_____________________________________________________

1)
LaborChemie Wien, A-1230, Kanitzgasse 21,
Sedimentationszentrifuge zur Grenanalyse von Nanopartikeln
aus: Fortschrittsberichte der DKG; Bd. 20 (2006) Heft 1; Erlangen, November 2006
M. Missbach
1)


Summary: Various measuring techniques for particle size in the low micron and nanometer
range exist. Most of them are based on light scattering principles. The only method to get
absolute size results that do not involve any assumptions in the interpretation of the raw data are
microscopy (yielding dry particle diameters) and sedimentation methods using X-ray detection
sources but that like most others give the hydrodynamic diameter.
Whilst standard sedimentation equipment due to the long time involved in the settling of small
particles is limited to larger diameters, the centrifuges due to high reachable G-forces allow to
use this principle for particles down to around 10nm. Many operating parameters including
choice of different spin fluids. Thus an enourmous size range for the same sample may be
covered (e.g. from a few tens of nm to a few tens of microns) as runs on the same sample with
different speeds can be merged into one result.

Vorerst ein berblick ber die verschiedenen Techniken, um mit den Unterschieden auch die
Vor- und Nachteile der einzelnen Verfahren herausarbeiten zu knnen:

1 Mglichkeiten zur Partikelgrenmessung (nm und unterer m Bereich)
Prinzipiell ist anzumerken, dass alle Methoden eine gewisse Probenvorbereitung
bentigen; Suspendierung, Stabilisierung mit Netzmittel,

2 Eigenschaften, Vorteile, Limitierungen der Methoden

Einerseits Bestimmung des Trockendurchmessers (Mikroskop, Elektronenmikroskop);
geben Auskunft ber die Form der Partikel; Werte nicht unbedingt mit anderen Verfahren
vergleichbar. Wenn eine reprsentative Aussage erforderlich ist, muss eine grere
Population vermessen werden, was zeitaufwendig ist.

Andererseits: Systeme, die den hydrodynamischer Durchmesser erfassen:
Einzelpartikel (Zhler) z.B. Coulter Counter oder
"ensemble averaging techniques", groe Populationen werden statistisch vermessen
Laserlichtstreuung, Fraunhofersysteme
Messbereich eigentlich nach unten durch Laserlichtwellenlnge begrenzt;
Daher Extrapolation nach unten in den Bereich der Mie-Streuung mit
begleitenden Schwierigkeiten (Stichwort: Imaginranteil der Brechung). Bei
multimodalen Verteilungen daher sehr viel Mathematik involviert (Annahmen zur
Auswahl der Modelle mssen getroffen werden, was Werte unsicher macht).
Ultraschall-Elektrokinetik
Vorteil: auch hhere Konzentrationen, wie sie in der Produktion anfallen, knnen
gemessen werden. Allerdings mssen auch hier Modellannahmen getroffen
werden, um richtige Ergebnisse zu erhalten.
Feld-Fluss-Fraktionierung (FFF)
Chromatographisches System, eher fr Molmassen geeignet, hoher
Instrumenteller Aufwand wegen des Zustzlichen Detektors
Sterische Exklusions-Chromatographie (SEC/GPC)
Es gilt hnliches wie fr die FFF Methode.
Dynamische Lichtstreuung, Photokorrelationsspektroskopie
Messung nur in sehr hohen Verdnnungen mglich. Resultate rasch Verfgbar;
ber die Interpretation der Korrelationskurve in Partikelgren mssen
Annahmen getroffen werden (z.B. ob monomodal oder multimodales Ergebnis
erwartet wird) Bei Rckstreugerten, die eine hhere Konzentration erlauben,
sind grere Partikel (> 1 schwer erfassbar)
Statische Lichtstreuung (MALLS oder Goniometer)
Rasch arbeitend, Informationen ber Partikel (Mie-Streuung) erforderlich bzw.
mssen kalibriert werden.
Sedimentation/Zentrifugalsedimentation
Absolutmessung des hydrodynamischen Durchmessers mglich, Messzeiten
knnen etwas lnger dauern (Minuten bis Stunden); Reine
Sedimentationsgerte teuer und nur fr Partikel >1 praktikabel (abhngig von
den Partikeleigenschaften). Aber es gibt Kombigerte.

3 Zentrifugen: Prinzip - Typen - Vor- und Nachteile
Hauptvorteil: "Sedimentationsmessung ist eine Absolutmessung". Dabei bedeutet der
Begriff "Absolutmessung", dass zur Berechnung der Partikelgre aus dem
Messresultat nur eindeutig bestimmbare oder bekannte physikalische Werte
herangezogen werden. Keinerlei Annahmen oder Berechnungsmodelle sind
anzuwenden, das Messsystem muss nicht kalibriert oder einjustiert werden.
Grundstzlich werden Zentrifugen eingesetzt, bei denen sich die Probe im inneren
einer Hohlscheibe absetzt, mit einem Detektorsystem wird das Signal durch die
Scheibe hindurch erfasst.
Stokes Gesetz (gltig fr laminare Strmung whrend der Sedimentation)
18
f
ln ( r
i
/ S )
f
Viskositt der Flssigkeit
D
m
2
= ----------------------------------------- r
i
radiale Position des Messstrahles

2
(
p

f
) * t
i
S radiale Position der Oberflche
t
i
Messzeit
Winkelgeschwindigkeit d. Scheibe

p
Dichte der Partikel

f
Dichte des flssigen Mediums
Dieses Gesetz ursprnglich aufgestellt fr die Sedimentation unter Gravitationskraft -
kann fr Partikelsedimentation in einer Zentrifuge erweitert werden: es ergibt sich damit
die Zeit t, die ein Partikel mit dem Durchmesser D und der Dichte bentigt, um die
radiale Distanz S zur Position r des Detektors zu wandern.


