Problmatique Mthodologie Rsultats- Observations Conclusion

Comment se fait
l!intgration des
protines dans le
Rticulum
Endoplasmique ?

On synthtise un ADNc codant pour une protine
radioactive s!intgrant en temps normal dans le RE. On
fait 2 cultures.
On effectue une centrifugation. La protine est
marque la radiactivit. Comme le RE est
plus dense que le cytosol, il se situe dans le
culot, le cytosol dans le surnageant
Les protines sont incapables de s!intgrer dans
le RE aprs la n de leur traduction pour des
ribosomes libres. L!intgration dans la membrane
du RE pour des protines transmembranaires est
donc co-traductionnelle et ce par des ribosomes
associs la membrane du RE.
Comment se fait
l!intgration des
protines dans le
Rticulum
Endoplasmique ?
Culture A : On retire les rticulums de la cellule. On
enclenche la synthse protique par des ribosomes
libres, on rajoute les rticulums ensuite
La radioactivit se situe dans le surnageant
Les protines sont incapables de s!intgrer dans
le RE aprs la n de leur traduction pour des
ribosomes libres. L!intgration dans la membrane
du RE pour des protines transmembranaires est
donc co-traductionnelle et ce par des ribosomes
associs la membrane du RE.
Comment se fait
l!intgration des
protines dans le
Rticulum
Endoplasmique ?

Culture B : Culture tmoin, avec les rticulums. La
synthse s!effectue par des ribosomes associs au
rticulum (REG)
La radioactivit se situe dans le culot
Les protines sont incapables de s!intgrer dans
le RE aprs la n de leur traduction pour des
ribosomes libres. L!intgration dans la membrane
du RE pour des protines transmembranaires est
donc co-traductionnelle et ce par des ribosomes
associs la membrane du RE.
Est ce que les deux
protines ont la mme
structure, lorsqu!elles
sont synthtises en
prsence ou sans RE?
On rcupre les protines et on effectue une
lectrophorse sur PAGE-SDS qui permet une
migration en fonction de la taille seulement.
La protine cytosolique (Culture A) migre
moins loin que la protine synthtise avec le
RE (Culture B).
Ces deux protines ont cependant t
synthtises partir du mme ADNc, mais la
protine A est plus grosse.
La protine du RE a t mature par le RE. On
SUGGERE que les protines transmembranaires
contiennent un peptide signal cliv lors de
l!insertion co-traductionnelle.
Le peptide signal est-il
ncessaire l!intgration
dans le RE ?
In vitro, on supprime au niveau de l!ADN la squence
qui code pour le peptide signal. On effectue la
traduction en prsence du REG
Les protines synthtises restent cytosoliques Le peptide signal est donc ncessaire
l!intgration dans la membrane du RE.
Le peptide signal est-il
sufsant l!adressage co
traductionnelle?
On utilise l!ADNc de la GFP (protine non membranaire
qui ne possde donc aucune proprits pouvant l!aider
tre adresse dans le RE). On cre in vitro un
hybride avec un peptide signal.
La uorescence se situe dans le Rticulum et
non dans le cytoplasme
Le peptide signal est sufsant l!insertion co
traductionnelle.
Quelle est la diffrence
entre une protine
soluble dans le RE et une
protine insre dans la
membrane du RE?
On utilise notre GFP hybride soluble dans la lumire du
RE et une protine X dans la membrane du RE
Protine Soluble (GFP)
On compare 4 lectrophorres
a) La protine + RE seule
b) La protine + RE avec une peptidase seule
c) La protine + RE avec un dtergent seul
d) La protine + RE avec une peptidase + un dtergent
On observe pour les Exp a) et b) une protine
la mme hauteur. On met plusieurs
hypothse :
1) La peptidase est trop vieille et ne fonctionne
pas
2) La protine (GFP) est trs rsistante la
peptidase
3) La GFP se trouve enferme dans le RE et la
peptidase ne lui est pas accessible.
L!Exp c) donne le mme rsultat que les E a) et b)
le dtergent n!a donc pas d!action sur la GFP.
L!Exp d) ne rvle aucune trace de protines. Il y a
donc eu digestion par la peptidase de la GFP. Ceci
invalide les hypothses 1) et 2).
Le dtergent est ncessaire pour dtruire la
membrane plasmique et rendre accessible la
protase la GFP, compltement soluble dans la
lumire du RE.
Quelle est la diffrence
entre une protine
soluble dans le RE et une
protine insre dans la
membrane du RE?
Protine membranaire.
Mme protocole.
L!Exp b) rvle la prsence d!une protine plus
petite que dans l!E a)
Les protines membranaires sont intgres dans
la membrane du RE laissant une partie extra
rticulum.
Quelle est la diffrence
entre une protine
soluble dans le RE et une
protine insre dans la
membrane du RE?
Cela permet de dnir une deuxime squence qui implique l!arrt de transfert de la protine travers la membrane, c!est la squence stop transfert.
Conclusion : Les protines transmembranaires ont une squence signal et une squence stop transfert
Cela permet de dnir une deuxime squence qui implique l!arrt de transfert de la protine travers la membrane, c!est la squence stop transfert.
Conclusion : Les protines transmembranaires ont une squence signal et une squence stop transfert
Cela permet de dnir une deuxime squence qui implique l!arrt de transfert de la protine travers la membrane, c!est la squence stop transfert.
Conclusion : Les protines transmembranaires ont une squence signal et une squence stop transfert
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