Tema: Tincin diferencial de un frotis bacteriano

Introduccin:
Justificacin: La tincin diferencial es un mtodo por el cual se distingue entre tipos de bacterias lo
cual ayuda en su identificacin ms general.
Objetivos: general: Diferenciar tipos de bacterias segn sus reacciones de tincin.
Especficos: Realizar un frotis bacteriano de un medio de cultivo.
Teir diferencialmente el frotis bacteriano y observarlo con el uso del microscopio.
Identificar la reaccin de tincin presente en el frotis.
Hiptesis:
Al aplicar tincin diferencial en el frotis y al observarlo, se pueden distinguir las caractersticas de
dos grupos bacterianos.
Marco terico:
La tincin Gram es un protocolo de tincin diferenciada desarrollado por el doctor Christian Gram
en 1884 y permite agrupar a las bacterias en dos grandes grupos dependiendo la estructura de su
pared bacteriana (Rodrguez,).

Las bacterias tienen peptidoglicanos en su pared celular, que protegen a la clula mecnicamente
y le confiere su forma; los peptidoglicanos son molculas nicas de procariotas y estn
compuestas de cido murmico ,glucosamina ambos acetilados y cadenas de pptidos. Las
bacterias Gram + poseen una capa ancha de peptidoglicanos sobre su membrana citoplasmtica,
las Gram- tienen una capa fina de estas molculas entre dos membranas (interna y externa)
caractersticas de las bacterias Gram- (Baron,1996).

La tincin Gram se sirve de las diferencias existentes entre la envoltura de ambos tipos de
bacterias con lo cual se puede observar a las Gram con una coloracin naranja y a las Gram+ de
color lila (Baron,1996).


Materiales y Mtodos:
El experimento se realiz el da martes 10 de abril del 2012 en el laboratorio de microbiologa de la
ESPE, primero se lav el porta objetos con jabn y se lo sec; se coloc una gota pequea de agua
en el porta objetos; con el mechero encendido en llama azul se procedi a esterilizar el asa
bacteriolgica metindola en la llama hasta que el platino se torne rojo, tambin se pas por
fuego al mango que sujeta al filamento de platino; se abri el frasco que contiene al cultivo
bacteriano sin contaminar al asa, una vez abierto se pas la boca del frasco por el fuego y
posteriormente se introdujo al asa y se rasp el medio de cultivo; se cerr el frasco y se frot el
asa en el portaobjetos. Una vez seco el frotis se lo fij pasndolo rpidamente por el mechero. Se
aplic cristal violeta de tal manera que toda el rea del frotis qued cubierta por el colorante, se lo
dejo reposar 1 min y se lavo con un chorro tenue de agua para limpiar el colorante; de igual modo
se aplic yodo por 1 minuto y se enjuag; se aplicaron de 15 a 18 gotas de decolorante y se lav
con agua; se aplic safranina por 1 min y se lav. Se sec el porta objetos por presin con papel
toalla y se observ en el microscopio a 4x, 10 x 40 x y 100 x.
Resultados:
Ver grfico 1
Discusin:
El cristal violeta y el yodo se absorben por igual en ambos tipos de bacteria por lo cual se efecta
la decoloracin; en gram + los tintes permanecen dentro de la clula debido a que la gruesa pared
celular tiene una baja porosidad y no permite que el decolorante acte por el contrario las Gram
se decoloran entonces se aplic el colorante de contraste safranina el cual las tie rosadas, las
gram + no son afectadas por la safranina ya que an mantienen la mezcla de los dos colorantes
primarios. Debido a esto se puede diferenciar entre bacterias Gram + y Gram aunque existen
pocos organismos denominados gram variables los cuales no difieren drsticamente en la
estructura de su cubierta (Tortora, 2007).
Conclusiones:
El resultado de la tincin Gram en bacterias Gram + y Gram - , difiere debido a las caractersticas
de las paredes celulares de estas bacterias observndose coloracin roja en las Gram - y lila en las
Gram +.
La fijacin del frotis garantiza que la muestra no se desprender del porta objetos en el momento
de la tincin.

Preguntas:
Tortora. Funke. Case. (2007). Introduccin a la microbiologa (9 ed). Argentina: Buenos Aires.
Editorial Mdica Panamericana, S.A. ISNB: 978-950-06-0740-7 (p.69)
Baron S, editor. (1996).Medical Microbiology (4th ed). Galveston (TX): University of Texas Medical
Branch at Galveston. Chapter 2