FASE NORMAL: La cromatografa de fase normal o "Normal phase HPLC" (NP-HPLC)

fue el primer tipo de sistema HPLC utilizado en elcampo de la qumica, y se caracteriza

por separar los compuestos en base asu polaridad. Esta tcnica utiliza una fase
estacionaria polar y una fase mvilapolar, y se utiliza cuando el compuesto de inters
es bastante polar. Elcompuesto polar se asocia y es retenido por la fase estacionaria.
La fuerza deabsorcin aumenta a medida que aumenta la polaridad del compuesto y
lainteraccin entre el compuesto polar y la fase estacionaria polar (encomparacin a
la fase mvil) aumenta el tiempo de retencin.La fuerza deinteraccin no slo
depende de los grupos funcionales del compuesto deinters, sino tambin en factores
estericos de forma que los ismerosestructurales a menudo se pueden diferenciar el
uno del otro. La utilizacinde disolventes ms polares en la fase mvil disminuye el
tiempo de retencinde los compuestos mientras que los disolventes ms hidrofbicos
tienden aaumentar el tiempo de retencin.
La Cromatografa en Fase Reversa: Fundamentos: La cromatografa en fase reversa
(RPC) permite separar molculas en base a su polaridad. El principio de la
cromatografa en fase reversa es semejante al de la cromatografa en capa fina. Sin
embargo, aqu la fase estacionaria es de patculas de slica qumicamente modificadas
con hidrocarburos saturados, insaturados o aromticos de diferentes tipos. Esto
convierte a la fase estacionaria en una matrz apolar. Por lo tanto, para este tipo de
cromatografas se emplean mezclas de solventes polares, tales como agua,
acetonitrilo, acetato de etilo, acetona y alcoles alifticos. En virtud de lo anterior, este
tipo de cromatografa ha sido tambin llamada como cromatografa de interaccin
hidrofbica (HIC). En general, este ltimo trmino se ha empleado para referirse a las
aplicaciones en las que se emplean substituyentes y matrices compatibles con fluidos
biolgicos. Por tanto, el termino HIC es comn cuando se habla de purificacin de
protenas y carbohidratos, en tanto que RPC es ms empleado para referirse a la
separacin de molculas en sistemas que son inadecuados para la separacin de
macromolculas biolgicas. Las molculas se retienen en la columna en virtud de las
interacciones hidrofbicas que establecen con la slica modificada. Aunque, las
interacciones hidrofbicas son en general bastante dbiles, son tambin a menudo
muy numerosas y para elur las molculas es casi siempre necesario disminuir la
polaridad del disolvente; para ello se puede substituir el agua de la fase mvil con un
solvente orgnico cuya concentracin se va aumentando gradualmente. Debido a
diversas limitaciones prcticas de la cromatografa de capa fina en fase reversa, entre
las que destaca el costo de usar placas no reutilizables de una matrz difcil de
sintetizar, la cromatografa en fase reversa ha sido adaptada para el uso de columnas.
La versatilidad y eficiencia de este tipo de cromatografa se ha visto incrementada con
el uso de sistemas de alto desempeo (HPLC, del ingls "High Performance Liquid
Chromatography") que utilizan alta presin para mejorar la resolucin y reducir los
tiempos de separacin.
Los sistemas de alto desempeo pueden tambin emplearse en otros tipos de
cromatografas, de manera que para referirse a la cromatografa en fase reversa en
sistemas de alto desempeo se emplea la abreviatura HPLC-RPC.