Universidade Federal de So Carlos

Centro de Cincias Exatas e Tecnologia

Departamento de Engenharia Qumica DEQ
a!orat"rio de Engenharia das #ea$%es
Cintica Enzimtica em um Reator em
Batelada
&ro'essor( Dr) #a*uel +iordano
,line Colaciti -./00.
Caio 1urohane -02022
3aria ,lice +rigoli dos Santos -40056
7ath8lia ,guilar Santune -.405.
Thas 9elena de ,lmeida Si*ueira -.4:;;
So Carlos< -5 de Setem!ro de -66;
/
ndice Geral
INTRODUO ............................................................................... 3
OBJETIVO ..................................................................................... 5
FUNDAMENTOS TERICOS ............................................................ 5
CARBOIDRATOS ................................................................................... 5
AMINOCIDOS E PROTENAS ...................................................................... 6
ENZIMA ........................................................................................... 8
CINTICA ENZIMTICA .......................................................................... 1
EQUAO DE MICHAELIS-MENTEN .............................................................................. 11
INFLUNCIAS EXTERNAS NA CINTICA DA REAO. .............................................................. 14
BIOCATA!ISADOR IMOBI!IZADO. ................................................................ 1"
MTODOS DE IMOBILIZAO ..................................................................................... 18
EFEITOS DIFUSIVOS ............................................................................. 1#
AN!ISE DOS EFEITOS DIFUSIVOS ............................................................... $1
%IDR!ISE DA SACAROSE E O MTODO DNS ................................................. $5
MTODO DO CIDO 3&5 DINITROSSA!IC!ICO 'ADNS( ...................................... $6
MTODO DIFERENCIA! ......................................................................... $"
MATERIAIS E MTODOS ............................................................... $8
MATERIAIS UTI!IZADOS ......................................................................... $8
METODO!O)IA .................................................................................. $8
HIDRLISE DA SACAROSE CATALISADA PELA INERTASE LIRE ................................................. !8
HIDRLISE DA SACAROSE CATALISADA PELA INERTASE IMOBILIZADA EM UM "EL DE A"AROSE ............. !#
RESU!TADOS E DISCUSSO ......................................................... 3
ENZIMAS !IVRES ................................................................................ 3
ENZIMA IMOBI!IZADA ........................................................................... 36
CONC!US*ES ............................................................................. +"
REFER,NCIAS BIB!IO)RFICAS ................................................... +8
MEMORIA! DE C!CU!O .............................................................. +#
PRIMEIRA PARTE- ENZIMA !IVRE ............................................................... +#
-
INTRODUO
Uma importante desco!erta para a en=imologia 'oi 'eita em /4;.< *uando
>?chner conseguiu extrair a primeira en=ima ativa de uma c@lula viva) Tal tra!alho
proporcionou diversas contri!ui$%es< dentre elas( primeiramente< *ue um !iocatalisador
pode tra!alhar de maneira e'iciente e independente de *ual*uer !ioprocessoA e em
segundo< novos estudos tiveram incio< essencialmente< os relacionados ao isolamento e
puri'ica$o das en=imas< sendo *ue a primeira separa$o sucedida de uma en=ima pura
ocorreu em /;-0< por Summer) Este estudo e os posteriores revelaram *ue as en=imas
so protenas< uma propriedade B8 admitida como generalidade)
,ssim< as en=imas so protenas com altos pesos moleculares *ue atuam como
catalisadores) #ecentemente< desco!riuCse *ue algumas mol@culas de #7, tam!@m
apresentam este DpoderE< por@m a grande maioria das rea$%es celulares @ mediada pelas
en=imas)
Sua nature=a e especi'icidade so< principalmente< devido a sua estrutura
tridimensional< a *ual @ determinada pela se*?ncia de amino8cidos *ue a comp%em)
&or@m< so extremamente suscetveis a mudan$as no meio< tal como a altera$o do p9<
temperatura< 'or$as iFnicas e nas concentra$%es envolvidas) Caso< tais parGmetros
ultrapassem o limiar permitido pela macromol@cula< ocorrer8 um processo denominado
desnatura$o< ou seBa< a en=ima diminuir8< ou at@ mesmo perder8< a sua atividade
cataltica pouco tempo ap"s o experimento)
En=imas tm sido muito signi'icativas para diversos produtos industriais por
mais de /66 anos) &or@m< os di'erentes tipos de aplica$o tm aumentado
potencialmente< nas indHstrias alimentcias< 'armacuticas e !io*umicas) ,pesar da
inten$o de aumentar o uso das en=imas< a produ$o desta se desenvolve mais
lentamente) Em /;;0< as vendas norteCamericanas das indHstrias de en=imas eram de
I5.- milh%es< e a proBe$o para -660 era de I040 milh%es
J.K
) Diante deste 'ato< podeCse
supor *ue o pre$o 'inal do produto deva ser altssimo) ,ssim< 'oiCse necess8rio criar
maneiras di'erentes de us8Clas< ao inv@s de deix8Clas livres no meio< B8 *ue neste caso< a
sua reutili=a$o tornavaCse impossvel ou o processo de puri'ica$o inacessvel
economicamente)
Uma maneira muito utili=ada< nos dias atuais< @ a sua imo!ili=a$o) Este
processo podeCse dar por con'inamento em uma matri=< encapsula$o em uma
mem!rana semiperme8vel< entre duas mem!ranas ou adsorvida na super'cie de um
5
suporte s"lido) Tal procedimento o'erece muitas vantagens em rela$o Ls en=imas
livres< dentre eles esto( a sua reutili=a$oA a elimina$o das etapas de recupera$o e
puri'ica$o< as *uais tm custos altosA a manuten$o da sua atividade por mais tempo)
&or@m< a imo!ili=a$o desta protena ode resultar em insta!ilidade< perda de atividade e
altera$%es nas suas condi$%es "timas Mp9< temperatura< 'or$a iFnica< etc)N)
&ortanto< no geral< o tipo de imo!ili=a$o utili=ada em uma en=ima espec'ica e a
sua aplica$o depender8 de diversos parGmetros interrelacionados) Osto includo tanto o
custo da en=ima como do su!strato< o tempo de vida Htil da en=ima imo!ili=ada< os
pesos moleculares das esp@cies envolvidas Mpor exemplo( ser8 *ue o su!strato e o
produto so pe*uenos su'icientes para passarem por uma mem!rana semiperme8velN e
as implica$%es ocasionadas na trans'erncia de massa) De tal modo< no existe um
procedimento certo para a melhor escolha do tipo de imo!ili=a$o< sendo *ue a escolha
da t@cnica ade*uada envolve avan$adas considera$%es dos 'atores relatadas
anteriormente< seguida de experimentos de tentativas e erros at@ *ue se encontrem
resultados aceit8veis)
2
Objetivo
Ps experimentos reali=ados o!Betivam o estudo da hidr"lise en=im8tica da
sacarose< tanto para a en=ima livre como imo!ili=ada< possi!ilitando assim a o!ten$o
de parGmetros cin@ticos e e'etividade o!tidos por m@todos empricos) Ps valores
encontrados empiricamente devero ser comparados com os te"ricos o!tidos pelo
c8lculo de e'etividade interna e m"dulo de Thiele) Ser8 'eito um estudo dos e'eitos
provocados pelo p9 e da temperatura so!re a rea$o de hidr"lise)
Fundamentos Tericos
Carboidratos
Ps car!oidratos so su!stGncias orgGnicas tam!@m chamadas de hidratos de
car!ono Mglicdios< sacardeos ou a$HcaresN) Esse nome 'oi dado por*ue nele esto
presentes - 8tomos de hidrognio< / de car!ono e / 8tomo de oxignio< podendo ser
representados< genericamente< pela '"rmula emprica MC9
-
PN
n
< onde n Q 5) Da o nome
car!o Mcar!onoN hidrato Mhidros R 8guaN) Ps car!oidratos so a maior reserva de energia
de todo o reino vegetal< sendo produto do processo 'otossint@tico< trans'ormando os
gases CP
-
e 9
-
P em a$Hcares< na presen$a da lu= solar< e polimeri=andoCos em
polissacardeos< tais como amido e celulose) &or outro lado< no reino animal< os
car!oidratos so encontrados em pe*uenas *uantidades no sangue< so! a 'orma de
glicose< e no 'gado e mHsculos< so! a 'orma de glicognio) Estes podem ser
classi'icados em( monossacardeos< oligossacardeos e polissacardeos)
Ps monossacardeos< ou a$Hcares simples< so os menores car!oidratos<
contendo de 5 a ; 8tomos de car!ono em sua composi$o< apresentando um sa!or
adocicada< alta solu!ilidade em 8gua e no hidrolis8vel) ,s pentoses e hexoses so os
mais comuns) ,s pentoses so monossacardeos de : car!onos< sendo as mais
importantes as ri!oses e desoxirri!ose< os *uais so componentes essenciais do D7, e
#7,< respons8veis pelo comando e coordena$o das 'un$%es celulares) S8 as hexoses<
monossacardeos de 0 car!onos< por serem ricas em energia so os principais
com!ustveis da c@lula< sendo as mais importantes a glicose< 'rutose e a galactose)
:
Ps oligossacardeos< ou a$Hcares pe*uenos< so car!oidratos constitudos por
dois a de= monossacardeos< por@m para o estudado apresentado< apenas os
dissacardeos sero discutidos) Estes so 'ormados pela com!ina$o de duas mol@culas
de monossacardeos unidas pela liga$o covalente ou glicosdica< havendo o
desprendimento de uma mol@cula de 8gua Msntese de desidrata$oN) So relativamente
pe*uenosA insolHveis em 8gua< in'luenciando o e*uil!rio osm"tico das c@lulasA e so a
principal 'orma de transporte dos car!oidratos) Dentre os mais comuns< encontramCse as
maltoses< lactoses e sacaroses)
, sacarose @ um dissacardeo composta por uma mol@cula de TCDCglicose
MFigura /N e uma mol@cula de UCDC'rutose MFigura -N) Quando h8 a *ue!ra desta liga$o<
por uma rea$o de hidr"lise< uma mistura e*uimolar de glicose e 'rutose @ o!tida) Estes
produtos so denominados de a$Hcares invertidos< pois a sacarose desvia o plano da lu=
polari=ada para a direita< en*uanto os produtos 'ormados desviam o plano para a
es*uerda) Este processo se d8 somente na presen$a da en=ima invertase ou sucrase)
Fiura !" #$D$licose
Fiura %" $D$&rutose
Fiura '" (acarose
)mino*cidos e +rote,nas
,s protenas so as mol@culas orgGnicas mais a!undantes nas c@lulas<
