Guia Trabajo Practico Carrera Medicina

www.monografias.
com
Gua de trabajo prctico para estudiantes de segundo ao de la carrera de medicina
Mara Espino Hernndez - mespino@elacm.sld.cu
1. Orientaciones generales para la utilizacin del !olleto
". #rctica de $aboratorio %o. 1
&. #rctica de $aboratorio %o' "
(. #rctica de laboratorio &
). *lase prctica %o ('
+. #rctica de laboratorio )
,. *lase #rctica +
8. -ibliogra!a
Orientaciones generales para la utilizacin del folleto
E./0123%/E'
El material que ponemos en tus manos es una gua para el desarrollo del trabajo en el laboratorio durante
las actividades prcticas de nuestra asignatura y a la vez es un cuaderno complementario para tu
preparacin previa a dicha actividad.
En cada una de las clases prcticas que ste recoge encontrars adems de los objetivos materiales y
reactivos a utilizar problemas y procedimientos a desarrollar en el laboratorio un contenido terico el que
debers estudiar previo al desarrollo de cada actividad.
Es importante que tengas en cuenta que este contenido !" #$#%&%$'E a lo que en la seccin de
autopreparacin se te orienta estudies por tu libro de te(to ya que ambos materiales se complementan. Es
muy importante que al finalizar tu autoestudio trates siempre de responder cada una de las preguntas que
aparecen en esta seccin pues de este modo adems de corroborar la calidad de tu autopreparacin te
garantizar un mejor desenvolvimiento durante el trabajo prctico.
Esperamos que este material te sea de gran utilidad para la adquisicin de habilidades y contribuya a
mejorar tu aprovechamiento docente en nuestra asignatura.
$O. #4O5E.O4E.
$aboratorio 1ocente de 3gentes biolgicos.
%ormas generales para el trabajo en el laboratorio'
El laboratorio de prcticas de )gentes biolgicos es un lugar convenientemente habilitado donde se
manipulan productos patolgicos y se e(aminan microorganismos. Estos pueden ser patgenos o no pero
a*n en este *ltimo caso deben ser manejados con e(trema precaucin por su potencial patogenicidad.
Es indispensable por lo tanto el cumplimiento de las siguientes orientaciones'
1. +antener la disciplina establecida para todas las actividades docentes.
,ara ver trabajos similares o recibir informacin semanal sobre nuevas publicaciones visite www.monografias.com
1
www.monografias.com
2. -os alumnos asistirn vistiendo sus uniformes. !o se permitir la estancia en el laboratorio a personas
sin batas sanitarias.
3. )tender de manera organizada al pase de lista. !o formar grupos en la puerta del laboratorio que
obstaculicen la entrada al mismo.
4. %odos los artculos personales deben ser colocados en la mesa aleda.a o en el sitio que le indique el
profesor. !unca sobre la meseta de trabajo.
5. El alumno asistir a la clase prctica con la preparacin terica necesaria adquirida y/o reafirmada
mediante su auto preparacin seg*n las orientaciones y ejercicios se.alados para cada clase en el
folleto de )ctividades prcticas.
6. Es imprescindible trabajar en todo momento con calma y concentracin procurando no distraer al resto
de los alumnos que se encuentran en el laboratorio.
7. 0urante la permanencia en el laboratorio queda terminante prohibido1 fumar2 ingerir comidas y bebidas2
aplicarse cosmticos y peinarse2 as como llevarse las manos y utensilios a la boca nariz ojos y odos.
8. El profesor dar una introduccin e indicaciones generales de cada actividad prctica con el objetivo de
hacerla ms comprensible y eficaz.
9. El alumno debe leer cada ejercicio de laboratorio. -os realizar en la secuencia se.alada y anotar los
datos en el cuaderno.
10. Es indispensable el uso de guantes desechables para la manipulacin del material contaminado.
11. El material contaminado que se deseche ser colocado en los depsitos correspondientes designados
por el profesor.
12. El material desechable no contaminado se depositar en los cestos colocados al efecto.
13. !o se permite tirar basura al piso vertederos ni colocarlas sobre o bajo las mesetas.
14. En caso de rotura de envases con material contaminado o cualquier otro tipo de accidente llamar
inmediatamente al profesor.
15. -ave sus manos antes de salir del laboratorio.
16. 3omprobar antes de salir que su rea de trabajo queda perfectamente limpia cerradas las llaves de
agua apagados los mecheros apagadas las luces de las mesetas y los microscopios limpios. -as
banquetas deben quedar en orden.
17. !o abandonar el laboratorio sin la debida autorizacin del profesor.
18. El incumplimiento de alguno de los aspectos relacionados se considera una indisciplina.
Prctica de Laboratorio No. 1
/ema "' #arasitologa M6dica
/tulo' 1iagnstico de laboratorio de protozoos intestinales 7 sanguneos.
Objeti8os'
- Enumerar los diferentes productos patolgicos que se requieren para el diagnstico de los
protozoos intestinales y sanguneos.
- +encionar las caractersticas que deben cumplir las diferentes muestras para el diagnstico de
protozoos intestinales y sanguneos as como los mtodos diagnsticos empleados en cada caso.
- "bservar al microscopio quistes de protozoos intestinales y formas parasitarias de Plasmodium.
3spectos tericos
-as enfermedades asociadas a protozoos tienen en la actualidad una elevada incidencia en la poblacin
mundial algunas de ellas acompa.adas de una alta tasa de mortalidad tal es el caso del paludismo y la
tripanosomiasis africana entre otras. )lgunos protozoos intestinales como Giardia lamblia y Entamoeba
histolytica son causa de mal nutricin prdida de peso y diarreas severas2 otros como Plasmodium sp
Trypanosoma sp y Leishmania producen afecciones cardacas y del #!3 da.an las membranas mucosas
la piel y diferentes rganos de la economa.
-os ciclos de vida de los protozoos son muy variados y complejos. El conocimiento de stos permite realizar
una toma de la muestra en el momento adecuado con el fin de poder observar el agente biolgico y con ello
realizar el diagnstico certero de la enfermedad. 0emostrar e identificar el agente infectante se considera la
regla de oro en el diagnstico parasitolgico.
0iagnstico de los protozoos sanguneos.
0entro de los protozoos sanguneos se destacan por su incidencia e importancia epidemiolgica
Plasmodium sp, Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei y Leishmania donovanii.
a4 %oma de la muestra 1 Es necesario tener en cuenta el perodo en el cual el parsito de acuerdo a su
ciclo de vida transita por la sangre 5parasitemia4 o se encuentra presente en determinados rganos y/o
2
www.monografias.com
tejidos 5sitios de inoculacin4 en los que produce lesiones caractersticas. )tendiendo a ello las
muestras pueden ser1
- #angre perifrica
- %ejidos
- -36
- E(udado de las lesiones
- )spirado del chancro inicial o del ganglio linftico
b4 +todos de diagnstico1 ,ueden ser indirectos o directos. -os primeros se basan en la determinacin de
la respuesta inmune del organismo ante la infeccin parasitaria a travs de pruebas inmunoserolgicas
y los directos se sustentan en la observacin de las formas parasitarias. -os mtodos directos son los
