UNIVERSIDAD SANTO TOMS

SEDE OSORNO










INFORME NMERO


EXTRACCIN DE ADN VEGETAL









PAULA CORONADO GARCS
PROFESOR: ROBERTO SAAVEDRA
CARRERA DE ENFERMERA
OSORNO, CHILE
12 de Mayo del 2014









INTRODUCCIN

En el presente informe se emplear el mtodo de extraccin de ADN en clulas vegetales,
en este caso nuestro medio de observacin ser la espinaca.

Las plantas poseen pigmentos fotosintticos (clorofilas, carotenos, xantofilas, antocianinas,
etc.), en numerosas ocasiones uno de estos pigmentos es tan abundante que enmascara a los
dems y no se pueden observar. [1]
En esta prctico queremos extraer los pigmentos fotosintticos que se encuentra en la
espinaca y conseguir separarlos utilizando una tcnica sencilla que no lleva ms all de un
par de minutos.
ADN es la abreviatura del cido desoxirribonucleico (en ingls, DNA). Constituye el
material gentico de los organismos. Es el componente qumico primario de los
cromosomas y el material del que los genes estn formados.
El ADN fue identificado inicialmente en 1868 por Friedrich Miescher, bilogo suizo, en los
ncleos de las clulas del pus obtenidas de los vendajes quirrgicos desechados y en el
esperma del salmn. l llam a la sustancia nuclena, aunque no fue reconocida hasta 1943
gracias al experimento realizado por Oswald Avery.
La estructura del ADN es una pareja de largas cadenas de nucletidos. La estructura de
doble hlice del ADN fue descubierta en 1953 por James Watson y Francis Crick. Una
larga hebra de cido nucleico est enrollada alrededor de otra hebra formando un par
entrelazado. Dicha hlice mide 3,4 nm de paso de rosca y 2,37 nm de dimetro, y est
formada, en cada vuelta, por 10,4 pares de nucletidos enfrentados entre s por sus bases
nitrogenadas. [2]
Para estudiar el ADN e imprescindible aislarlo e identificarlo. Existen diferentes mtodos
de aislamiento, dependiendo de estudios de investigacin que se quiera realizar. Sin
embargo todos comparten el hecho de que, debido a que la molcula se encuentra al interior
de estructura membranosa y est asociada con protenas, se requiere usar sustancias


adecuadas para obtener adecuadas para obtener al ADN de la forma ms purificada posible
[3]
MATERIALES
- Alcohol 70
- Detergente lquido
- Ablandador de carne o jugo de pia, solucin lentes de contacto
- Gasa (colador)
- Licuadora
- Tubos de ensayo
- Recipiente (vaso pp 250 ml)
- Varilla de vidrio
- Porta objeto
- Cubre objeto
- Gotero
- Microscopio
- Matraz de Erlenmeyer
- Esptula

REACTIVOS

- H20
- Espinacas
- Sal
- Jugo de pia
- Azul de metileno
- Aceite de inmersin











MTODO

- Primero se procede a mezclar espinaca + H20 + sal, se deja reposando 15 segundos.
- Luego se cuela con una gasa.
- Agregar detergente lquido (2 cucharadas) y se tiene que depositar en el vaso pp,
luego revolverlo con una varilla de vidrio y se deja reposar 10 minutos.
- Despus se deposita en borde del tubo de ensayo la espinaca (1/3)
- se le aade jugo de pia tambin por el borde al tubo de ensayo y tiene que ser
agitado suavemente con la varilla de vidrio.
- Aadir alcohol por el borde del tubo de ensayo y se deja reposar para que el ADN
se desprenda los hilos gelatinosos que son el ADN.
- Luego se extrae el ADN (los filamentos) y se pone en el porta objeto.
- Colocar azul de metileno y se deja escurrir por el porta objeto.
- Despus aadirle una gota de agua destilada para que se le salga un poco la
coloracin.
- Luego hay que ponerle el cubre objeto.
- y se procede a observar la muestra en el microscopio ptico en 100x.
- Sacarle fotografas.
- Finalmente se analizan los resultados resultados.















RESULTADOS

Extraccin de ADN en vegetal, muestra en 100x con aceite de inmersin en microscopa
ptica.




















DISCUSIN
Como pudimos observar y luego comprobar los resultados de la muestra de ADN del
vegetal extrado, se logr establecer la funcin de cada uno de los reactantes que hicieron
posible la extraccin y que el ADN se desprendiera y se elevara. Entonces, Cmo es
posible que con objetos de uso cotidiano, tengan tal repercusin en un experimento de esta
magnitud? Primero se explicar cules son las funciones de cada elemto que hicieron
posible la extraccin del ADN.
Para qu se usa la sal en la extraccin de ADN?
En le extraccin de ADN se utiliza cloruro de sodio o acetato de sodio para que los iones
sodios (Na+) interaccionen con los grupos fosfato cargados negativamente del ADN. De
esta forma los fosfatos no interaccionan con las molculas de agua, ya que sus cargas
negativas son "bloqueadas" por el sodio y el ADN se vuelve ms insoluble, y as se
favorece su precipitacin.
Para qu se usa el jugo de pia en la extraccin de ADN?
La pia contiene una enzima conocida con el nombre de bromelina o bromelana. sta es
una enzima proteoltica, lo que quiere decir que es capaz de "romper" las protenas dejando
libres las unidades que las forman, los aminocidos.