constituindo de 26V a .6V da sua massa seca) Tais compostos so polmeros
construdos a partir de monFmeros de amino8cidos< sendo *ue o TCamino8cido @ o !loco
0
construtor da protena< a *ual @ constituda ao menos de um grupo car!oxlico e um TC
amino8cido) &or@m< elas di'erem entre si pela estrutura dos seus grupos #< ou ento<
pelas suas cadeias laterais)
,pesar da se*?ncia de amino8cido determinar o seu tipo de estrutura< as
intera$%es entre os diversos grupos tam!@m so signi'icativas) ,ssim< a sua estrutura
tridimensional pode ser descrita em *uatro di'erentes nveis(
Estrutura prim8ria( corresponde a se*?ncia linear dos amino8cidos<
sendo *ue cada protena no possui somente uma composi$o 'ixa< mas
tam!@m uma Hnica se*?ncia dos amino8cidos) Desta 'orma< a estrutura
unidimensional tem um pro'undo e'eito na sua con'orma$o
tridimensional e< tam!@m< na sua 'un$o 'inal)
Estrutura secund8ria( esta @ a maneira como a cadeia polipeptdica @
estendida< sendo um resultado das pontes de hidrognio entre os resduos
no separados de'initivamente) Existem dois principais tipos de
estruturas secund8rias( MaN h@lices e M!N 'olha) , estrutura helicoidal pode
ser tanto TChelicoidal ou triplaCh@lice) 7a primeira estrutura< as pontes de
hidrognio podem ocorrer entre o grupo TCcar!oxila com o grupo 79<
existente em sua vi=inhan$a) S8 a triplaCh@lice< presente no col8geno<
consiste em trs TCh@lices entrela$ados em uma superCh@lice< sendo
extremamente rgida e el8stica)
Estrutura terci8ria( esta @ o resultado das intera$%es entre os grupos #
separados pela cadeia) ,ssim< o Ddo!ramentoE da cadeia amino8cida<
indu=ida pela intera$o< determina a estrutura terci8ria da protena) Estes
grupos podem interagir por pontes de hidrognio< liga$%es covalentes ou
pontes de dissul'eto)
Estrutura Quatern8ria( apenas protenas com mais de uma cadeia
polipeptdica possuem este tipo de constru$o< sendo 'ormada pelas
intera$%es entre as suas su!unidades) , estrutura da su!unidade das
en=imas tem papel 'undamental na sua atividade cataltica)
,s protenas tm diversas 'un$%es !iol"gicas< as *uais as cinco principais
categorias so(
&rotenas estruturais( col8geno< *ueratina< glicoprotenas)
.
&rotenas de transporte( hemoglo!ina< al!umina)
&rotenas regulat"rias( hormFnios MinsulinaN)
&rotenas de de'esa( anticorpos)
&rotenas catalticas( en=imas)
-n.ima
,s en=imas constituem uma larga classe dentre as protenas< sendo *ue mais de
dois mil di'erentes tipos so conhecidos) Estas macromol@culas so componentes
essenciais para os seres vivos< especialmente< devido a sua capacidade cataltica no
meta!olismo celular)
Estas so extremamente espec'icas< vers8teis e e'etivas *uando comparadas as
rea$%es *umicas< em temperatura am!iente) P alto grau de especi'icidade da en=ima se
d8 pela analogia da chave com a 'echadura para a intera$o su!stratoCen=ima) Esta
rela$o a'irma *ue existe uma Hnica regio Mstio catalticoN complementar em tamanho<
'orma e nature=a *umica do su!strato MFigura 2N) Esta cavidade @ um arranBo
tridimensional espec'ico grupos #Cresiduais de amino8cidos< *ue podem interagir com
o su!strato)
Fiura /" 0odelo c1ave$&ec1adura
4
W importante lem!rar *ue a rela$o chaveC'echadura no explica por*ue um
su!strato parecido com o outro< *uimicamente< no reage da mesma 'orma< em!ora
possua os mesmos grupos *ue participam da rea$o cataltica) Putra explica$o seria a
teoria do aBuste indu=ido< proposto por 1oshland
J/K
) Sua hip"tese esta!elece *ue em!ora
o su!strato semelhante possua os grupos reagentes< outros grupos presentes neste
indu=em a en=ima a uma mudan$a estrutural *ue resulta no alinhamento no apropriado
dos grupos reativos) ,ssim< o!servaCse *ue @ necess8rio tam!@m< *ue o su!strato como
um todo indu=a a en=ima a uma con'orma$o espacial *ue alinhe apropriadamente os
grupos reativos)
, sua principal 'un$o @ a diminui$o da energia de ativa$o da rea$o pela
'orma$o do complexo su!stratoCen=ima< podendoCse o!ter o produto deseBado em
minutos *ue< espontaneamente< seria o!tido em um ms) &or@m< @ importante salientar
*ue< de 'orma alguma< a en=ima modi'ica a constante de e*uil!rio ou a energia livre de
+i!!s da rea$o)
Fiura 2" Com+ara34o entre as enerias de ativa34o
7o geral< uma en=ima catalisa *uer uma rea$o *uer a sua inversa) &or ve=es isto
no @ possvel< por uma de duas ra=%es( ou a rea$o catalisada li!era muita energia
en*uanto *ue a rea$o inversa exige muita energiaA ou a rea$o @ a ciso de uma
mol@cula em dois produtos en*uanto *ue a rea$o inversa< re*uerendo o encontro de
dois su!stratos< @ menos prov8vel)
, vantagem da cat8lise< em termos !iol"gicos< @ a o!ten$o de *uantidades
maiores de um produto espec'ico em detrimento de outros) &or exemplo< se um dado
reagente , origina< espontaneamente< os produtos > e C se a rea$o *ue produ= o
produto > 'or acelerada< no s" se o!tm maiores *uantidades de > no mesmo tempo
como se diminui a 'orma$o do produto C por 'alta de reagente) Desta 'orma< as
;
en=imas encaminham os reagentes para a 'orma$o de produtos 'avor8veis ao
meta!olismo< em detrimento de outros)
7ormalmente< *uando se 'ala de cat8lise< re'ereCse ao aumento da velocidade de
rea$o< entretanto rigorosamente 'alando< a en=ima pode acelerar ou diminuir a
'orma$o do produto)
, cat8lise homognea consiste ao processo< no *ual um catalisador est8 em
solu$o com pelo menos um dos reagentes) Pcorre *uando a mistura( catalisadorX
reagente @ uma mistura homognea) 7esse caso o catalisador participa e'etivamente da
rea$o< mas no @ consumido no processo M@ regenerado no 'inalN) Putra caracterstica
deste tipo de cat8lise @ produ$o de produtos intermedi8rios) , principal vantagem deste
tipo de rea$o consiste em maiores rendimentos< *uando comparados ao mesmo
processo via cat8lise heterognea< para um dado tempo de rea$o) W possvel citar ainda
como vantagem a no in'luncia da agita$o no processo< sendo este um parGmetro no
relevante) Entretanto< como desvantagens tmCse a !aixa esta!ilidade t@rmica e a
di'iculdade de separa$o dos produtos< uma ve= *ue produtos< reagentes e catalisador
constituem um sistema mono'8sico)
, cat8lise heterognea envolve mais de uma 'ase< sendo *ue o catalisador @<
geralmente< um s"lido e os reagentes e produtos l*uidos ou gasosos) 7esse caso< o
catalisador 'ornece uma super'cie onde os reagentes iro reagir mais 'acilmente< e com
menor energia de ativa$o) ,s principais vantagens da utili=a$o de catalisadores
heterogneos so a sua grande esta!ilidade t@rmica Msuportam temperaturas elevadasN e
a sua 'acilidade de recuper8Clos no 'im da rea$o( tratandoCse de uma 'ase s"lida< uma
simples opera$o como a 'iltra$o ou a centri'uga$o permite separar o catalisador dos
produtos da rea$o) , principal desvantagem @ a 'alta de seletividade)
Cin5tica -n.im*tica
9istoricamente< desco!riuCse *ue a cin@tica en=im8tica de uma rea$o cataltica
no se dava em um Hnico passo) , hidr"lise da sacarose em glicose e 'rutose< atrav@s da
invertase< 'oi demonstrada em /;6- por >roYn em um de seus experimentos) ,ssim< a
dependncia hiper!"lica< entre a velocidade da rea$o e a concentra$o do su!strato< 'oi
encontrada em outras rea$%es catalticas)
, cin@tica en=im8tica< ramo da !io*umica preocupaCse em estudar a velocidade
de uma rea$o e os 'atores *ue a in'luenciam< ou seBa< avalia a *uantidade de produto
/6
'ormado ou a de su!strato consumido por unidade de tempo de rea$o) ,trav@s desse
estudo @ possvel a determina$o das constantes de a'inidade do su!strato e dos
ini!idores< o conhecimento das condi$%es "tima da cat8lise< a elucida$o dos
mecanismos da rea$o e a determina$o da 'un$o de uma determinada en=ima em uma
rota meta!"lica)
Uma rea$o en=im8tica pode ser expressa pela seguinte e*ua$o(
-6ua34o !
Pnde(
E Concentra$o da en=ima)
S Concentra$o do su!strato)
ES Concentra$o do complexo de transi$o)
& Concentra$o do produto)
P estudo cin@tico de uma en=ima visa primariamente caracteri=ar< ou seBa<
descrever a atividade dessa en=ima) In vitro estudaCse a atividade da en=ima procurando
sa!er *ue tipo de rea$%es pode catalisar< *ue su!stratos pode interagir e como se
modi'ica essa atividade M*ualitativa eXou *uantitativamenteN *uando se 'a=em variar as
condi$%es em *ue @ ensaiada)
P valor de p9< a temperatura< o tempo de incu!a$o< as concentra$%es dos
ligantes( su!stratos< produtos< ini!idores e ativadores so exemplos de condi$%es de
ensaio *ue podem ser modi'icadas com o o!Betivo de o!servar como varia a atividade
da en=ima)
-6ua34o de 0ic1aelis$0enten
Uma explica$o para as o!serva$%es de >roYn e outros estudiosos 'oi
'ormali=ada por 9enri< em /;65< e 'inali=ada por ) 3ichaelis e 3) ) 3enten< em
/;/5) 3ichaelis e 3entem o!tiveram !ons resultados para dar suporte a sua an8lise da
//
dependncia da velocidade inicial com a concentra$o do su!strato e da en=ima) Eles
admitiram a rea$o en=im8tica mais simples< caracteri=ada por um Hnico su!strato se
trans'ormando em um Hnico produto e *ue< inicialmente a en=ima e o su!strato reagem
reversivelmente< 'ormando um composto intermedi8rio denominado de complexo
en=imaCsu!strato *ue< por sua ve=< ou se decomp%e ou reage com outra su!stGncia<
regenerando a en=ima e 'ormando os produtos da rea$o) Este processo pode ser
representado pela E*ua$o /< mostrada anteriormente)
ConsiderandoCse *ue E< S e ES alcan$am e*uil!rio muito rapidamente em
compara$o a velocidade com a *ual ES se decomp%e em en=ima livre e produto< e
ainda velocidade instantGnea em *ual*uer tempo depende da concentra$o de ES(
K J
-
ES k v =
-6ua34o %
,inda temCse *ue a en=ima total no sistema reacional @ dada por(
K J K J K J
6
ES E E + =
-6ua34o '
Dividindo a E*ua$o - por JE
6
K< temCse(
K J K J
K J
K J
-
6
ES E
ES k
E
v
+
=
-6ua34o
/
7o e*uil!rio< JESK pode ser expressa em termos de JSK< JEK e 1
m
< onde 1
m
@ a
constante de dissocia$o do complexo ES(
m
m
K
S E
ES
k
k
ES
S E
K
K KJ J
K J
K J
K KJ J
/
/
= = =


