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Este documento presenta los procedimientos para realizar un frotis sanguíneo, analizarlo bajo el microscopio e identificar los componentes celulares de la sangre. Describe cómo extraer sangre del dedo, realizar la extensión en el portaobjetos, teñir la muestra y observarla. Explica los posibles errores en la tinción y características de eritrocitos, leucocitos como neutrófilos, eosinófilos y basófilos, así como linfocitos, monocitos y plaquetas. La práct
Este documento presenta los procedimientos para realizar un frotis sanguíneo, analizarlo bajo el microscopio e identificar los componentes celulares de la sangre. Describe cómo extraer sangre del dedo, realizar la extensión en el portaobjetos, teñir la muestra y observarla. Explica los posibles errores en la tinción y características de eritrocitos, leucocitos como neutrófilos, eosinófilos y basófilos, así como linfocitos, monocitos y plaquetas. La práct
Este documento presenta los procedimientos para realizar un frotis sanguíneo, analizarlo bajo el microscopio e identificar los componentes celulares de la sangre. Describe cómo extraer sangre del dedo, realizar la extensión en el portaobjetos, teñir la muestra y observarla. Explica los posibles errores en la tinción y características de eritrocitos, leucocitos como neutrófilos, eosinófilos y basófilos, así como linfocitos, monocitos y plaquetas. La práct
DOCENTES: Dr. PADILLA SAGASTEGUI, SANTOS ENRIQUE Dr. BELTRAN ORBEGOSO, RAUL ANTONIO
CICLO: IX
Trujillo Per 2014
FROTIS SANGUNEO
Introduccin
La sangre es un tejido conjuntivo que circula a travs de la sangre del aparato cardiovascular, est formado por clulas y un componente extracelular cuyo volumen supera el de las clulas. El volumen total de sangre es de alrededor de 5 litros lo que equivale al 7 a 8% de peso corporal total (Rodak, 2005).
Se define como frote, frotis o extendido, a la preparacin microscpica delgada y transparente, extendida entre dos cristales (porta o cubreobjetos), obtenida de un lquido orgnico espeso o tejido semilquido o pastoso (sangre, aspirados, secreciones, exudados, etc.) (Rodak, 2005).
El frotis sanguneo es realizado en forma rutinaria en todo hemograma, ya sea que se realice en forma manual o automatizada (2) .
El frotis sanguneo se utiliza para el estudio de las caractersticas citolgicas de las clulas de la sangre, lo cual permite valorar el funcionamiento general de la mdula sea a travs de sus componentes celulares, lo cual implica la evaluacin de las lneas eritrocticas, leucocitaria y megacarioctica, determinando anormalidades en forma, tamao, color e inclusiones citoplasmticas, dando una medida cuantitativa y cualitativa de los elementos que lo conforman (Sans, 2001).
La importancia de un buen extendido y su correcta tincin son fundamentales a la hora de la observacin al microscopio, ya que un frotis mal hecho entrega muy poca informacin acerca de la morfologa celular, y en algunos casos es esta observacin la que entrega al Clnico la informacin que requiere para realizar su diagnstico (Sans, 2001).
El objetivo de esta prctica es realizar un frotis sanguneo con sangre del alumno y analizarlo y conocer los componentes celulares del tejido sanguneo
Material
- Lanceta para puncin digital. - Torundas de algodn. - Alcohol 70. - Dos portaobjetos. - Guantes y bata. - Tincin con colorante Giemsa (formado por una mezcla de eosina, azul metileno y azures en solucin acuosa). - Microscopio de laboratorio. - Aceite de inmersin
Causas de error en la tincin del frotis sanguneo:
- Coloracin excesivamente azul: Frotis muy grueso, lavado insuficiente, Tincin muy prolongada, colorante demasiado alcalino. - Coloracin muy rosada: El agua del lavado, el colorante o el tampn demasiado cidos. - Aparicin de artefactos debido a suciedad, deterioro o presencia de grasa en portaobjetos. - Hidratacin de los hemates: Fijacin inadecuada por uso de alcohol metlico no absoluto.
Metodologa
1. Preparamos el material que vamos a utilizar y nos colocamos los guantes. 2. Procedemos a desinfectar el dedo del cual extraeremos la sangre que se utilizara en el frotis sanguneo. 3. Pinchamos con lanceta en el dedo, una vez hecho esto, apretamos el dedo para bombear sangre haca afuera. Una vez se haya formado una gota la acercamos al portaobjetos poco a poco hasta que la sangre pase a ste.
