleoprotenas citoslicas pequeas; este ARN es rico en uracilo e interviene en el procesamiento de ARN r en el ncleo.