-6ua34o 2
Su!stituindo a E*ua$o 2 na E*ua$o :< temCse(
/-
m
m
K
S E
E
K
S E k
E
v
K KJ J
K J
K KJ J
K J
-
6
+
=

-6ua34o 7
#earranBado a E*ua$o 0< o!t@mCse(
S K
S v
v
m
+
=
max
-6ua34o
8
K J
6 - max
E k v =

-6ua34o 9
Pnde< o termo 1
m
@ a concentra$o de su!strato na *ual a velocidade @ igual L
metade de v
m8x
Esse termo @ caracterstico de um su!strato para uma en=ima espec'ica<
e nos 'ornece um parGmetro de especi'icidade deste su!strato em rela$o L en=ima< isto
@ a Da'inidadeE) Quanto menor o 1
m
< maior a especi'icidade< e viceCversa)
3ichaelis e 3enten propuseram o modelo acima citado como modelo de rea$o
en=im8tica para apenas um su!strato) , partir deste modelo< criaram a E*ua$o ;< *ue
nos permite demonstrar como a velocidade de uma rea$o varia com a varia$o da
concentra$o do su!strato) Esta e*ua$o pode ser expressa gra'icamente< e representa o
e'eito da concentra$o de su!strato so!re a velocidade de rea$o en=im8tica)
, representa$o gr8'ica da velocidade da rea$o em 'un$o da concentra$o de
su!strato @ uma hip@r!ole MFigura 0N< sendo *ue a assntota hori=ontal corresponde L
v
max
) P valor de 1
m
tam!@m pode ser o!tido atrav@s do gr8'ico pois< *uando JSKR1
3
< a
e*ua$o de 3ichaelisC3enten prev *ue a velocidade seBa(
- K J K J
K J
m a x
m a x
v
S S
S
v v =
+
=
-6ua34o :
/5
Fiura 7" -&eito da concentra34o do substrato na velocidade em uma rea34o en.im*tica
In&lu;ncias e<ternas na cin5tica da rea34o=
1.1.1.1. Temperatura
Como em *ual*uer rea$o *umica< a en=im8tica tem a sua velocidade de
'orma$o de produto aumentada com a eleva$o da temperatura at@ certo limite) Desta
'orma< acima deste valor a atividade da en=ima tende a decrescer com esta vari8vel
devido a sua desnatura$o< ou seBa< ocorre a perda de sua 'un$o< como @ demonstrado
na Figura .< em um intervalo de tempo menor)
Fiura 8" -&eito da tem+eratura na atividade en.im*tica
/2
P ponto "timo de opera$o pode ser o!tido atrav@s de um gr8'ico da varia$o da
atividade en=mica pela temperatura< sendo *ue o trecho ascendente @ denominado de
ativa$o t@rmica) , Figura 4 @ um exemplo de duas en=imas sendo desnaturadas nas
temperaturas 5.<:ZC e 26ZC)
Fiura 9" In&lu;ncia da tem+eratura na atividade en.im*tica
7a regio ascendente< a velocidade da rea$o varia de acordo com a E*ua$o de
,rrhenius ME*ua$o /6N)
K J
-
E k v =

-6ua34o !>
T R
E
a
e A k

=
-

-6ua34o !!
Pnde(
Ea

Energia de ativa$o J[calXmolK
, Fator pr@Cexponencial
#C Constante universal dos gases J[calXmol)1K
T Temperatura do meio J1K
/:
S8 a parte descendente da Figura 4 @ conhecida como temperatura de desativa$o
ou desnatura$o t@rmica< sendo representada pela E*ua$o /-(
t k
d
e E E

= K J K J
6

-6ua34o !%
Pnde(
[
d
Constante de desnatura$o)
W importante *ue apesar de ser uma DconstanteE< o [
d
varia com a altera$o da
temperatura< de acordo com a E*ua$o /5)
T R
E
d d
d
e A k