ms empleados. Estos pueden ser1
- E(amen en fresco de la sangre 1 se coloca una gota de sangre entre cubre y portaobjetos y se
observa al microscopio con objetivo seco de 78(.
- 9rotis de la sangre 1 se e(tiende una gota de sangre sobre un portaobjeto se seca al aire y se fija con
metanol. %e.imos por el mtodo de :iemsa y observamos al microscopio con objetivo de inmersin
5;88(4.
- :ota gruesa1 se e(tiende una gota de sangre en un rea del portaobjeto de ;cm
<
se deja secar se
ti.e por el mtodo de :iemsa y se observa al microscopio con objetivo de inmersin 5;88(4.
-os mtodos indirectos ms utilizados son1 E-&#) &nmunofluorescencia &nmunoprecipitacin 9ijacin del
complemento y )glutinacin.
0iagnstico de protozoos intestinales1
0entro de los protozoos intestinales se destacan por su inters clnico Entamoeba histolytica y Giardia
lamblia.
a4 %oma de la muestra 1 -a muestra ideal son las heces las que deben ser colectadas preferiblemente en
un recipiente de cristal o plstico correctamente lavado y seco. 0eben ser adems frescas 5recin
emitidas4 y procesadas rpidamente en particular cuando queremos observar los trofozotos de estos
parsitos. 0e no ser posible el procesamiento inmediato se deben conservar por diferentes medios que
pueden ser1 refrigeracin a 7
o
3 en formol al = ;8 > alcohol polivinlico 5,?)4 en una solucin de
+ertiolato@yodo@formol 5+&94. -a muestra debe ser recogida directamente sobre un papel limpio
colocado en el suelo para evitar que se mezcle con la orina ya que las sustancias aqu presentes
pueden da.ar los trofozotos. En los parasitismos es com*n que no se e(creten constantemente las
formas parasitarias este fenmeno est estrechamente relacionado con el ciclo de vida del parsito y
se conoce como fase de e(crecin negativa por tal motivo se recomienda siempre indicar de tres a
seis e(menes de heces con un periodo de dos a tres das entre uno y otro 5e(menes seriados4. En
los casos de alta sospecha clnica de giardiosis se puede obtener tambin una muestra de aspirado
duodenal o de biopsia duodenal para realizar el diagnstico siempre que los anlisis de las heces
hayan resultado negativos.
b4 +todos de diagnstico 1
- E(amen directo entre cubre y portaobjeto 1 #e coloca una peque.a porcin de las heces en
un portaobjeto mezclada con una gota de eosina lugol o solucin salina fisiolgica se coloca sobre la
preparacin una lmina cubreobjeto y se e(amina al microscopio con objetivo de 78(.
- +todos de concentracin 1 )umentan considerablemente la sensibilidad del diagnstico.
$tiliza una mayor cantidad de muestra 5; gramo apro(imadamente4 y se basan en la diferencia que
pueda e(istir entre el peso especfico de la sustancia en la cual se disuelve la muestra y las formas
parasitarias. Aasado en ello se han dise.ado diferentes mtodos dentro de ellos el de 6itchie
5solucin formol@ter/acetato de etilo4 es el ms utilizado para el diagnstico de los protozoos y por el
cual se obtiene un concentrado de los quistes por un proceso de sedimentacin.
- +todos indirectos 1 -os ms utilizados son E-&#) y aglutinacin.
#roblema' Usted tendr en su puesto de trabajo un extendido de sanre te!ido con Giemsa con "ormas
parasitarias de Plasmodium sp., as# como di"erentes muestras de heces conservadas en "ormol $ue
contienen $uistes de protozoarios. %ealizar el montaje para el exmen directo de las heces y observar al
microscopio las di"erentes "ormas parasitarias.
4eacti8os 7 Materiales
- 9rotis de sangre perifrica te.ido con :iemsa.
- -minas portaobjetos y cubreobjetos
- +icroscopio ptico
- +uestras de heces conservadas en formol
3
www.monografias.com
- )plicadores
- :uantes
- -ugol
#rocedimiento
,ara el e(men de las heces1 5:uarde las medidas adecuadas de bioseguridad colquese los guantes
antes de proceder4
a4 3oloque en la lmina portaobjeto una gota de reactivo de lugol.
b4 3on un aplicador tome una peque.a porcin de heces y mezclela con la gota de lugol en el portaobjetos
haciendo un peque.o crculo. 5$tilice una lmina para cada muestra4
c4 3oloque encima una lmina cubreobjetos.
d4 -leve la lmina al microscopio ptico y enfoque con objetivo de ;8(. )l lograr una imagen ntida pase al
objetivo de 78(.
e4 "bserve detenidamente las caractersticas de los quistes observados y realice en su cuaderno un
esquema de las diferentes formas parasitarias.
,ara observar la lmina de sangre perifrica1
a4 )dicione sobre la preparacin una gota de aceite de cedro.
b4 Enfoque con objetivo de inmersin ;88(
c4 6ealice en su cuaderno un esquema de las caractersticas de las formas de Plasmodium observadas.
#resentacin de los resultados
@ 6ealice un informe escrito de lo observado en cada una de las preparaciones.
3utopreparacin
3onsulte en su libro de te(to +icrobiologa y ,arasitologa +dica %omo &&& los siguientes captulos1
- 3aptulo BC :eneralidades los tema1 3iclo evolutivo ,roceso infeccioso parasitario 9uentes de
infeccin ?as de entrada al hospedero y 0iagnstico clnico y de laboratorio de las enfermedades
parasitarias 5pginas D ;;;< ;C y ;B4
- 3aptulo BE Giardia lamblia 5pginas F;@F=4
- 3aptulo E7 )meba 5pginas ;8B@;8D4
- 3aptulo EE Plasmodium 5pginas ;=;@;=F y ;=D@;C84
0espus proceda a responder las siguientes preguntas1
;. G3ules son las formas infectantes de Giardia lamblia y Entamoeba histolytica y cules son sus
caractersticas ms sobresalientesH
<. GIu requisitos deben cumplir las muestras de heces para estudio parasitolgico y en particular
para la b*squeda de protozoos intestinalesH GIu otra muestra puede ser *til para el diagnstico
de la giardiosisH
F. )nte un paciente con sospecha clnica de paludismo GIu e(amen usted indicaraH Gqu muestra
sera necesaria para el estudioH Aasado en el ciclo de vida de este parsito Gqu formas
parasitarias pudiera encontrar en dicha muestraH
7. En un paciente con un cuadro de diarrea aguda en el que sospecha una amebiasis result negativo
el primer e(amen de las heces. G3onsidera usted este resultado concluyenteH 9undamente su
respuesta.
Prctica de Laboratorio No: 2
/ema "' #arasitologa M6dica
/tulo' 1iagnstico de 9elmintos intestinales
Objeti8os'
- +encionar los requisitos que debe cumplir la muestra de heces para el diagnstico de
infecciones por helmintos intestinales y los mtodos de diagnstico ms frecuentemente empleados.
- "bservar al microscopio huevos y larvas de helmintos.
- "bservar las caractersticas macroscpicas de formas adultas de helmintos.
3spectos tericos.
-as helmintiasis afectan a una gran parte de la poblacin mundial en particular a aquellas personas que no
guardan las condiciones higinico sanitarias adecuadas2 la defecacin al aire libre la ingestin de agua no
potable para el consumo y de alimentos contaminados con tierra el no lavado o el lavado incorrecto de las
manos antes de ingerir alimentos entre otras constituyen muchas de las causas por las cuales las
personas se infectan con estos parsitos.
%al y como ocurre con los protozoos los helmintos tambin poseen ciclos de vida variados y complejos y su
