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Universidad Austral de Chile

Sede Puerto Montt
Escuela de Tecnologa Mdica





Microscopia








Fecha: 3 de abril de 2014

Autores
Carolina Angulo Cortes
Camila Arroyo Crdenas
Cinthya Gonzlez Crcamo
Diego Retamales Buchner

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Resumen:
La utilizacin ptima del microscopio, nos ayud a la realizacin de este prctico,
en el cual se pudo observar detalladamente el tinte del papel en distintos aumentos
verificando que este no es uniforme en su superficie.
Lo que se observ fueron trozos de papel tintados en un microscopio ptico en los
aumentos 4x, 10x y 40x, las muestras se colocaron en placas de vidrio en donde se las
humedeci con agua antes de colocarlas en el microscopio. Se utilizaron 3 muestras las
cuales posean dibujos (puntos, letras y nmeros), en donde su finalidad fue observar las
diferentes imgenes obtenidas con cada aumento del microscopio.
Al observar las muestras en el microscopio nos dimos cuenta que mientras ms
aumentbamos la imagen en el microscopio ms desigual era la superficie de tincin en el
papel, determinando que solo algunas fibras se tean, mientras otras permanecan en
blanco.




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Introduccin:
El ser humano posee un sentido de la vista bastante desarrollado, pero aun as para
poder estudiar detalladamente variadas muestras que a simple vista no pueden ser
percibidas por el ojo humano, debemos recurrir a instrumentos que nos permitan ampliar
significativamente el estudio de estas muestras, este instrumento, denominado microscopio.
Fue utilizado por los primeros bilogos para el estudio e investigacin de la clula, este
nombre proviene del griego, en donde mikros, toma por significado pequeo o minsculo
y skopeo lo cual se define como observar o mirar. A los estudios que se realizan con el
microscopio se le denomina microscopia.
El microscopio fue inventado principalmente por Zaccharias Janssen en el ao
1590. Con el correr de los aos esta invencin se fue perfeccionando, y si bien estos
instrumentos

incorporan ahora muchas mejoras, las propiedades de la luz establecen el
lmite de la pureza del detalle que puedan revelar (Alberts y colaboradores, 1998) (pg. 6),
por esto actualmente se ha llegado a tener diferentes tipos de microscopios: El microscopio
compuesto, ptico, digital, fluorescente y electrnico.
En este primer prctico de laboratorio perteneciente a la clase de Biologa Celular
observamos diferentes muestras en un microscopio compuesto. El microscopio compuesto
utiliza una variada combinacin de lentes, los cuales pueden llegar a aumentar hasta 2000
veces el tamao del objeto observado.
Al desarrollar la actividad designada en el prctico logramos observar
detalladamente 3 diferentes muestras entregadas en la clase, las cuales sern analizadas en
el siguiente informe de microscopia.



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Materiales y mtodos
El da jueves 27 de marzo de 2014 en el laboratorio nmero uno de la Universidad
Austral de Chile sede Puerto Montt, se realiz el primer practico de biologa
correspondiente a la carrera de tecnologa mdica a cargo de la profesora Melinka Mansilla,
en el cual el tema tratado fue microscopia.
Los materiales utilizados para la realizacin de este prctico fueron los siguientes:
- Microscopio compuesto.
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Papel delgado con letras impresas
- Pipeta de trasvasije
- Frasco con agua
- Muestras fijadas
- Delantal blanco de laboratorio
- Cuaderno para apuntes
- Lpices
- Gua prctica de biologa celular; practico nmero dos MICROSCOPIA e
indicaciones de la profesora a cargo del practico.


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Mtodos:
La primera indicacin de la profesora para desarrollar el prctico fue darnos a
conocer el funcionamiento y la utilizacin bsica del microscopio, sealando sus partes y la
funcin que cumple cada una de ellas al momento de observar una muestra.
Una vez finalizado el reconocimiento del microscopio, la profesora prosigui a
entregar las instrucciones correspondientes para la preparacin de una placa temporal. Para
poder llevar a cabo exitosamente la preparacin de esta, se debieron seguir rigurosamente
las siguientes instrucciones:
- Primero el alumno debi verificar si tanto el porta como el cubre objeto estaban
completamente limpios.
- Se prosigui a depositar el porta objeto sobre la mesa, y con la pipeta de trasvasije
se succiono una pequea cantidad de agua desde el frasco, depositando una gota
sobre el porta objeto.
- Posterior a esto se tom una letra de papel recortada que facilito la profesora y se
posiciono sobre la gota de agua que se encontraba sobre el porta objeto.
- Por ltimo se coloc el cubre objeto sobre el porta objeto formando un ngulo de
45 y dejndolo caer lentamente sobre la placa para as evitar la formacin de
posteriores burbujas sobre la muestra.