=

-6ua34o !'
t k
T R
E
d
a
e E e A v

= K J
6

-6ua34o !/
Pnde(
E
d
Energia de desativa$o J[calXmolK
Deste modo< a energia de ativa$o de uma rea$o en=im8tica varia de 2 a -6
[calXmol< e a de desativa$o esta na 'aixa de 26 a /56 [calXmol) &ortanto< a
desnatura$o de en=ima ocorre mais r8pido *ue a sua ativa$o)
1.1.1.2. pH
, estrutura tridimensional de uma protena @ esta!ili=ada pela 'orma$o de
liga$%es entre os diversos amino8cidos) ,ssim< *uando o p9 da solu$o @ alterado< as
liga$%es esta!ili=adoras so perdidas< ocasionando em uma nova con'orma$o ou<
depende das liga$%es *ue!radas< at@ mesmo um desdo!ramento da protena) ,l@m
disso< algumas en=imas possuem seus grupos iFnicos no seu stio ativo< ou seBa<
*ual*uer altera$o do meio provocaria uma mudan$a na atividade en=im8tica< por
conse*?ncia< na velocidade da rea$o)
/0
Fiura :" Obten34o e<+erimental do +? timo=
Teoricamente< a determina$o do p9 "timo< em *ue a en=ima deve tra!alhar<
re*uer conhecimento so!re as caractersticas do seu stio ativo< as *uais so di'ceis de
serem o!tidas) ogo< este ponto @ de'inido experimentalmente)
@iocatalisador imobili.ado=
Quando a mo!ilidade de uma en=ima @ restrita a um espa$o 'ixo< temCse uma
en=ima imo!ili=ada) Tal procedimento apresenta importantes vantagens< como a sua
reutili=a$o e a elimina$o de etapas puri'icadoras< ap"s o seu uso) ,l@m disso< essas
macromol@culas podem ser utili=adas em di'erentes con'igura$%es de reatores e altas
taxas volum@tricas de produtos so possveis) Contudo< apesar de suas diversas
vantagens< @ ra=o8vel esperar *ue haBa uma diminui$o na sua atividade cataltica< a
*ual est8 diretamente correlacionada a estrutura da macromol@cula)
, ta!ela a!aixo apresenta os parGmetros cin@ticos< para a invertase solHvel e
imo!ili=ada< utili=andoCse trs suportes di'erentes Malginato de c8lcio< *uitina de [rill e
polietileno ativadoN
J-K
) ,trav@s destes dados< @ possvel o!servar a clara inter'erncia da
imo!ili=a$o< havendo um aumento no 1
m
e uma diminui$o da v
max
para a en=ima
imo!ili=ada< em compara$o L solHvel)
Tabela !" AarBmetros cin5ticos +ara a invertase=
AarBmetr
o
Invertase (olCvel Invertase Imobili.ada 0aterial
D
m
Em0F -0<6 4</ ,lginato de c8lcio
/.
:-<-
5-<-
Quitina de [rill
&olietilieno ativado
v
m*<
EUF
/</6 6<-:
6<.2
6<5-
,lginato de c8lcio
Quitina de [rill
&olietilieno ativado
05todos de imobili.a34o
,s en=imas podem ser imo!ili=adas de di'erentes maneiras< sendo *ue as duas
principais categorias so( con'inamento e imo!ili=a$o em um suporte s"lido)
1.1.1.3. Confinamento
Este tipo de imo!ili=a$o ocorre *uando a en=ima @ 'isicamente aprisionada em
um pe*ueno espa$o< delimitado por uma mem!rana semiperme8vel) 7o ocorre
nenhum tipo de liga$o *umica com o suporte) , incluso em uma matri= e
encapsula$o< dentre desta a microencapsula$o)
Em linhas gerais< a incluso em uma matri=< consiste no aprisionamento das
mol@culas de en=imas entre as malhas de um polmero geli'orme) P uso de tal m@todo @
'avorecido B8 *ue ocorrem liga$%es simples entre a en=ima e o suporte< no havendo a
sua desnatura$o devido a inexistncia de reagentes *umicos) &or@m< as limita$%es
di'usionais so intensas) Ps materiais utili=ados so< geralmente< alginato de c8lcio< agar
e col8geno)
, encapsula$o ocorre *uando a en=ima @ imo!ili=ada no interior de es'eras
cuBo envolt"rio @ constitudo por um polmero semiperme8vel e geli'orme) Este @
utili=ado para reter os componentes com altos pesos moleculares Men=imasN< permitindo
acesso livre do su!strato ou produto L en=ima) Uma 'orma especial desta imo!ili=a$o @
a microencapsula$o< ou seBa< ocorre a prepara$o de um sistema emulsionado< onde a
en=ima permanece con'inada no interior de micelas) &or@m< @ importante salientar *ue
no deve haver destrui$o da matri= polim@rica pela en=ima)
1.1.1.4. Imobilizao em um suporte slido
Ps tipos mais conhecidos< dentro desta categoria< so por adsor$o e liga$o
covalente)
/4
, adsor$o consiste na liga$o da en=ima com a super'cie de um suporte inerte
atrav@s de liga$%es 'sicas 'racas< tal como 'or$as de \an der ]aals ou 'or$as
dispersivas) W um dos m@todos mais utili=ados devido a simplicidade do procedimento<
'a=endo com *ue os custos seBam redu=idos< e por apresentar e'eitos di'usionais *uase
*ue insigni'icantes) Todavia< as en=imas tornamCse altamente dependentes da varia$o
do p9 e da temperatura e @ preciso um pr@Ctratamento da super'cie para *ue haBa uma
imo!ili=a$o e'etiva)
S8 a 'ixa$o pela 'orma$o de liga$%es covalentes e*uivale a reten$o da en=ima
na super'cie do suporte mediante liga$%es covalentes< *ue so< normalmente<
esta!elecidas entre os grupos 'uncionais amino< car!oxila< hidroxila) Sendo *ue estes
grupos no devem estar locali=ados no stio ativo) , escolha das condi$%es ideais ir8
depender da esta!ilidade da en=ima e do suporte 'rente ao p9 de 'orma$o das liga$%es
covalentes< assim como a esta!ilidade das liga$%es suporteCen=ima 'rente ao p9 de
utili=a$o do sistema imo!ili=ado) Em geral< as rea$%es so 'eitas em meio a*uoso< a
temperatura variando de 6ZC a -:ZC e o p9 pr"ximo a neutralidade) Tal t@cnica
apresenta uma grande esta!ilidade e e'icincia< al@m de no ser to suscetvel a varia$o
da temperatura< p9< material do suporte e 'or$as iFnicas)
-&eitos di&usivos
#esistncia di'usiva pode ser o!servada< em di'erentes nveis< em en=imas
imo!ili=adas) ,ssim< em rea$%es heterogneas< a trans'erncia de massa dos reagentes
iniciaCse no interior da 'ase 'luida em dire$o a super'cie externa do pellet) Ps
reagentes< ento< di'undem da super'cie externa para o interior do pellet< atrav@s dos
poros) &ara rea$%es *ue seguem a cin@tica de 3ichaelisC3enten< o transporte de massa
in'luencia diretamente os parGmetros cin@ticos< 1
m
e v
max

7o presente estudo< hidr"lise da sacarose pela com invertase< h8 duas
possi!ilidades de opera$o( a primeira trataCse do uso da en=ima livre< em *ue os
parGmetros cin@ticos so denominados intrnsecos e a etapa controladora do processo @ a
pr"pria rea$oA e a segunda possi!ilidade @ a utili=a$o da en=ima imo!ili=ada no gel de
agarose< sendo *ue os parGmetros cin@ticos determinados so designados inerentes<
*uando os e'eitos di'usivos internos e externos so despre=veis< ou aparentes< *uando
so estimados so! condi$%es em *ue os e'eitos di'usivos esto presentes)
/;
E'etuandoCse os !alan$os de massa para a opera$o em um reator de !atelada<
em regime descontnuo< para as condi$%es mencionadas anteriormente< temCse a
E*ua$o /:< re'erente ao sistema homogneo( en=ima e sacarose solHveis na 8gua) W
importante destacar *ue se considerou o volume da rea$o sendo igual ao volume do
l*uido)
V r
dt
V C d
s
S
=
N M
-6ua34o !2
Pnde(
C
s
Concentra$o do su!strato JgXKA
\ \olume do l*uido JKA
r
s
\elocidade da rea$o JgX)minK)
S m
S
S
C K
C V
r
+
=
)
max
-6ua34o
!7
,s seguintes hip"teses so adotadas para o sistema heterogneo< em *ue os
e'eitos di'usivos podem ser desconsiderados)
, rea$o ocorre na super'cie do suporteA
P tempo de di'uso @ maior *ue o tempo de rea$oA
C
S
^
R C
s!
Mdesconsiderando a di'uso externaN)
,ssim< a partir da 'ormula$o destas hip"teses< @ possvel e'etuar o !alan$o
material em !atelada< o!tendoCse a E*ua$o /.)
r catalisado S
S
L
rea r
dt
dC
V =
_
) -6ua34o
!8
^ _
^ _
max
_
)
S m
S
S
C K
C V
r
+
=
-6ua34o
!9
P!tendoCse o valor de v
m8x
no sistema homogneo Men=ima livre solHvelN< para a
o!ten$o de v`
m8x
no sistema heterogneo Men=ima imo!ili=ada na super'cie do
catalisadorN !asta a converso com !ase na E*ua$o /;)
-6
r catalisado
L
rea
V
V V =
max max
_
-6ua34o
!:

=
rea!o
V tem"o
mol
v
max -6ua34o %>

=
-
max
_
r catalisado
m tem"o
mol
v
-6ua34o
%!
Quando se trata de uma es'era< o!t@mCse a E*ua$o --(
N / M 5
_
max max

=
R
V V

-6ua34o %%
Uma terceira possi!ilidade de sistema heterogneo @ a*uela onde h8 en=imas
imo!ili=adas em toda a 8rea Minterna e externaN do suporte poroso insolHvel em 8gua<
com duas 'ases( su!strato solHvel em 8gua e en=ima na 'ase s"lida) Osso implica em uma
nova etapa a ser vencida e o tempo de di'uso interna pode ser maior *ue o tempo de
di'uso externa eXou maior *ue o tempo de rea$o)
)n*lise dos e&eitos di&usivos
, e'etividade externa Ma
e
N relaciona a velocidade de rea$o real Mo!tido com a
en=ima imo!ili=adaN com a *ue deveria ser o!tida na ausncia de di'uso Men=ima livre<
com S R S
!ul[
N< e pode ser representada pela E*ua$o -5 a!aixo(
a r#n
a"arente
e
v
v
sec int
=
-6ua34o
%'
Se a
e
'or muito menor *ue /< a velocidade real @ muito menor *ue a velocidade
te"ricaA logo h8 resistncia di'usional est8 limitando o consumo de S) Quando a
e
'or
aproximadamente /< a rea$o controla o consumo de S e o tempo de rea$o com en=ima
imo!ili=ada na super'cie da partcula @ igual L velocidade com en=ima livre)
)Putra maneira de se calcular a e'etividade @ atrav@s de sua estimativa por
correla$%es< sendo invi8vel o procedimento experimental< &ara tal c8lculo 'a=Cse
necess8rio o uso de dois adimensionais< sendo eles(
-/
!=!=%= G
Dado pela E*ua$o -2< o adimensional representa a in'luncia da rela$o
entre C
s
Mconcentra$o de SN e a a'inidade da en=ima na velocidade de rea$o< uma ve=
*ue dependendo do valor assumido< a velocidade pode depender mais Mordem /N ou
menos Mordem =eroN da concentra$o de S)
m
s
K
C
=

-6ua34o %/
/)/)5) D
a
P adimensional $
a
@ o nHmero de Dam[$hler< e pode ser representado pela
E*ua$o -:(
"oss#vel trasn"orte de velocidade m%
er&#cie na rea!o de velocidade m%
$a
sup
=
-6ua34o
%2
, m8xima velocidade de rea$o ocorre *uando a *uantidade de S @ muito maior
*ue o valor de E< o *ue signi'ica excesso de reagente em rela$o L en=ima< e todas as
mol@culas de en=ima esto sempre DocupadasE)
, velocidade de di'uso depende do gradiente de concentra$o como 'or$a
motri=) , m8xima velocidade possvel para um determinado C
s!
re*uer o m8ximo
gradiente possvel) Osso ocorre *uando a rea$o @ muito r8pida< de modo *ue todo S *ue
chega L super'cie @ imediatamente consumido e< portanto< C
s
^R6)
,ssim< o 'luxo na super'cie @ dado pela E*ua$o -0 e seu valor m8ximo @ dado
pela E*ua$o -.)
^N )M
s s'
s
s C C
$
( =

