CICLO DE VIDA DEL ENTOMONEMATODO NATIVO

Steinernema feltiae Filipj ev

Life cycle of native entomonematode Steinernema feltiae Filipjev
Adriana Senz' y J ess Emilio Luque-
RESUMEN
En el laboratorio deControl Biolgico de laFacultad deAgrono-
ma de laUniversidad Nacional, sede Bogot, seestudio labiolo-
gabsica del entomonemtodo nativo Steinernemafeltiae Filipjev,
1934(Rhabditida: Steinemematidae). Utilizando larvas deltimo
instar de la polilla mayor de las colmenas Galleria mellonella,
expuestas a 8000 juveniles infectivos/caja de petri y realizando
disecciones diariamente, sedeterminaron los estados de desarro-
llo, duracin del ciclo vida y relacin desexos del nemtodo nati-
vo. El ciclo de vida consiste de un estado de huevo, cuatro esta-
dosjuveniles y un estado adulto (macho y hembra); ste seinicia
con el estado de vida libre ojuvenil infectivo (13) y puede tener
dos vas. Si los nutrientes son suficientes y la densidad de 13
inicial esbaja, estos desarrollan losmachos yhembras delaprime-
ra generacin. Los huevos de estas hembras adultas eclosionan y
losjuveniles sedesarrollan hasta formar hembras y machos adul-
tos de la segunda generacin. Los huevos producidos por estas
hembras dan origen a los 13. Este ciclo corresponde al ciclo de
vida largo, que toma 10das a20C. Si los nutrientes son insufi-
cientes' los13desarrollan hembras ymachos adultos delaprimera
generacin y los huevos producidos por las hembras desarrollan
el estado juvenil infectivo. Este ciclo corresponde al ciclo devida
corto, que toma seis das a20C. Los nemtodos son tolerantes a
temperaturas de lOa 24"C. Larelacin desexos delaprimera gene-
racin est influida por latemperatura. Las hembras a 15C consti-
tuyen el 62% de lapoblacin, pero a30C corresponden al 43%.
Palabras claves: J uveniles infectivos, primera generacin, se-
gunda generacin, adultos, Galleria mellonella.
SUMMARY
The basic biology of the native entomonematode Steinernema
feltiae Filipjev, 1934(Rhabditida: Steinemematidae) was studied
at theLaboratory ofBiological Control which belongs toAgronomy
Faculty ofthe National University ofColombia. Larvae oflast urge
ofthe greater moth of Galleria mellonella, were exposed to 8000
infective / box. Dissections were done daily and developmental
stages, life cycle and ratio sexes were determinated for native
nematode. The life cycle consisted of six stages: egg term, four
juvenile periods and one adult stage. The last one period began at
infective juvenile 3(13). This onecould beintwo ways: Ifthere is
enough food and the initial density islow, themal eand female are
developed. Eggs fromfemale of first generation will develop males
and females for second generation. The 13 generation will be
produced fromfemale of second cycle. The last onecorrespond to
the long time cycle (lO days / 20C). Ifnutrients are low, 13cycle
develop female and males of the first generation. Eggs for this
cycle will bedevelop infective juvenile stage. This onewill bethe
short life(6days / 20C). Nematodes aretolerant to temperatures
between 10to 24C. Temperature about 15C will show 62% of
female, while 30C will correspond tothe43% offemale.
Key words: Infectives J uveniles, first generation, second
generation, adults, Galleria mellonella.
INTRODUCCION
Las especies que pertenecen al gnero Steinernema Travassos,
1927(=Neoaplectana Steiner, 1929) son patgenos obligados de
insectos. Presentan caractersticas que les son nicas, ya que, a
diferencia de otros Rhabditida, han desarrollado la habilidad de
presentar una asociacin mutualista con bacterias especficas del
gnero Xenorhabdus (Akhurst, 1993), lascuales facilitan lamuer-
te del hospedero y xito en la reproduccin de los nemtodos,
adems deresistir las defensas del hospedero y evitan ser recono-
cidos por el sistema de respuesta del insecto. Sin embargo, el
destino delabacteria enel hemocele vara con laespecie deinsec-
to y el estado fisiolgico del mismo (Dunphy y Thurston, 1990).
Tambin, tienen gran capacidad de adaptacin anuevos ambien-
tes y acondiciones adversas (Molyneux, 1985), presentan un am-
plio rango de hospedantes (Poinar, 1979); lacapacidad de actuar
en forma sinrgica con otros entomopatgenos incrementan su
eficacia y resaltan su potencialidad como biorreguladores depo-
blaciones de insectos perjudiciales (Koppenhofer y Kaya, 1997);
pueden ser cultivados in vivo e in vitro (Bedding, 1981-1984) Y los
estados infectivos pueden ser almacenados por largos perodos,
conservando sucapacidad infectiva y, posteriormente, ser aplica-
dos a travs de los mtodos convencionales empleados para in-
secticidas qumicos (Friedman, 1990).
El ciclo devida delasespecies del gnero Steinernema, descri-
toporGlaser (l932), Bovien (1937), Dutky(l974) yPoinar(l979),
consiste de un estado de huevo, cuatro estados juveniles y un
estado adulto (macho y hembra). El segundo estado juvenil (J 2)
puede ser el estado preinfectivo o el estado no preinfectivo y el
tercer estado juvenil puede ser el estado infectivo (13) o el estado
Biloga. Facultad de Agronoma, Universidad Nacional de Colombia. Bogot. E-mail: adrinemato@yupimail.com/adsaenz@poligran.edu.co
Profesor Asistente. Facultad de Agronoma, Universidad Nacional de Colombia. Bogot. E-mail: jluquez@usa.net
Agronoma Colombiana, 2000. 17: 17-24
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Agronoma Colombiana Vol. 17
no infectivo (IJ ). Generalmente ocurren dos generaciones en un
insecto hospedero. Kaya y Stock (1997) establecen que algunos
de los huevos producidos por la primera generacin de hembras
desarrollan J 3, pero lamayora de los huevos dan origen a lase-
gunda generacin de adultos. Los huevos producidos por la se-
gunda generacin de hembras se desarrollan en 13, los cuales
conservan lacutcula del segundo estado juvenil, que les confiere
resistencia a condiciones ambientales adversas (Stock, 1998).
