Introduccin La mayora de los problemas analticos reales comienzan con una compleja mezcla a partir de la cual es necesario aislar, identificar y cuantificar uno o ms componentes dela misma. Se pueden plantear las siguientes cuestiones: una, de carcter cualitativo (de qu componente se trata?), y otra de carcter cuantitativo (cunto hay de ese componente?).Para ello, se puede utilizar el mtodo instrumental de anlisis, como es la espectrofotometra para medir la absorcin de radiacin ultravioleta y visible que interacta con la materia (tomos y molculas), la misma es considerada una tcnica cuali y cuantitativa basndose en la medicin del color o de la longitud de onda de una radiacin e intensidad de la misma. Se har una descripcin del mtodo espectrofotomtrico para dar al lector una idea del empleo del mismo y su utilidad en los ensayos de sustancias.
ESPECTROFOTOMETRA Es un mtodo analtico que utiliza los efectos de la interaccin de las radiaciones electromagnticas con la materia (tomos y molculas) para medir la absorcin o la transmisin de luz por las sustancias.
Se refiera a los mtodos, cuantitativos, de anlisis qumico que utilizan la luz para medir la concentracin de las sustancias qumicas. Se conocen como mtodos espectrofotomtricos y, segn sea la radiacin utilizada, como espectrofotometra de absorcin visible (colorimetra), ultravioleta, infrarroja.
El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
El espectro electromagntico: Desde Newton, sabemos que la luz blanca se descompone en los colores que la integran si la hacemos pasar a travs de un prisma. Es el efecto que se repite, por ejemplo en el arco iris, el cual se dice es el espectro de la luz visible procedente del sol, son las gotas de lluvia y el aire atmosfrico lo que hacen de espectroscopio. La principal emisin de radiacin de los cuerpos es la radiacin electromagntica en forma de luz visible, de la misma manera cada elemento qumico absorbe y emite luz decolores que componen su espectro. La longitud de onda de la radiacin puede ser desde muy pequea, en el caso de la llamada radiacin gamma, hasta muy grande en las ondas de radio. Se mide, pues, usando desde nanmetros y ngstroms hasta cientos de metros. Recordemos que un nanmetro es la milmillonsima parte de un metro (1 m = 10 9 nm) y que un ngstromes la diez mil millonsima parte de un metro (1 m = 10 10 A), por lo que un nanmetro equivale a 10 ngstrom (1nm = 10 A).La luz que recibimos del Sol es radiacin electromagntica que se desplaza a 300.000kms/s, en su totalidad, pero la longitud de onda no es la misma en todos los fotones luminosos, sino que vara entre los 4000 A y los 7000 A, aproximadamente, o lo que es lo mismo, entre los 400 nm y los 700 nm. La luz blanca se descompone, en definitiva, en un espectro de diferentes bandas coloreadas, cada una definida por una longitud de onda distinta. As, la luz de menor longitud de onda es la luz violeta, que es de alrededor de unos 4000 ngstroms, y la luz de mayor longitud de onda es la luz roja, que es de alrededor de unos 7000 mgstroms. Sin embargo, hay radiaciones de mayor y tambin de menor longitud de onda, es decir, que tienen una longitud de onda inferior a 4000 Angstroms y que tienen una longitud de onda superior a los 7000 Angstroms. Las radiaciones que van desde el violeta al rojo se dice que forman el espectro visible, pues proceden de la descomposicin de la luz blanca. Las radiaciones de longitud de onda inferior al violeta se llaman radiaciones ultravioletas, rayos X y rayos gamma, por orden decreciente en la longitud de onda. Las radiaciones de longitud de onda superior al rojo son las denominadas infrarrojas, microondas y ondas de radio, por orden creciente en longitud de onda.
