Qumica Biolgica 2010

Qumica Biolgica
TP 4 PROTEINAS ,
.
Introduccin

Las rot!nas son "iomol#culas $ormados or
%& L''amino(cidos distintos, unidos
lin!alm!nt! !ntr! s or !nlac!s !tdicos, !n
un n)m!ro *u! +ara !ntr! ,& a m(s d! -&&&.
Los amino(cidos como su nom"r! lo indica son
mol#culas *u! s! caract!ri.an or r!s!ntar, al
m!nos, un gruo (cido / un gruo amino.
0ormula g!n!ral d! un aminoacido
Los distintos amino(cidos s! di$!r!ncian !n la !structura d!l gruo R, !n la natural!.a d! dic1a cad!na
lat!ral s! "asa la clasi$icacin d! los aminoacidos. La r!s!ncia d! un gruo amino / otro (cido
d!t!rmina *u! los amino(cidos s! comort!n como "as!s o como (cidos d!!ndi!ndo !l 2 d!l m!dio.
El +alor d! 2 al cual !l amino(cido no ti!n! carga n!ta s! llama unto iso!l#ctrico 3I4, a +alor!s d!
2 5 I la mol#cula t!ndr( carga ositi+a mi!ntras *u! la carga s!r( n!gati+a si 2 6 I. La $orma
n!utra s! d!"! a la $ormacin d! una sal int!rna llamada 78itt!rion, !sto ocurr! or*u! !l rotn d!l
gruo car"o9ilo !s a"strado or !l gruo amino N2
%
*u! !st( !n osicin al$a / *u!dando !st! como
gruo amonio N2
:
;
El unto iso!l#ctrico d! las rot!nas !sta in$lu!nciado or las cad!nas lat!ral!s, /a *u! los gruos
aminos / acidos rincial!s artician !n !l !nlac! !tdico
Las rot!nas r!s!nta num!rosas $uncion!s< acti+idad !n.im(tica, d! transort!, 1ormonal, contr(ctil,
r!s!r+a !n!rg#tica, !structural!s !tc. S!g)n su con$ormacion nati+a las rot!inas u!d!n clasi$icars! !n
0i"rosas o =lo"ular!s<
Fibrosas:
' ticas !structuras s!cundarias, $ormadas or $i"ras ord!nadas a lo largo d! un !>!.
' insolu"l!s !n agua / !n solucion!s acuosas.
' gran r!sist!ncia $sica< accin m!c(nica 3!s*u!l!tos, transmisin d! !s$u!r.os4 o rot!ccin.
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E>< !scl!rotina, col(g!no, !lastina, *u!ratina.
Globulares:
' cad!nas l!gadas d! tal modo *u! toman $ormas !s$#ricas o glo"ular!s comactas 3!structura
t!rciaria4.
' solu"l!s !n agua o solucion!s acuosas.
' a!l!s mu/ din(micos !n !l organismo. P!rt!n!c!n a !sta cat!gora, las !n.imas, los anticu!ros,
algunas 1ormonas, las rot!nas con $uncin d! transort!, !tc.
Algunas rot!nas no s! !ncu!ntran claram!nt! !n ninguno d! !stos gruos d! clasi$icacin< or
!>!mlo, u!d!n r!s!ntar !structura d! tio $i"roso, !ro s!r solu"l!s !n solucion!s salinas, como las
glo"ular!s, *u! !s !l caso d! la miosina d!l m)sculo / !l $i"ring!no d!l lasma sangun!o.
S!g)n su comosicin *umica, las rot!nas u!d!n s!r<
Siml!s< su 1idrlisis roduc! slo amino(cidos, como la insulina o !l col(g!no.
?on>ugadas: su 1idrlisis roduc!, ad!m(s d! amino(cidos, otros comu!stos inorg(nicos u org(nicos,
clasi$ic(ndos! !ntonc!s !n<
Nucl!orot!nas.