conocimiento es importante toda vez que permite establecer las pautas tanto para el diagnstico de
laboratorio como para la prevencin de estas enfermedades.
4
www.monografias.com
En los helmintos podemos observar tres formas parasitarias diferentes1 el adulto el huevo y la larva. -os
helmintos adultos de forma general tienen una talla que permite ser observados a simple vista sin
embargo los huevos y las larvas son microscpicas. ,or tal motivo el diagnstico de laboratorio en estos
casos se basa tanto en la observacin macroscpica de las muestras buscando las formas adultas del
parsito como en la observacin microscpica en la b*squeda de huevos y larvas.
0iagnstico de laboratorio
a4 %oma de la muestra 1 -a muestra generalmente son las heces y los requisitos para su obtencin y
conservacin son los mismos que para el diagnstico de los protozoarios. ) diferencias de las
infecciones por protozoarios en estos parasitismos la diarrea no es un sntoma clnico com*n por lo que
a veces a determinados pacientes se les hace difcil obtener la muestra. Es importante en estos casos
aclarar que la muestra siempre debe ser obtenida por defecacin espontnea ya que la utilizacin de
la(antes y/o lavados intestinales incrementa el volumen de lquido y con ello la dilucin de las formas
parasitarias que puedan estar presentes en ella. ,ara el diagnstico especfico de &asciola heptica,
'ncylostoma duodenalis, (ecator americanus y )tronyloides stercoralis la muestra de aspirado
duodenal tambin puede ser *til en la b*squeda de huevos del parsito cuando los seriados de heces
son negativos.
b4 +todos de diagnstico 1 )l igual que para protozoos los mtodos pueden ser directos e indirectos
siendo los directos los ms recomendados.
- E(men directo entre cubre y portaobjeto 1 se coloca una peque.a porcin de las heces en
un portaobjeto mezclada con una gota de eosina lugol o solucin salina fisiolgica se coloca sobre la
preparacin una lmina cubreobjeto y se e(amina al microscopio con objetivo de 78( buscando
huevos y larvas.
- +todos de concentracin 1
+todo de 6itchie 5ver clase prctica ;4
-a 3opa 3nica1 est basado en la sedimentacin y es el ms utilizado para el diagnstico de
&asciola dado el gran tama.o y peso de estos huevos.
+todo de 9aust1 es una tcnica basada en la flotacin que emplea sulfato de zinc.
+todo de #heather1 es un mtodo com*n basado en la flotacin que emplea una solucin
sobresaturada de az*car sal y formol.
- %amizaje de la heces 1 3onsiste en hacer pasar las heces por un tamiz 5colador4 para observar
parsitos adultos o fragmentos de ellos. )u(iliados con una lupa podemos identificar el agente por sus
caractersticas macroscpicas.
- +todo de :raham o de la cinta adhesiva 1 Es un mtodo especial para la identificacin de huevos de
Enterobius vermicularis 5tambin puede ser *til en el diagnstico de Taenia sp4. 3onsiste en aplicar
un fragmento de cinta adhesiva transparente en la zona perianal del paciente se retira y luego se
coloca sobre una lmina portaobjeto para observar al microscopio los huevos caractersticos.
- +todo de Jarada@+ori 1 Es una tcnica empleada para el cultivo de larvas de nemtodos de inters
clnico. Es un mtodo *til para la diferenciacin de ancylostomideos cuyos huevos son idnticos y es
indispensable para el diagnstico y seguimiento de las infecciones por )tronyloides stercoralis.
- +todo de la tinta china * ,ermite la diferenciacin de las especies de Taenia a travs del conteo de
las ramas uterinas de los progltides.
#roblema' Usted encontrar en su puesto de trabajo di"erentes vidrios reloj $ue contienen "ormas adultas
de helmintos para la observaci+n y descripci+n de sus caracter#sticas macrosc+picas. 'simismo encontrar
di"erentes muestras de heces conservadas en "ormol las $ue contienen huevos y larvas de parsitos,
proceder al montaje de las heces por examen directo y la observaci+n posterior al microscopio.
4eacti8os 7 materiales'
:uantes
-minas portaobjetos
-minas cubreobjetos
)plicadores
6eactivo de -ugol.
?idrios reloj con parsitos adultos.
+uestras de heces conservadas en formol
#rocedimiento'
@ E(men directo de las heces1
5
www.monografias.com
a4 ,roceda de la misma forma que en la prctica anterior 50iagnstico de protozoos intestinales4
6ecuerde guardar las medidas de bioseguridad requeridas colquese los guantes antes de comenzar
a trabajar.
b4 "bserve detenidamente las caractersticas de los huevos y larvas. 6ealice un esquema de lo
observado en su cuaderno relacionando cada uno de ellos con el parsito correspondiente
@ ,arsitos adultos1
a4 "bserve detenidamente los parsitos adultos contenidos en cada vidrio reloj y detalle cada una de sus
caractersticas.
b4 6ealice las siguientes anotaciones en su cuaderno de trabajo1 clasificacin 5si es !ematelminto o
,latelminto y en este *ltimo caso si es 3estode o %rematodo4 tama.o apro(imado diferencias entre
hembra y macho otras caractersticas distintivas.
#resentacin de los resultados'
3onfeccione un informe que recoja las observaciones macroscpicas y microscpicas realizadas.
3utopreparacin'
3onsulte en su libro de te(to +icrobiologa y ,arasitologa +dica %omo &&& los 3aptulos siguientes1
- 3aptulo D= 'scaris 5pgina <;;@<;74
- 3aptulo DC Trichuris 5pgina <;B@<;D4
- 3aptulo DB 'cylostomas y (ecator 5pginas <<;@<<74
- 3aptulo DE )tronyloides 5pgina <<D@<F;4
- 3aptulo ;88 Enterobius 5pginas <7F@<7=4
- 3aptulo ;;< Taenia sainata y Taenia solium 5pginas FF;@FF=
- 3aptulo ;<; &asciola 5pgina FE;@FEF y FE=4
,roceda luego a responder las siguientes preguntas1
;. ,lantee las diferencias morfolgicas fundamentales entre nematodos cestodes y trematodos
<. G3ul es el nematodo intestinal de mayor tama.oH G3mo usted reconocera a simple vista la
hembra de este parsitoH GIu caractersticas distintivas tienen sus huevosH
F. GIu diferencias presentan las formas adultas de la hembra y el macho de Trichuris trichiura que
permiten su reconocimientoH GIu caractersticas tienen sus huevosH
7. G,ara qu se utiliza el mtodo de :rahamH
=. GIu caractersticas poseen los huevos de Enterobius vermicularisH
C. G,or que es necesario la tincin con tinta china de los progltides para la diferenciacin entre T.
solium y T. sainataH
B. En un paciente infectado por &asciola heptica Gqu forma parasitaria usted espera encontrar en
las hecesH Gqu caractersticas fundamentales poseen los huevos de este parsitoH
Prctica de laboratorio 3
%ema F1 Aacteriologa mdica
Microscopa 7 coloraciones. *ulti8o de los microorganismos.
Objeti8os'
- 6ealizar tincin de preparaciones por los mtodos de :ram y Kiehl !eelsen.
- &dentificar al microscopio diferentes morfologas bacterianas y sus caractersticas tintoriales.
- "bservar las caractersticas del crecimiento bacteriano en diferentes medios de cultivo
3spectos tericos
0urante el transcurso de una investigacin bacteriolgica la definicin de la morfologa y las caractersticas
tintoriales de un microorganismo constituyen elementos claves para su identificacin y el punto de partida
