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UNIVERSIDAD SAN PEDRO

FILIAL TRUJILLO




FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA






EFECTO ANTIMITOTICO DEL EXTRACTO ACUOSO DE RIZOMAS DE Niphidium
albopuctatissimum Calahuala






AUTORES





ASESOR;


TRUJILLO PERU

2014













ABSTRACT

The psoriasis and the cancer are two illnesses very difficult of suffering for the
affected patients; but at the same time the medical treatment is not very effective,
and these patients go especially to the phytoterapy. It is in this context that we find
that Niphidium albopunctatissimum (a fern) it is very used in the treatment of the
Psoriasis in the Peru. The current scientific literature (etnomedica, chemistry,
botany, pharmacological and toxicological) it doesn't register information on the
therapeutic use of this plant. For this investigation the sample was gathered in
Coina, District of Huaranchal, Country of Otuzco. The sample was processed
appropriately as for cleaning, stabilization, drying and preparation of the extracts.
He/she was carried out the qualitative chemical study or strain phytochemistry first,
where coumarinas, tannins, saponins, flavonoides, fatty, terpenos, steroids and free
amino acids were identified. The watery extract of Niphidium albopunctatissimum
shows a remarkable effect inhibitor of the such mitosis and as they confirm it the so
much reduction of the size of the small roots of allium cepa (of 7.2 cm in the group
control to 3.8, 2.4 and 2.2 cm for the groups MP1, MP2 and MP3 respectively), as of
the IM (of 41.5 in the group control at 27.7, 17.5, 9.7 for the groups MP1, MP2 and
MP3 respectively) of the cells meristematic in the test of Deysson.