4. Realizamos la extensin del frotis sanguneo.
Tras realizar la extensin, se obtienen tres partes de la muestra:
- Cabeza (con demasiados eritrocitos). - Cuerpo (zona ptima para la observacin, existe un reparto equilibrado de clulas). - Cola (eritrocitos en escaso nmero)
Frotis incorrectos:
5.- Se deja secar la muestra al aire 6.- Colocar el frotis sobre una rejilla para tincin. 7.- Cubrir completamente el portaobjetos con colorante de Wright gota a gota, si el colorante se comienza a evaporar deber agregarse ms. Dejar el colorante sobre el frotis 5 minutos. 8.- Agregar un buffer para evitar una coloracin dbil, este buffer puede ser agua destilada, y dejarlo 5 minutos. 9.- Pasados los 5 minutos se enjuaga el excedo de colorante con agua destilada y se deja secar 10.- Ya seca la muestra se procede a observar en el microscopio. Para una mejor observacin del componente celular se puede usar el objetivo de 100 X el vual tambin es llamado objetivo de inmersin. Ya que en este se utiliza liquido de inmersin para poder utilizarlo
Agregando colorante Microscopio Glbulos rojos Descripcin de clulas sanguneas
Eritrocitos (Glbulos rojos)
Los Glbulos rojos son las clulas enucleadas carentes de los grnulos tpicos. Contienen hemoglobina la cual se fija al oxgeno y al dixido de carbono. Actan solo dentro del torrente circulatorio, donde se fijan al oxgeno para entregarlo a los tejidos y fijan dixido de carbono en los tejidos para llevarlo a los pulmones.
Leucocitos
Los leucocitos se subclasifican en dos grandes grupos granulocitos y agranulocitos, el fundamento de esta divisin es la presencia de los grnulos especficos prominentes en el citoplasma.
Granulocitos
Neutrfilos
Constituyen la variedad predominante de los granulocitos. Los neutrfilos maduros son almacenados en la medula sea antes de ser liberados a la circulacin durante 5 das, una vez en la sangre su permanencia en ella es fugaz ya que pasan rpidamente a los tejidos donde llevan a cabo su funcin.
Los neutrfilos maduros van a contener 3 tipos de grnulos.
o Grnulos especficos: son pequeos y ms abundantes que los azurfilos. Estos contienen varias enzimas como la colagenasa tipo IV, activadores del complemento y otros agentes bactericidas.
o Grnulos azurfilos: surgen al principio de la granulospoyesis y se encuentran en todos los granulocitos su contenido ms importante es la mieloperoxidasa, la cual es un bactericida muy potente.
o Grnulos terciarios: hay dos tipos en los neutrfilos los que contienen fosfatasas y los que contienen metal o proteinasas. Eosinfilos
Tambin tienen una actividad bactericida pero es mucho menor a la de los neutrfilos. En sus grnulos almacenan protenas con funciones citotxicas para paracitos y contiene dos tipos de grnulos:
Grnulos especficos: contienen protenas principales como la protena bsica mayor, la perxidasa de neutrfilo, etc.
Grnulos azurfilos: son lisosomas con una variedad de hidrolasas acidas lisosomas y otras enzimas hidrolticas.
Basfilos Constituyen una muy pequea porcin de los leucocitos, ya que tienden a ubicarse en los tejidos en donde existe inflamacin relacionada con hipersensibilidad a protenas, alergia de contacto o rechazo de injerto contra husped. Contiene dos tipos de grnulos:
Grnulos especficos: estos grnulos contienen heparina, histamina, heparan sulfato y leucotrienos, los cuales tienen actividades vasoactivas.
Son el componente principal del sistema inmunitario. En el organismo hay tres tipos de linfocitos distintos desde el punto de cita funcional:
Linfocitos T: se diferencian en el timo, tienen una semivida prolongada, expresan en su superficie protenas marcadoras, y se subclacifican en linfocitos CD4 y CD8. Los linfocitos T CD4 poseen el marcador CD4 y reconocen a los antgenos del complejo mayor de histocompatibilidad II.
Los linfocitos T CD8 expresan el marcador CD8 y reconocen a los antgenos unidos al complejo mayor de histocompatibilidad I.
Linfocitos B: participan en la produccin de anticuerpos circulante. En la sangre los linfocitos maduros expresan IgM e IgG en su superficie, lo mismo que las molculas del MHC II.
Linfocitos NK: tienen actividad destructora sobre clulas infectadas por virus o clulas tumorales
Monocitos
Son los leucocitos ms grandes. Se movilizan desde la medula osea hacia los dems tejidos, donde se diferencian a macrfagos y reciben un nombre diferente a segn en el tejido donde estn como osteoclastos en los huesos, clulas de kupffer en el hgado etc. Plaquetas
Son pequeos fragmentos citoplasmticos que provienen de los megacariocitos. Las plaquetas actan en la vigilancia continua de los vasos sanguneos, la formacin de cogulos y la reparacin del tejido lesionado.
Conclusin Esta prctica nos ayud a aprender cmo realizar un estudio de laboratorio muy bsico pero muy importan, tambin nos ayud a conocer la morfologa microscpica de los componentes celulares de la sangre.
El frotis sanguneo es un estudio muy fcil de realizar pero muy importante ya que ayuda a la diagnosticacin de diversos trastornos que pueden afectar a las clulas sanguneas y por consecuencia al organismo, estas enfermedades pueden incluir anemias, leucemias, trastornos plaquetarios, trastornos inmunes, etc.
Referencias Bibliogrficas
Rodak, B. 2005. Hematologa: Fundamentos y aplicaciones Clnicas. Segunda Edicin. Ed. Mdica Panamericana.