Staphylococcus aureus

La bacteria gram-positiva S. aureus es una causa importante de infeccin adquirida en el hospital.

Esta bacteria produce una toxina formadora de poros, es la causa principal de las infecciones del
torrente sanguneo, las vas respiratorias inferiores y la piel, y, debido a la aparicin de cepas
resistentes a los antibiticos, es una grave amenaza para la salud pblica. Para hacer frente al reto
de tratar las infecciones por S. aureus, de clulas enteras atenuados o vacunas muertas se han
desarrollado. Sin embargo, estas vacunas no han sido particularmente eficaces. Del mismo modo,
las vacunas de subunidades compuestas de protenas de superficie bacterianas individuales
generan respuestas inmunes que brinden proteccin slo parcial cuando se prueba en animales de
experimentacin. Sin embargo, una vacuna ms eficaz subunidad recientemente ha sido
desarrollado para proteger a los individuos contra S. aureus mediante la combinacin de varios de
los antgenos de la bacteria (fig. 12.8). A partir de una cepa que causa la enfermedad de S. aureus,
23 protenas de la superficie externa bacteriana se identificaron a partir de datos de secuencias de
ADN genmicas. Entonces, las regiones codificantes de estas protenas, menos las secuencias de
seal, eran reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) amplifica y se clon en los vectores
plasmdicos que permitieron a las protenas que se expresa en E. coli con un poli-His en el extremo
N de la protena (para facilitar la purificacin de la protena sobreexpresada). Las protenas se
expresaron y purificaron, y los ratones se inmunizaron por separado con cada una de las 23
protenas purificadas. Los ratones inmunizados fueron desafiados posteriormente con inyecciones
de vivo que causa la enfermedad de S. aureus. Muchas de las protenas de la superficie
recombinantes generado una respuesta inmune que proporcion una proteccin parcial contra la
enfermedad estafiloccica, con algunas protenas ms protector que otros. Sin embargo, en el
largo plazo, la inmunizacin con protenas de superficie individuales proporcion slo una
proteccin modesta. Una mezcla de las cuatro protenas que generan individualmente los
anticuerpos ms eficaces se utiliz para inmunizar ratones y se encontr que proteger
completamente contra el patgeno. El diseo experimental se asegur de que slo es comn, y no
la cepa especfica, se utilizaron protenas de superficie de S. aureus para inmunizar ratones. Por lo
tanto, no es sorprendente que la vacuna subunidad tetravalente que se desarroll era eficaz
contra cinco aislamientos clnicos diferentes (cepas) de S. aureus. Este trabajo representa un
importante primer paso en el desarrollo de una vacuna contra S-aureus.
Virus del Papiloma Humano
Virus del papiloma humano es el agente causante de muchas enfermedades de transmisin sexual
comunes. Si bien la mayora de estas infecciones son benignas y con frecuencia infeccin
asintomtica persistente con ciertas cepas del virus del papiloma humano se asocia con el
desarrollo de los cnceres de cuello uterino y afines, as como verrugas genitales. Dado que el
virus del papiloma humano tipo 16 se asocia con aproximadamente el 50% de los cnceres
cervicales, una vacuna que previene papiloma humano tipo 16 infeccin podra reducir
significativamente la incidencia de cncer de cuello uterino. Por otra parte, una vacuna que se
dirige contra varios tipos diferentes de papilomavirus humanos podra prevenir con eficacia casi
todos los cnceres de cuello uterino inducida por el virus del papiloma humano. Para poner esto
en perspectiva, el cncer cervical es el segundo cncer ms comnmente diagnosticado entre las
mujeres en todo el mundo, que representan ms de 250.000 muertes por ao.
En junio de 2006, la Food and Drug Administration de EE.UU. aprob una vacuna que protege a las
mujeres contra la infeccin por el virus del papiloma humano tipos 6, 11, 16, y 18, los tipos ms
frecuentemente asociados con el cncer cervical y las verrugas genitales. A finales de 2006, esta
vacuna ha sido aprobada para su uso en ms de 50 pases de todo el mundo. La vacuna, llamada
Gardasil, es tetravalente, es decir, contiene partculas similares a virus ensambladas a partir de la
mayor de la cpside (L1) las protenas de las mencionadas cuatro tipos de virus del papiloma
humano (Fig. 12.9 y 12.1 de la caja). Se ha demostrado previamente que la protena L1 puede
auto-ensamblan en partculas similares a virus que se asemejan a los viriones del virus del
papiloma, y estas partculas son altamente inmunognica, la induccin de anticuerpos
neutralizantes dirigidos contra el virus completo en vivo. El gen para la protena L1 de cada uno de
los cuatro tipos de virus se clon y expres en una cepa recombinante de Saccharomyces
cerevisiae (levadura). Despus de fermentaciones separadas de las cuatro cepas de levadura, las
protenas de la cpside virales ensambladas en partculas similares a virus (es decir, la cpside viral
sin otras protenas virales o el cido nucleico viral). Estas partculas similares a virus se purificaron
y se combinaron para formar la vacuna tetravalente.
Vacunas peptdicas
La pregunta que surge es si una pequea porcin discreta
(dominio) de una protena puede actuar como una vacuna
eficaz subunidad e inducir la produccin de anticuerpos
neutralizantes. Intuitivamente, sera de esperar que
solamente las porciones, o dominios, de una protena que
son accesibles a la unin del anticuerpo, es decir, aquellos
en la superficie exterior del virus, sera
inmunolgicamente importante y que los situados en
regiones inaccesibles dentro de la partcula de virus
podra ser ignorada si no contribuyen a la conformacin
del dominio inmunognico (Fig. 12.10). Si este argumento
tiene validez, es posible que los pptidos cortos que
imitan eptopos (determinantes antignicos) ser inmunognica y podra ser utilizado como
vacunas (vacunas de pptidos).
Sin embargo, hay ciertas limitaciones a la utilizacin de pptidos cortos como vacunas:
Para ser efectivo, un eptopo debe consistir en un corto tramo de aminocidos contiguos, lo que
no siempre se producen naturalmente.
El pptido debe ser capaz de asumir la misma conformacin que el eptopo en la partcula viral
intacta.
Un nico eptopo puede no ser suficientemente inmunognica.
Fiebre Aftosa
Eptopos antignico potencialmente solubles de VP1 del FMDV se identificaron a partir de la
estructura cristalogrfica de rayos X, y dominios de sntesis qumica de la protena se ensayaron
como vacunas de pptidos candidato. Los pptidos correspondientes a los aminocidos del 141 al
160, 151 al 160, y de 200 a 213, que se encuentra cerca del extremo C-terminal de VP1, y los
aminocidos 9 a 24, 17 a 32, y 25 a 41, que se encuentran cerca el extremo N-terminal de VP1,
fueron cada uno unido a una protena portadora inerte separado (hemocianina de lapa
californiana) y se inyecta en los conejillos de indias (fig. 12.11). Por lo general pptidos muy
pequeos son degradados rpidamente a menos que se unan a la superficie de una molcula
portadora ms grande. Una sola inoculacin con el pptido 141-160 suscit anticuerpos
suficientes para proteger a los animales frente a los problemas posteriores con la fiebre aftosa.
Por el contrario, la inoculacin con VP1 completa o pptido 9 a 24, 17 a 32, o 25 a 41 produjo
niveles ms bajos de anticuerpos neutralizantes.