In dieser Formel sind im Gltigkeitsbereich des Stokes` Gesetzes alle Parameter
eindeutig messbar, es mssen keine Annahmen getroffen werden wie gesagt: eine
Absolutmessung! Dies natrlich nur, solange alle diese Parameter whrend der
kompletten Messung konstant gehalten werden. Es ist keine Eichung des
Messvorganges erforderlich bzw. mglich. Werden aber Parameter whrend der
Messung verndert (wie z.B. die Drehzahl) oder sind sie nicht konstant (wie bei Einsatz
eines deutlichen, mehrstufigen Gradienten), dann ist dieser Vorteil verloren auch wenn
die Verteilungen enger erscheinen. Es muss geeicht werden oft mit Substanzen, die
nicht dieselben Eigenschaften haben, wie die Proben was einen zustzlichen
Unsicherheitsfaktor ergibt. Da aufgrund der vorerst unbekannten Gre nicht
vorausberechnet werden kann, wo sich ein Partikel befindet, sind auch die wirkenden
Krfte nicht berechenbar.

Enorm groer Messbereich (von unter 10nm bis zu ber 100m, je nach
Probentype), wobei der Bereich nach unten durch mgliche Rckdiffusion und nach
oben durch die Bedingung der laminaren Sedimentation limitiert ist.
Proben mit groem Unterschied in der Partikelgre durch Kombination (Merging)
von zwei Messlufen erfassbar.
Nachteile: lngere Messzeit, Mie-Korrektur (nur bei Lichtzentrifuge)
Etwas greres Probenvolumen erforderlich (10 bis 20ml)

4 Die zwei Zentrifugentypen nach der Art der Detektion:

Lichtzentrifugen (z.B. Brookhaven DCP)
Die Detektion erfolgt mittels eines Lichtstrahles
Rntgenzentrifugen (Brookhaven XDC)
Die Erfassung der Partikel erfolgt mittels eines niedrigenergetischen
Rntgenstrahles durch Detektion in einem Szintillationsdetektor

5 Prinzipieller Ablauf einer Messung:

Die Probenbezeichnung wird eingegeben, es werden die Betriebsparameter des
Laufes gewhlt, eventuell unter Einsatz der Modeling Utility.

Mit einer Injektionsspritze werden 10 bis 15ml der Probe in die Hohlscheibe gefllt.

Die optische Dichte der Ausgangssuspension erfasst und gespeichert

Das Programm durch "Start" begonnen,

Suspension in der Hohlscheibe zu Beginn und beginnendes Absetzen der Partikel whrend der Messung










Nach Ablauf werden die Resultate automatisch gespeichert und angezeigt.

Die Probe wird durch "MIX" wieder aufgeschttelt und aus der Scheibe abgesaugt.

6 Zwei Messmethoden bei Scheibenzentrifugen:

Homogenstart (HOST) Dabei wird eine homogene Partikelsuspension eingesetzt.
Die Position des Lichtstrahles befindet sich etwas ber dem Scheibenboden (um
nicht durch das angehufte Sedimentationsgut beeinflusst zu werden). Whrend sich
die Partikel von den groen zu den kleinen hin immer weiter absetzen, wird die
Transparenz der Probe und damit das Signal am Detektor hher.

Bei Start Phase 1 Phase 2 Phase 3 vor Ende

Typischer Signalverlauf einer HOST Messung






Linienstart (LIST) Dabei wird auf die Oberflche des laufenden Trennmediums
eine geringe Menge konzentrierter Probe aufgebracht, die sich in Streifen trennt.
Nach durchlaufen der Trgerflssigkeit kann ohne Stop des Zentrifugenlaufes die
nchste Probe aufgegeben werden.