I. INTRODUCCIN

A lo largo de la historia los grupos humanos se han esforzado en obtener de la
naturaleza los remedios para su subsistencia y reproduccin. La explotacin de la
naturaleza no solo suministr a los grupos humanos alimentos, vestidos y materiales para la
vivienda y utensilios, sino, tambin numerosos principios activos que con aciertos, y tambin
muchos errores, les permitieron asegurar, cada vez con mayor eficacia, la supervivencia.
En la actualidad la ciencia moderna analiza y estudia los efectos teraputicos de las
plantas, y quiere precisar, comparar y clasificar las diversas propiedades para agrupar a las
plantas de efectos similares, para conocer los fitoconstituyentes responsables de aliviar o
curar las enfermedades, separarlos de las plantas que los contienen, determinar sus
estructuras qumicas, procurar su sntesis y proponer modificaciones estructurales en busca
de una mayor y mejor actividad (18, 19, 24),
Algunas enfermedades cursan con una fisiopatologa similar, solo diferencindose en
la velocidad con que ocurre el fenmeno que los desencadena. Esto ocurre con
enfermedades como la caspa, la psoriasis, el cncer, etc. Enfermedades en las que a
reproduccin celular est acelerada, p.e. cada 7 das en la caspa, cada 4 das en ia
psoriasis y en horas en un cncer maligno. Teniendo en consideracin lo afirmado por
Alfred Taylor en el sentido de que el tratamiento del cncer no ha tenido tanto xito con las
sustancias qumicas inventadas por el hombre, comparado con los resultados satisfactorios
obtenidos desde pocas muy remotas con extractos de plantas; numerosos laboratorios de
diversos lugares del mundo, han emprendidoamplios programas de investigacin
sometiendo a "screening" extractos de plantas en relacin a su actividad citosttica, estas
investigaciones se basan en informes obtenidos por escritos antiguos o del folklore(8, 10).
Estudios realizados en el Instituto Nacional del Cncer en los Estados Unidos
reportan que han sido aislados ms de 450 fitoconstituyentes de diferentes plantas que han
mostrado actividad citosttica in vivo y/o in vitro. Entre estos compuestos se encuentran:
esteroides, sesquiterpenos, diterpenos, saponinas, esteroides, saponinas triterpenoides,
quinoides, cardenlicos, taninos y alcaloides (9).
Los productos naturales han contribuido notoriamente al arsenal teraputico.
Alrededor de la mitad de los productos farmacuticos disponibles son de origen natura! (2).
Actualmente son objeto de un renovado inters dado que apenas una mnima fraccin de la
biodiversidad ha sido explorada farmacologicamente y a que se cuenta con eficientes
tcnicas de reconocimiento de la actividad biolgica y de la identidad qumica de los
compuestos presentes (9). Si bien se requieren ingentes esfuerzos para obtener frmacos a
partir de fuentes naturales, es enteramente coherente buscar nuevas sustancias con
actividad citosttica a partir de molculas de origen natural (9, 21)
Los helechos son una de las plantas ms antiguas sobre el planeta. Durante la era
Mesozoica, hace alrededor de 245 millones a 66 millones aos, las verduras de hojas eran
un alimento bsico para los dinosaurios herbvoros. Cuando lleg la Edad de Hielo a finales
de esa era, muchas especies de helechos del norte murieron en las reas congeladas, pero
continuaron creciendo en las zonas subtropicales y tropicales (19).
Los helechos producen esporas. Las hojas de los helechos se llaman frondas. El tallo
del que nacen se prolonga bajo la tierra formando un rizoma. Los musgos y los helechos
tienen distintos ciclos vitales, aunque en una fase ambos producen esporas. Esa fase se
llama reproduccin asexual, en la cual la reproduccin de un nuevo organismo proviene de
una sola clula. Los helechos tambin se reproducen por alternancia de generaciones. Las
esporas aparecen en e! dorso de sus frondas. Las esporas que caen en lugares
sombreados y hmedos tienen ms posibilidades de germinar (19).
En el gran grupo de los helechos encontramos que muchos de ellos tienen
aplicaciones farmacolgicas como laxantes, colagogos, vermfugas, en bronquitis, en el
asma, como antipsoriasicos, vitligo, etc.
Dentro de los helechos encontramos a la familia Polypodiaceae, y dentro de esta al
gnero Polypodium con algunos miembros muy apreciados actualmente como el
Polypodium leucotomus en e! tratamiento de la psoriasis (7, 12, 14, 2.3).
El problema surge al considerar que los miembros de la familia Polypodiaceae son
muy parecidos entre s; y se tiende a llamarlos a todos con el mismo nombre como sucede
con el nombre comn de Calahuala, calaguala, Kallawala que se usa indistintamente para
Niphidium albopunctatisimun en Per, Polypodium Ieucotomus en Centroamrica y
Polypodium feuillei en Chile (11, 20, 22).
En el Per no existe literatura referente a las propiedades farmacolgicas de la
especie Niphidium albopunctatissimum; por lo tanto nos parece relevante realizar un estudio
que pruebe si la utilidad popular como antipsorisico se debe a que impide la divisin celular
(mitosis) o a que su mecanismo de accin farmacolgica es otra y tal vez similar a la del
Polypodium Ieucotomus.
El objetivo de este trabajo es contribuir al estudio fitoqumico y farmacolgico del
extracto etanlico de los rizomas de Niphidium albopunctatissimum para determinar si en el
rizoma existen sustancias que tengan actividad antimittica mediante la tcnica de Deysson
modificada.
Por todas estas razones el presente trabajo de investigacin se propone determinar
qu tipo de metabolitos secundarios estn presentes en el rizoma de Niphidium
albopunctatissimum; esperando que alguno o algunos de ellos sea o sean los que son
responsables de inhibir la mitosis, mecanismo por el cual se explicara y justificara su uso
en psoriasis y cncer. El presente trabajo lo realizamos con la ambicin de contribuir al uso
de plantas medicnales basado en datos cientficos; todo esto en el marco del siguiente
interrogante:

II. MATERIAL Y MTODO
2.1.1 Material botnico: En el desarrollo del presente trabajo de investigacin se
recolectaron 3 Kg de rizomas de la especie en estudio en la localidad de Coina del
Distrito Huaranchal de la Provincia de Otuzco del Regin La Libertad. Muestra que
luego fue trasladada al laboratorio de Instituto Farmacutico de Investigacin en
Productos Naturales de Trujillo.
La clasificacin de a especie en estudio se realiz en el Herbarium
Truxillensis de la Universidad Nacional de Trujillo, segn el sistema de clasificacin
Filogentico de A. Engler (1964), dicha especie fue clasificada en:

Reino : Plantae
Filo : Pteridophyta
Clase : Pteropsida
Familia : Polypodiaceae
Gnero : Niphidium
Especia : Niphidium albopunctatissimum
Nombre vulgar : Calahuala


DESCRIPCIN
Es una planta perenne, rizomatosa cuya altura es de 50 a 80 cm, pudiendo llegar a
100 cm de altura. Tallos pubescentes, erguidos o decumbentes. Hojas opuestas de color
verde brillante claro, con pecolo corto, elpticas a aovadas hasta suborbiculares, de 30 a 50
cm de longitud y 5 a 10 cm de ancho. Margen entero.
Las hojas presentan una lmina pubescente de aspecto aterciopelado en ambas
caras, en tanto que las hojas son glabras a subglabras en el estado estolonfero.
Helecho que forma macollos de gran densidad y vistosidad. Prefiere crecer a media
sombra, en lugares con poca luz las hojas se ponen ms verdes. Crece mejor en suelos
ricos; pero resiste los suelos regulares y con moderada irrigacin. No necesitan
prcticamente ninguna poda; de vez en cuando son atacados por escamas (scale) y es
recomendable inspeccionar las plantas antes de comprarlas. No son atacados por ninguna
plaga y se reproducen por divisin de matas (19).


8

2.1.2 MATERIALES DE LABORATORIO
2.1.2.1 REACTIVOS Y SOLVENTES
Cloruro de sodio
Sulfato de sodio
Carbonato de sodio
Orceina
ter etlico
Alcohol etlico 96
Agua destilada
Tricloruro frrico
Acido pcrico
Alcohol amlico
cido actico
cido clorhdrico
cido sulfrico
Hexano
Cloroformo
2.1.2.2 MATERIAL DE VIDRIO
Vasos de precipitacin
Luna de reloj
Probetas
Matraces
Pipetas
Tubos de ensayo
Agitador de vidrio
2.1.2.3 EQUIPOS E INSTRUMENTOS
Balanza digital
Bao Mara
Microscopio
Cmara digital
Computadora



2.2 MTODOS

2.2.1 PREPARACIN DE LA MUESTRA
Despus de recolectada la muestra se separ primero las sustancias
extraas retirando la cubierta en una especie de pelado del rizoma, para luego
lavar y desinfectar la especie en estudio.
Posteriormente se realiz la seleccin de los rizomas por medio de la
inspeccin visual (aproximadamente 1 kg) que fueron rallados y colocados en
bandejas de acero para ser sometidos a un proceso de estabilizacin en horno a
40 centgrados por media hora.
Despus del proceso de estabilizacin de la muestra, esta se lleva a la
cmara de secado en bandejas de acero a 30 por 24 a 48 horas (16).

2.2.2 DETERMINACIN QUMICO CUALITATIVO.
La muestra es sometida a una extraccin acuosa por decoccin para
obtener el extracto acuoso, del cual luego se puede determinar o administrar al
sistema de prueba a distintas concentraciones.


2.2.3 ACTIVIDAD ANTIMITTICA: TCNICA DE DEYSSON MODIFICADA (5, 6)
2.2.3.1 CULTIVO CELULAR
Los cultivos se realizan en tubos de vidrio con agua filtrada renovada
cada 24 h., Y haciendo burbujear aire a travs de los mismos con el fin de
mantener el medio a un nivel de oxgeno constante. Todo el sistema se
mantiene a una temperatura comprendida entre 20-25 c, y en la oscuridad.
Los bulbos de Allium cepa L. se seleccionan de un peso comprendido
entre 20-40g. y se colocan de manera que solo sus bases permanezcan
sumergidas en el agua. Se retiraran las catfilas y raicillas secas de los bulbos
de Ailium cepa L, para luego colocarlos en los vasos de vidrio con agua fresca;
la que ser cambiada a diario por 3 o 4 das; cuidando que el disco germinativo
este cubierto totalmente de agua (5).

