ALUMNOS: Juan CaniuCantillana

Ximena Glvez Gonzlez

Paulina Gatica Fernndez
Hernn Manque Armijo


PROFESOR(ES): Eduardo Albornoz Balmaceda
Gustavo Jimnez Alarcn
























27- Mayo - 2014

Fraccionamiento subcelular

ODONTOLOGA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
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INTRODUCCIN

La clula se define como la unidad fundamental de los seres vivos, poseen estructuras complejas que
realizan diversos procesos vitales, y que adems se reproducen, pueden nutrirse, crecer y morir, sin
embargo, la cantidad de clulas que existen no son iguales, y segn su estructura podemos
diferenciar clulas eucariontes de procariontes. (1)
Las clulas procariontes poseen una estructura muy sencilla, su lmite celular es la membrana
plasmtica y hacia dentro de esta se encuentra el citoplasma con el material gentico (ADN)
disperso, y que no presenta organelos. Los organismos procariontes son unicelulares (compuestos
solo por una clula), un ejemplo son las bacterias.
Por otro lado tenemos las clulas eucariontes, que tambin estn rodeadas por una membrana
plasmtica que las separa del medio externo, pero a diferencia de las clulas procariontes, en su
citoplasma poseen una serie de subdivisiones denominadas organelos que poseen formas y
funciones definidas, y su material gentico se encuentra al interior de un organelo al que llamamos
ncleo celular. Los organismos compuestos por estas clulas incluyen tanto seres unicelulares y
organismos pluricelulares.
Enfocamos este informe en el reconocimiento de organelos, tales como el ncleo, mitocondrias,
retculo endoplasmtico liso, retculo endoplasmtico rugoso, citoplasma, membrana plasmtica,
aparato de Golgi, ribosomas, peroxisomas, lisosomas, cloroplastos, citoesqueleto.
El hallazgo de estos organelos se debe principalmente a la existencia del microscopio, sin embargo
el inters de caracterizarlos por funcin, y composicin condujo al desarrollo de nuevas tcnicas,
una de ellas es el fraccionamiento subcelular, la cual se basa en la separacin de los distintos
organelos mediante ruptura de la clula y posterior centrifugacin, para que por medio de un campo
gravitacional, estos vayan separndose en relacin a su tamao y peso.
El siguiente trabajo tiene como finalidad los siguientes objetivos:
Comprender la tcnica de fraccionamiento subcelular por medio del rompimiento de la
clula.
Aprender sobre la separacin de organelos mediante un campo gravitacional
Reconocer las dos fases en un tubo al trmino de una centrifugacin.
Reconocer y distinguir el sobrenadante y el pellet


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MATERIALES Y MTODOS

En este prctico de laboratorio
En las actividades se usaron distintos mtodos:
ACTIVIDAD N1:
ACTIVIDAD N2: Procedimos a observar una muestra que se nos entreg la cual corresponda a
hgado de rata, esta fue observada en el microscopio con los objetivos 4, 10 y 40X. Finalmente
observamos con el objetivo 100X (tambin conocido como objetivo de inmersin), para poder
realizarla debimos adicionar aceite de inmersin a la muestra. Una vez finalizado el procedimiento
limpiamos el microscopio cuidadosamente con una papel especial absorbente embebido en xilol.


















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RESULTADOS
ACTIVIDAD N1:
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ACTIVIDAD N2: Cuando ya tenamos todos los materiales, comenzamos con la actividad.
Encendimos y preparamos el microscopio, ajustamos la muestra y comenzamos observando fijando
el objetivo menor, el cual corresponde al 4X y la imagen observada fue la siguiente:

Como se trata del primer objetivo, observamos una estructura no muy bien definida, donde se
aprecian las clulas teidas en conjunto, y algunas partes ms pequeas que llamaban la atencin por
su forma.
Luego observamos con el objetivo 10X

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Con este objetivo ya es mas fcil observar las clulas, estructuras que estas forman, y estpacios que
hay entre estas. Luego pasamos a observar con el aumento 40X:

Aqu se observaron las clulas que forman el hgado de rata con mayor claridad y, junto con ellas,
sus ncleos. Observamos la estructura que est en la foto (que en realidad no sabemos que
representa) que forma parte del hgado. Por ltimo aplicamos el aceite de inmersin a la muestra y
procedimos a observar con el aumento de inmersin o 100X.

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DISCUSIN

Ya con los registros de los resultados respectivos a cada muestra, debemos analizar los detalles de
cada actividad.
ACTIVIDAD N1: En la primera actividad luego del centrifugado, pudimos observar dos fases en
el tubo, una slida depositada en el fondo, la cual corresponde al pellet, y una lquida sobre este la
cual corresponde al sobrenadante. El pellet obtenido corresponde al ncleo de las clulas, debido a
que estos son los organelos ms grandes, y por ende son los primeros en decantar, debido a esto
podemos decir que el primer centrifugado corresponde a la fraccin nuclear, luego en el segundo
centrifugado obtuvimos los mismos resultados, solo con una degradacin de color en ambas fases,
en donde la materia que decant corresponde a las mitocondrias, lisosomas y peroxisomas, por lo
que podemos decir que corresponde a la fraccin mitocondrial, y al sobrenadante como fraccin
microsomal, ya que su contenido corresponda a la membrana plasmtica y retculo endoplasmtico,
debido a que estos son los ms pequeos de las clulas.
ACTIVIDAD N3: En la segunda actividad se observo la muestra de higado con los objetivos 4x y
10x,los cuales no se pudo obserbar ninguna estructura llamativa ,solo se ve una imagen morada.
en cambio en el objetivo 40x ya se pueden observar los nucleo con una distincion levemente morada
,ademas del citoplasma rosado ya que esta muestra esta teida con hematoxilina y eosina.
tambien en el objetivo 10x con aceite de inmersin en cual se observa con mas detalles los nucleos y
si se observa con mayor detalle se puede percatar de la cromatina desenrollada.






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CONCLUSIN

En sntesis podemos mencionar, que la identificacin de un fraccionamiento subcelular, permite
identificar los distintos organelos y la importancia de su existencia en la clula, debido a que estos
en general producen todas las reacciones dentro de la clula.
De manera general pudimos constatar que finalizada la actividad prctica, se pudo establecer un
anlisis acerca del fraccionamiento subcelular, y que el proceso de centrifugacin permite identificar
y diferenciar claramente el pellet del sobrenadante.
Como fue de esperar pudimos comprobar que con los conocimientos, estudios y posteriores
investigaciones al terminar el prctico, nos dio paso a la comprobacin de lo que anteriormente
habamos podido notar durante el laboratorio.
Pudimos comprobar que el fraccionamiento subcelular es una tcnica que nos permite obtener
diferenciadamente cada uno de los organelos celulares, los cuales poseen diferentes componentes,
los que reaccionan de distinta manera segn sea su metabolismo enzimtico.











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BIBLIOGRAFA

Introduccin a la biologa celular y molecular, Albert 2 Edicin