Wouts (I980) establece que lapresencia de los estados juveniles
est condicionada por ladensidad de13que ingresan inicialmente
a un hospedero.
En Colombia, aunque no se han realizado estudios relaciona-
dos con labiologa bsica de entomonemtodos nativos, sepue-
dendestacar lostrabajos deCaicedo yBellotti (1996), Ortz (1994)
y Garzn et al. (1996), con especies que pertenecen al gnero
Steinernema, para el control de algunas plagas de inters nacio-
nal. Por ello, esta investigacin reporta el ciclo de vida del
entomonemtodo nativo Steinernema feltiae, adems de la des-
cripcin de los estados juveniles, influencia de latemperatura en
el ciclo devida y larelacin de sexos.
MATERIALES Y METODOS
El estudio serealiz enel laboratorio deControl Biolgico dela
Facultad deAgronoma delaUniversidad Nacional deColombia,
de Bogot, bajo condiciones de temperatura y humedad relativa
controladas.
Material Entomolgico
Se utiliz como insecto hospedero larvas de ltimo instar de
Gallera mellonella (L) (Lepidoptera: Pyralidae), criadas enlabo-
ratorio con dieta artificial (Garzn y Aza, 1994). Esta dieta est
compuesta por: harina demaz (400 gr), germen detrigo (160 gr),
levadura decerveza (IOOgr), leche enpolvo (50gr), miel deabejas
(16OmI),glicerina(l25rnl), agua(100ml)y formaldehdo (0,03%, mi).
Los ingredientes slidos y lquidos seprepararon por separado y
luego semezclaron hasta conseguir una pasta homognea que se
coloc dentro de una bolsa plstica y se aplan con un rodillo
hasta obtener un grosor de 0,5 cm. Se cortaron crculos de dieta
del mismo dimetro delabase delos frascos decra (bomboneras)
y secolocaron dentro de stos, junto con dos tiras que contenan
huevos, los frascos setaparon hermticamente y secolocaron en
cmaras decra auna temperatura de22C.
Obtencin del entomonemtodo nativo
Los 24.000 juveniles infectivos deS.feltiae, que seutilizaron
para los diferentes ensayos, se obtuvieron de las existencias de
almacenamiento del laboratorio decontrol biolgico de laFacul-
taddeAgronoma; los cuales seencontraban almacenados a 10C,
enrecipientes de20ml, quecontenan 2ml deagua destilada y 30(1
deTritonx100(Senz, 1998).
Ciclodevida del entomonemtodo nativo
Estudibs preliminares con Steinernemtidos (Wouts, 1980)
indican que cuando el suministro de nutrientes es limitado y
hay superpoblacin; los entomonemtodos tienen un ciclo de
vida corto (una generacin) y, cuando hay gran cantidad de
nutrientes, un ciclo normal o largo (2 generaciones). Para con-
firmar la presencia de los ciclos, se realizaron los siguientes
montajes:
A. Ciclo de vida largo. Se expusieron 50 larvas de G.
mel/onel/a por lOdas a8000 13, en cajas depetri (100xl5 mm)
a20C con papel filtro humedecido y sedisectaron diariamen-
te hasta cuando el ciclo de los entomonemtodos se comple-
t. Las larvas sedisectaron en cajas depetri de 60x 15mm cada
6y 12horas. El proceso de infeccin y diseccin se replic 10
veces para confirmar la presencia de cada estado de vida.
Adems, mediante las disecciones, se hicieron observacio-
nes sobre sitios de invasin, caractersticas de cada estado
de desarrollo y cambios morfolgicos durante el ciclo.
B. Ciclo de vida corto. Pedazos pequeos de tejido de
la larva (Lmm ') se colocaron en un pedazo de papel filtro
saturado de agua (l crn-) en una caja de petri de 60X15mm.
Dos hembras preadultas y dos machos adultos del
entomonemtodo, procedentes desde cualquiera de las lar-
vas, se transfirieron al tejido, adems, se adicionaron cua-
tro gotas de agua cerca al papel para asegurar la hume-
dad, se sellaron y mantuvieron a 20C. Este procedimiento
se replic 20 veces, las cajas se examinaron diariamente
hasta cumplidos siete das y se contaron los nemtodos
obtenidos.
Descripcin delos estados del ciclo devida del entomonemtodo
nativoSfeltiae
La descripcin morfolgica de cada estado se realiz con
montaje en placa (Stock, 1998). Los datos morfomtricos de
longitud total y ancho del cuerpo de cada estado se tomaron
con ayuda del ocular micromtrico del microscopio CARL-ZEISS
y los oculares 20 y 40X, respectivamente.
Influencia delatemperatura enel ciclo devida
Para establecer la influencia de la temperatura en el ciclo
de vida, se expusieron 50 larvas de G. mel/onel/a por caja de
petri (100x15 mm) a800013, para un total de 16cajas. Grupos
de dos cajas se colocaron atemperaturas de 10; 15; 20; 24; 30;
33; 35 y 37C. Despus de dos das, sedisectaron diariamente
tres larvas y los estados de vida se determinaron hasta com-
pletar el ciclo de vida.