2.2.3.2 Muestra problema:
El extracto acuoso obtenido de la maceracin se constituye en la muestra
problema. Se debe determinar la concentracin de! extracto acuoso. Se trabajan
con5, 10 y 15 mL de extracto acuoso de rizoma Niphidium
albopunctatissimum para los grupo problema 1, 2 y 3 respectivamente.

2.2.3.3 Metodologa del ensayo y tratamiento de las raicillas (se describe el proceso
para cada muestra):
Se formaran 4 grupos de 5 bulbos cada uno, uno para el grupo control y 3
sern designado como grupos problema 1, 2 y 3. El grupo control se ensaya frente
a agua destilada estril.
Cuando las races alcanzan 2 a 3 cm, los bulbos se trasladan a otros

frascos de cultivo que contienen los extractos a ensayar (momento denominado
"tiempo cero"), donde se mantienen durante el tiempo de tratamiento sealado en
cada caso (72 h.). En los grupos problema 1, 2 y 3 se diluyen 10, 15 y 20 mL de
extracto acuoso respectivamente.

2.2.3.4 Fijacin y tincin
Transcurrido dicho tiempo, las races se cortan, se fijan en solucin Carnoy
(etanol absoluto-cido actico, 3:1), y se tien con orcena actico-clorhdrica
segn la tcnica de Tjio y Levan (orcena 2g; cido actico-agua destilada, 45-55;
cido clorhdrico, 10 mL).

2.2.3.5 Estudio citolgico de las races y toma de datos
Una vez teidas las races, procedemos al montaje de las preparaciones
y determinamos para cada tiempo de tratamiento el ndice mittico (IM) y el
ndice de fase (IF). La lectura de cada preparado se realizara usando un
microscopio ptico de 1200 aumentos. Se considerara 4 campos por cada una
de las muestras.
Finalizado el tratamiento, las races se cortan, fijan y tien como ya se ha
descrito, procedindose posteriormente a la determinacin de los IM y los IF
cuyo valor se calcula con las formulas descritas en el anexo 1. Los resultados se
expresan en disminucin porcentual del IM.

2.2.4 Tratamiento estadstico.
Los promedios de cada variable medida fueron sometidos a un ensayo
correlacin simple, utilizando el software SPSS, versin 13 en espaol para inferir
diferencia estadsticamente significativa, utilizando nivel de probabilidad 5% ( =0,05),
V. CONCLUSIONES

III. RESULTADOS

Los resultados obtenidos en el presente trabajo se presentan en un cuadro y 3
tablas:
Cuadro N 1 RESULTADOS DEL TAMIZAJE FITOQUMICO

Tabla N 1 Promedio y desviacin estndar de los tamaos de !as raicillas de allium cepa
despus de 72 horas de cultivo.

Tabla N 2 Recuento de fases de las muestras de cada cultivo celular para los grupos
TESTIGO, MP1, MP2 y MP3

















Cuadro N 1 RESULTADOS DEL TAMIZAJE FITOQUIMICO

ENSAYO
TIPO DE EXTRACTO
ETEREO ETANOLICO ACUOSO
SUDAN +
DRAGENDORF
MAYER
WAGNER
BALJET +++
LIEBERMAN+BUCHARD +
CATEQUINAS
RESINAS + +
FEHLING


ESPUMA ++ ++
TRICLORURO FERRICO +++ +++
NINHIDRINA + +
BORTRANGER

SHINODA + +
KEDDE
ANTOCIANINAS
MUCILAGOS
PRINCIPIOS AMARGOS



















Tabla N 1 Promedio y significacin estadstica de los tamaos
de las raicillas de allium cepa despus de 72 horas
de crecimiento

GRUPO DE TRABAJO
LONGITUD PROMEDIO DE LAS
RAICILLAS (en cm)
CONTROL 7,5
PROBLEMA 1 3,8
PROBLEMA 2 2,4
PROBLEMA 3 2,2




Grafico N 1 Longitud Promedio de las Raicillas en cm.