En un experimento adicional, un pptido ms largo que consiste en cidos amino 141-158 se uni
a los aminocidos 200 a 213 por dos residuos de prolina provoc altos niveles de anticuerpos
neutralizantes en los conejillos de indias, incluso cuando se inyecta sin ninguna protena
portadora. Esta molcula "de dos pptido" fue ms eficaz que cualquiera de los pptidos
individuales por s solos y evit la proliferacin de virus de fiebre aftosa en ganado vacuno, as
como en los conejillos de indias.
Aunque estos resultados fueron prometedores, la cantidad (dosis) de material de pptido que
tena que ser utilizado para provocar una respuesta inmunolgica fue de aproximadamente 1000
veces la cantidad de virus de fiebre aftosa inactivada necesaria para provocar la misma respuesta.
Para superar este problema, el ADN que codifica el pptido de VP1 del FMDV 142-160 estaba
relacionado con el gen que codifica una molcula portadora altamente inmunognica, antgeno
del ncleo del virus de la hepatitis B (HBcAg). Cuando se expres el gen para esta protena de
fusin en E. coli o clulas animales en cultivo, la protena de molculas auto-ensamblada en
estables "partculas de 27 nm," con el pptido de VP1 del FMDV situada en la superficie exterior
de la partcula. Estas partculas son altamente inmunognica en animales de laboratorio. Por lo
tanto, el HBcAg puede ser una molcula portadora eficaz para tales pptidos sintticos cortos. Una
comparacin de las inmunogenicidades en conejillos de indias de una variedad de vacunas de
pptidos FMDV, todos los cuales contenan el pptido VP1 142-160 secuencia, revel que una
protena de fusin que contiene los aminocidos de HBcAg y de VP1 del FMDV 142-160 fue de
aproximadamente 1/10 como inmunognica partculas de virus de fiebre aftosa como inactivadas,
35 veces ms inmunognica que una protena de fusin que contiene E. coli -galactosidasa y
aminocidos de VP1 del FMDV 137 a 162, y 500 veces ms inmunognico que el pptido sinttico
libre de compuesto de los aminocidos 142 a 160. Debido a que los pptidos sintticos fusionados
a HBcAg no interfieran con el montaje de la 27-nm virus de la hepatitis B como partculas, y
porque estas partculas son casi tan inmunognica como el virus intacto del que se deriva el
pptido sinttico, este enfoque puede convertirse un mtodo general para el suministro de
vacunas de pptidos.