Influencia delatemperatura enlarelacin desexosdelaprimera
generacin deadultos
Para determinar lainfluencia de latemperatura en el rango de
sexos hembras/machos, seexpusieron 10larvas de G. mellonella
a 8000 13 en cajas de petri (tres en total). Cada caja de petri se
coloc a 15, 24 y 30C. Despus de tres das, todas las larvas se
disectaron y el nmero dehembras y machos secontabiliz. Las
pruebas estadsticas consistieron deuna prueba deJ i-Cuadrado y
rango mltiple deDuncan, usando el programa SPSS.
RESULTADOS
Ciclo devida largo deSteinernema feltiae
Mediante las disecciones de las larvas inoculadas, se pudo com-
probar que el juvenil infectivo o 13devida libre aplicado alarvas
deltimo instar de G. mellonella invade atravs delaboca, ano y
espirculos penetra la pared del sistema digestivo y entra a la
cavidad corporal. Algunos 13seacumulan en lacpsula ceflica y
2000 Saenz y Luque: Ciclo de vida del entonemtodo ...
parte posterior del intestino. El 13, antes demudar al prximo esta-
dojuvenil, inicia sudesarrollo incrementando lalongitud total del
cuerpo y del estoma y despus quealcanza lacavidad corporal del
hospedero; esto toma en promedio ocho horas (Figura 1).
El ciclo devida deS.feltiae est compuesto deciclo largo (dos
generaciones) y ciclo corto (una generacin), pero esto depende
del nmero deJ 3que, inicialmente invade el hospedero y ladispo-
nibilidad de nutrientes para los estados de desarrollo, lo cual se
observa en el montaje de larvas y trozos de tejido. Este
entomonemtodo nativo presenta siete estados diferentes de de-
sarrollo: huevo, cuatro estados juveniles (11, 12, J 3 Y 14), separa-
dos por mudas y adultos de los dos sexos (machos y hembras).
Los cuatro estados juveniles son morfolgicamente distintos.
Diecisis horas despus de haber ingresado al hospedero, el
estoma del juvenil infectivo seabregradualmente, el esfago inclu-
yendo el bulbo basal, se expande y las glndulas excretoras
incrementan sutamao. La cmara bacterial, ubicada en laregin
anterior del intestino, contiene las clulas bacterianas de
Xenorhabdus bovienii que son liberadas, a travs del ano, en el
hemocele delaslarvas deG. mellonella. En lahemolinfa, lasbacte-
rias sepropagan y causan septicemia, lacual, en48horas, mata las
larvas delapolilla mayor delascolmenas, G. mellonella. Alcanzada
lacavidad corporal del hospedero, estejuvenil crece muy poco en
longitud pero dobla su ancho. A las 24 horas, mudan a 14 o
preadultos machos yhembras (esto seinicia con el rompimiento de
lacutcula posteriormente y el nemtodo empieza asalir, abando-
nando lacutcula vieja. (Figura 2). El ancho del cuerpo delos14se
incrementa ms rpido queenlongitud, hastaalcanzar casi el ancho
19
y lalongitud del adulto. Durante estetiempo, el dueto excretor llega
aser largo y sehaformado el sistema reproductor.
El 14muda formando laprimera generacin dehembras y ma-
chos jvenes entre las 48 y 60 horas despus de la inoculacin.
Inicialmente, ambos sexos son deigual tamao, pero las hembras
incrementan varias veces sulongitud, mientras que los machos lo
hacen aloancho. El apareamiento seinicia enel momento queuno
o dos machos estn cerca deuna hembra y uno deellos seenrolla
a ella e inserta la espcula por la vagina o, en algunas veces, en
zonas diferentes del cuerpo de lahembra hasta encontrar lavulva
y, finalmente, realizar lacpula. Al finalizar lacopula, el macho se
desenrolla delahembra y stapuede ser copulada por otro macho.
La mayora de las hembras expulsan los huevos; sin embargo al-
gunas hembras desarrolladas tardamente retienen en su cuerpo
los huevos (ovovivparas) y stos embargo, algunas hembras de-
sarrolladas tardamente eclosionan internamente, inicindose el
proceso de nutricin de los 11(Figura 3). De 12a 20 horas des-
pus, los 11rompen el cuerpo de lahembra y semueven entre el
hemocele del insecto. Los 11mudan a12y estos mudan aJ 3(juve-
nil infectivo), que retiene lacutcula del segundo estado juvenil, la
cual le sirve como proteccin (Figura 4). Otros 11sufren mudas
sucesivas a12, 13y 14y aparece lasegunda generacin deadultos
hembras y machos. Sin embargo, sto seve condicionado por la
disponibilidad de nutrientes y la densidad de la progenie de la
primera generacin, es decir, en un hospedero fresco y con una
densidad poblacional baja, sedesarrolla rpidamente el 14. Cuan-
do ladensidad de lapoblacin es alta y los nutrientes son insufi-
cientes, sedesarrollan los 12dando origen alos 13infectivos. Las
AMBIENTE
1J I 1IllAS I J )ETERIORAIJ O
~D=
~~~
,~~~
J 3 ENTRAN AL
HOSPEDERO
=
J 3 LOCALIZAN
LARVAS DE
Gallera mcllonclla
CICLO
D
I CICLO LARGO I
@0
SUFICIENTE
ALIMENTO
(ambiente fresco)
.~ 'NS:FlClENH
~ U ALIMENTO
f.:\ HOSPEDEROS
~ PEQUE~OS
n 11.21J IAS I
o
Figura /. Ciclos de vida largo y corto del nemtodo nativo Steinernema feltiae. H: hembra, M: macho, I G: primera generacin,
2G: segunda generacin "
\
20
Agronoma Colombiana Vol. 17
hembras se alimentan y viven cerca de cuatro a cinco das y los
machos viven de seis asiete das.