Analizando lo expuesto anteriormente, se puede decir que se emplea en la extraccin del
material gentico porque contribuye a eliminar las protenas que puedan contaminar el
ADN de esta maneras puede obtener las fibras.











Para qu se usa el detergente en la extraccin de ADN?
Por lo general es SDS. Este detergente es un agente litico muy fuerte, "deshace" a las
paredes celulares. En este mtodo, el detergente contenido en el tampn de extraccin
provoca la lisis de la membrana. Dado que la composicin de los lpidos y el detergente es
similar, el componente de CTAB del tampn de extraccin captura lpidos que integran la
membrana celular nuclear. [4]


Figura 1. Ilustra el mecanismo de solubilizacin de los lpidos con un detergente


Figura 2. Rotura de la membrana celular y extraccin del ADN genmico.


Para qu se usa el alcohol en la extraccin de ADN?


La funcin del Alcohol es separar el ADN. El mismo no es soluble en etanol, y es muy
importante que el etanol que uses est fro. Lo puedes poner en un congelador o un freezer
que no se te va a congelar. Y bueno, lo que hace es precipitar el ADN. Si la extraccin
estuvo bien realizada y tienes un volumen grande de ADN vas a poder verlo a simple vista
como un ovillito blanco en el fondo del tubo. Lo mejor es agitar suavemente el tubo para
que lo veas moverse.
El alcohol te ayuda a purificar la muestra de ADN eliminando las protenas presentes al
solubilizarlas en la misma solucin de etanol, adems elimina impurezas orgnicas al
solubilizarse en el mismo por ser un compuesto orgnico el etanol.

En sntesis la extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas. En primer lugar
tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al
ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar
libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y
para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

La solucin de detergente lquido y sal ayudada por la accin de la licuadora es capaz de
romper la pared celular y las membranas plasmtica y nuclear.
El jugo de pia contiene un enzima, que contribuye a eliminar las protenas que puedan
contaminar el ADN.
El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se
encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. [2]















CONCLUSIN

A modo de conclusin se destaca la importancia de poder observar y analizar el mtodo de
extraccin de ADN.

La extraccin de ADN es un procedimiento importante de la biologa molecular. Por
definicin, es extraer ADN de cualquier tipo de clula con el propsito de analizarla. Entre
las mquinas utilizadas para extraer el ADN estn las "Batidoras", las cuales rompen las
clulas para acceder al ADN, el "Frasco de gel", el cual separa las secuencias de ADN en
un gel usando una carga elctrica, y la centrifugacin, la cual hace girar una solucin de
ADN y luego lo precipita (extrayndolo) utilizando sales. Una vez que se extrae el ADN, su
importancia se usa para numerosas funciones. [5]

Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulto que las fibrillas de ADN comenzaron a
elevarse del tubo de ensayo, de un color blanco precipitado por sobre el alcohol (mezcla
Heterognea.)

La calidad del ADN es crucial para la aplicacin exitosa de las tcnicas moleculares. El
material vegetal, en su especial condicin fisiolgica, y no tanto el protocolo que se utilice
va a determinar, en la mayora de los casos, la calidad del ADN.

Fue de suma relevancia poder observar la muestra en una clula vegetal ya que por tiempo,
es ms fcil llevar a cabo todo el proceso de extraccin de ADN en una espinaca. A
diferencia de las clulas vegetale entre el ADN de las plantas y los animales se encuentra
en la secuencia de bases en la hlice. Los compuestos que se encuentran en las clulas


vegetales estn ausentes en las clulas animales y las secuencias de bases de ADN
refleja esto, puesto que el ADN genmico de la planta es a menudo mayor que el ADN
de los animales. Estas diferencias afectan los mtodos de extraccin, ya que impacta en
el rendimiento y la pureza del ADN. [5]




REFERENCIAS BIBLIOGRICAS
S. Aldrige, 1999, El hilo de la vida de los genes a la ingeniera gentica, Pemasyelte, S.L,
Primera Edicin, Espaa, pp 1


REERENCIAS ELECTRNICAS

Extrado el 08 de Mayo de 2014 desde:

http://inakiresa.wordpress.com/tag/extraccion/ [1]

http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/la_ciencia_a_t
u_alcance_II/quimica/Experiencias_quimica_extraccion_de_adn.htm [2]


http://siladin.cch-
oriente.unam.mx/coord_area_cienc_exp/biologia/guiabioi/Extraccion_de_ADN.pdf [3]



http://gmo-
crl.jrc.ec.europa.eu/capacitybuilding/manuals/Manual%20ES/Sesi%C3%B3n4.pdf [4]


http://www.ehowenespanol.com/importante-extraccion-adn-lista_143344/ [5]