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Observacin de la muestra (uso correcto del microscopio)
Para que la observacin de la muestra se efectuase correctamente se debieron efectuar
las siguientes acciones:
- La primera accin que se llev a cabo fue colocar la placa preparada sobre la
platina, verificar que el cubre objeto estuviese posicionado hacia arriba y que el
material estuviese ubicado en el orificio que se encuentra al centro de la platina.
- Se prosigui a encender la fuente de luz y ajustar el voltaje de la lmpara.
- El diafragma del condensador se abri al mximo y posteriormente se elev hasta su
mxima posicin.
- Se verific que la iluminacin para el material preparado sea ptima para su
visualizacin.
- Lo siguiente fue ubicar el objetivo de menor aumento (4x) en el eje ptico del
microscopio.
- Se prosigui a observar desde el exterior y con el tornillo macromtrico se acerc la
placa hasta el tope superior que posee la platina.
- Por medio de la observacin del ocular se baj la platina lentamente utilizando el
tornillo macromtrico hasta que se obtuvo una imagen ntida y se corrigi el foco
con el tornillo micromtrico.
- Se corrigi la iluminacin bajando el condensador y se cerr el diafragma hasta que
se obtuvo la mxima cantidad de contraste en el campo de visin que se encontraba
iluminado uniformemente.
- Luego se gir el revolver lentamente hasta el objetivo 10x utilizando el tornillo
micromtrico para la obtencin de una imagen ntida, se abri un poco ms el
diafragma para aumentar la entrada de luz porque era necesario para poder
visualizar la muestra ms ntidamente y por ltimo se repiti la operacin con el
lente de 40x.
- El objetivo con aumento de 100x no fue utilizado en esta observacin de la muestra
ya que para poder utilizar este objetivo se necesita aceite de inmersin.

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Cuando se termin de efectuar la observacin se gir lentamente el revlver y se
posiciono el objetivo 4x en el eje ptico del microscopio, se retir el porta objeto, se
verifico si la platina se encontraba seca y se baj hasta su tope.
Una vez se finaliz la utilizacin del microscopio el control de la luz se posiciono en
cero, se apag el microscopio, se desconect y se enrollo el cable alrededor del pie y se
cubri totalmente con el cobertor de plstico y por ltimo se guard el microscopio en su
lugar correspondiente.




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Determinacin del poder de aumento.
Se entiende por poder de aumento la capacidad que posee el microscopio para mostrar
una imagen aumentada de un objeto a observar (muestra). Este consta de dos lentes que
aumentan la imagen, estos son los lentes y los objetivos.
El poder de aumento de un microscopio es determinado por el aumento del ocular
multiplicado por el aumento del objetivo a utilizar. Generalmente el ocular que se utiliza
posee un aumento de 10x.
De lo dicho anteriormente se desprende la siguiente interrogante Cul ser el poder
de aumento cuando se estn utilizando los objetivos de 4x; 10x; 40x y 100x?
Esta interrogante se responde en la siguiente tabla:
Objetivo Ocular Poder de aumento
4x 10x 40x
10x 10x 100x
40x 10x 400x
100x 10x 1000x



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Qu rol cumple el aceite inmersin en el microscopio ptico?
El aceite de inmersin tiene la funcin de evitar la dispersin de los rayos luminosos,
ya que posee casi el mismo ndice de refraccin que el vidrio.
Mediante esta se elimina casi completamente la desviacin de los rayos de luz
aumentando as la eficacia de los objetivos de los microscopios.
La desviacin de los rayos luminosos se produce porque los objetivos de mayor
aumento poseen una distancia focal muy pequea respecto a la platina y adems el dimetro
de la primera lente del objetivo es muy pequeo, por esto los rayos que se dirigen de la
muestra al objetivo atraviesan al cubre objeto y se separan ms de lo normal algunos
sufriendo reflexin al pasar por el aire llegando as una pequea parte de la luz.
Para poder utilizar el aceite de inmersin primero debe enfocarse el objetivo de menor
aumento sobre la muestra, agregar una gota de aceite de inmersin al rea a observar de la
muestra y despus girar el objetivo de inmersin. Una vez finalizada la observacin de la
muestra con el objetivo de inmersin, no se debe olvidar limpiar el lente frontal y la
muestra para as eliminar todos los residuos del aceite, para esto se puede utilizar un
limpiador de lentes marca IHR DIAGNOSTICA




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Con el aumento 4x se logra
visualizar una lnea punteada
correspondiente al tinte de la
hoja de papel cuadriculada que
se observ.
Con el aumento 10x las fibras en
la impresin de la lnea punteada
de la hoja se logran visualizar de
una forma ms ntida.
Cuando se utiliz el aumento 40x la
visualizacin de la muestra fue an ms
detallada ya que se logr apreciar los
espacios donde el tinte no penetro
totalmente a la hoja de papel.
Resultados
Los resultados obtenidos en el prctico nmero uno de biologa realizado el da jueves
27 de marzo del ao 2013 fueron los siguientes:
Observacin muestra 1: Hoja de papel cuadriculada



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Observacin muestra 2: Letra A
Con el aumento 4x se observa
una letra A invertida y detalles
de impresin bien definidos.
Con el aumento 10x se logra
observar un aumento
considerable en la letra y esta no
se visualiza en su totalidad.
Con el aumento 40x se observan
fallas en la impresin de la letra
y adems pequeas gotas de
agua en la muestra.