Losadultosdelasegunda generacin aparecen entrelas 120a130
horas y son mucho ms pequeos que los adultos de la primera
generacin. El ciclo de vida largo de Steinernema fe/tiae tiene una
duracin de 10das, en el cual se completan las dos generaciones
(Figura1).
Ciclo devida corto deSteinemema feltiae
En cuanto al ciclo corto, sepudo establecer que los 13apare-
cen al quinto da despus de colocadas las hembras preadultas y
los machos adultos en el tejido de lalarva, muchos 13estn pre-
sentes despus de6das (Figura 1). Adems, cerca del 99% son13
infectivos (30 cajas de las 40 replicas y todos los 13sonjuveniles
infectivos) y el 1%son13no infectivos (las 10cajas restantes, con
un 99%de13infectivos). Los 13producidos por el ciclo corto son
igualmente infectivos a larvas de G. mellonella, como son los
obtenidos por ciclo largo. La tasa reproductiva promedio de la
primera generacin dehembras deS.fe/tiae fuede 1537,7813 (n=40;
rango: 312-368013).
Descripcin delosestados del ciclo devida del entomonemtodo
nativo S.feltiae
Primer estado juvenil (J I): El J I emerge desde el huevo y son
transparentes y activos y, despus dealimentarse, acumulan reser-
vas y toman una apariencia oscura (Figura 5). La cutcula es lisa,
arnfidos y fasmidos noobservados, regin labial ligeramente cerra-
dayconseis labios. Estoma triangular, ceilostoma cambia detrans-
parente enjvenes aparcialmente oscuro enJ I prximos amudar a
J 2. Prostoma-telestoma en forma de embudo; esfago, isthmus y
bulbo basal distintivo. Poro excretor presente e incospicuo. Ano
distintivo. Cola cnica y con terminacin aguda, losJ I mudan aJ 2
aproximadamente 13 horas despus de salir del huevo. Los J I
Figura 2. Tercer Estado juvenil no Infectivo de la Primera Generacin
en proceso de muda.
Figura 3. Hembra de primera generacin del entomonemtodo nativo
Steinernema feltiae. a: primer estado juvenil (J I) en el tero; b: huevos.
disectados desde larvas de G. mel/one//a y colocados en agua
mueren sincompletar sudesarrollo. El rango de longitud va desde
225J .1ma250J .1myel ancho desde 17,5J .1ma27,5J .1m(n=10).
Segundo estado juvenil (J 2): Cutcula lisa, campos laterales
ausentes, fasmidos no sedistinguen fcilmente. Regin labial con
seis labios. Ceilostoma cerrado, protostoma-telostoma y esfago
presentes, isthmus distintivo, rodeado por el anillo nervioso, poro
excretor indistinto. Intestino oscuro y con reservas. Ano distinti-
vo, con labio posterior extendido. Cola gradualmente aguda ydel-
gada al terminar (Figura 6). La oscilacin de lalongitud es desde
450J .1ma580J .1myel ancho, desde42,5J .1ma57,5!lm (n=1O).Si losJ 2
se desarrollan bajo condiciones desfavorables (Figura 1), stos
pueden ser considerablemente pequeos o, si el alimento es sufi-
ciente, el J 2 sedesarrolla a13. Sinembargo, si el alimento es insu-
ficiente (hospederos pequeos, por ejemplo, Achroia grise//a y
Tecia so/anivora, Senz (1998)) o si los J 2 son removidos desde
una fuente de alimento, despus de 14horas el estoma se estre-
cha, el esfago se reduce en tamao y los J 2 llegan a ser J 2
preinfectivos, justamente antes demudar al tercer estado infectivo,
los cuales retienen lacutcula del segundo estado, lacual lesirve
Figura 4. J uvenil Infectivo del entomonemtodo nativo
Steinernema feltiae. a. Cuticula del segundo estado juvenil.
como proteccin. Los J 2 disectados desde larvas infectadas en
O,lml de agua y los fluidos del cuerpo, llegan a ser juveniles
infectivos entre 24y 36 horas.
Tercer estado juvenil noinfectivo (ij) delasegunda generacin:
El tamao del cuerpo esvariable, pero esms grande queel J 2dela
segunda generacin. Ellumen intestinal esprominente. Los IJ mu-
dan aJ 4aproximadamente alas 24 horas. El rango delongitud del
cuerpo esde740J .1ma900J .1myel ancho, de38J .1ma57J .1m(n=1O).
Tercer estado juvenil infectivo (J 3): Cuerpo delgado, agu-
do desde labase del esfago al extremo posterior. Cutcula con
anulacin transversa distintiva, claramente visible en desarro-
llos tempranos, cuando todava est rodeado por lacutcula del
J 2 y hasta finales del desarrollo, cuando reanuda el crecimiento
en un nuevo hospedero (Figura 4). Campos laterales con nueve
lneas laterales. Regin labial lisa, generalmente no cerrada.
Protostoma-telostoma en forma triangular anteriormente. Es-
fago largo y estrecho, con lumen ocupando de tl3 a 1/4 del
ancho del cuerpo, angosto a nivel del anillo nervioso, termi-
nando en el bulbo. Poro excretor distintivo, localizado anivel
de lamitad del esfago. Dueto excretor largo, glndula excretora
ventral y desplaza el bulbo basal y el extremo anterior del intes-
tino. Una bolsa bacterial encerrada por la pared intestinal e
inmediatamente debajo del Cardia. Lumen del intestino angos-
to o cerrado. Pared intestinal oscura y con glbulos. Recto
2000 Saenz y Luque: Ciclo d vida del entonemtodo ... 21
Figura 5. Primer Estado J uvenil (J 1) del entomonemtodo nativo
Steinernema feltiae.