-6ua34o
%7
^N M
max S s' s s
C C K ( =
-6ua34o
%8
Deste modo< $
a
pode ser apresentado pela E*ua$o -4(

s' s
C K
V
$a

=
max
-6ua34o
%9
--
, Figura /6 mostra a in'luncia da concentra$o de S e o signi'icado de 1
3
na
velocidade da rea$o en=im8tica)
Fiura !>" Helocidade da rea34o em &un34o da concentra34o de substrato=
Quando U @ muito maior *ue / MS
6
@ muito maior *ue 1
3
N< a velocidade da
rea$o @ igual a v
m8x
Mordem =eroN) &ara altas concentra$%es de S os e'eitos di'usivos
tendem a ser menos signi'icativos< pois a disponi!ilidade de S para a en=ima @ alta e
mesmo *ue S na super'cie seBa menor *ue S no meio< a concentra$o na super'cie
ainda pode estar em excesso em rela$o L en=ima presente) ,penas para altos $
a
< ou
seBa< altos Dturn overE de en=ima< *ue signi'ica alta capacidade de processamento de
su!strato por mol@cula de en=ima< o *ue implica em velocidade m8xima intrnseca
muito alta em rela$o L de transporte e o!servaCse *ue a velocidade com en=ima
imo!ili=ada @ menor *ue com en=ima livre) &ara valores de U muito menores *ue / MS
6
muito menor *ue 1
m
N< o comportamento da curva de \ x S @ linear Mordem /N)
, rela$o entre C
s
e 1
3
pode in'luenciar na rela$o entre as velocidades de
di'uso e da rea$o M$
a
N< 'a=endo com *ue a e'etividade dependa de U e de $
a
)
!=!=/= -&eitos Di&usivos Intra$Aart,cula
-5
Se a velocidade do 'luido 'or su'icientemente alta de modo *ue no haBa e'eito
di'usivo externo< podeCse di=er *ue h8 somente di'uso interna< e todos os c8lculos
podem ser reali=ados !aseandoCse nessa hip"tese)
Como principais di'eren$as entre resistncia interna e externa podeCse di=er *ue
na primeira(
,penas uma 'ra$o do volume do catalisador est8 disponvel para di'uso
Mparte do volume do catalisador @ s"lidoA a di'uso ocorre no 'ludo *ue preenche os
porosNA
, geometria do poro @ complexa e no uni'ormeA
3ol@culas de su!strato e poro do catalisador podem ter tamanhos similares)
Estes e'eitos so incorporados em um coe'iciente de di'usividade M$
e&&
N< dado
pela E*ua$o -;(

)
$ $
"
S e&&

= -6ua34o %:
Pnde(
9 Coe'iciente de restri$o ou estreitamentoA
b
p
&ororsidade do gelA
c Tortuosidade)
, dependncia de $
s
com a temperatura @ dada pela E*ua$o 56)
/
-
-
/
/ -
N M
N M
N M N M
T
T
T
T
T $ T $
S S
=

-6ua34o '>
P parGmetro 9 pode ser o!tido pela E*ua$o de #en[in apresentada a!aixo(
[ ]
: 5 -
;24 < 6 64; < - /622 < - / d N / M * * * * ) + = -6ua34o '!

"oro
soluto
raio
raio
* =
-6ua34o '%
, velocidade real de rea$o no poro depende da concentra$o de S existente no
poro< logo< se a velocidade da rea$o @ alta< ocorre uma *ueda acentuada de Cs< L
medida *ue se vai ao centro da partcula) , velocidade de consumo de S varia com o
raio da partcula< sendo a velocidade no volume glo!al da partcula uma integral da
velocidade real em casa ponto)
-2
Sendo assim< existe a necessidade de se conhecer o per'il de concentra$o de S
ao longo do raio< reali=ando o !alan$o de massa dentro da partcula)
&ara a cin@tica de 3ichaelisC3enten Mes'eraN< podeCse calcular o m"dulo de
Thiele a partir da E*ua$o 55)

=
e&& m
"
$ K
V
R
max
-
-
;
-6ua34o ''
Pnde #
p
@ o raio da partcula e
5 ;
-
" "
R R
=
@ o comprimento caracterstico da
es'era)
, E*ua$o de 3ichaelisC3enten mostra a dependncia da velocidade da rea$o
com Cs< variando de ordem =ero MS grandeN at@ ordem / MS pe*uenoN)
Do mesmo modo *ue se de'iniu e'etividade externa< podemos de'inir e'etividade
intrapartcula Ma
O
N como sendo a rela$o entre a velocidade o!servada e a velocidade *ue
ocorreria na ausncia de gradiente de concentra$o intraCpartcula)
Todo pro!lema di'usional ocorre por*ue h8 atraso no transporte de S para o
interior da partcula< 'a=endo com *ue S
interior
seBa menor *ue S
super'cie
) ,ssim< *uando a
velocidade intrnseca no depende de S Mordem =eroN @ por*ue este est8 em *uando de
excesso) ,ssim< a no ser *ue % seBa muito grande< ou seBa< v
m8x
muito maior *ue $
e&&
Mrea$o r8pidaN< mesmo C
s
sendo menor no interior da partcula< pode ser *ue ele ainda
esteBa em excesso< 'a=endo com *ue a e'etividade se mantenha pr"xima de /)
Sendo assim< *uanto menor C
s
< mais importante se tornam os e'eitos di'usionais<
pois a velocidade da rea$o se torna muito sensvel a varia$%es em C
s
) Osso implica em
*ue para mesmos valores de m"dulo de Thiele< a e'etividade diminui com a diminui$o
de U)
?idrlise da sacarose e o 05todo DN(
, degrada$o en=im8tica da sacarose se 'a= por hidr"lise de suas liga$%es
glicosdicas so! a a$o de glicosidases) ,s invertases hidrolisam sacarose e
polissacardeos contendo uma liga$o UCDC'ruto'uranosil em 'ruto'uranosdeos e< no
caso da sacarose< o!t@mCse uma mistura e*uimolar de glicose e 'rutose) , perspectiva
de aplica$o industrial de invertases micro!iol"gicas na produ$o de a$Hcar invertido
-:
depende principalmente da en=ima apresentar atividade e esta!ilidade operacional a
temperaturas superiores a 06e C)
&elo 'ato de as invertases serem muito mais caras *ue as hidrolases Mdevido aos
!aixos rendimentos de extra$o *ue se o!t@mN< al@m das mesmas serem muito sensveis
a v8rios ini!idores Mmetais pesados< 8cidos< su!strato e produtosN< uma alternativa
industrial encontrada @ a imo!ili=a$o da en=ima como B8 'oi explicada anteriormente)
, rea$o da hidr"lise da sacarose com a en=ima invertase @ apresentada a!aixo(
(acarose I Glicose J Frutose
C
!%
?
%%
O
!!
J

