Xochilt Yiset Garca Garca, Teresa Broca Crdova, Yesenia Kristell Lpez Velzquez, Mara Ignacia Palma Velzquez y Justo Ernesto Canch Hoil
UNIVERSIDAD POPULAR DE LA CHONTALPA. Laboratorio de Microbiologa Bsica
RESUMEN
La microbiologa es una rama de la biologa que estudia a los microorganismos en su medio en el cual estos son muy importantes en la vida der ser humano aunque a veces igual son portadores de algunas enfermedades que hacen que causen daos al ser humano y a otros organismos que los contenga, ms que nada analizaremos la importancia que nos brindan los microorganismos as como tambin su forma de reproduccin en diferentes medios de cultivo haciendo nfasis en los resultados de las practicas elaboradas durante la investigacin.
Palabras claves: Microorganismos, clula, bacterias, medios de cultivo, agar nutritivo
INTRODUCCION
La microbiologa es el estudio de los microorganismos y sus actividades, su forma, estructura, reproduccin, fisiologa, metabolismo e identificacin, como estn distribuidos en la naturaleza, sus relaciones con otros seres, los benficos o perjudiciales que ejercen sobre los humanos, y las alteraciones fsicas y qumicas que provocan en el medio .[1] Independientemente de la complejidad de un organismo, la clula es la verdadera unidad bsica de la vida. Todos los seres vivos tienen faculta de responder al medio que los rodea y con frecuencia a alterarlo. Las caractersticas principales de los microorganismos son: a) la capacidad de reproduccin. b) la faculta de ingerir y asimilar sustancias nutritivas y metabolizarlas para producir energa y desarrollarse. c) la capacidad de excretar productos de desecho. d) la facultad de reaccionar a cambios en su medio ambiente, llamada en ocasiones irritabilidad. [1] Los microorganismos tienen un mbito mas amplio de potencialidades fisiolgicas y bioqumicas que todos los dems organismos en total. Por ejemplo, algunas algas y bacterias son capaces de fijar nitrgeno atmosfrico para sintetizar protenas y otros compuestos orgnicos nitrogenados complejos. Otras especies requieren compuestos de nitrgeno inorgnico u orgnico como materia prima para elaborar sus constituyentes. Algunos microorganismos sintetizan todas sus vitaminas, en cambio otros necesarios que les sean suministradas. [1] Para aislar e identificar una especie bacteriana y diferenciarla de aquellas otras con que pudiera confundirse morfolgicamente, es preciso obtener cultivos que por caractersticas macro y microscpicas ,y debido al estudio de las propiedades biolgicas del microorganismo nos permiten establecer su identidad. Estos cultivos se lleva a cabo sobre sustratos ptimos para el desarrollo bacteriano. Un medio de cultivo esta constituido por sustancias generalmente complejas que posibilitan el crecimiento de las bacterias. El desarrollo de un microorganismo en un medio de cultivo depende de diversos factores entre los cuales los ms importantes son: disponibilidad de los elementos nutritivos necesarios, existencia del oxigeno requerido, temperatura de incubacin precisa (35.5 -37) y el grado de humedad apropiada. [2] Los microorganismos beneficiosos para el ser humano son aquellos que en el organismo de una persona previenen que los otros microorganismos patgenos crezcan, o algunas producen toxinas qumicas para prevenir la competicin del crecimiento microbiano. algunos microorganismos beneficiosos para el ser humano son los pro biticos, que son microbios vivos que pueden incluirse en la preparacin de una amplia gama de productos, incluyendo alimentos, medicamentos, y suplementos dietticos. [3] Sin embargo, otros son perjudiciales ,todos los virus ,asicomo algunas bacterias, protozoarios y hongos microscpicos son parasitos,se nutren a expensas de otros seres vivos causndoles perjuicios mas o menos graves. Algunos demestos microorganismos parasitan al hombre, a su gando o a sus cultivos causndoles enfermedades que se denominan infectocontagiosas por que se producen por invasin del organismo(infeccin) y se transmiten por contagio de unos individuos a otros . los microorganismos que causan estas enfermedades se denomina germenes o microbios patgenos. [4] El objetivo principal de esta prctica es que el alumno observe en el microscopio, las diferentes formas de vida de los microorganismos, haciendo nfasis en las bacterias, algas verdes, protozoarios y hongos tipo moho.
MATERIALES Y MTODOS
Para la colecta de microorganismos se tomaran en cuenta 3 tipos:
1.-Algas verdes y Protozoarios
a) Para la obtencin de algas verdes se debern tomar muestras de cualquier lago o laguna, as como de cualquier cuerpo de agua estancada donde se observe crecimiento de estos organismos. b) Para todos los casos se tendrn tres muestras de tres das diferentes de colecta. En el caso de un lago o laguna se tomar un frasco de cristal con una cuerda amarrada en la boca del frasco y se lanzar a la parte ms profunda que el alumno pueda alcanzar. c) Cuando haya tocado fondo se retira del lago, se le coloca su correspondiente tapa, se etiqueta y se guarda en el refrigerador. d) Al siguiente da se repite el procedimiento hasta tener la tercera muestra.