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Observacin muestra 3: numero 1
Con el aumento 4x se observa el
nmero 1 invertido y se puede
ver con facilidad las fallas en la
impresin.
Con el aumento 10x se observa
el nmero 1 de mayor tamao
provocando as que no se aprecie
totalmente, lo que si se divisa es
una mayor falla en el tinte de la
hoja viendo as las fibras que no
fueron tintadas.
Con el aumento 40x ya no se
reconoce el nmero 1, se
observa detalladamente la
penetracin del agua en la
impresin del tinte provocando
que este se disperse.

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Discusin:
Al comparar nuestros resultados detallados como dibujo cientfico nos percatamos
que como grupo no llegamos a una misma observacin, esto se vio influenciado por las
diferentes posiciones que individualmente se le proporciono a la muestra analizada, lo que
no significa que fuera una muestra diferente.
En una primera instancia al comparar nuestra muestra inicial, la que corresponda a
un trozo de papel cuadriculado (al que se le agrego una cierta cantidad de agua) con un
aumento en el lente de 4x, observamos que a pesar de estar en diferentes posiciones
logramos visualizar lo mismo, ya que se observaba ntidamente el tinte de la hoja
cuadriculada. Al utilizar un aumento mayor correspondiente a 10x en la misma muestra
logramos observar que el tinte de cada una de estas ya tomaba una forma irregular. Para el
aumento final de 40x logramos visualizar ms detalladamente la influencia que el agua
provoco sobre el tinte de esta impresin.
Al continuar con nuestro practico de microscopia se nos presentaron dos muestras
las cuales una contena una letra A impresa y la otra un nmero 1 similares en tamao
a la muestra inicial. Lo que se vio reflejado en estas, utilizando los mismos aumentos (4x,
10x, 40x) fue un resultado similar correspondiente al tinte. Cabe destacar adems que se vio
visualizada en ambas muestras una imagen invertida. Este efecto es provocado por un
prisma de cristal que est en el interior del microscopio a la altura de la base del ocular, este
prisma tiene por funcin concentrar la luz o imagen aumentada por los objetos y dirigirla
hacia los oculares. Como resultado, la imagen que se aprecia por medio del microscopio
compuesto se invierte al compararla con la muestra que se est analizando.



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Conclusin
Por medio de la realizacin de los trabajos realizados en el primer practico de
biologa, el cual trato sobre microscopia, se puede concluir que los objetivos entregados al
inicio de la actividad el da jueves 27 de marzo del ao 2014 se cumplieron a cabalidad, ya
que se nos permiti conocer el funcionamiento del microscopio compuesto, las partes que
lo componen, para que se utiliza cada una de ellas y su funcin especfica dentro del
microscopio.
Tambin se efectu la visualizacin de distintas muestras entregadas por la
profesora Melinka Mansilla, la cual es la docente que se encuentra a cargo de los prcticos
de la clase de Biologa Celular.
Y por ltimo como grupo podemos concluir que tras la pequea investigacin
realizada sobre el poder de aumento y el aceite de inmersin, el primer concepto se utiliza
en las clases prcticas para poder obtener una imagen ms ntida de la muestra que se
encuentra en observacin segn el objetivo que se utilice, y el segundo concepto se utiliza
mayoritariamente para evitar que la luz que nos permite visualizar las muestras al
microscopio se reflecten ya que si ocurre esto la visualizacin de la muestra se obstruye
porque la cantidad de luz incidente no es suficiente para poder apreciar la totalidad de la
muestra.



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Bibliografa
Libro:
Albert y colaboradores (1998). Introduccin a la biologa celular. Segunda edicin.
Argentina: Editorial Mdica Panamericana.
Pginas Web
Antonio Gros. Ceuta. Bases de cuestiones de fsica. Recuperado de
http://www.ugr.es/~agros/ugr/basfis07.htm
Cercas E. Montalvo Arenas (2010). Microscopia. Recuperado de
http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/PDF/Portal%20de%20Recursos%20en%20Li
nea/Apuntes/2_microscopia.pdf
Duoc UC, Escuela de Salud. BQ Lpez Reyes C. Gua microscopio. Recuperado de
http://biblioteca.duoc.cl/bdigital/Documentos_Digitales/600/610/39594.pdf
IPB, Microscopia a grandes rasgos. Recuperado de
http://www.ipb.csic.es/servicios/Microscopia/uploads/3/6/2/2/3622788/microscopia_a_gran
des_rasgos.pdf
Ojo cientfico. Qu es un microscopio compuesto? Recuperado de
http://www.magisteriolalinea.com/home/carpeta/pdf/MANUAL_APA_ULACIT_actualizad
o_2012.pdf