?
%
O I C
7
?
!%
O
7
J C
7
?
!%
O
7
Como se pode perce!er na rea$o acima< os produtos 'ormados so os
monossacardeos glicose e 'rutose< *ue so a$Hcares redutores< uma ve= *ue possuem
grupo car!onlico e cetFnico livres capa=es de se oxidarem na presen$a de agente
oxidantes em solu$%es alcalinas) Ps dissacardeos *ue no possuem essa caracterstica
sem so'rerem hidr"lise da liga$o glicosdica so denominados de a$Hcares no
redutores)
Sa!endoCse a concentra$o de a$Hcares redutores< a velocidade da rea$o
Matividade en=im8ticaN pode ser determinada) &ara estimar estes valores< existem v8rios
m@todos *umicos no seletivos *ue 'ornecem resultados com elevado grau de
con'ia!ilidade< *uando utili=ados corretamente ap"s a elimina$o de inter'erentes) Um
m@todo tam!@m importante para a determina$o do teor de a$Hcares redutores @ o
m@todo D7S)
05todo do *cido 'K2 Dinitrossalic,lico L)DN(M
Este m@todo consiste na redu$o do 8cido 5<: dinitrossaliclico a 8cido 5CaminoC
:Cnitrosaliclico ao mesmo tempo em *ue o grupo aldedo do a$Hcar @ oxidado a grupo
car!oxlico< com o desenvolvimento de uma colora$o avermelhada< lida em
espectro'otFmetro a :26nm Mfanin et al+, /;;4N)
Entretanto a e*uivalncia entre o 8cido aminoC:Cnitrossaliclico produ=ido e a
*uantidade do a$Hcar no @ exata e di'erentes a$Hcares produ=em di'erentes
intensidades na cor desenvolvida) Osso sugere *ue a *umica da rea$o deva ser mais
-0
complexa *ue a apresentada< podendo estar relacionada com as rea$%es de
decomposi$o de a$Hcares em solu$o alcalina)
P espectro'otFmetro utili=ado nas experincias para medir a a!sor!Gncia de cada
solu$o e 'ornecer a concentra$o de a$Hcares redutores @ !aseado na lei de am!etC
>eer< dada pela E*ua$o 52< a *ual relaciona a!sor!Gncia e concentra$o)
C L A's = -6ua34o '/
Pnde(
,!s ,!sor!Gncia JnmKA
b Coe'iciente de a!sor$o molar ao comprimento de onda A
Espessura do meio a!sorvente JmKA
C Concentra$o da solu$o a!sorvente) J3K)
05todo Di&erencial
7este modo de an8lise de dados< trataCse diretamente com a e*ua$o di'erencial
de taxa a ser analisada< avaliando todos os termos na e*ua$o< inclusive a derivada
dC
i
Xdt< e analisando a *uantidade do aBuste da e*ua$o com os dados experimentais)
SeguemCse os seguintes passos(
Fa=Cse um gr8'ico dos dados de C
,
versus t e ento se tra$a uma curva suave
para representar os dados)
DeterminaCse a inclina$o dessa curva nos valores de concentra$o
ade*uadamente selecionados) Essas inclina$%es< dC
,
Xdt R r
,
< so as taxas de
rea$o nessas composi$%es)
&rocuraCse por uma e*ua$o de taxa para representar os dados de r
,
em 'un$o
de C
,
< mediante o teste na 'orma de ordem n< Cr
,
R[)C
,
n
e aplicando logaritmos
na e*ua$o da taxa a 'im de se o!ter uma reta)
-.
0ateriais e m5todos
0ateriais utili.ados
Espectro'otFmetro
Erlenmeger de -:6 m
Tu!os de ensaio
Tu!os de FollinC]u de -: m
>al%es volum@tricos
&ipetas volum@tricas
Solu$o de 7aP9
Solu$o de en=ima invertase solHvel
Solu$o de D7SA
Oncu!adora a 56e C
+elo
hgua destiladaA
TermFmetro
0etodoloia
?idrlise da sacarose catalisada +ela invertase livre
EncontravaCse preparada a solu$o de sacarose em tampo acetato 6<6:3< em
p9 :<:< nas concentra$%es 06< 26< 56< -6< /6< : e - gX< as *uais encontravamCse em
!anho termost8tico em uma temperatura de 56eC ) &rimeiramente< 'oi adicionado uma
solu$o de en=ima MC
en=ima
R 5mgXN na solu$o de sacarose a -gX e<
concomitantemente< disparouCse o cronFmetroA L partir da 'oram retirados amostras de
- m do 'rasco de solu$o de sacarose< *ue encontravaCse no reator< nos tempos( -< : e
/6 minutos) ,s amostras o!tidas eram inseridas em tu!os de 6<- m Mdilui$o de /</N de
solu$o de 7aP9 a -3 para a inativa$o da en=ima Mparando a rea$oN< para as demais
concentra$%es de solu$o de sacarose< 'oram reali=ados os mesmos procedimentos nas
seguintes dilui$%es(
-4
Tabela %" Dilui3Nes utili.adas durante a +rimeira +arte do e<+erimento=
&ara a determina$o da concentra$o de a$Hcares redutores Mglicose i 'rutoseN
'oi reali=ado o m@todo D7S< *ue se iniciou trans'erindo / m da solu$o diluda para
um tu!o de FollinC]u de -: m de solu$o contendo a solu$o de D7S e
homogenei=ando a mistura reacional) Ps tu!os 'oram colocados em um !anho em
e!uli$o por aproximadamente : minutos< e logo ap"s< os mesmos 'oram res'riados em
um !anho de gelo< e completados com 8gua destilada< homogenei=ados e colocados para
a leitura de transmitGncia em um espectro'otFmetro em comprimento de onda j R :-6
nm) P!tidas as leituras de a!sor!Gncia< 'oram calculados as concentra$%es de ,# a
partir da curva de cali!ra$o do aparelho)
?idrlise da sacarose catalisada +ela invertase imobili.ada em um el de
aarose
P procedimento para o experimento - @ semelhante ao do experimento /<
todavia a en=ima utili=ada desta ve= na solu$%es de sacarose< encontravaCse imo!ili=ada
em gel agaroseCglutaraldeido< e as solu$%es de sacarose utili=adas 'oram de( 26< 56< -6<
/6< : e- gX< e os tempos de retirada da solu$o do reator passaram a ser de :< .e /6
minutos)
Tabela '" Dilui3Nes utili.adas durante a seunda +arte do e<+erimento
-;
Resultados e Discuss4o
-n.imas livres
&ara determinar os parGmetros cin@ticos da en=ima livre reali=ouCse o
experimento a um p9 de :<: e temperatura de 56
o
C) Utili=ouCse a en=ima invertase
solHvel e< no reator< ocorrendo a hidr"lise da sacarose< B8 apresentada anteriormente)
#etiraramCse amostras da en=ima em tempos pr@Cdeterminados para *ue no
ocorresse a ini!i$o en=im8tica pelo produto) , concentra$o de a$Hcares nas amostras
'oram calculadas atrav@s da curva de cali!ra$o do espectro'otFmetro< pelo meio D7S)
, curva de cali!ra$o pode ser veri'icada pela E*ua$o 5:)
N 5:2: < 5 64:5 < 6 M A's dil C
ar
+ =
-6ua34o '2
DeterminouCs a concentra$o de sacarose na amostra a partir da este*uiometria
da rea$o< como pode ser o!servado na E*ua$o 50)
ar s
C C )
506
52-
=
-6ua34o '7
, velocidade de rea$o r
s
para cada valor de C
s
'oi calculada plotandoCse uma
curva de C
ar
versus tempo) , partir do aBuste linear o!teveCse r
ar
< pela este*uiometria da
rea$o< a partir da E*ua$o 50 calculouCse r
s
) ,s Figuras // a /. ilustram o aBuste
linear para as di'erentes concentra$%es)
& '()(1*#+ ,()(4!8
R
!
'()#8#-
()((
()(.
()1(
()1.
()!(
()!.
( ! 4 * 8 1( 1!
./012 '034(
C
56
'78!( C '! /0L
L12345 6C '! /0L7
Fiura !!" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a %OP=
56
& '()(-*1+ ,()(1*4
R
!
'()##8
()((
()1(
()!(
()-(
()4(
().(
( ! 4 * 8 1( 1!
./012 '034(
C
56
'78!(
C '. /0L
L12345 6C '. /0L7
Fiura !%" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a 2OP=
& '()(*##+ ,()1-*#
R
!
'()##18
()(((
()1.(
()-((
()4.(
()*((
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()#((
( ! 4 * 8 1( 1!
./012 '034(
C
56
'78!(
C '1( /0L
L12345 6C '1( /0L7
Fiura !'" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a !>OP=
& '()(8.*+ ,()(888
R
!
'()##84
()(((
()!((
()4((
()*((
()8((
1)(((
( ! 4 * 8 1( 1!
./012 '034(
C
56
'78!(
C '!( /0L
L12345 6C '!( /0L7
Fiura !/" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a %>OP=
5/
& '()(#(.+ ,()(..*
R
!
'1
()(((
()!((
()4((
()*((
()8((
1)(((
1)!((
( ! 4 * 8 1( 1!
./012 '034(
C
56
'78!(
C '-( /0L
L12345 6C '-( /0L7
Fiura !2" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a '>OP=
& '()1(-+ ,()(8-#
R
!
'1
()(((
()!((
()4((
()*((
()8((
1)(((
1)!((
( ! 4 * 8 1(
./012 '034(
C
56
'78!(
C '4( /0L
L12345 6C '4( /0L7
Fiura !7" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a />OP=
& '()1(-!+ ,()(#1#
R
!
'()##8.
()(((
()!((
()4((
()*((
()8((
1)(((
1)!((
( ! 4 * 8 1( 1!
./012 '034(
C
56
'78!(
C '*( /0L
L12345 6C '*( /0L7
Fiura !8" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a 7>OP=
5-
Ps resultados o!tidos para r
s
podem ser con'eridos na Ta!ela 2)
Tabela /" Helocidades de rea34o +ara cada concentra34o Cs=
C
s
EOPF )mostra
Tem+o
EminF
Tem+oLsM Dilui34o )bs
C
ar
EOPF
dC
s
Odt
EOP=minF
%
- -<6: !%2 /</ 6<66: 6<645
: :<6/ '>! /</ 6<6/: 6<//; >K>!7>
/6 /6<6- 7>% /</ 6<62/ 6<-/:
2
- -<6/ !%! /</ 6<664 6<6;2
: :<6/ '>! /</ 6<652 6</;6 >K>'/'
/6 /6<62 7>/ /</ 6<640 6<54/
!>
- /<:. !!8 /</ 6<6:2 6<-05
: :<65 '>' -<6 6<6:/ 6<2:; >K>77/
/6 ;<:4 2:9 5<6 6<602 6<4/;
%>
- -<6/ !%! /</ 6<62. 6<-54
: :</- '!% /</ 6</6: 6<2:- >K>8!9
/6 ;<:4 2:9 -<6 6</65 6<464
'>
- -<-/ !/! /</ 6<6:- 6<-:0
: :<65 '>' /</ 6</-/ 6<:// >K>92:
/6 /6<-5 7%' -<6 6</-; 6<;4-
/>
- -<6: !%2 /</ 6<60 6<-40
: :</4 '!9 -<6 6<6.5 6<060 >K>:89
/6 ;<24 299 5<6 6<64. /<6:6
7>
- -<6. !%8 /</ 6<60- 6<-;5
: 2<:: %:2 -<6 6<60; 6<:46 >K>:9>
/6 /6<65 7>' 5<6 6<6;2 /</-/
, partir dos dados da Ps resultados o!tidos para rs podem ser con'eridos na
Ta!ela 2)< plotouCse uma curva de C
s
versus r
s
< aBustandoCse a e*ua$o de 3ichaelisC
3enten Mhip@r!oleN< no so'tYare Prigink 4)6) , partir desse aBuste< o!tiveramCse os
parGmetros cin@ticos [
m
e \
m8x
) &odeCse o!servar o resultado na Figura /4)
55
Fiura !9" Curva +ara obten34o dos +arBmetros cin5ticos Qm e Hm*<=
Ps parGmetros cin@ticos o!tidos so representados na Ta!ela :)
Tabela 2" AarBmetros cin5ticos
H
ma<
LOPM 6<//.
Q
m
LOP=minM /6<5;4
DeterminouCse tam!@m< para a rea$o estudada< a energia de ativa$o no p9 :<:)
&ara isso plotouCse uma curva de ln M\
m8x
N por /XT e 'e=Cse o aBuste linear da curva e
calculouCse a energia de ativa$o atrav@s da E*ua$o 5.)
RT
E
k C V
a
s m%
= ) ln ln -6ua34o '8
Ps dados utili=ados na curva de lnM\
m8x
N versus /XT esto representados na
Ta!ela 0)
Tabela 7" Dados utili.ados +ara o c*lculo da eneria de ativa34o da rea34o
v
m*<
T !OT ln v
m*<
0,117 303 3,30E-03 -2,142
52
0,123 308 3,25E-03 -2,096
0,190 313 3,19E-03 -1,661
Fiura !:" Curva de ln LHm*<M versus !OT=
, partir do aBuste linear e da E*ua$o 5.< veri'icouCse *ue a energia de ativa$o
encontrada para a rea$o 'oi de 5.<.20 [SXmol)
\eri'icouCse ainda a in'luncia do p9 e da temperatura na velocidade da rea$o)
Essa in'luncia pode ser veri'icada na Figura -6)
Fiura %>" In&lu;ncia da tem+eratura e do +? na velocidade de rea34o
, partir da Figura -6< o!servaCse *ue a temperatura e p9 "timos so<
respectivamente( 26ZC e :<:)
5:
-n.ima imobili.ada
Ps parGmetros v
m8x
e 1
m
para a en=ima imo!ili=ada 'oram o!tidos de maneira
an8loga ao experimento com en=ima livre) Com esses parGmetros< pFdeCse calcular a
velocidade da rea$o M3ichaelisC3entenN e a e'etividade interna em 'un$o do tempo)
Ps parGmetros utili=ados 'oram corrigidos para a mesma concentra$o de en=ima< B8 *ue
a concentra$o da en=ima imo!ili=ada era /6 ve=es maior do *ue a en=ima livre)
&ara os c8lculos da velocidade de rea$o do su!strato 'oi utili=ado o m@todo
di'erencial< em *ue o procedimento de c8lculo 'oi o mesmo reali=ado no experimento /<
sendo *ue os dados o!tidos esto inseridos na Ta!ela .)
Tabela 8( Helocidades de rea34o +ara cada concentra34o Cs=
&elo m@todo di'erencial< o!teveCse as velocidades dos produtos< oriundas dos
coe'icientes angulares do aBuste linear dos gr8'icos de concentra$o de produto por
tempo< sendo a velocidade de consumo de su!strato o!tido partir da rela$o
este*uiom@trica existente entre o produto e o reagente< e reali=ando as devidas
convers%es< sendo *ue os gr8'icos das velocidades representados pelas Figuras -/ a -0)
em!rando< ainda *ue os valores o!tidos para a concentra$o de 26 gX 'oram
desconsiderados para os c8lculos *ue se seguem a!aixo< uma ve= *ue 'oi constatado ser
um ponto tendencioso< devido a um possvel erro de lei de a!sor!Gncia)
50
& ' ()(((!+ - ()((48
R
!
' ()#84#
()(((
()(!(
()(4(
()(*(
()(8(
()1((
()1!(
()14(
()1*(
( 1(( !(( -(( 4(( .(( *(( 8((
./012 '034(
C
56
'78!(
C ' !/0L
L12345 6C ' !/0L7
Fiura %!" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a %OP=
& ' ()(((*+ - ()(11#
R
!
' ()#8#
()(((
()(.(
()1((
()1.(
()!((
()!.(
()-((
()-.(
()4((
( 1(( !(( -(( 4(( .(( *(( 8((
./012 '9(
C
56
'78!(
C ' . /0L
L12345 6C ' . /0L7
Fiura %%" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a 2OP=
5.
& ' ()(((#+ - ()(4-8
R
!
' ()8*-8
()(((
()1((
()!((
()-((
()4((
().((
()*((
( 1(( !(( -(( 4(( .(( *(( 8((
./012 '9(
C
56
'78!(
C ' 1( /0L
L12345 6C ' 1( /0L7
Fiura %'" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a !>OP=
& ' ()((18+ , ()(*.*
R
!
' ()##(1
()(((
()!((
()4((
()*((
()8((
1)(((
1)!((
( 1(( !(( -(( 4(( .(( *(( 8((
./012 '9(
C
56
'78!(
C ' !( /0L
L12345 6C ' !( /0L7
Fiura %/" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a %>OP=
54
& ' ()((1#+ , ()(!81
R
!
' ()#888
()(((
()!((
()4((
()*((
()8((
1)(((
1)!((
1)4((
( 1(( !(( -(( 4(( .(( *(( 8((
./012 '9(
C56 '78!(
C ' -( /0L
L12345 6C '-( /0L7
Fiura %2" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a '>OP=
& ' ()(((.+ , ().1-4
R
!
' ()##(*
()(((
()1((
()!((
()-((
()4((
().((
()*((
()8((
()8((
()#((
( 1(( !(( -(( 4(( .(( *(( 8((
./012 '9(
C56 '78!(
C ' 4( /0L
L12345 6C ' 4( /0L7
Fiura %7" Curva +ara determina34o de rar +ara concentra34o iual a />OP=
,s velocidades de consumo de su!strato o!tidos a partir do m@todo
di'erencial 'oram inseridas no Prigin 4)6< para *ue 'osse possvel reali=ar o aBuste do
modelo de 3ichaelis 3enten< *ue possu a caracterstica de uma hip@r!ole) &elo
gr8'ico 'ormado com os pontos experimentais< a curva 'oi aBustada< sendo *ue os
coe'icientes da hip@r!ole &/ e &- correspondem< respectivamente< as valores de v
m8x
e
1
m
< ilustrados na Figura -.)
5;
Fiura %8" Gr*&ico de ajuste das velocidades e<+erimentais +ara en.ima imobili.ada=
Ps valores o!tidos L partir do aBuste dos pontos experimentais encontramCse
anexados na Ta!ela 4)
Tabela 9" Halores dos +arBmetros Dm e Hm*<=
E4:305 !3;6/
E4:305
I02<3=3:5>5
V0?@
'78!.034( 1)18 ()!!
A0 '78!( 1()4( !#)!1
C '078!( 1).( 1.)((
Com os dados de velocidade consumo de su!strato o!tidos para a en=ima livre e
imo!ili=ada< 'oi possvel calcular a e'etividade interna experimental< lem!rando *ue os
parGmetros utili=ados 'oram corrigidos para a mesma concentra$o de en=ima< sendo
*ue os valores das e'etividades interna experimental o!tida pelo tempo< encontraCse na
Ta!ela ;)
26
Tabela :" Dados de e&etividade interna e<+erimental=
Utili=ando os dados da e'etividade experimental< iniciouCse o c8lculo da
e'etividade te"rica do experimento)
&ara o c8lculo dos valores de U utili=aCse a E*ua$o 54< e o 3"dulo de Thiele a
E*ua$o 5;)
-6ua34o '9
-6ua34o ':