0os$orot!nas.
=licorot!nas.
@!talorot!nas.
Liorot!nas.
Parte experimental
Objetivos:
' R!conoc!r distintos ag!nt!s d!snaturali.ant!s
' ?aract!ri.ar los amino(cidos d! la al")mina
' ?uanti$icar rot!nas solu"l!s !n distintas mu!stras "iolgicas
Desnaturalizacin
Es la modi$icacin *u! ocurr! !n la !structura nati+a d! una rot!na, alt!rando as sus roi!dad!s.
En+u!l+! alt!racion!s d! la !structura %A,:A / 4A d! las rot!nas. La !structura -A s! manti!n!. Las
alt!racion!s *u! s! o"s!r+an son disminucin d! la solu"ilidad /Bo #rdida d! la acti+idad "iolgica. La
disminucin d! la solu"ilidad u!d! s!r !9licada or la !9osicin d! radical!s 1idro$"icos *u!
!r>udican la int!raccin rot!na'agua / $a+or!c!n la int!raccin rot!na'rot!na. La $loculacin / la
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coagulacin son mani$!stacion!s +isi"l!s d! la alt!racin !structural causada or ag!nt!s
d!snaturali.ant!s.
Ag!nt!s d!snaturali.ant!s<
?alor< la agitacin t#rmica a$!cta las int!raccion!s *u! !sta"ili.an la !structura tridim!nsional d! las
rot!nas 3u!nt!s 2, int!raccin 1idro$"ica4
Ccidos< s! com"inan con rot!nas con carga ; $ormando coml!>os rot!natos insolu"l!s
Sal!s d! m!tal!s !sados< s! com"inan con rot!inas d! carga $ormando rot!inatos insolu"l!s.
Sol+!nt!s org(nicos< r!s!ntan ct! di!l#ctrica in$!rior al agua !ntonc!s la atraccin !ntr! cargas
ou!stas !s alta.3r!ciitacin4
Coagulacin
-. ?olocar !n un tu"o d! !nsa/o una !*u!Da cantidad d! clara d! 1u!+o / agr!gar igual cantidad d!
agua
%. ADadir E gotas d! (cido ac#tico.
:. R!!tir !n otro tu"o !l aso - / cal!ntar sua+!m!nt!.
4. O"s!r+ar ! int!rr!tar los r!sultados
Prueba e !ul"ato e amonio
Las rot!nas, como otros coloid! son r!ciitadas or solucion!s conc!ntradas d! sal!s d! amonio
FNa?l. 3N244
%
SO4 / NaSO
4
G. Aar!nt!m!nt! la r!ciitacin s! d!"! a la n!utrali.acin /
d!s1idratacin d! la mol#cula, s!guida d! agr!gacin / r!ciitacin.
-. Pon!r !n !l tu"o d! !nsa/o d! - ml d! al")mina d! 1u!+o
%. ADadir - ml d! solucin d! sul$ato d! amonio al ,&H.
:. @!.clar, d!>ar !n r!oso -& min. / o"s!r+ar la $ormacin d! r!ciitado.
Caracterizacin de aminocidos de la albmina
I!"ido a la r!s!ncia d! di$!r!nt!s amino(cidos !n las union!s !tdicas las rot!nas r!accionan con
una +ari!dad d! comu!stos $ormando roductos color!ados.
E9ist!n r!accion!s d! coloracin *u! son !s!c$icas ara amino(cidos d! !sas rot!nas / son
imortant!s tanto ara la d!t!ccin como ara !l doa>! d! amino(cidos / rot!nas.