Bei Start Phase 1 Phase 3 Phase 5 Ende mit Restart









Typischer Signalverlauf einer LIST Messung mit drei Partikelgren















7 Mglichkeiten zur Optimierung / Variierung Erstellen der Applikation

a. Laufzeit:
Die Zeitspanne fr einen Lauf betrgt zwischen drei Minuten und acht Stunden.
b. Drehzahl
Die Drehzahl ist zwischen 600 und 6000rpm (bei Spezialscheiben bis 10000rpm)
whlbar
c. Volumen
Das einsetzbare Volumen fr eine Probe betrgt etwa 7ml bis 25ml
d. Konzentration
Wenn auch bei der Zentrifugalsedimentation keine Annahmen getroffen werden
mssen, so muss dennoch darauf geachtet werden, dass die Vorbedingungen einge-
halten werden. Abgesehen von der Unabhngigkeit der Einzelpartikel voneinander
(bei 80% Volumsanteil sedimentieren Partikel sicherlich nicht ungestrt im Medium),
ist auch auf richtiges Strmumgsverhalten zu achten.
e. Kopfsteuerung (Betriebsmodus)
Neben dem Gravitationsmodus (G-mode), bei dem eine Messung bei ruhender
Scheibe und ruhendem Detektorkopf abluft, gibt es den F-Mode bei rotierender
Scheibe und in der "Home Position" ruhendem Kopf und zwei Moden, bei denen der
Detektorkopf gegen die Sedimentationsrichtung bewegt wird, um die Messdauer zu
verringern.
f. Laufmittel (Glycerin statt Wasser)
Neben dem Standard Laufmittel ("spin fluid") Wasser knnen auch andere,
hochviskose Flssigkeiten eingesetzt werden, um den Messbereich zu erweitern. Ist
eine Messung in organischen Lsungsmitteln erforderlich, so wird dazu eine
lsungsmittelresistente Scheibe aus Polycarbonat eingesetzt.

Beispiel: eine Probe, die in Wasser mit einem Bereich von 3,7m bis 0,09m erfassbar ist,
htte in Glyzerin einen Messbereich von 29,6m bis 0,7m.

Warum ist eine Optimierung der Messmethodik erforderlich, warum knnen leicht
unterschiedliche Resultate auftreten, obwohl es sich um eine Absolutmethode handelt?
Auch wenn alle Parameter direkt zugnglich sind, mssen doch di Rahmenbedingungen
eingehalten werden, unter denen das Stokes Gesetz gilt. Dies ist nach obenhin die Bedingung,
dass es sich um eine laminaren Sedimentationsstrom handelt, also bei Reynoldszahlen bis
etwa 0,2 und dass nach unten hin die Sedimentation noch rasch genug stattfindet, um nicht
durch Rckdiffusion zu stark beeinflusst zu werden.

Beispiel:
Eine bimodale Silikatprobe, die bei feststehendem Messkopf (F-mode, links) und einer Laufzeit
von zwei Stunden noch nicht alle kleinen Partikel erfasst hat (Cumulative erst bei 80%), zeigt
eine schlechte Auflsung der beiden Gren. Der Partikelanteil um 0,10m ist nur als Schulter
zu erkennen, der Anteil um 0,05m noch kaum erfasst.
Wird jedoch der Kopf gegen die Sedimentationsrichtung bewegt (X-mode, rechts), sind nach
50min bereits alle Partikel vermesse, die Population bei 0,10m ist klar getrennt.
Beide Lufe zeigen in der summarischen Auflistung den korrekten d50-Wert von ca. 0,12m,
der Mittelwert ist aber wegen der fehlenden Feinanteile noch stark unterschiedlich.


8 Modeling Utility

Das Resultat kann also von den Messbedingungen als auch von der erforderlichen
Arbeitszeit her optimiert werden. Zur raschen Ermittlung der besten Bedingungen bietet
das Programm eine Modellierfunktion, in der rasch der Einfluss der nderung eines
Parameters ermittelt werden kann. Auf Knopfdruck wird der Messbereich errechnet.























Durch Reduktion der Drehzahl auf 700rpm Durch Verdreifachung der Laufzeit auf 75min
erhht sich der Durchmesser der grten wird der Durchmesser der kleinsten
Partikel auf das Doppelte (3,85m) messbaren Partikel auf 0,07m gebracht.


Durch Wechsel zum X-Mode mit bewegtem Detek- Einsatz reiner Gravitation (G-Mode) erweitert den
tor wird das Verhltnis von grtem zu kleinstem Grenbereich auf bis zu 47m, wobei dieser Lauf
Durchmesser auf etwa 1:40 gebracht, der Bereich .. dann mit einem zweiten fr kleine Partikel zu einer
wesentlich erweitert. Gesamtmessung vereinigt werden kann (merging).



















8 Resultate
Das Tabellarische Endresultat enthlt neben den Betriebsparametern der Messung










alle statistischen Auswertungen aus Partikelgre und verteilung,
wahlweise mit 2%, 5% oder 10%-Schritten. Ausdruck erfolgt in whlbaren Protokollen










9 Zusammenfassende Bemerkungen:

Einer der groen Vorteile der Zentrifugen liegt im groen Messbereich und der Tatsache,
dass es sich bei der Grenmessung um eine Absolutmessung handelt. Bei
Lichtzentrifugen mit der Einschrnkung, dass die Richtigkeit der Verteilung von der
richtigen Wahl der Mie-Korrektur-Parameter abhngt.
Als Schlusswort vielleicht die Aussage eines langjhrigen Nutzers einer XDC, die den
Einsatzschwerpunkt der Systeme auf den Kern bringt: "Wir haben die
unterschiedlichsten Messsysteme im Einsatz. Wenn wir auf den einzelnen Gerten
verschiedene Werte bekommen, aber einen richtigen bentigen, dann greifen wir auf die
Rntgenzentrifuge zurck"