2.-Hongos tipo Mohos
a) Para tal caso debern colectarse Basiodiomecetes o Deuteromicetes en algn potrero, ya que estas especies crecen bien en el estircol del ganado vacuno. b) Pueden ser Zygomicetes como Rizophus nigricans, o cualquier otro tipo de hongo filamentosos.
3.-Bacterias
a) Para esto debern prepararse medios de cultivo. Esta prctica se llevo a cabo en el laboratorio de microbiologa Los materiales necesarios fueron una probeta graduada de 1000 mL; Vaso de precipitado de 500 mL; Matraz Erlenmeyer de 500 mL; 5 Cajas de Petri de plstico ya esterilizadas; Agar nutritivo; Plumn indeleble; Asa de inoculacin; Algodn; Papel Aluminio; Cinta Maskin tape; Parrilla Elctrica; 2 Agitadores Magnticos largos; Bata de laboratorio ,Balanza analtica o semianaltica; Agua destilada; Guantes de asbesto; Gasas; Mechero de Bunsen; Microscopio estereoscpico; Microscopio de Luz; Portaobjetos; Pipeta volumtrica de 1 mL; Navajas en forma de hojas o Bistur.
Preparacin del medio
a) Se preparar una caja de petri por cada alumno participante el da de la prctica. b) Debern leerse las instrucciones y conocer cuntos g se requieren para preparar 1 L de medio de cultivo a base de agar nutritivo. c) Por cada caja de Petri se requieren aproximadamente 15 mL, as que si por cada L se requieren X gramos, por Y cajas de Petri se prepararn Z gramos. d) Una vez calculados los mL se prepararn 100 mL extra. Esto quiere decir que si al final se necesitan 150 mL para 10 cajas Petri los mL totales sern 250 mL, lo cual es una compensacin por prdidas por evaporacin o derrames involuntarios. e) Tomar la cantidad pesada de agar nutritivo y disolverla en el matraz con la cantidad de agua necesaria, colocarla sobre la parrilla elctrica y calentarla hasta disolverla. Hay que observarla hasta que hierva y justo en el momento que alcance su punto de ebullicin retirarla de la parrilla para que no se derrame puesto que en caso que suceda hay que prepararlo de nuevo. f) Mientras hierve el medio se le agrega el agitador magntico para mejorar su disolucin. g) Colocar un tapn de algodn sobre el matraz que contiene el medio ya disuelto y cubrirlo con aluminio. h) Durante este transcurso se habrn lavado las cajas de Petri y escurrido durante ese tiempo. i) Tomar cada caja de Petri y envolverla con papel aluminio y junto con el matraz colocarlo dentro del Autoclave para esterilizarlo a 15 lb de presin a 121 C por 15 minutos. j) Esterilizados cajas y medio debern llevarse a la Campana de Flujo Laminar y antes de que alcance su punto de solidificacin vaciar en las cajas y rotularlas con el nombre del estudiante.
Siembra de bacterias
a) De las muestras de agua colectadas tomar una porcin con el asa de inoculacin y hacer la siembra en estras. b) En otras cajas de Petri, segn el alumno, soplar sobre el medio de cultivo. c) Tomar una muestra con el asa de inoculacin de mucosa bucal y nasal y hacer la siembra en estras. d) Tocar el medio de cultivo con la yema de los dedos en repetidas ocasiones.