E9ist!n tam"i#n r!accion!s g!n!ral!s or*u! sir+!n ara caract!ri.ar gruos comun!s a todas las
rot!nas como gruos amino o union!s !tdicas 3nin1idrina / "iur!t4
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R!accin Jantorot!ica
Es d!"ida a la $ormacin d! un comu!sto arom(tico nitrado d! color amarillo, cuando las rot!nas son
tratadas con (cido ntrico conc!ntrado. La ru!"a da r!sultado ositi+o !n a*u!llas rot!nas con
amino(cidos ortador!s d! gruos "!nc#nicos, tirosina, $!nilalanina, trito$ano. Kna +!. r!ali.ada la
ru!"a s! n!utrali.a con un (lcali / +ira a un color anaran>ado.
-. Pon!r !n !l tu"o d! !nsa/o d! % ml d! clara d! 1u!+o.
%. Agr!gar un +olum!n igual d! agua d!stilada.
:. ADadir - ml d! 2NO
:
conc!ntrado.
4. ?al!ntar al BaDo @ara a -&& ?
,. En$riar !n agua $ra
L. ADadir gota a gota una disolucin d! 2idr9ido d! sodio al 4&H.
R!accin d! amino(cidos a.u$rados
S! on! d! mani$i!sto or la $ormacin d! un r!ciitado n!gru.co d! sul$uro d! lomo. S! "asa !sta
r!accin !n la s!aracin m!diant! un (lcali, d!l a.u$r! d! los amino(cidos, !l cual al r!accionar con
una solucin d! ac!tato d! lomo, $orma !l sul$uro d! lomo.
-. Pon!r !n !l tu"o d! !nsa/o d! % ml d! clara d! 1u!+o.
%. Agr!gar un +olum!n igual d! agua d!stilada.
:. ADadir % ml d! solucin d! 1idr9ido sdico al %&H.
4. ADadir -& gotas d! solucin d! ac!tato d! lomo al ,H.
,. ?al!ntar !l tu"o 1asta !"ullicin.
Determinacin cuantitativa de protenas mediante el mtodo de Biuret.

Est! m#todo !s s!ncillo / su s!nsi"ilidad !st( d!ntro d! un rango d! conc!ntracin d!l ord!n d!
miligramos. Eml!a !l r!acti+o d! Biur!t< sul$ato d! co"r! !n m!dio alcalino. EITAB?u !n 1idr9ido
d! sodio. ?uando una rot!na s! on! !n contacto con un (lcali conc!ntrado, s! $orma una sustancia
coml!>a d!nominada biuret, *u! !n contacto con una solucin d! sul$ato c)rico da una coloracin
+iol!ta caract!rstica. La r!accion s! "asa !n la $ormacin d! un coml!>o a.ul d!"ido a la unin d!l
sul$ato d! co"r! !n m!dio alcalino con comu!stos con % o m(s union!s !tdicas.

?oml!>o Biur!t
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#ctiviaes
P!sar - g d! mat!rial "iolgico< 1gado, ollo / carn!. 2omog!n!i.arlo !n un Pott!r con -& ml d! agua
d!stilada. ?!ntri$ugar , minutos a :&&& rm. S!arar !l so"r!nadant!. 3mu!stra4
Blanco T!stigo Pro"l!ma
Agua d!stilada &,- ml '' ''
So"r!nadant! '' '' &,- ml
T!stigo : g H '' &,- ml ''
Biur!t : ml : ml : ml
Incu"ar :& minutos a t am"i!nt! / l!!r a ,4& nm, ll!+ando a & con !l tu"o "lanco.
?alcular la conc!ntracin d!l ro"l!ma !n g H d! rot!nas solu"l!s.
?alcular !l H B !n cada mat!rial "iolgico.
#ctiviaes complementarias
-. Indica la !structura d! los sigui!nt!s amino(cidos<
a. Kn AA "(sico
". Kn AA (cido
c. Kn AA N!utro no olar
d. Kn AA N!utro olar
%. I!$in! rot!na
:. Indica rot!nas *u! cumlan las sigui!nt!s $uncion!s<
a. ?ontr(ctil<
". Estructural
c. 2ormonal
d. Transort! intrac!lular
!. En.im(tica
4.I!$in! !structura -M, %M, :M / 4M