0
1
2
3
4
5
6
7
8
CONTROL PROBLEMA 1 PROBLEMA 2 PROBLEMA 3
LONGITUD PROMEDIO DE LAS
RAICILLAS (en cm)
LONGITUD PROMEDIO DE
LAS RAICILLAS (en cm)

Tabla N 2 Recuento de fases de las muestras de cada cultivo
celular para los grupos CONTROL, GP1, GP2 y GP3



Grfico N 2 Recuento de Fases para el Grupo control




Grfico N 3 Recuento de Fases para el Grupo Problema 1



0
200
400
600
800
1000
1200
1400
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NUMERO DE CELULAS OBSERVADAS EN CADA FASE
CONTROL
CONTROL
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
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NUMERO DE CELULAS OBSERVADAS EN CADA FASE
PROBLEMA 1
PROBLEMA 1
GRUPO DE
TRABAJO
NUMERO DE CELULAS OBSERVADAS EN CADA FASE
INTERFASE PROFASE METAFASE ANAFASE TELOFASE TOTAL
CONTROL 702 278 79 61 80 1200
PROBLEMA 1 868 210 32 24 66 1200
PROBLEMA 2 990 132 18 10 50 1200
PROBLEMA 3 1084 77 4 5 30 1200


Grfico N 4 Recuento de Fases para el Grupo Problema 2











Grfico N 5 Recuento de Fases para el Grupo Problema 3







0
200
400
600
800
1000
1200
1400
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NUMERO DE CELULAS OBSERVADAS EN CADA FASE
PROBLEMA 2
PROBLEMA 2
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
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L
NUMERO DE CELULAS OBSERVADAS EN CADA FASE
PROBLEMA 3
PROBLEMA 3


Grfico N 6 Recuento de Fases para Todos los Grupos 1






Tabla N 3 Promedios de ndice Mittico e ndice de Fase y
significacin estadstica del ndice Mittico para
los grupos GP1, GP2 y GP3



GRUPO DE
TRABAJO
INDICE
MITOTICO
INDICE DE FASE
PROFASE METAFASE ANAFASE TELOFASE
(IM)
CONTROL 41,5 55,1 15,9 12,3 16,1
PROBLEMA 1 27,7 (s) 63,3 9,6 7,2 19,9
PROBLEMA 2 17,5 (s) 62,9 8,6 4,8 23,8
PROBLEMA 3 9,7 (s) 66,4 3,5 4,3 25,9














0
200
400
600
800
1000
1200
1400
I
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T
A
L
NUMERO DE CELULAS OBSERVADAS EN CADA FASE
CONTROL
PROBLEMA 1
PROBLEMA 2
PROBLEMA 3


Grfico N 7 Promedios de ndice Mittico e ndice de Fase
para los grupos GP1, GP2 y GP3

































0
10
20
30
40
50
60
70
PROFASE METAFASE ANAFASE TELOFASE
INDICE
MITOTICO
INDICE DE FASE
CONTROL
PROBLEMA 1
PROBLEMA 2
PROBLEMA 3


IV. DISCUSIN

A pesar de los siglos de tradicin, la fitoterapia entendida como tratamiento de las
enfermedades por plantas frescas, secas o sus extractos -ha evolucionado y ha ganado
prestigio y eficacia, sobre todo en los ltimos tiempos, acercndose cada vez ms a las
normas y usos que exige la medicina moderna. Como resultado de ello, actualmente se
posee un mejor conocimiento de las propiedades medicinales, se ha incrementado su
nmero, se han desentraado cientficamente secretos de sus principios activos y se han
descrito con ms precisin sus propiedades, contraindicaciones y efectos secundarios, que
ha redundado en una ms correcta sistematizacin de su uso y posologa (3).
En el origen de un buen nmero de medicamentos se encuentran los productos
naturales. En unas ocasiones, al menos, se trata de un aprovechamiento directo de la
planta en diferentes formas farmacuticas. En otros casos, se utiliza el resultado de su
modificacin molecular como un intento de mejorar sus propiedades, su respuesta
biolgica, su potencia y selectividad o su biodisponibilidad y toxicologa (4).
En el caso que nos ocupa tratamos de probar cientficamente que el extracto acuoso
de Niphidium albopunctatissimum posee actividad antimittica, para lo cual primero
realizamos el estudio qumico cualitativo para detectar que metabolitos secundarios estn
presentes en el rizoma de la planta antes mencionada; y cuyos resultados se muestran en
el cuadro N 1, de donde se puede resumir que en general el rizoma contiene grasas,
aminocidos libres, coumarinas, triterpenos y/o esferoides, resinas, taninos y flavonoides
como posibles principios activos farmacolgicos.
El ndice Mittico se considera como un parmetro que refleja la frecuencia de la
divisin celular y la velocidad de crecimiento de los meristemos. Como se describi en la
metodologa, todos los experimentos se llevaron a cabo cuando las races alcanzaron una