para la realizacin posterior de pruebas fisiolgicas y bioqumicas indispensables para la clasificacin
definitiva en gnero y especie.
El trabajo con microorganismos en el laboratorio se realiza en condiciones aspticas tanto para evitar la
contaminacin de la muestra con los microorganismos ambientales como del investigador con la muestra.
Es por esto que es necesario trabajar siempre en el entorno de la llama de un mechero bunzen en un
cuarto climatizado 5cuarto de siembra4 y en determinadas actividades bajo la proteccin de un gabinete de
seguridad o flujo laminar.
0efinicin de las caractersticas morfolgicas y tintoriales1 ,ara definir las caractersticas morfolgicas y
tintoriales de una bacteria presente en una muestra lo primero es la preparacin del frotis y la tincin
posterior con colorantes apropiados.
$na de las tcnicas de tincin ms empleadas en Aacteriologa es la %incin de :ram. Este mtodo
descrito por 3hristiam :ram en el a.o ;EE7 permite dividir a las bacterias en dos grandes grupos
6
www.monografias.com
5grampositivas y gramnegativas4. $tiliza dos colorantes bsicos 5violeta cristal y safranina4 una solucin
mordiente encargada de fijar el colorante violeta 5lugol4 y una solucin decolorante 5alcohol al B8>4. -as
bacterias :ram positivas retienen el colorante violeta cristal por lo que se observan te.idas de color violeta
mientras que las gramnegativas se decoloran por la accin del alcohol y toman el segundo colorante
5safranina4 por lo que se ven de color rosado.
El fundamento de este mtodo se consider hasta hace pocos a.os estaba basado en la diferencia en la
composicin qumica de la pared celular de ambos grupos bacterianos sin embargo estudios ms recientes
han demostrado la participacin de protenas citoplasmticas en esta respuesta.
)lgunas bacterias no son capaces de te.irse por el mtodo de :ram para estos casos se utilizan mtodos
de tincin especiales. $no de los ms utilizados es el de Kiehl !eelsen para la identificacin de
micobacterias. Esta es una tincin diferencial que utiliza la fucsina fenicada como primer colorante alcohol
cido como solucin decolorante y el azul de metileno como colorante de contraste. -os gneros
,ycobacterium, (ocardia y algunos actinomicetos resisten la decoloracin por el alcohol cido y
permanecen te.idos con el primer colorante 5rojo4. Es por esto que se conocen como bacilos cido alcohol
resistente 5A))64. El principio de este mtodo se basa en la alta proporcin de cidos miclicos 5lpidos4
presentes en la pared celular de estos microorganismos que los hace resistentes a la decoloracin una vez
te.idos por la fucsina. El resto de las bacterias s se decoloran y se ti.en con el segundo colorante
observndose de color azul.
3ultivo de los microorganismos1 -os medios de cultivo son soluciones acuosas de diferentes sustancias
nutritivas necesarias para el crecimiento y la reproduccin de los microorganismos. Estos son clasificados1
- #eg*n su estado fsico en1 lquidos slidos o semislidos. -a solidez de los medios se
consigue por la adicin de agar. El agar es una sustancia inerte es decir no es un nutriente ni tampoco
interfiere con otros constituyentes del medio de cultivo.
- #eg*n su finalidad los medios se clasifican en1
:enerales o universales1 :arantizan el crecimiento de un elevado n*mero de microorganismos.
Ej. )gar nutriente )gar sangre 3aldo cerebro@corazn etc.
Enriquecimiento1 #on medios complejos con aditivos adicionales para favorecer el crecimiento
de determinados microorganismos 5particularmente e(igentes4. Ej. 3aldo selenito 3aldo
tetrationato de sodio etc.
#electivo1 #on aquellos que favorecen por su dise.o el crecimiento especfico de un
microorganismo 5o grupo de microorganismos4. Es de gran utilidad para el aislamiento de
microorganismos a partir de una poblacin microbiana mi(ta. Ej. )gar ## )gar +c 3onLey
)gar %3A#
0iferencial1 0estinados a facilitar la discriminacin de microorganismos de una mezcla por sus
propiedades diferenciales del crecimiento en dichos medios.
&nstrumentos de siembra1 -os instrumentos empleados son1
)sa de alambre
)guja de alambre
Jisopo
,ipeta
Esptula de 0rigalsLy
Meringuilla
+todos de siembra1 -a siembra de acuerdo a los propsitos el instrumento utilizado y las caractersticas
del medio donde se va a realizar el cultivo puede realizarse por1
0iseminacin 1 se realiza de diferentes formas y con instrumentos variados dependiendo del objetivo
que se persiga. Ejemplo1 para obtener colonias aisladas en un medio de cultivo slido se utiliza la
diseminacin por estras para lo que se emplea el asa de alambre. 59ig. F.;4
,icadura 1 se realiza con aguja de alambre fundamentalmente en medios slidos o semislidos
contenidos en tubos de cultivo.
) profundidad 1 %ambin conocido como placa vertida. Es un mtodo de siembra especial donde por
lo regular el inculo se mezcla con el medio de cultivo. 59ig. F.<4
7
Fig. 3.1: Mtodo
de siembra por
estras
Fig. 3.2: Mtodo de
siembra por vertido e
p!a"as o a pro#$didad
www.monografias.com
&ncubacin1 -os medios de cultivo sembrados se colocan en incubadoras a la temperatura humedad y
concentracin de o(geno ptimas para el crecimiento. -as condiciones de incubacin dependen de las
caractersticas y del tiempo de generacin del microorganismo. -as bacterias que com*nmente parasitan al
hombre se desarrollan bien a temperaturas entre F= y FB
o
3 en perodos de ;E a <7 horas.
"bservacin del crecimiento1 0espus de la incubacin se observan las caractersticas del crecimiento del
microorganismo y los cambios ocurridos en el medio de cultivo. En medios de cultivo en placas ,etri pueden
ser apreciados los caracteres de las colonias microbianas1 color borde 5entero o festonado4 brillo superficie
5lisa o rugosa4 tama.o y produccin de lisis de los glbulos 5ste *ltimo solo si el medio de cultivo empleado
fuera )gar #angre4.
#roblema' usted encontrar en su puesto de trabajo placas con cultivo bacteriano los $ue debern
identi"icar mor"ol+icamente por la t-cnica de Gram de"iniendo "orma, modo de arupaci+n y carcter
tintorial del microoranismo, describir adems las caracter#sticas ms sobresalientes observadas en los
cultivos. Encontrar "rotis elaborados a partir de una muestra de esputo para realizar tinci+n de .iehl
(eelsen.
4eacti8os 7 materiales.
- )sa de siembra
- ,ortaobjetos
- 3olorantes para la tincin de :ram
- 3olorantes para la tincin de Kiehl !eelsen
- ,reparaciones para te.ir por Kiehl !eelsen
- +echero bunzen
- )ceite de cedro
- )gua destilada estril
- ,lacas y tubos con cultivos.
#rocedimiento.
,reparacin del frotis a partir del cultivo1
;. 3oloque sobre la lmina portaobjeto una gota de agua destilada estril.
<. Esterilice el asa de siembra a la llama del mechero. 59ig. F.F4
F. )rrastre una peque.a porcin del cultivo bacteriano con el asa en condiciones aspticas.
7. #uspenda las clulas en la gota de agua sobre el portaobjeto.
=. 0eje secar al aire.
C. 9ije la preparacin cortando con la lmina tres veces la llama del mechero 59ig. F.74.