Pnde<
Cs
6
R Concentra$o inicial de su!strato)
#
p
R #aio da partcula)
\E
3ax
R

\elocidade m8xima calculada por volume de catalisador)
D
e''
R

Di'usividade e'etiva da sacarose no gel contendo en=ima imo!ili=ada)
, di'usividade e'etiva da sacarose no gel contendo en=ima imo!ili=ada MD
e''
N< @
a'erida L partir da E*ua$o 26)
2/
C '78!(
>C98>. 'IMOB(
B78!.034C
>C98>. '!IVRE(
B78!.034C
int. Exp
$ &11 &161 &"1
5 &3+ &3+3 &1
1 &51 &66+ &""
$ &#" &"18 &135
3 &18 &86 &1$6
+ &$# &#"# &$#
Km
C
S6
=

=
e&& m
"
$ K
V
R
max
-
-
l
;
-6ua34o />
Pnde<
D
s
R

Di'usividade do su!strato)

p
R

&orosidade do gel)
9 R Coe'iciente de restri$o)
= Tortuosidade do gel)
P valor de $
s
'oi calculado a partir da e*ua$o 2/)
-6ua34o /!

Sendo a T a temperatura expressa em eC e a viscosidade em c&< calculada
pela E*ua$o 2-)
-6ua34o /%
Sendo 7< o!tida L partir da E*ua$o 25)
-6ua34o /'

Pnde<
> R Teor de grau >rix do meio reacional
E< 'inalmente< 9 calculado pela E*ua$o 22)
-6ua34o //
Ps demais parGmetros utili=ados para o calculo da e'etividade te"rica a partir do
3"dulo de Thiele< como #
p
<
p
e , encontramCse na Ta!ela .)
Com os valores do 3"dulo de Thiele e de U a'eridos< @ possvel o!ter o valor
atri!udo a e'etividade te"rica do experimento< a partir da Figura -/)
2-

)
$ $
"
S e&&

=
/
-
-
/
/ -
N M
N M
N M N M
T
T
T
T
T $ T $
S S
=

B
B
-
/4 /;66
=
[ ]
: 5 -
;24 < 6 64; < - /622 < - / N / M * * * * ) + =
Fiura %!" Gr*&ico da e&etividade interna LRIMK em &un34o do 0dulo de T1iele S e de G=
P resultado para a viscosidade calculada a partir da E*ua$o 2-< est8 expresso
na Ta!ela /6)
Tabela !>" Hiscosidade na tem+eratura e<+erimental
7a Ta!ela // esto os resultados dos parGmetros > e 7< al@m dos valores de $
s
)
Tabela !!" AarBmetro @ e NK e os valores de Ds=
B N
D9
'D0E89(