longitud de 3 a 4 cm; longitud a la cual los meristemos alcanzan un equilibrio dinmico en
nuestras condiciones experimentales, es decir, el nmero de clulas que entran a divisin
es proporcional al nmero de clulas que entran a diferenciacin, establecindose un IM
con un valor constante que esta alrededor de 41.5 %.
El efecto antimittico se demuestra al observar los resultados expresados en las
tablas N 1 y N 2, en las cuales tanto el tamao de las raicillas de Allium cepa como el
ndice Mittico han tenido una disminucin estadsticamente significativa (correlacin
negativa altamente significativa entre la concentracin y el IM (r = 0,4902; F*0,05) en el
tamao (de 7.5 cm en el grupo control a 3.8, 2.4 y 2.2 cm para los grupos problema 1, 2 y 3
respectivamente) y en el ndice Mittico (de 41.5 en el grupo control a 27.7, 17.5 y 9.7 para
los grupos problema 1, 2 y 3 respectivamente) por lo que en el caso de la variacin el
ndice Mittico se refiere, para el tamao de las races seleccionadas el IM disminuye con
el transcurso del tiempo para estas races, lo cual puede ser explicado por el hecho de que
con el transcurso del tiempo se pierde el equilibrio dinmico, de manera que el nmero de
clulas que pasan a diferenciacin supera a las que entran a divisin.
No existiendo referencias bibliogrficas puntuales sobre composicin y efecto
farmacolgico de Niphidium albopunctatissimum, solamente podemos agregar que el efecto
antimittico observado puede sustentarse en los flavonoides y/o en las saponinas
presentes en su composicin, pues en la lucha contra el cncer se reporta a innumerables
compuestos de estos grupos de metabolitos secundarios como por ejemplo el resveratrol
que es un flavonoide presente en la uva y desde luego en el vino con muy buenos efectos
anticancerosos (15); y las saponinas del frijol de soya, del cual se sabe que Tambin
contiene varios componentes no-isoflavnicos con actividad anti cancergena. Las
saponinas en las plantas han sido sealadas como posibles anti cancergenas. Poseen
caractersticas de superficie activa que son debido a la naturaleza amfiflica de su

estructura qumica. El frijol soya es uno de las fuentes dietarias ms importantes de
saponinas. Se cree que la suplementacin de las dietas humanas con ciertos productos de
soya que demuestran que suprimen la carcinognesis en animales, pueden reducir
marcadamente las tasas de mortalidad en humanos y humanas (1).




V. CONCLUSIONES

1. El rizoma de Niphidium albopunctatissimum contiene grasas, coumarinas, esteroides y/o
triterpenos, resinas, flavonoides, taninos, saponinas y aminocidos libres.