8
9ig. F.71 ,asos de una tincin.
;1 3olocar la muestra <1
E(tender F1 #ecar al aire 71
9ijar a la llama
1
4
2
3
9ig. F.F1 Esterilizacin del
asa de siembra en la llama
del mechero
www.monografias.com
%incin de :ram
- 3ubra el frotis con cristal violeta al ;> espere F8 segundos y lave con agua corriente.
- 3ubra el frotis con lugol espere F8 segundos y lave con agua corriente.
- 3ubra el frotis con alcohol etlico o alcohol acetona espere F8 segundos y lave con agua corriente
- 3ubra el frotis con el colorante safranina espere F8 segundos y lave con agua corriente.
- #ecar al aire.
- )dicione una gota de aceite de cedro sobre la preparacin y observe al microscopio con el objetivo de
mayor aumento 5;88N4.
- 6ealice un esquema en su cuaderno de lo observado y anote las caractersticas morfolgicas y
tintoriales del microorganismo problema.
%incin de Kiehl !eelsen
- 3ubra el frotis con fucsina y caliente el colorante sobre la lmina dndole calor a la lmina por debajo
hasta que se observe la emisin de vapores. Espere = minutos y lave con abundante agua corriente.
- 3ubra la lmina con alcohol@cido espere < minutos y lave con agua corriente.
- 3ubra la preparacin con azul de metileno espere F8 segundos y lave con agua corriente.
- #ecar al aire.
- 3oloque sobre la preparacin una gota de aceite de cedro y observe al microscopio con objetivo de
inmersin 5;88N4.
- )note en su cuaderno los resultados de la observacin.
0efinicin de caractersticas culturales
- "bserve detenidamente los cultivos en las placas y determine las diferentes caractersticas de las
colonias1 tama.o color borde superficie aspecto produccin de hemlisis etc.
- )note los resultados de lo observado en su cuaderno de trabajo
,repare un informe con los resultados obtenidos del trabajo realizado en el laboratorio de acuerdo a las
indicaciones de su profesor.
3utopreparacin
6evise en su libro de te(to +icrobiologa y ,arasitologa +dica %omo & los captulos que a continuacin se
relacionan1
- 3aptulo 7 +icroscopa y coloraciones 5,g. <8@<E4
- 3aptulo = 3aractersticas de las clulas procariticas y eucariticas 5,g. <D@FC4
- 3aptulo B 3ultivo y crecimiento de los microorganismos 5,g. 7=@=74
,roceda despus a responder las siguientes preguntas1
;. -a coloracin de :ram es una de las ms utilizadas en Aacteriologa Gen qu se fundamenta este
mtodoH
<. -a tincin de Kiehl !eelsen se utiliza para la observacin al microscopio de las micobacterias. G3ul
es el fundamento de este mtodo de tincinH Gconsidera usted que si se omitiera el paso del
calentamiento de la fucsina sobre la lmina se obtendran los mismos resultadosH 9undamente.
F. GIu se conoce como cultivo o siembra en AacteriologaH 3ite ejemplos de medios de cultivo
generales diferenciales selectivos y de enriquecimiento.
7. El agar es una sustancia inerte que aporta solidez a los medios de cultivo permitiendo el desarrollo
de colonias aisladas. GIu ventajas representa esto para el diagnsticoH
=. -a tincin negativa es uno de los mtodos empleados en el laboratorio de microbiologa. )l respecto
diga1 Gqu tipo de colorantes usted utilizara en este casoH Gqu diferencias tiene este mtodo con
un mtodo de tincin simpleH
Clase prctica N
o
4:
/ema 222 -acteriologa M6dica
9
www.monografias.com
/tulo' :uimioterapia antimicrobiana. M6todos de respaldo al tratamiento antimicrobiano.
Objeti8os'
- &nterpretar los mecanismos de accin de las drogas antimicrobianas y los mecanismos de
resistencia desarrollados por las bacterias para contrarrestar su efecto.
- &nterpretar los resultados de un antibiograma por mtodos de difusin y dilucin de acuerdo a las
categoras de susceptibilidad establecidas.
)spectos tericos
El descubrimiento de los antibiticos en el pasado siglo dio inicio a una nueva era en el tratamiento de las
enfermedades infecciosas que estuvo marcada en la dcada de los a.os <8 por la obtencin de la penicilina
a cargo del notable cientfico #ir )le(ander 9leming. -a introduccin de este antibitico por primera vez en la
clnica a inicios de la dcada del 78 y los subsiguientes descubrimientos de otras drogas con mecanismos y
espectro de accin variados permiti ganar una de las ms importantes batallas libradas por el hombre en
la lucha por la supervivencia.
,rcticamente desde los inicios en el uso de las entonces consideradas Odrogas milagrosasP se evidenci la
capacidad que tenan los microorganismos tanto para desarrollar mecanismos capaces de contrarrestar el
efecto de estos frmacos como de trasmitir tal caracterstica a otros miembros de su progenie. -os
mecanismos de resistencia desarrollados por las bacterias estn estrechamente relacionados con el
OblancoPo estructura de la clula sobre la que act*a un antibitico o grupos de antibiticos en especfico.
En la actualidad e(isten en uso ms de un centenar de drogas pertenecientes a diferentes grupos y
generaciones de antimicrobianos con capacidad variada para inhibir y matar microorganismos. -os
mecanismos de accin de estos frmacos se agrupan generalmente en los siguientes1
;4 -os que inhiben la sntesis de la pared celular
<4 -os que inhiben la funcin de la membrana celular
F4 -os que inhiben la sntesis proteica
74 -os que inhiben la sntesis de los cidos nucleicos
&nhibicin de la sntesis de la pared celular1 -os antibiticos que act*an afectando la pared celular tienen la
capacidad de unirse a protenas de la membrana citoplasmtica bacteriana conocidas como ,A, siglas
provenientes del ingls Openicilin binding proteinP o lo que es lo mismo protenas de unin a penicilina.
Estas en su mayora transpeptidasas son las encargadas de transportar las peque.as cadenas peptdicas
que junto a las subunidades repetidas de !@acetilglucosamina y !@acetilmurmico conforman la estructura
de enrejado caracterstico del peptidoglucano sustancia que aporta rigidez a la pared de la bacteria y que le
permite garantizar su forma e integridad celular. -a unin de la penicilina a esta enzima por su centro activo
impedir a la transpeptidasa cumplir su funcin2 como consecuencia se debilita la pared y la bacteria muere
por lisis celular. Ejemplos de antibiticos que act*an por esta va son todos los pertenecientes al grupo de
los Q@lactmicos 5antibiticos que se caracterizan por presentar en su estructura qumica un anillo Q@
lactmico4 que son los ms abundantes y utilizados en la clnica. Entre los ms conocidos podemos citar las
penicilinas y todos sus derivados adems de otros como el ceporn cefazolina y ceftria(one
representantes de las cefalosporinas.
&nhibicin de la funcin de la membrana celular1 -os antibiticos que act*an a este nivel realizan funcin de
detergentes o surfactantes estos compuestos se adosan a la superficie e(terna de la membrana celular
alterando su estructura y propiedades osmticas. -a unin de estos compuestos a la membrana se cree
producen una reorientacin de la estructura de mosaico fluido caracterstico. )ct*an por esta va las
polimi(inas y los antif*ngicos fundamentalmente.
&nhibicin de la sntesis proteica1 -os frmacos que act*an impidiendo esta funcin tienen la capacidad de
interactuar con el ribosoma bacteriano de forma selectiva en alguno de los eventos que ocurren a nivel de
las subunidades F8# y/o =8# interfiriendo de alg*n modo en la fidelidad de la lectura del cdigo gentico o
por interferencia directa en alguno de los procesos de la sntesis proteica propiamente dicha. $na variedad
de antibiticos act*an de esta forma entre los que se encuentran el cloramfenicol la eritromicina
tetraciclina Lanamicina y gentamicina entre otros.
&nhibicin de la sntesis de los cidos nucleicos1 ,or este mecanismo los antibiticos act*an alterando la
estructura organizada de doble hlice del )0! bacteriano por bloqueo de la enzima )0! gyrasa o
%opoisomerasa && afectndose el proceso de replicacin y posteriores eventos de transcripcin y traduccin
para la sntesis proteica. Ejemplos de antibiticos que act*an a este nivel son las quinolonas representadas
por el cido nalid(ico y la ciproflo(acina entre otros as como tambin la rifampicina.
+ecanismos de resistencia de las bacterias a los agentes antimicrobianos.
#e plantea que la resistencia de las bacterias a los antibiticos puede tener dos orgenes uno gentico y
otro no gentico. El no gentico est relacionado con la aparicin de resistencia debido a la prdida del
blanco de accin de una droga especfica en la bacteria o por un proceso de inactivacin 5no multiplicacin4
10
www.monografias.com
que sufren algunas especies en determinados tejidos que infectan. ,or ejemplo ,ycobacterium
tuberculosis tiene la capacidad de sobrevivir en los tejidos durante a.os sin multiplicarse despus de causar