Incubacin del medio
a) Dejar los medios en una estufa para su incubacin a 37 C por 10 das y observar el crecimiento posteriormente. b) Observacin de las algas verdes y protozoarios c) Tomar una muestra del agua colectada y colocarla en una caja de petri. Observar al microscopio estereoscpico. d) Tomar una muestra del agua colectada y colocarla en un portaobjetos y Observar al microscopio de luz. e) Tomar una muestra de los hongos estilo moho (zygomicetes principalmente) y observar al microscopio estereoscpico. f) Hacer cortes trasversales y longitudinales del las Setas y observar al microscopio. g) Dibujar lo visto en la lente de aumento.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Para la elaboracin de la prctica de observacin de mundo microscpico y tincin de gram, en el laboratorio se realizo el siguiente procedimiento: Cada alumno llevo una caja de petri de plstico esterilizada, las cuales se marcaron con sus respectivos nombres, grupo y carrera. Al realizar la prctica se tomo en cuenta que se necesitan 23 gr de agar para prepararse en un litro de agua y como tambin saber que para cada caja petri se necesitan aproximadamente 15 ml de agar nutritivo. Asi que para 30 cajas petri se prepararan 450 ml de agar nutritivo, y tomando en cuenta que se agregaran 100 ml mas de agua por perdidas de evaporacin o por algn derrame de agar nutritivo al depositarse en alguna caja petri. Tomando en cuenta los 450 y 100 ml de agua, en total se prepararan 550 ml de agar nutritivo, el cual necesito 12.66 gr de agar. Se prosigui a pesar un pedazo de aluminio el cual peso 0.8 gr para poder pesar los 12.66 gr de agar, una vez pesado este se deposito en un matraz de 1000 ml, para despus colocarla sobre la parrilla elctrica la cual al llegar a su disolucin total, alcanzo un color amarillo claro. Mientras se calentaba se le agrego un agitador magntico el cual sirvi para mejorar su disolucin, por tanto se espero a que el liquido alcanzara su punto de ebullicin e inmediatamente se retirara de la parrilla elctrica para que no se derramara. Mientras el agar nutritivo alcanzaba su punto de ebullicin se dejo a cargo a un compaero para que el agar nutritivo no se derramara, por lo que se aprovecho para la observacin de las algas verdes y protozoarios, el cual se tomaron muestras de aguas colectadas de diferentes lugares y se pusieron en cajas petri para su observacin al microscopio estereoscpico. Despus siguiendo con las muestras de aguas colectadas tambin se colocaron en porta objetos y se observaron al microscopio de luz. Por ltimo se tomo muestras de hongos estilo moho(zygomicetes) de un pedazo de pan y de tortilla, as como los cortes transversales y longitudinales de las setas de los hongos filamentosos, los cuales fueron observados al microscopio estereoscpico. Una vez bajado de la parrilla se coloco un tapn de algodn sobre el matraz y se dejo transcurrir el tiempo adecuado para que el agar nutritivo tuviese la temperatura adecuada (antes de que se solidificara) para vaciar en las 30 cajas petri. Despus de haber alcanzado la temperatura adecuada, se coloco el matraz con agar nutritivo cerca de un mechero para que al momento de que cada alumno al vaciar los 15 ml aproximados de agar nutritivo a cada caja petri, este no se contaminara con bacterias del medio. Despus de vaciar el agar a las cajas se espero a que el agar nutritivo de cada caja petri se solidificara y en seguida se tomo el asa de inoculacin para hacer estras de agua colectada, mucosa bucal y nasal. Algunos sembraron con la yema de los dedos, pero cada siembra fue a consideracin de cada alumno. Una vez terminada la siembra se juntaron todas las cajas petri, para ser envueltas en papel aluminio y se guardaron en una estufa para su incubacin a 37 C por 8 das para el crecimiento de bacterias y hongos. Pasados los 8 das se prosigui con la Tincin de Gram, en la cual se recogieron las muestras y solo sirvieron las que se llevo correctamente el crecimiento de hongos fue aceptable. En equipos se tomo una muestra de la siembra y se coloco en un porta objeto con extendido en espiral, dejando secar a temperatura ambiente, despus se fijo la muestra con metanol durante 1 minuto; enseguida se agrego azul violeta, se espero un minuto y se enjuago con agua. Despus se agrego Lugol el cual se espero 3 minutos. Pasado el tiempo indicado se decoloro con etanol y acetona hasta que no escurriera mas liquido azul, se dejo pasar entre 15 y 20 segundos para despus enjuagar con agua. Una vez enjuagado se hizo la tincin de contraste enjuagando safranina, la cual se dejo 2 minutos y el color del tinte fue de color rosado-rojizo el cual indico las bacterias Gram negativas, se enjuago nuevamente con agua. Por ltimo se observo al microscopio ptico a 4x, 1ox y 100x, en donde se pudieron observar diferentes tipos de bacterias. Con la realizacin de esta prctica aprendimos la forma de vida como son las bacterias, algas verdes ,protozoarios y hongos tipo moho. La utilidad de los medios de cultivo para la microbiologa es individualizar los distintos tipos de microorganismos presentes en una muestra. [5]
BIBLIOGRAFA
1 .-Microbiologa pelczar/reid/chan cuarta edicin Ed. mc grawhill capitulo 38 pg. 703). 2.-Microbiologia clnica practica P.Garcia, M.T Fernndez del barrio y F.Paredes salido 2 edicin. 3.- http://biologiamedica.blogspot.mx/2010/09/ microorganismos-beneficiosos-para-el.html 4.-FP de Grado Superior Biologa Juan Antonio Jaramillo Snchez. 5.- Microbiologa estomatologa, fundamentos y gua practica,2 edicin editorial panamericana.
EJEMPLO.
Garca, G. M., R. Quintero R. y A. Lpez M. 2004. Biotecnologa alimentaria. Editorial LIMUSA. 168 pg.