Figura 6. Segundo Estado J uvenil (J2) del entomonemtodo nativo
Steinernema feltiae.
largo y angosto, ano distintivo. Cola cnica con terminacin
aguda. El rango de longitud del cuerpo es de 680llm a900llm y
el ancho, de241lm a341lm.
Cuarto estado juvenil 04) preadulto macho y hembra dela
primera y segunda generacin: Cutcula lisa, lneas laterales au-
sentes. Anfidos indistintos, ceilostoma triangular. Prostoma-
telostoma esclerotizado y en forma de embudo. Esfago ancho,
ocupa cerca de lamitad del ancho del cuerpo, procorpus hincha-
do, realzando el ithmus angosto, lurnentriradiado. Anillo nervioso
inmediatamente anterior al bulbobasal. BulboBasal piriforme. Poro
excretor anivel delamitaddel esfago, abierto, glndulas excretoras
grandes, desplazando el bulbo basal dorsalmente. Lumen del in-
testino ancho. Desarrollo del tracto genital. En los J 4hembras, se
observan losprimordios conspicuos delavulva y, enel J 4macho
los primordios de las espculas. Recto ancho, ano distintivo con
labios anales posteriores (Figura 7). Colaconsiderablemente corta
ms queenel 13. Excepto por losprimordios delosrganos sexua-
les y laforma de lacola, no hay caracteres que distingan J 4 ma-
chos y hembras. Adems, las dos generaciones son similares y
varannicamente enel tamao. Esteestado duraaproximadamen-
tede 12a24horas. El estado adulto del macho, puede ser recono-
cido por las espculas bien formadas, gubemaculum, gnadas y
mucrn enlacola del adulto (Figura 8). Lalongitud del cuerpo de
laprimera generacin deJ 4hembras vade2282.4llm a2853umyel
ancho, desde 120llma200llm (n=I O);enel J 4machos desde951um
a1014.4llmyancho, desde 70llm a80llm (n=10). Lalongitud dela
segunda generacin deJ 4hembras, desde 951uma 10461lm yan-
cho, desde 90llm a 1051lm (n=10); J 4machos, desde 900llm a950
umyancho, desde27,51lm a52,51lm (n=10).
Macho delaprimera generacin: Cutcula lisa, sinlneaslate-
rales; regin labial, estoma yesfago como enel preadulto, excep-
topor las glndulas excretoras queestn localizadas bajo el bulbo
basal y no estn desplazadas. Poro excretor distintivo, muy abier-
to, localizado anivel del procorpus. Testculos reflexos. Espculas
duras, amarillas ycon manubrio grande (Figura 9). Gubemaculum
amarillo, distalmente angosto, extremo proximal, usualmente, incli-
nado anteriormente y es, aproximadamente, lamitad mxima del
Figura 7. Cuarto estado J uvenil (J4) preadulto macho y hembra de la
primera generacin del entomonemtodo nativo.
ancho. Cola aguda, delgada y terminacin corporal en un fino
mucrn. Bursa ausente (Figura 8). Lalongitud vadesde 1085urna
1430llm yel ancho, desde 821lm a98(n=10).
Macho delasegunda generacin: estos machos sonsimilares
alosdelaprimera generacin, excepto queellos soncortos (780llm
a9951lm) y, aproximadamente, lamitaddeancho (451lm a58Ilm).
Hembra delaprimera generacin: Cutculalisa, lneaslaterales
ausentes. Regin labial, inicialmente, parecida aladel preadulto. En
he~bras grandes, lapapila labial s~incrementa entamao, laregin
labial y el estoma se ensanchan. Anfidos oscuros. Ceilostoma con
paredesesclerotizadas.Protostoma-telostomaaformadeembudo.Es-
fagocortoconrelacinal tamaodel cuerpo, similaral J 4. Bulbobasal
piriformeypequeo, encomparacinaotrosestadiosyconrelacinal
tamao del cuerpo. Poro excretor a nivel del procorpus. Glndulas
excretorasdesplazadas alaparteanterior del intestino. Tractogenital
pareados y reflexos. Utero y espermateca localizados ventralmente:
ovarioslocalizadosdorsalmenteyterminanventralmenteenfrentedeI~
mitaddel cuerpo. Labiosvulvares sobresalientes. Rectoyanodistinti-
Figura 8. Macho de primera Generacin del entomonemtodo nativo
Steinernema feltiae.
22 Agronoma Colombiana
Vol. 17
vos. Labioanal posterior, colaligeramentedelgada, cuerporedondeado
al final, con terminacin mucronada. La longitud corporal va desde
2658J lma5175J lmyelancho,desde 140J lma220.un(n=10).
Hembra delasegunda generacin: Estashembrassonsimilaresa
lasdelaprimerageneracin, exceptoquesonmspequeas: 1.800J lma
2.500.undelargoy80J lma119.undeancho.
Influenciade latemperatura enel ciclo devida: Latemperatura influy
enelciclodevidadeS.feltiae. A 1000C, laprimerageneracindehembrasy
machosaparece alosdocedasdeexpuestoel hospedero (Cuadro 1).Los
J I deesta generacinseencuentranalos 15das, embebidosenel tejido
graso ysumovimientoesmuylento.A los18das, el tamao dealgunos J I
Figura 9. Espculas de macho de primera generacin del entomonemtodo
nativo Steinernema feltiae.