un proceso infeccioso tiempo durante el cual se hace resistente al tratamiento. En cualquiera de estos casos
la resistencia al frmaco no se transfiere a otras generaciones celulares y la susceptibilidad se recupera tan
pronto el microorganismo comience nuevamente a multiplicarse o recupere la estructura perdida.
El mecanismo de resistencia gentico por su carcter heredable y transmisible horizontalmente incluso
entre diferentes poblaciones microbianas es el ms importante y es el que desarrolla la bacteria como
respuesta al ataque del agente antimicrobiano. ,uede ser1
3romosmico1 cuando se produce una mutacin en un locus que controla dentro del genoma la
susceptibilidad a un medicamento dado.
E(tracromosmico1 cuando en el intervienen elementos no cromosomales conocidos como
plsmidos los que pueden ser ntegramente transmitidos de una bacteria a otra por los diferentes
procesos de intercambio gentico 5conjugacin transduccin y transformacin4. 0e este modo la
adquisicin de uno solo de estos plsmidos 6 5plsmidos de resistencia4 codifica en la bacteria
resistencia para tantos antibiticos como informacin contenida tenga cada uno de ellos. -os
transposones son peque.os segmentos de plsmidos 6 con capacidad de insertarse en cualquier
sitio del genoma 5mecanismo de transposicin4 que tambin codifican resistencia especfica a
diferentes frmacos.
-os mecanismos genticos de resistencia a los antimicrobianos ms comunes son los siguientes1
;. &nactivacin enzimtica
<. +odificacin estructural del blanco o sitio de accin
F. 0isminucin de la permeabilidad a la droga
7. 0esarrollo de bombas de eflujo activo
&nactivacin enzimtica1 Es el ms com*n. -as enzimas ms conocidas son las denominadas Q@lactamasas
desarrolladas por bacterias grampositivas y gramnegativas para inactivar a los antibiticos del tipo Q@
lactmicos. -a enzima es capaz de actuar sobre el antibitico antes de que ste se una a las ,A, que
constituyen su blanco de accin 0el mismo modo que son estos los antibiticos ms utilizados en la clnica
en correspondencia con ello ya se han identificado ms de F88 enzimas Q@lactamasas que se diferencian
en su perfil bioqumico y estn destinadas a la hidrlisis de diferentes sustratos.
+odificaciones estructurales en los blancos o sitios de accin1 -a bacteria desarrolla un blanco estructural
alterado incapaz de ser reconocido por el antibitico especfico. Ej. las bacterias resistentes a la o(acilina
5penicilina capaz de resistir el efecto de las enzimas Q@lactamasas4 eluden el efecto del antibitico
produciendo una modificacin estructural de su blanco que son las ,A,.
0isminucin de la permeabilidad a la droga1 )nte el ataque de determinados frmacos las bacterias pueden
evadirlo por modificaciones en la permeabilidad de la membrana al medicamento. ,or ejemplo prdida de
poros de membrana especializados en el transporte de determinadas sustancias.
0esarrollo de bombas de eflujo activo1 0iferentes microorganismos han creado esta defensa ante el ataque
de un gran diversidad de frmacos. ,roducen protenas especializadas en e(traer el antibitico del interior
de la clula una vez que ha penetrado en el espacio periplsmico. Este mecanismo es e(tremadamente
eficiente dado que la velocidad con que la bacteria saca de su interior el antibitico es mayor que la
velocidad con que ste penetra.
6esistencia cruzada1 3uando determinadas bacterias presentan resistencia a varios antibiticos que
comparten parcial o totalmente un mismo mecanismo de accin se dice entonces que e(iste resistencia
cruzada.
,ruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos.
%an pronto como fue introducido en la prctica clnica el uso de los antibiticos surgi tambin la necesidad
de implementar mtodos de laboratorio capaces de medir el grado de efectividad de las diferentes drogas
empleadas en el tratamiento de un proceso infeccioso especfico.
-a variedad de mtodos y pruebas especiales destinadas al estudio de la susceptibilidad y respaldo al
tratamiento antimicrobiano son muy variados y se han ido perfeccionando a travs del tiempo con el
propsito de hacerlos cada vez ms eficientes y efectivos.
)ntibiograma1 Es la prueba en la cual enfrentamos un microorganismo a una concentracin conocida de una
droga antimicrobiana para evaluar su efecto midiendo el crecimiento microbiano a una temperatura y tiempo
dados y comparndolo con un estndar de referencia. -os mtodos se basan en la dilucin o difusin del
antibitico en medios especficos en los que se cultiva el microorganismo y en todos los casos los
resultados se interpretan a travs de las siguientes categoras de susceptibilidad1
- #usceptible 5#4 #ignifica que el microorganismo causante del proceso infeccioso debe responder
e(itosamente al tratamiento aplicado a las dosis habituales y por una va apropiada.
11
www.monografias.com
- +edianamente #usceptible o &ntermedio1 5+# o &4 #ignifica que el microorganismo solo se inhibir por la
droga si se aplica una dosis m(ima y por una va parenteral. 5#alvo e(cepciones estos medicamentos
no deben ser seleccionados para el tratamiento sobre todo aquellos en los que la dosis teraputica est
muy cercana a los rangos de to(icidad4.
- 6esistente 1 564 #ignifica que el microorganismo no se inhibe por el antibitico a las concentraciones
sistmicas usualmente alcanzables por la droga cuando es aplicada por la va y en las dosis adecuadas.
+todos
a4 +acrodilucin en caldo 1 9ue el primero que se desarroll y constituye el mtodo de referencia. #e
realiza en tubos de ensayo conteniendo un medio de cultivo lquido 5caldo +ueller Jinton4 y en el
que se realizan diluciones sucesivas de un antibitico partiendo de una concentracin conocida.
,osteriormente se inocula cada tubo con igual cantidad de un inculo estandarizado del
microorganismo de prueba. #e incuba durante ;E@<7 horas tiempo al cual se realiza la lectura a
simple vista buscando turbidez indicadora de crecimiento microbiano. -ectura1 se identifica el tubo
con la menor concentracin del antibitico a la cual no se obtuvo crecimiento microbiano visible
5ausencia de turbidez4 o lo que es lo mismo la concentracin mnima inhibidora 53+&4 que se
e(presa en Rg/m- 59igura ;4 y los resultados se comparan con los estndares de referencia
especficos que han sido internacionalmente normados para diferentes microorganismos o grupos
microbianos. El laboratorio informa el valor de la 3+& determinada para cada antibitico
acompa.ado de la categora de susceptibilidad correspondiente. ?entajas1 mtodo ms e(acto.
0esventajas1 gran complejidad de realizacin y costo elevado.
Fig.4.1: Test de macrodilucin en caldo. En los tubos donde hay menor
concentracin del antibitico (tubos de la izquierda) aparece turbidez
indicadora de crecimiento bacteriano. ontando de derecha a izquierda! la
concentracin de la droga contenida en el tubo # " se corresponder#a con la
$% para ese antibitico.
b4 +icrodilucin en caldo 1 El mismo mtodo llevado a microtcnica. %iene como ventajas que emplea
menor cantidad de recursos y se facilita su ejecucin #e realiza en placas de microttulo de fondo
plano con tapa destinadas para estos fines. 0iferentes mtodos automatizados utilizan como base
esta variante y se considera el mtodo ideal para monitorear el tratamiento antimicrobiano en el
paciente grave. -a lectura informe del laboratorio e interpretacin de los resultados se realiza de
igual forma a la antes descrita.
c4 +todo de Aauer@Sirby 1 Es el internacionalmente recomendado para la prctica hospitalaria de
rutina dada su sencillez y bajo costo no obstante est sujeto a m*ltiples errores tcnicos razn por
la que su realizacin requiere de un e(haustivo control de la calidad. #e realiza en placas de cultivo
con )gar de +ueller@Jinton sobre las que se e(tiende el microorganismo de prueba con un hisopo
de algodn estril. ,osteriormente sobre la superficie de la placa inoculada se colocan peque.os
discos comercialmente preparados impregnados con concentraciones estandarizadas de los
diferentes antibiticos y debidamente identificados. -as placas se incuban por un periodo de;E@<7
horas. -ectura1 El antibitico impregnado en el disco al hacer contacto con la superficie h*meda de
12
www.monografias.com
la placa de agar difundir en el medio impidiendo el crecimiento del microorganismo de prueba en
correspondencia con su grado de susceptibilidad 5halo de inhibicin4. 3on una regla plana se mide
en milmetros el halo obtenido en cada caso y se compara ste con los datos reflejados en las
tablas de referencia para la interpretacin de los resultados. 9ig. F y 7. El -aboratorio informar el
antibitico acompa.ado de la categora de susceptibilidad correspondiente.
