Facultad de Ciencias de la Salud

Departamento de ciencias biolgicas

Laboratorio de Biologa Celular














Integrantes : Nadine Arce
Catalina Hurtado
Estefany Lefin
Profesores : Mara Jos Daz
Jos Manuel Ugalde
Seccin : 9





Introduccin
Los valles y picos de las ondas coinciden cuando se encuentran en fase, es decir, cuando
estn siendo emitidas por una fuente coherente, aumentando su amplitud y brillo, por el
contrario , cuando se encuentran fuera de fase disminuye su brillo y amplitud .
La ondas de luz que pasan entre las sustancias se difractan causando cambios en la
trayectoria, esto hace que las relaciones de fases de alteren y produzcan interferencias en
el microscopio ptico comn, dando como resultado una imagen poco contrastada, es por
ello que las clulas al ser observadas en este mtodo deben teirse.
El estudio de la estructura, los movimientos y el comportamiento de las clulas en vivo,
bajo variadas condiciones experimentales, debiera ser una de las tcnicas fundamentales
de la citologa de la sangre. Y sin embargo, esta forma de examinar a las clulas ha sido
reemplazada por la evaluacin de clulas teidas de un frontis; un hecho que es explicado
por el uso comn de este mtodo para el diagnstico y el control del tratamiento.
Afortunadamente y sin embargo, hoy en da, los hematlogos se estn enfocando cada vez
ms hacia tcnicas de la citologa general. De estas tcnicas, la del examen de clulas vivas
es una de las ms importantes, particularmente desde el descubrimiento de nuevos
principios de microscopia (e.g contraste de fase y contraste de interferencia)(1)
Sin embargo no solo existe esta tcnica de microscopia, a lo largo del tiempo han surgido
nuevos mtodos, como lo es la microscopia de campo oscuro el cual utiliza una luz muy
intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El campo de visin
del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y slo recoge la luz que se
refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espcimen aparecen como un fondo
oscuro y los objetos minsculos que se estn analizando aparecen como una luz brillante
sobre el fondo. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos
transparentes y sin manchas, invisibles con iluminacin normal.
Otro mtodo es la microscopia de contraste de fase que se usa principalmente para
aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las clulas sin colorear. Es ideal
para especmenes delgados, o clulas aisladas. El microscopio de fase ilumina el
espcimen con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin
embargo en el microscopio de fase el cono de luz es ms estrecho y entra en el campo de
visin del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la
intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este
tipo de iluminacin provoca variaciones minsculas en el ndice de refraccin de un
espcimen transparente, hacindolo visible. Este tipo de microscopio es muy til a la hora
de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biologa y medicina.(2)
Adems el constante avance de la microscopia, nos permite poder conocer el tipo y
caractersticas de las clulas presentes en la sangre e incluso el nmero de partculas por
unidad de volumen, a travs de la llamada cmara de Neubauer.
El avance del tiempo y los nuevos inventos, nos permiten hoy hacer visible lo invisible.
Objetivos:
El propsito de este laboratorio es poder analizar una muestra por medio de la
microscopia de campo oscuro. Por otro lado realizaremos un recuento de clulas, de una
muestra de sangre diluida, utilizando la cmara de Neubauer. Y por ltimo trataremos de
medir el tamao de las clulas de la muestra. Adems de aprender a manejar cada uno de
estos mtodos en la microscopia.


















Materiales
Entre los materiales que utilizamos se encuentra el microscopio olympus Cx21 como
material fundamental del experimento, tambin ocupamos una muestra fresca de sangre,
un trozo redondeado de cartulina negra (cmara oscura), muestra fresca de sangre diluida
y la cmara de NEUBAUER (ocupada para la contabilidad de glbulos rojos) y un
microscopio con reglillas en el ocular izquierdo (utilizado para medir el tamao de los
eritrocitos).
Mtodos
-En el primer experimento ocupamos el microscopio colocando una muestra de sangre
fresca que nos facilit la profesora, primeramente observamos la muestras en las
resoluciones 4x, 10x y 40x a campo claro (en esta ocasin lo logramos observar nada),
posteriormente ocupamos la cartulina negra la cual colocamos en la luz del microscopio
movindola para lograr observar los eritrocitos, estos los observamos en las resoluciones
4x, 10x y 40x, fotografiando lo observado.
-En el segundo experimento nuestros compaeros de seccin junto con la gua de los
profesores calibraron la reglilla, los cuales elaboraron una tabla de conversin y colocando
una muestra para la utilizacin del microscopio. Despus nosotras observamos los
eritrocitos (15 eritrocitos) midindolos y anotndolos para despus sacar un promedio de
medidas de eritrocitos.
-En el tercer experimento se nos entreg una suspensin de eritrocitos () que se
mont en la cmara de NEUBAUER, est la colocamos en el microscopio esperando un
lapso de tiempo para que la muestra se sedimentara, enfocamos el microscopio con la
cmara oscura empezando desde el aumento 4x hasta llega a 10x y localizamos los
cuadrados que necesitamos para el conteo, de estos valores sacamos un promedio.