(55%)noseincrementyestninmvilesymueren.EI45%restantemudan
aJ 2y, alos25das, aparece el 13. A esta temperatura,slo,sepresentel
ciclocorto(unageneracin)conunaduracinde25das.
A 15 C, losjuveniles infectivos desarrollan alos seis das, la
primera generacin demachos y hembras, no sonmuy activos y, a
los cinco das despus de expuesto el hospedero, aparece la se-
Cuadro l. Influencia de la temperatura en el ciclo de vida del nemtodo
nativo Steinernema feltiae.
DURACION EN DlAS
TEMP MUERTE lGA 2GA CICLO CICLO
oC LARVA+
. ..
CORTO LARGO
10 120 12 NP 25 NP
15 93 6 5 10 17
20 48 3 8 6 10
24 :26 I 5 5 8
30 24 NC NP NP NP
33 ----- NP NP NP NP
35 ----- NP NP NP NP
37 ----- NP NP NP NP
+Tiempo en horas. I GA: primera generacin de adultos. 2GA : segunda generacin adul-
tos. NP: no se present. Ne: no se complet.
gunda generacin de adultos y el J 3, a los 14das; sin embargo,
una alta produccin de stos aparece a los 17das, tiempo en el
cual finaliza el ciclo devida (Cuadro 1).
A 20 C, los 13, alos tres das deexpuestos al hospedero desa-
rrollan laprimera generacin deadultos. Lamayoria deestos adul-
tos estn en la parte anterior y media de las larvas. Despus de
cuatro das, las hembras de laprimera generacin han producido
huevos y mueren, pero unas pocas contienen J I, loscuales emergen
desde el cuerpo delas hembras y migran atodas partes delalarva.
Despus de seis das, aparecen los 13 (ciclo corto) y a los ocho
das los adultos de lasegunda generacin (Cuadro 1). Al noveno
da, los huevos producidos por la segunda generacin de hem-
bras sedesarrollan aJ I, ste muda aJ 2y, al dcimo da, sonabun-
dantes los J 3. A esta temperatura, el ciclo corto dura seis das y el
largo, diez das (Figura 1).
A 24 C, el J 3desarrolla laprimera generacin demachos adul-
tos en un da y hembras, en da y medio. Los J 3 (ciclo corto) y la
segunda generacin de adultos aparecen a los cinco das, sin em-
bargo, algunas deestas hembras contienen J l. Los huevos produ-
cidos por la segunda generacin de hembras llegan a ser J 3 en
ocho das. Cerca del 7% de larvas de G. mel/onel/a contiene un
nmero grande de adultos muertos. El ciclo de vida corto dura
cinco das y el largo, ocho das (Cuadro 1).
A 30 C, los 13ingresan enel hospedero y llegan aser machos
adultos, pero, slo, viven tres das. En cuanto a las hembras
preadultas, no sedesarrollaron aadultas y mueren en un da.
A las temperaturas de33, 35y 37 C, los nemtodos no alcan-
zan el estado J 4 y mueren y slo, en un 45% de las larvas se
encontraron juveniles infectivos internos.
Influencia delatemperatura enlarelacin desexosdelaprimera
generacin deadultos.
Deacuerdo con laprueba deJ i-Cuadrado, laoscilacin dehem-
bras y machos obtenidos en laprimera generacin son dependien-
tesdelatemperatura (X2=12,03; gl=2; P=9,21; (=O,OU. A 15oC, la
relacin hembras/machos fuede 1,6:l (22/13); a24C, de 1.8:1(8/4)
y, a30C, de 0,9: I (5/6) (Cuadro 2). Cuando las temperaturas se
incrementan desde 15a24C, el porcentaje dehembras permanece
constante (P<O,O 1), pero, cuando latemperatura seincrementa de
24a30C, el porcentaje dehembras decrece notablemente (P<O,O1).
Las observaciones realizadas, muestran que un macho puede co-
pular con ms deuna hembra y, por lotanto, una cantidad grande
dehembras a 15C (Cuadro 2) puede incrementar laproduccin de
juveniles infectivos. Sin embargo, al exponer hospederos con
nemtodos atemperaturas superiores de24C con este nemtodo,
sepresenta laposibilidad de obtener una cantidad grande de ma-
chos, locual imposibilita laobtencin y multiplicacin dejuveni-
les infectivos. As mismo, sepresentan diferencias significativas
encuanto al nmero dehembras/machos por larva a 15C, lomis-
mo que el porcentaje de hembras a 15-24C y el porcentaje de
machos a30C (Cuadro 2).
DISCUSION
Lahabilidad de losjuveniles infectivos para descubrir y pene-
trar el hospedero constituye el paso esencial en el ciclo devida de
Steinernemafe/tiae y, posiblemente estn condicionados por es-
tmulos decompuestos nitrogenados de los residuos fecales ypor
solventes orgnicos delacutcula de G. mel/onel/a. Esto lorepor-
taron Akhurst y Dunphy (1993), estableciendo que los juveniles
infectivos son atrados por cido rico, xantina, amonio y cido
orgnico. Otros factores que afectan lapenetracin son las defen-
sas comportamentales del hospedero, como laalta tasa dedefeca-
cin para reducir lainfeccin por el ano (Scarabeidae), bajo volu-
2000 Saenz y Luque: Ciclo de vida del entonemtodo ... 23
Cuadro 2. Nmero y porcentaje de hembras y machos de primera generacin
de Steinernema fe/tiae.