Fig.4.& 'ntibiograma por m(todo de Fig. 4.) E*emplo de antibiticos sensible
di+usin y resistente
#roblema' Usted tendr en su puesto de trabajo un antibiorama realizado por el m-todo de /auer01irby y
los datos correspondientes a otro realizado por uno de los m-todos de diluci+n. %ealizar la
lectura, in"ormar e interpretar los resultados correspondientes en cada caso.
#rocedimiento.
)ntibiograma por el mtodo de Aauer@Sirby1
- 6ealice meticulosamente la medicin en milmetros de los halos de inhibicin de los diferentes
antibiticos. ,ara ello coloque la regla sobre cada uno de los discos por el reverso de la placa
determinando en cada caso el tama.o del dimetro del halo.
- &dentifique el antibitico y escriba en su cuaderno la medida en mm obtenida para cada uno.
- 3ompare los resultados por usted obtenidos con los datos que se ofrecen en la tabla de referencia
5%abla ;4 y determine la categora de susceptibilidad correspondiente a cada antibitico.
- &nforme e interprete los resultados.
)ntibiograma por mtodo de dilucin1
- 3ompare los valores de 3+& para cada antibitico que se le ofrecen en el problema con los datos de la
tabla de referencia 5%abla <4.
- 0etermine las categoras de susceptibilidad en cada caso.
- &nforme e interprete los resultados.
/abla 1. 4E5E4E%*23 #343 $3 1E/E4M2%3*2;% 1E $3. *3/EGO4<3. 1E .0.*E#/2-2$2131
#O4 M=/O1O. 1E 1250.2;%
3gente antimicrobiano
*ontenido
del disco
>?g@
/amao del dimetro >mm@
4 2 .
)mpicilina ;8 T ;F ;7@;C U ;B
3efazolina F8 T ;7 ;=@;B U ;E
3eftria(one F8 T ;F ;7@<8 U <;
:entamicina ;8 T ;< ;F@;7 U ;=
Sanamicina F8 T ;F ;7@;C U ;E
%etraciclina F8 T ;7 ;=@;E U ;D
3iproflo(acina = T ;= ;C@<8 U <;
)cido !alid(ico F8 T ;F ;7@;E U ;D
3loramfenicol F8 T ;< ;F@;B U ;E
13
6esistente
#ensible
www.monografias.com
9osfomicina <88 T ;< ;F@;= U ;
/abla ". 4E5E4E%*23 #343 $3 1E/E4M2%3*2;% 1E $3. *3/EGO4<3. 1E .0.*E#/2-2$2131
#O4 M=/O1O. 1E 12$0*2;%
3gente antimicrobianio *oncentracin Mnima 2n9ibitoria >?gAml@
4 2 .
)mpicilina U F< ;C T E
3efazolina U F< ;C T E
3eftria(one U C7 ;C@F< T E
:entamicina U E @ T 7
Sanamicina U F< @ T ;C
%etraciclina U ;C E T 7
3iproflo(acina U 7 < T ;
)cido !alid(ico U F< ;C T E
3loramfenicol U ;< ;F@;B T ;E
9osfomicina U ;< ;F@;= T ;C
#resentacin de 4esultados.
Elabore un informe con los resultados obtenidos donde destaque1
- )ntibiticos susceptibles intermedios y resistentes en cada caso.
- 6ealice un comentario sobre los resultados por usted obtenidos donde se.ale cuales pudieran ser los
antibiticos posibles a seleccionar por el mdico.
3utopreparacin
)dems de estudiar los aspectos tericos de la prctica que aparecen en el folleto lea detenidamente en su
libro de %e(to 5+icrobiologa y ,arasitologa +dica %omo &4 los 3aptulos ;8 y ;; ,g. E;@DD. -uego
proceda a responder las siguientes preguntas1
;. G3ul usted considera constituye una de las causas fundamentales del acelerado incremento de la
resistencia bacteriana a los agentes antimicrobianosH 9undamente su respuesta.
<. En el laboratorio se aisl un estafilococo que present el siguiente patrn de susceptibilidad1
,enicilina1 6 Sanamicina1 # cefazolina1 # %etraciclina1 & y cloramfenicol1 #
a4 &nterprete los resultados obtenidos
b4 GIu mecanismo de resistencia bacteriano usted considera se puso de manifiesto en la
resistencia observada a la penicilinaH. Mustifique su respuesta.
c4 GIu otros mecanismos de resistencia bacterianos a las drogas antimicrobianas usted
conoceH
F. GIu se conoce como antibiogramaH
7. G3ules son los mecanismos ms frecuentes que utilizan las bacterias para resistir el ataque de los
antibiticosH
Prctica de laboratorio
/ema &' -acteriologa M6dica
/tulo' 1iagnstico de laboratorio de los cocos pigenos
Objeti8os'
- 0iferenciar al microscopio las caractersticas morfolgicas y tintoriales de los diferentes gneros y/o
especies bacterianas incluidas dentro de este grupo.
- "bservar las caractersticas diferenciales de las colonias producidas por estas bacterias sobre los
medios empleados para el primocultivo.
3spectos tericos
Aajo la denominacin de cocos pigenos se agrupan las especies bacterianas con morfologa coccea
5forma redondeada4 y que producen pus. 0entro de este grupo se encuentran las especies patgenas de los
gneros1 )taphylococcus, )treptococcus, Enterococcus y (eisserias.
Estas bacterias estn implicadas en procesos infecciosos diversos que van desde un absceso localizado
hasta una sepsis generalizada de mal pronstico.
0iagnstico de cocos pigenos grampositivos1 ,ara el diagnstico de las infecciones ocasionadas por
estafilococos estreptococos y enterococos las muestras pueden ser variadas y dependern de la
localizacin del proceso infeccioso. Entre las ms comunes se encuentran1
- #ecrecin de heridas y/o abscesos
14
www.monografias.com
- #ecrecin nasal y/o farngea
- #angre
- Esputo
- #ecrecin tica
- -quido cefalorraqudeo
- "rina
El primer paso del diagnstico consiste en la realizacin de un e(amen directo de la muestra 5frotis y
coloracin por :ram4 para determinar las caractersticas morfolgicas y tintoriales del agente causal.
,aralelamente tambin se realiza una siembra en placas con )gar #angre 5primocultivo4 para observar las
caractersticas culturales del microorganismo y realizar posteriormente las pruebas fisiolgicas especficas
para la determinacin de las especies.
-os pasos generales del diagnstico se muestran en el siguiente esquema1
Esquema para la identificacin de los cocos pigenes :ram positivos
0iagnstico de cocos pigenos gramnegativos 5 (. meninitidis y (. onorrhoeae 41
En las infecciones causadas por (. onorrhoeae, las muestras fundamentales son1
- #ecrecin endocervical
- #ecrecin uretral
- #ecrecin conjuntival
En las infecciones por (. meninitidis las muestras pueden ser1
- -36
- )spirados de petequias
15
www.monografias.com
- #angre 5para cultivo4
- #ecrecin nasofarngea 5estudio de portadores4
En ambos casos se realiza un e(amen directo de la muestra 5frotis y coloracin por :ram4 para determinar
las caractersticas morfolgicas y tintoriales del agente causal. ,aralelamente tambin se efect*a una
siembra en placas con )gar %hayer +artin y/o )gar 3hocolate 5primocultivo4 para observar las
caractersticas culturales del microorganismo y realizar posteriormente las pruebas fisiolgicas especficas
para la determinacin de las especies. Estas especies bacterianas son microaerfilas por lo que requieren
de condiciones especiales de incubacin para su adecuado desarrollo2 se deben mantener los cultivos a
temperatura de F=@FB
o
3 en atmsfera conteniendo de =@;8> de 3"< por 7E horas.
-os pasos generales del diagnstico se muestran en el siguiente esquema1
Esquema para la identificacin de los cocos pigenes :ram negativos
#roblema' Usted tendr en su puesto de trabajo preparaciones 2exmenes directos3 de di"erentes muestras
a las $ue realizar tinci+n de Gram y observar al microscopio para identi"icar las caracter#sticas
mor"ol+icas y tintoriales de las bacterias presentes en ellas. Tambi-n encontrar placas de primocultivos
para la observaci+n de las caracter#sticas culturales de los microoranismos en estudio.
- +icroscopio
- )ceite de cedro
- ,reparaciones de muestras 5e(menes directos4
- ,lacas con cultivos de cocos pigenos
- 3olorantes de :ram
#rocedimiento'
,ara observar las caractersticas morfolgicas y tintoriales de las bacterias en estudio1
- 6ealice la tincin de las preparaciones procediendo de igual modo que en la ,rctica !o. F
- 3oloque la lmina te.ida en el microscopio y adicione sobre ella una gota de aceite de cedro.
- Enfoque con el objetivo de ;88 (
- )note las caractersticas observadas 5forma modo de agrupacin respuesta a la tincin de
:ram4.
,ara determinar las caractersticas del crecimiento1
- "bserve las colonias desarrolladas sobre la superficie de placas de cultivo y anote sus
caractersticas ms distintivas 5tama.o color aspecto borde superficie4.
- +ire alrededor de las colonias y refiera si hay lisis o no de los eritrocitos de la sangre del medio de
cultivo y si esta es total o parcial.
- )note cada resultado en su cuaderno de trabajo.
16
www.monografias.com
,repare un informe de los resultados obtenidos en la prctica. Escriba el nombre del gnero bacteriano 5o
especie si procede4 que deba corresponder a cada una de las morfologas por usted observada. %enga en
cuenta respetar la nomenclatura binomial para la escritura de los nombre cientficos de los
microorganismos.
3utopreparacin
6evise en su libro de te(to +icrobiologa y ,arasitologa +dica %omo & los 3aptulos que a continuacin se
refieren1
- 3aptulo ;E Estafilococos ,g. ;=F@;=C ;=D y ;C8