&$
1)(.E-
(4
4)#4E-
(*

&5
!)*4E-
(4
4)#4E-
(*

1
.)-1E-
(4
4)#4E-
(*

$
1)(8E-
(-
4)#-E-
(*

3
1)*-E-
(-
4)#-E-
(*

+
!)1#E-
(-
4)#-E-
(*
25
T 'FC( 'DP(
-8 ()8*8
-( ()###
P c8lculo da di'usividade e'etiva< ainda necessita do c8lculo do coe'iciente de
restri$o M9N< a partir da E*ua$o 22< e de dados de propriedade do gel< *ue se
encontram< respectivamente< nas Ta!elas /- e /5)
Tabela !%" Tabela com dados +ara o c*lculo de ? e seu res+ectivo valor=
Tabela !'" Aro+riedades do el=
&ara o c8lculo do 3"dulo de Thiele< reali=ada pela E*ua$o 5;< 'oi
necess8ria a converso do valor de \
m8x
para a unidade molXmm
gel
)s< sendo *ue os valores
encontramCse na Ta!ela /2)
Tabela !/" Halores da convers4o de Hm*<=
Uma ve= o!tidos todos os parGmetros necess8rios para o c8lculo do 3"dulo
de Thiele e de U< os mesmos 'oram a'eridos< 'a=endo com *ue 'osse possvel a
determina$o da e'etividade interna experimental< cuBos valores encontramCse na ta!ela
/:)
22
raiogel
(m)
raio soluto
(m)
raio poro
(m)
y H
()(1!. *E-1( 4E-8 0,015 0,939
Dados do Gel
dgel (m) !)4#E-(4
rgel (kg/L) 1)(1-
rporo,gel (m) 4E-8
ep
()#.Tp 8
Cgel (ggel/L) ()(.
A0'02=8!( '7803(
V05@
'02=8!.034(
VG05@
'02=803480HD5.(
-).*E,(- 1)(1-E,* -)4-E-(- *#).8
Tabela !2" Tabela das e&etividades terica e e<+erimental=
&ara uma possvel compara$o dos dados o!tidos experimentalmente com
os dados a'eridos teoricamente< o gr8'ico de e'etividade versus C
s
'oi construdo< est8
representado pela Figura --) , divergncia existente entre os dados o!tidos
teoricamente e os o!tidos experimentalmente< uma das possveis causas< encontramCse
no 'ato de erros experimentais< como a troca das solu$%es de sacarose ocorridas no
experimento /< utili=ando assim dilui$%es as *uais no eram apropriadas para a devida
solu$o< e originando uma propaga$o de erros< *ue 'oi repassado para o c8lculo da
e'etividade experimental Muma ve= *ue a mesma @ determinada L partir de parGmetros
do experimento /N< assim como o c8lculo da e'etividade te"rica< *ue utili=a a velocidade
de consumo de su!strato o!tida com en=imas livres)
E!eti"idades Te#ri$as e Experimentais em
%un&'o de Cs
0,00
0,10
0,20
0,30
0,40
0,50
0,60
0 10 20 30 40 50
Cs (g/L)
E
!
e
t
i
"
i
d
a
d
e
Efetividade Terica
Efetividade
E!eri"e#ta$
Fiura !!%" Gr*&ico com+arativo de dados obtidos em+iricamente e teoricamente
, an8lise da curva de e'etividade versus C
s
mostrou uma tendncia de aumento da
e'etividade com o aumento da concentra$o de su!strato< o *ue B8 era esperado) Osso pode ser
2:
C24D.
'78!(
D9
'0E8034(
D/II
'0E8034(
( ) te#ri$a 34../
@1
$ !)#8E-(8 -)88E-(# #)44 ()1# ()1* ()(8
5 !)#*E-(8 -)88E-(# #)44 ()48 ()!8 ()1(
1 !)#*E-(8 -)88E-(# #)44 ()#* ()-. ()(8
$ !)#*E-(8 -)88E-(# #)4. 1)#! ()41 ()1-
3 !)#*E-(8 -)88E-(# #)4. !)8# ()4. ()1!
+ !)#*E-(8 -)88E-(# #)4. -)8. ()48 ()(-
o!servado tam!@m analisandoCse os valores de velocidade dos processos com en=ima livre e
imo!ili=ada separadamente)
, di'eren$a entre as e'etividades te"rica e experimental podem ser explicadas
pelas condi$%es do experimento< onde talve= o processo di'usivo no tenha ocorrido da
mesma 'orma *ue o esperado) ,l@m disso< o valor de 1
m
utili=ado para determinar as
velocidades do processo com en=ima imo!ili=ada apresenta consider8veis erros devido
ao aBuste da curva da hip@r!ole no so'tYare Prigin 4)6)
DeterminouCse tam!@m a energia de ativa$o para o experimento -<
analogamente ao experimento /) &ara isso plotouCse uma curva de ln M\
m8x
N versus /XT<
representada pela Figura -5 e 'e=Cse o aBuste linear da curva e calculouCse a energia de
ativa$o atrav@s da E*ua$o 5.)
Tabela !7" Dados utili.ados +ara o c*lculo da eneria de ativa34o da rea34o
V05@
'78!.034( T 'A( 18T
=4
V05@
()(!! -(-)1.( -)818 -)!##
()(48 -(8)1.( -)(-8 -)!4.
()(*# -1-)1.( !)*84 -)1#-
*ln+m,x x -/T
% & 10,872 - 32,11
'
2
& 0,9619
0,000
0,500
1,000
1,500
2,000
2,500
3,000
3,500
4,000
4,500
3,180 3,200 3,220 3,240 3,260 3,280 3,300 3,320
-/T
*

l
n
(
+
m
,
x
)
Fiura %'" Curva de ln LHm*<M < !OT do e<+erimento %=
, partir do aBuste linear e da E*ua$o 5.< veri'icouCse *ue a energia de ativa$o
encontrada para a rea$o 'oi de ;6<5; [SXmol)
20
ConclusNes
P experimento nos permitiu a o!ten$o dos parGmetros cin@ticos v
max
e 1
m
< para
en=ima livre e en=ima imo!ili=ada< atrav@s do m@todo di'erencial) Tam!@m 'oram
calculadas as energias de ativa$o para os dois casos e os resultados estiveram dentro do
esperado)
&ara a en=ima livre< 'oi tam!@m analisada a in'luncia do p9 e da temperatura
no valor de v
max
< e o!teveCse *ue as condi$%es "timas< *ue 'ornecem o maior valor de
v
max<
'oram( p9 :<: e TR26ZC)
P!teveCse maior valor de 1
m
para a en=ima imo!ili=ada< o *ue pode ser
explicado pela presen$a de e'eitos di'usivos no gel< B8 *ue o parGmetro 1
m
est8
relacionado L a'inidade da en=ima pelo su!strato)
DividindoCse a velocidade m8xima de rea$o com en=ima livre pela velocidade de
rea$o da en=ima imo!ili=ada< o!teveCse a e'etividade interna de 6</0.) Este valor nos mostra
*ue o processo di'usivo comanda o processo B8 *ue a velocidade de rea$o para a en=ima
imo!ili=ada 'oi muito menor do *ue a da en=ima livre)
ConcluiuCse *ue o m@todo 'oi ade*uado para a o!ten$o dos parGmetros cin@ticos<
podendoCse aproximar a cin@tica do experimento pelo modelo de 3ichaelis C 3enten)
2.
Re&er;ncias @iblior*&icas
E!F +OP#D,7P< #))C) Estudo cintico da .idr/lise enzimtica de amido0 ini'i!o
"elo "roduto) Disserta$o de mestrado em engenharia Escola &olit@cnica da US&) So
&aulo /;4.)
E%F >,U3E#< S)D< DOE+P< S)3)3) Imo'iliza!o de Enzimas) Disponvel em(
nYYY)en*)u'sc)!rXla!sXpro!ioXdisc)))XEn=imasoimobili.acao)pptp< acesso em
/4X6;X-66;)
E'F 7otas de ,ula &ro'essora #a*uel de ima Camargo +iordano
E/F >,7C9< 9) ])A C,#1< D) S) Bioc.emical En1ineerin1) 7eY qor[< 3arcel
De[[er< Onc)< /;;.)
E2F >,OEq< S)E)A POS< D)F) Bioc.emical En1ineerin1 2undamentals) 7eY qor[<
3c+raYC9ill >oo[ Compang< /;..)
E7F FP+E#< 9)S) Elements o& C.emical Reaction En1ineerin1) &renticeC9all
Onternational< Onc) -r edi$o)
E8F S9UE#< 3))A 1,#+O< F) Bio"rocess En1ineerin1 3 Basic Conce"ts) &renticeC
9all Onternational< Onc) -r edi$o -66-)
E9F ,3EOD,< ,) C) S) Estudo do 4rocesso Cont#nuo "ara a 4rodu!o de A5car
Invertido "or via Enzimtica+ Disserta$o de mestrado) Universidade Federal de
&ernam!uco #eci'e -665)
E:F >P#f,7O< ])A O3,< U),)< ,QU,#P7E< E)A SC93ODE< ]) Biotecnolo1ia
Industrial 3 4rocessos 2ermentativos e Enzimticos) \ol) 5< So &aulo< Edgard >lucher
TD,< -66/)
24
0emorial de C*lculo
Arimeira +arte" -n.ima livre
&ara Cs R - gX< em um tempo de -<6: minutos< o!teveCse uma a!sor!Gncia
igual a 6<66:< em um tempo igual a :<6/ minutos< a a!sor!Gncia 'oi 6<6/: e para um
tempo de /6<6- minutos a a!sor!Gncia 'oi 6<62/)
,trav@s da curva de cali!ra$o do espectro'otFmetro calculouCse a concentra$o
de a$Hcares nas amostras(
&lotandoCse uma curva de C
ar
pelo tempo e 'a=endo um aBuste linear< o!teveCse a
seguinte e*ua$o(
g R 6<6/0;x i 6<62-4
,trav@s da este*uiometria da rea$o determinouCse a concentra$o de sacarose na
amostra(
2;
L 1 C
C
A's dil C
ar
ar
ar
X 645 < 6
N 66: < 6 ) 5:2: < 5 64:5 < 6 )M / < /
N ) 5:2: < 5 64:5 < 6 )M
=
+ =
+ =
L 1 C
C
A's dil C
ar
ar
ar
X //; < 6
N 6/: < 6 ) 5:2: < 5 64:5 < 6 )M / < /
N ) 5:2: < 5 64:5 < 6 )M
=
+ =
+ =
L 1 C
C
A's dil C
ar
ar
ar
X -/: < 6
N 62/ < 6 ) 5:2: < 5 64:5 < 6 )M / < /
N ) 5:2: < 5 64:5 < 6 )M
=
+ =
+ =
6/06:: < 6
6/0; < 6 )
506
52-
)
506
52-
=
=
=
s
s
ar s
C
C
C C
, partir dos dados o!tidos para cada concentra$o C
s
< plotouCse uma curva de C
s
por r
s
< e aBustouCse a e*ua$o de 3ichaelisC3enten Mhip@r!oleN< no so'tYare Prigink 4<
o!tendoCse os parGmetros cin@ticos [
m
e \
m8x(
[
m
R /6<5;... gX
\
m8x
R 6<//.20 gX)min
&ara o c8lculo da energia de ativa$o plotouCse uma curva de ln M\
m8x
N por /XT<
'e=Cse o aBuste linear o!tendoCse a seguinte e*ua$o(
.. < /- ) 2:26 + = % *
, partir do coe'iciente angular e da seguinte e*ua$o(

RT
E
k C V
a
s m%
= ) ln ln
EncontrouCse a energia de ativa$o para a rea$o(
Ea R 5..2:< :0 SXmol
:6