TEMP No. % No. %
Oc
HEMB HEMB MACH MACH
TOTAL
2221' 621l' 1311' 3811 3533
15
(3-63) (35-75) (1-32) (25-64) (4-95)
87
626* 43 386 1211
24e
(2-26) (54-74) (1-15) (26-45) (3-41)
30
0
e
55 4329 65
5629* 1210
(1-18) (8-100) (1-20) (26-100) (1-38)
Medias y desviaciones seguidas por * son significativamente diferentes, de acuerdo con
la prueba de rango multiple de Duncan =0,0 1).
men O liberacin deCO
2
(Lepidoptera), remocin delosjuveniles
de las partes bucales (Scarabeidae), entre otras.
El ciclo de vida del nemtodo nativo S. feltiae es similar al
descrito para otras especies de Steinernemtidos. Se presenta
ciclo corto (una generacin de adultos) y ciclo largo o normal
(dos generaciones de adultos). El ciclo de vida es dependiente
delatemperatura y no es completado aaltas temperaturas (30 a
37C), pues posiblemente afectan la produccin de esperma,
huevos o un cambio en el comportamierito de apareamiento de
los nemtodos. Para presentarse dos generaciones, la tempera-
tura ptima se encuentra entre 20 y 24C, Y este rango da la
probabilidad de que los nemtodos sobrevivan aclimas clidos.
Sinembargo, laduracin enmayor tiempo del ciclo devida (15C)
o, slo, el desarrollo del ciclo corto (10C) confirma laposibilidad
deutilizar este nemtodo en climas fros, yaque est adaptado a
estas condiciones. Adems, existen algunas similitudes en los
efectos de latemperatura en el ciclo devida del nemtodo nativo
y los reportados por Molyneux (1986), trabajando con S.feltiae.
Este autor establece que, a 10C, losjuveniles infectivos mudan
a14, pero mueren despus de cuatro semanas sin desarrollarse;
a 12C; unos pocos 13 emergen desde el 10% de los cadveres
infectados de G. mellonella despus de 10 semanas. A 28 Y
32C, slo laprimera generacin de adultos es producida en los
cadveres infectados. Por lo tanto, de acuerdo alas observacio-
nes dePoinar (1990), el nemtodo nativo sepuede establecer en
los rangos de temperatura que son favorables para el crecimien-
to y reproduccin de S. feltiae, no obstante, que el nemtodo
nativo es ms tolerante atemperaturas bajas que lacepa trabaja-
da por Molyneux. Adems, su ciclo de vida tiene una duracin
de ocho y diez das a las temperaturas ptimas para este ensayo.
Tambin S.feltiae presenta diferencias en tamaos entre los in-
dividuos, siendo laprimera generacin de mayor tamao que la
segunda.
El nmero promedio dehembras y machos delaprimera gene-
racin es de 35 individuos, producidos en larvas de G. mellonella
a 15e. Este nmero es, aproximadamente, dos y tres veces ms
queel nmero producido a24 y30C, respectivamente. Una razn
para el gran nmero dehembras y machos a 15Cpuede ser debida
a que los nemtodos han sido mantenidos a 8C y las larvas a
22e. Latemperatura de 15C disminuye laactividad delaslarvas,
pero incrementa la actividad de los nemtodos; de esta forma, a
una altacantidad de13ingresan alas larvas de G. mellonella. Esta
informacin puede ser til para producir grandes poblaciones de
juveniles infectivos en cultivo in vivo. Adems, si los 13almace-
nados a 8C y las larvas hospederos mntenidas a temperatura
ambiente, se colocan a 15C hasta cuando las larvas mueran y,
posteriormente, setransfieren a20 24C para el desarrollo delos
nemtodos, grandes cantidades de juveniles infectivos podrn
ser producidos.
En conclusin se puede sealar que:
Los atributos deSteinernemafeltiae, relacionados con el tiem-
po de generacin corto, ofrece posibilidades para su continua
manipulacin experimental ydedesarrollo demodelos deapli-
cacin en invernadero y en campo.
El ciclo devida deSteinernemafeltiae est relacionado direc-
tamente con lacantidad de alimento disponible, presentando
dos generaciones en Galleria mellon ella.
El nmero de infectivos producidos por un hospedero depen-
dedel tamao, especie, susceptibilidad ytiempo tomado por el
complejo nemtodolbacteria para ocasionar lamuerte del hos-
pedero.
Los resultados presentados son el punto de partida para el
desarrollo de metodologas de multiplicacin, pruebas de
patogenicidad en laboratorio y en campo con sta y otras es-
pecies de nemtodos.
Los entomonemtodos son un importante grupo de enemigos
naturales capaces de causar lamuerte o debilidad de una am-
plia gama de insectos hospedantes. Por ello, las investigacio-
nes basadas enlabiologa, ecologa, patogenicidad, entreotras,
y labsqueda de numerosas especies nativas ofrecern, atra-
vs de investigaciones futuras, una nueva alternativa para la
regulacin poblacional de insectos; pero, los nemtodos
entomopatgenos no pueden ser vistos como un componente
nico de manejo y, por el contrario, ellos pueden representar
una tctica en laserie deopciones biolgicas, qumicas y cul-
turales disponibles para el manejo deplagas.
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos a la Dra. P. Stock, curadora de la coleccin
nematolgica delaUCDA VIS, California, por sucontinua asesora
en el desarrollo deeste trabajo, y aCINDEC, por suapoyo econ-
mico para esta investigacin.
LITERATURA CITADA
AKHURST, R. Bacterial symbionts of entomopathogenic
nematodes - thepower behind the throne. En: Nematodes and
the Biological Control of Insect Pests. CSIRO. Publications.
Victoria, Australia. P. 127-135. 1993.