Cul es la diferencia en la observacin con el microscopio de campo claro y el de campo
oscuro? Cul es el efecto obtenido? Describa este cambio observado en el objetivo 40x.


Al mirar en campo claro no se puede divisar nada por la luz en cambio en el campo oscuro
se divisan los eritrocitos de la muestra, Por qu? Debido a que el contraste con el cartn
negro que hace que la muestra oscurezca pero a cierto nivel que permita que la luz pose
en la muestra y se puedan divisar los eritrocitos que se iluminan.
En la observacin de 40x se ven los eritrocitos en mayor tamao para ser ms visible al ojo
y con el contraste que en otros aumentos se vean como crculos blancos bien iluminados
en 40x se ven como grupos de eritrocitos como si fuesen grupos de huevos.



B- Para determinar el tamao celular promedio de un glbulo rojo (eritrocito) se midi
15 diferentes eritrocitos para sacar el promedio


Para eso en el enfoque del microscopio se divisaba una reglilla dividida en 100 sin
medicin



Datos:

1,5
unidades
2 unidades 3,5
unidades
3 unidades 1,5
unidades
4 unidades 1,5
unidades
2 unidades 1,5
unidades
3 unidades
2,5
unidades
3 unidades 2 unidades 2,5
unidades
2,5
unidades












n unidades coeficiente formula
resultado
micrmetro
1 1,5 3,33 1,5*3,33 4,995
2 2 3,33 2*3,33 6,66
3 3,5 3,33 3,5*3,33 11,655
4 3 3,33 3*3,33 9,99
5 1,5 3,33 1,5*3,33 4,995
6 4 3,33 4*3,33 13,32
7 1,5 3,33 1,5*3,33 4,995
8 2 3,33 2*3,33 6,66
9 1,5 3,33 1,5*3,33 4,995
10 3 3,33 3*3,33 9,99
11 2,5 3,33 2,5*3,33 8,325
12 3 3,33 3*3,33 9,99
13 2 3,33 2*3,33 6,66
14 2,5 3,33 2,5*3,33 8,325
15 2,5 3,33 2,5*3,33 8,325


promedio unidades


2,4



promedio resultado


7,992 micrmetro







C- Determinar cantidad de clulas.


Cantidad de clulas por cuadro









A B

C

D E
posicin cantidad
A 74
B 65
C 73
D 71
E 79
Promedio 72,4





72,4 uL ------ 1000ml = 72400ml Esta sera la cantidad si se ocupara la referencia de
que
1 uL 1000ml corresponden a 1ul


En nuestro caso se ocup 500ml 0.9% suero fisiolgico

Como 1000m corresponden a 1 ul, 500ml es:

1000 ml 1 ul
500 ml x ul
x= 0.5 ul


En 500ml 0.9% suero fisiolgico

72,4 uL ---- 500ml = 72400ml
0.5 uL













Conclusin
En la bsqueda de la vida el hombre quiso conocer lo que compona la vida humana, inicindose
en la microscopia, en el cual el hombre creo un instrumento, el microscopio el que permito
explorar ms a fondo diversos tipos de organismos.
Luego de realizar el laboratorio como grupo logramos conocer cmo eran los glbulos rojos, y
poder imaginar la cantidad de glbulos rojos que hay en el cuerpo, sabiendo que nuestra muestra
corresponda a una muestra diluida. Esto lo llevamos a cabo gracias a la utilizacin de la cmara de
NEUBAUER que permite dar un conteo ms exacto. Dicho esto se puede inferir que el cuerpo esta
inmerso en una gran cantidad de glbulos rojos con diferentes medidas.
Gracias a este trabajo logramos conocer nuevas tcnicas de visualizacin de muestras en el
microscopio y la utilizacin de las muestras.
















Referencias
1) Bessis M: In Living Blood Cells and Third Ultrastructure . Ed RI Weed. New York: Springer-
Verlag, 1973
2) http://www.ipb.csic.es/