- 3aptulo ;D Estreptococos ,g. ;C=@;B8 y ;BF@;B=
- 3aptulo <8 Enterococos ,g. ;BD@;EC
- 3aptulo <7 (eissserias y ,oraxella catarrhalis ,g. <;B@<;D <<<@<<F <<= <<E y <<D
,roceda posteriormente a responder las siguientes preguntas1
;. GIu entiende usted por cocos pigenosH
<. GIu valor considera usted que tiene el e(amen directo de la muestra en el diagnstico presuntivo de las
infecciones por estas bacteriasH
F. -a catalasa es una enzima producida por algunos cocos grampositivos. GIu valor tiene la deteccin de
la produccin de esta enzima en el laboratorioH
7. G3ul es la morfologa y el modo de agrupacin de estafilococos estreptococos neumococos
enterococos y neisseriasH
=. GIu importancia tiene la prueba de la coagulasa para el diagnstico de estafilococosH
C. G3mo se clasifican los estreptococos de acuerdo al tipo de lisis que producen en las placas de )gar
#angreHGIu significan los trminos V W y X hemolticosH
B. ) su consulta llega un paciente del se(o masculino con una uretritis purulenta en el que usted sospecha
una gonorrea. GIu e(amen microbiolgico usted indicara en este casoH GIu muestra se debe colectar
para realizar el diagnsticoH 0e ser el resultado positivo Gqu informe esperara usted del laboratorioH #i su
paciente fuese del se(o femenino Gqu e(amen usted indicaraH
Clase Prctica !
%ema ?1 +icologa +dica
0iagnstico de laboratorio de las micosis
Objeti8os
- &nterpretar los resultados de los estudios micolgicos emitidos por el laboratorio a travs del
conocimiento de los diferentes pasos del diagnstico.
- "bservar clulas de hongos filamentosos y levaduriformes as como su modo de reproduccin.
3spectos tericos'
El trmino micosis se utiliza para referirse a las infecciones causadas por hongos. Estos pueden producir
afecciones tanto de tipo superficial cutnea como sistmica localizacin sta que determinar la
complejidad y gravedad del cuadro clnico. En dependencia de la especie los hongos patgenos al hombre
pueden producir da.os en el hospedero que van desde sencillas manchas en la piel hasta cuadros de mal
pronstico que comprometen la vida del paciente.
+uestras1 -as muestras a colectar en el laboratorio dependern de la afeccin especfica1
- En la pitiriasis versicolor 5agente causal ,alassezia "ur"ur4 el e(amen consiste en raspados de la zona de
la piel afectada para recoger las escamas de las lesiones. En la piedra blanca y la piedra negra 5agentes
causales Trichosporon beielii y Piedraia hortae respectivamente4 la muestra la constituyen los pelos
infectados.
- En las dermatofitosis 5producidas por los gneros Trichophyton, ,icrosporum y Epidermophyton4 las
muestras consisten en raspados de la zona afectada de la piel o las u.as y los pelos infectados.
4andida albicans puede estar implicada en afecciones cutneas afectando la piel y las u.as por
lo que en estos casos las muestras seran los raspados de dichas zonas.
@ En las infecciones por 4andida sp las muestras dependern de la afeccin1
- "nicomicosis1 raspados de u.as.
- 3andidiasis genital1 secrecin vaginal
- 3andidiasis oral1 secrecin de las lesiones.
- &ntertrigo1 secrecin de las lesiones.
- 3andidiasis urinaria1 orina
- 3andidiasis sistmica1 sangre esputo -36 y biopsias de tejidos.
E(amen microscpico1 ,ara el e(amen al microscopio de las muestras stas se colocan entre cubre y
portaobjeto con una gota de S"J al ;8>. -a preparacin se calienta directamente a la llama de un
17
www.monografias.com
mechero bunzen sin dejar hervir y posteriormente se observa al microscopio ptico con objetivos de <8N y
78N. Es importante para la identificacin del microorganismo la observacin cuidadosa de la morfologa de
la clula presencia de septos y modo de reproduccin.
,ara la observacin de cndidas puede realizarse una tincin de :ram observando la preparacin te.ida al
microscopio con objetivo de inmersin 5;88N4. -as levaduras responden como grampositivas.
3ultivo1 El cultivo de las muestras se realiza en tubos con medio )gar #abouraud glucosa los que se
incuban a temperatura ambiente durante B Y ;7 das. %ranscurrido este tiempo se observan las
caractersticas de las colonias desarrolladas.
,ara el diagnstico de pitiriasis versicolor y ti.a capitis es *til la e(posicin directa de la lesin a la lmpara
de Zood. Esta es una lmpara que emite radiaciones en el rango de la luz ultravioleta y permite observar
fluorescencia. En el caso de pitiriasis versicolor la fluorescencia que se produce es de color amarillo@
naranja y en la ti.a capitis producida por ,. ypseum y ,. audoinii la fluorescencia es de color verde.
,roblema1 $sted encontrar en su puesto de trabajo preparaciones en fresco realizadas a partir de cultivos
puros de diferentes especies de hongos filamentosos para observar en ellas sus caractersticas
morfolgicas y formas de reproduccin adems encontrar lminas te.idas por :ram para observar las
caractersticas morfolgicas y de reproduccin de 3andida.
- ,reparaciones en fresco con lactofenol de cultivos puros de diferentes especies de hongos
filamentosos causales de micosis.
- ,reparaciones te.idas por :ram de 4andida albicans en cultivo puro.
- +icroscopio ptico.
- )ceite de cedro
#rocedimiento'
,ara observar las caractersticas morfolgicas y de reproduccin de los hongos filamentosos en estudio1
- 3oloque la preparacin en el microscopio y enfoque con objetivo de <8N y luego pase a objetivo de
78N
- -ocalice en la preparacin las hifas y aprecie si estas son septadas o aseptadas. Ausque campos
visuales que le permitan observar los caracteres de las esporas 5tama.o presencia de septaciones
forma4.
- )note y dibuje lo observado.
,ara apreciar los caracteres distintivos de 4andida albicans1
- 3oloque la preparacin te.ida en el microscopio y agregue sobre ella una gota de aceite de cedro.
- Enfoque con el objetivo de mayor aumento de ;88 N
- "bserve la forma de la clula su modo de reproduccin y si hay presencia de pseudomicelio y de
tubos germinativos.
- )note y dibuje lo observado.
,repare un informe de los resultados obtenidos en la actividad seg*n las orientaciones de su profesor
3utopreparacin
6evise en su libro de te(to +icobiologa y ,arasitologa +dica %omo & los siguientes captulos1
- 3aptulo 7; :eneralidades de +icologa ,g. 7=D@7CF
- 3aptulo 7F ,alassezia "ur"ur ,g. 7B=@7BB
- 3aptulo 77 5ermato"itos ,g. 7E;@7E=
- 3aptulo 7E 4andida ,g. =8;@=87
,roceda luego a responder las siguientes preguntas1
;. GIue e(menes usted recomendara para el diagnstico de la pitiriasis versicolorH
<. $n paciente que llega a su consulta tiene afectado el tejido queratinizado de las u.as de los pies Gqu
gneros de hongos pueden estar implicados en este tipo de afeccinH Gqu e(amen usted indicaraH GIu
muestra usted colectara para el diagnsticoH
F. G,or qu la infeccin por 4andida se considera una micosis oportunistaH
"ibliograf#a
- Aasualdo M 3oto 3 %orres 6. +icrobiologa Aiomdica1 Aacteriologa +icologa ?irologa
,arasitologa &nmunologa. Ed. )tlanta )rgentina ;DDC.
- Aotero 0 6estrepo +. ,arasitosis Jumana. Fra. Ed. 3orporacin para &nvestigaciones Aiolgica
3olombia ;DDE
- --op ) ?alds@0apena + Kuazo M-. +icrobiologa y ,arasitologa +dica. Ed. 3iencias +dicas
-a Jabana <88;
18
www.monografias.com
.itios Beb'
- http1//www.siue.edu/cbwilso/#taphylococcus.jpg
- http1//www.cat.cc.md.us/courses/bio;7;/labmanual/lab;/images/empneumo.jpg
- http1//rocLefeller.edu/vaf/;CL.htm
- http1//www.cat.cc.md.us/courses/bio;7;/labmanual/lab;C/images/DB<;Ea.jpg
- http1//www.meddean.luc.edu/lumen/deptwebs/microbio/med/gram/slidesFjpg
)utores1
Ms*. $utgarda 3bn CzDuez
,rofesora )u(iliar
1r*. Mara H. Espino Hernndez
mespino[elacm.sld.cu
,rofesora )u(iliar
1ra. Mercedes .il8a 4e7es
,rofesora )u(iliar
3oautores1
1ra. $inet 3lemn Mondeja
,rofesor )sistente
1ra. Mara Eulia Cald6s Hernndez
,rofesor )sistente
$ic. %iuris Mirabal Cald6s
)diestrada
)sesor1
1r. Eorge $uis Fuazo .il8a
,rofesor 3onsultante y
,rofesor ,rincipal del &#3+J
Este documento est protegido por las regulaciones de 0erecho de )utor. 9ue registrado en el 3entro
!acional de 0erecho de )utor 53E!0)4 con el n*mero ;<8;@<88=. Escuela -atinoamericana de +edicina
3uba <88=.
19
www.monografias.com
Escuela -atinoamericana de +edicina 5E-)+4
)signatura1 )gentes Aiolgicos.
<88=
20

Guia Trabajo Practico Carrera Medicina

Hochgeladen von

Dokumentinformationen

Copyright

Verfügbare Formate

Dieses Dokument teilen

Dokument teilen oder einbetten

Freigabeoptionen

Stufen Sie dieses Dokument als nützlich ein?

Sind diese Inhalte unangemessen?

Copyright:

Verfügbare Formate

Guia Trabajo Practico Carrera Medicina

Hochgeladen von

Copyright:

Verfügbare Formate

www.monografias.

Das könnte Ihnen auch gefallen