2. El extracto acuoso de rizomas de Niphidium albopunctatissimum tiene efecto antimittico



VI. RECOMENDACIONES

1. Realizar un ensayo bioguiado para determinar que sustancia sustancias son
responsables del efecto antimittico.

2. Realizar estudios de toxicidad aguda y toxicidad crnica para aceptar rechazar su
empleo en seres humanos.


VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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http://www.soynica.org.ni/soya_preven.php.
2. BURGUS, J., PONTONES, J. VERA, C., JIMNEZ, J., OZONAS, M. Mecanismos del
ciclo celular y la apoptosis implicados en las resistencias a los frmacos de uso
intravesical en el cncer superficial de vejiga. ACTAS UROLGICAS ESPAOLAS
OCTUBRE. 2005.
3. CARBALLO, M., CORTADA, C., GADANO, A. Riesgos y beneficios en el consumo de
plantas medicinales. Teora, Ao/Vol 14 N 002. Universidad del Bio Bio, Chillan, Chile,
pp 95 - 108.
4. CIFA. Descubrimiento de frmacos a partir de plantas medicinales. Facultad de Farmacia
y Bioqumica. UNMSM. 2003. Ciencia e Investigacin. 6(1), 36-39.
6. DAZ, M., RONCO, A., PICA, Y. Ensayos toxicolgicos y mtodos de evaluacin de
calidad de aguas: Captulo 4. Protocolos de Ensayo 1. Ensayo de toxicidad aguda con
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de cebolla. IDRC BOOKS free online.
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http://www.ataonline.org.ar/002/acta_toxicologica/ATA12-1 .pdf
9. Garca Gonzlez, M. M.Sc. Laboratorio de Ensayos Biolgicos -LEB Escuela de
Medicina- Universidad de Costa Rica. Plantas medicinales
ANEXO 1:

cientficamente validadas. Este artculo fue presentado en el II Congreso de ciencias
"Exploraciones fuera y dentro del Aula", realizado en agosto del 2000. disponible en
http://www.cientec.or.cr/ciencias/articulos.html.
11. JIMENEZ, D. Anapsos modifies inmunological parameters and improves the clinical
course in atopic dermatitis. Dermatology. 1986. 173: 154-156.
12. Kreig, M. 1983. Medicina verde. 3ra edicin. Edit. Continental S.A. Mxico.:
301-303
13. Lock de Ugaz, O. 1988, Investigacin Fitoqumica. 1ra edicin. Fondo Editorial de la
Universidad Catlica dei Per.: 7, 35-45
14. MESLINEPLUS. Enciclopedia Mdica en espaol. [On line]
http://www.nlm.nih.gov/medlinepius/spanish/ency/article/000434.htm
15. STEWART, J, ARTIME, M, O'BRIAN, C. Resveratrol: a candidate nutritional substance
for prostate cancer prevention. J Nutr. 2003 Jui; 133(7 Supp!):2440S- 2443S. [On line],
http://www.merck.de/servlet/PB/meriu/1414880/index.html
16. Miranda Martinez, M. Cuellar Cuellar, A. Manual de Practicas de Laboratorio:
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DETERMINACIN DE SLIDOS TOTALES EN UN EXTRACTO
(Concentracin absoluta del extracto)
La determinacin de la variacin de la masa, debido a la prdida o eliminacin de sustancias

voltiles por accin del calor, mediante un proceso de evaporacin de la porcin de ensayo y
secado del residuo en estufa, hasta masa constante, se le asigna como slidos totales.
Materiales y reactivos
Cpsula de porcelana
Bao de agua
Balanza analtica
Desecador
Estufa
Pipeta aforada de 5 ml.

Procedimiento:
5.0 mL del extracto se colocan en la cpsula de porcelana previamente tarada a 105 C, se
evapora sobre bao mara hasta que el residuo este aparentemente seco. Se pasa
entonces hacia una estufa y se deja hasta peso constante (aproximadamente 3 horas). Se
retira la cpsula de la estufa y se coloca en el desecador hasta que alcance la temperatura
ambiente. Posteriormente se pesa y se realizan los clculos.
Expresin de los resultados.
La cantidad de slidos totales, se calcula por la siguiente frmula:

S.T. Pr-P
V

Pr = masa de la cpsula ms ei residuo (en gramos)
P = Masa de la cpsula vaca (en gramos)
V = Volumen de la porcin de ensayo (en mL)



ANEXO 2
1 ) FORMULA PARA CALCULAR EL NDICE MITTICO
IM = P + A + M +T
N TOTAL DE CLULAS

P: N de clulas en Profase
A:N de clulas en Anafase
M: N de clulas en Metafase
T: N de clulas en Telofase

2) FORMULA PARA CALCULAR EL NDICE DE FASE

IF = N DE CLULAS EN FASE
N TOTAL DE CLULAS EN MITOSIS