AKHURST, R. y G. DUNPHY. Tripartite Interactions between
Symbiotically Associated Entomopathogenic Bacteria,
Nematodes, and Their Insect Hosts. En: Parasites and
Pathogens ofInsects (Beckage,N., Thompson,S andFederici.B,
eds) Academic Press, INe. p. 1-23. 1993
BEDDING, R.A. Low cost in vitro mass production of
Neoaplectana and Heterorhabditis species (Nematoda) for
field control ofinsect pests. Nematologica 27: 109-114. 1981.
24 Agronoma Colombiana
Vol. 17
BEDDING, R.A. Large-scale production, storage and transport of
the insect parasitic nematodes Neoaplectana sp. and
Heterorhabditis.AnnAp.I.BioI.101: 117-l20.1984.
BOVIEN, P. Sorne types of association between nematodes and
insects. Videnskabelige Meddelelser fra Dansk Naturhistorisk.
Forening 101: 1-114. 1937.
CAICEDO, A.M y A. BELLOTTI. Reconocimiento de nemtodos
entomopatgenos nativos asociados con Cyrtomenus bergi
Froeschner (Hemiptera: Cydnidae) en ocho localidades de Co-
lombia. Revista Colombiana deEntomologa. 22( 1): 19-24. 1996.
DUNPHY, G.B. y G.S. THURSTON. Insect inmunity. En:
Entomopatogenic nematodes in biological control (Gaugler, R
and Kaya, H, eds). CRC Press, Boca Raton. Florida. p. 301-323.
1990.
DUTKY, S.R Nematode parasites. En: Proceedings ofthe summer
institute on biologica1 control of p1ant insects and diseases
(F.G. Maxwell and F. A. Harris, eds). J ackson. University press
ofMississip.i. p. 576-590. 1974.
FILIPJ EV, I.N. Eine newe art der gattung Neoaplectana Steiner
nebst Bemerkungen uber die systematishe sellung der 1etzteren.
Magasin de parasitologie de I'Institut zoologique des sciences
deL 'USSR. IV: 229-240.
FRIEDMAN, M. Commercial production and development. En
Entomopathogenic nematodes inbiological control (Gaugler, R y
Kaya, H, eds.). Boca Raton, Florida. CRe. Press. p. 153-172. 1990.
GARZON, M. y B. AZA .. Potencial del nemtodo (Steinernema
sp) para el control biolgico del gusano blanco de la papa
Premnotrypes vorax (Hust). Tesis Ing. Agrnomo Facultad de
Agronoma, Universidad Nacional de Colombia, Santaf de
Bogot.p. 1l0. 1994
GARZON, M., B. AZA, 1. J IMENEZ, y J . LUQUE. Potencial del
nemtodo Steinernema sp para el control biolgico del gusa-
no blanco de la papa. Revista Colombiana de Entomologa.
22(1): 25-30. 1996.
GLASER, R. Studies on Neoaplectana glaseri, anematode parasite
of the J apanese beetle (Popillia japonica). Circular No. 211.
State ofNew J ersey. Department of Agriculture. 1932.
KA Y A, H. Y P. STOCK. Manual ofTechniques inInsect Pathology
Techniques in insect Nematology. Academic Press. N.Y. p. 281-
324.1997.
KOP.ENHOFER, A.M; H. KA Y A. Additive and synergistic
interaction between entomopathogenic nematodes and
Bacillus thuringiensis for scarab grub control. Biological Con-
trol.8: 131-137.1997.
MOL YNEUX, A.C. Survival of infective juveniles of
Heterorhabditis sp. and Steinernema sp. (nema toda:
Rhabditida) at various temperatures and their subsequent
infectivity for insect. Rev. Nematol. 8: 165. 1985.
MOL YNEUX, A.C. Heterorhabditis sp and Steinernema
(=Neoaplectana) sp.: Temperature and aspects of behavior
and infectivity. Experimental Parasitology 62: 169-180. 1986.
ORTIZ, L. E. Control microbiano de Sagalassa valida Walker
(lepidoptera: Glyphipterigidae) con el nemtodo Steinernema,
carpocapsae en Turnad) (Nario). Tesis Ingeniero Agrnomo.
Universidad Nacional de Colombia. Facultad de Agronoma.
Santaf.de-Boget. p. 97. 1994.
POINAR, G. Nematodes for biological control of parasitism oflarvae
of the greater wax moth, Gallera mellonella. J ournal of
Nematol. 15:351-358. 1979
POINAR, G. Biology and Taxonomy of Steinernematidae and
Heterorhabditidae. En: Entomopathogenic Nematodes in
Biological Control. (Gaugler, R y Kaya, H, eds.). CRC Press
Boca Raton. p. 75-87. 1990.
SAENZ, A.A. Steinernemafeltiae cepa Villapinzn (Rhabditida:
Steinemematidae) ciclo de vida, patogenicidad y mtodos de
cra. Tesis Maestra en Ciencias Agrarias, rea de nfasis
Entomologa. Universidad Nacional de Colombia. Facultad de
Agronoma. Santaf de Bogot. p. 125. 1998.
STOCK, P. Sistemtica y Biologa de nemtodos parsitos y aso-
ciados ainsectos de importancia econmica. Universidad Na-
cional del Litoral, Esperanza. Santaf deArgentina. p. 100. 1998.
TRA V ASSOS, L. Sobre o genera Oxysomatium. Boletim Biologico
(SaoPaulo) 5: 20-21. 1927.
WOUTS, W. M. The Biology, life cycle and redescription of
Neoaplectana bibionis Bovien, 1937 (Nematoda:
Steinemematidae). 1. Nematol. 12:62-72. 1980.