Colores de la luz visible Longitud de onda de la absorcin mxima (nm). Color absorbido Color observado 380 420 Violeta Amarillo -verdoso 420 440 Azul - violeta Amarillo 440 470 Azul Naranja 470 500 Verde - azuloso Rojo 500 520 Verde Prpura 520 550 Verde amarillento Violeta
TCNICAS ESPECTROSCPICAS 1. Espectroscopa de Infrarrojo (IR): Este tipo de espectroscopia se basa en la absorcin de la radiacin infrarroja por las molculas en vibracin. En una molcula, todos los tomos vibran alrededor de la distancia interatmica media. Existen dos modos principales de vibracin, alargamiento y flexin, y stos estn cuantizados. La absorcin de luz infrarroja de energa o frecuencia apropiada (25- 15 m; 4.000-666 cm -1 ) excita a la molcula desde su estado fundamental hasta un estado excitado producindose la vibracin de un modo determinado. Una molcula absorber energa cuando sta sea igual a la necesaria para que se produzca una transicin vibracional de la molcula. Es decir, la molcula vibrar de un modo determinado gracias a la energa que se le ha suministrado. La frecuencia o longitud de onda de cada modo de absorcin es funcin de la masa relativa de los tomos, la constante de fuerza de los enlaces y la geometra de la vibracin. Esto hace posible asignar frecuencias caractersticas de alargamiento y flexin a grupos funcionales especficos, ya que, aunque las frecuencias vibracionales para un enlace dado en una molcula compleja no son totalmente independientes de los dems enlaces situados cerca, el rango de variacin es pequeo. Dicho esto conviene destacar que slo se observar un pico en el espectro de infrarrojo en el caso de que el movimiento de vibracin, alargamiento o flexin, vaya acompaado de un cambio en el momento dipolar. As mismo, cuanto ms polar sea un enlace ms intenso ser el pico correspondiente a su frecuencia de vibracin. 550 580 Amarillo Azul violeta 580 620 Naranja Azul 620 680 Rojo Verde - azuloso 680 780 Prpura Verde La aplicacin ms habitual de la espectroscopia de infrarrojo en qumica orgnica es de tipo cualitativo y reside la identificacin de determinados grupos funcionales de una molcula para los que se observan bandas caractersticas en determinadas regiones del espectro (vase tabla adjunta). Este hecho permite adems la utilizacin de esta tcnica en el seguimiento de una reaccin en la que se tiene lugar una transformacin de grupos funcionales observables en IR.
2. Espectroscopa de Resonancia Magntica Nuclear La espectroscopia RMN se ha convertido en los ltimos aos en la tcnica analtica ms til en Qumica Orgnica. El fenmeno de la resonancia magntica nuclear se basa en el hecho de que ciertos ncleos giran alrededor de su eje, es decir, poseen espn nuclear (I). El movimiento de giro de estas especies cargadas, provoca que lleven asociados un campo magntico dbil (momento magntico), pudiendo considerarse como pequeos imanes. El espn nuclear puede tener valores enteros o fraccin de dos. As, ncleos como 1 H, 19 F y 13 C tienen valores de espn nuclear , el 14 N tiene 1, el 11 B tiene 3/2 y el 73 Ge tiene 9/2. Sin embargo, otros ncleos como 12 C y 16 O tienen un valor cero de espn nuclear y, por tanto, son inactivos en esta tcnica. En Qumica Orgnica los ms estudiados son el 1 H y el 13 C. Si un ncleo con espn nuclear 1/2 se sita en un campo magntico externo puede adoptar dos orientaciones diferentes, paralela o antiparalela respecto al campo aplicado, siendo la primera de menor energa. La presencia exclusiva de estas dos orientaciones se debe a que los niveles de energa implicados estn cuantizados. De forma similar a la espectroscopia de infrarrojo, los ncleos pueden excitarse al nivel de energa superior suministrando la radiacin electromagntica adecuada e inducir as la resonancia, fenmeno que supone simplemente invertir su orientacin. Cada istopo activo en RMN absorbe radiacin de frecuencia diferente en un campo magntico constante. Este hecho hace que podamos estudiar cada uno de ellos de forma independiente. Adems, la diferencia de energa entre estos dos niveles es principalmente, funcin del ncleo que se est irradiando y del campo magntico aplicado, siendo sta mayor cuanto ms intenso es el campo magntico externo. La posicin exacta en el espectro de RMN a la que un determinado ncleo absorbe se llama desplazamiento qumico y se mide en partes por milln (ppm). Este valor es independiente de la intensidad del campo magntico aplicado. Tanto en espectroscopia de RMN de protn como de carbono los valores de desplazamiento qumico estn referidos al del tetrametilsilano (TMS) al que se le ha asignado, arbitrariamente, un valor cero. Adems del desplazamiento qumico de las seales otras caractersticas importantes de los espectros de RMN, en especial de los de protn, que nos suministran una informacin muy valiosa son: 1) La intensidad de las seales (valor de integracin). 2) El desdoblamiento de las seales (grado de acoplamiento).
a) Resonancia magntica nuclear de protn: Valores de desplazamiento qumico en RMN de protn Habitualmente, en un espectro de RMN de protn los desplazamientos qumicos aparecen en el intervalo 0-10 ppm. Su valor exacto, como se ha comentado anteriormente, depende del entorno qumico de cada ncleo. Los protones con un mismo entorno qumico se dice que son qumicamente equivalentes y resuenan al mismo desplazamiento qumico por lo que dan lugar a una sola seal en el espectro. La equivalencia qumica de los protones de un determinado compuesto est relacionada estrechamente con su grado de simetra. Los protones equivalentes deben ser intercambiables entre s mediante una operacin de simetra (plano de simetra, centro de simetra o rotacin). La equivalencia o inequivalencia de los protones de una molcula se puede determinar reemplazando de forma secuencial cada uno de los tomos de hidrgeno a estudiar por un sustituyente Z. Si se obtiene el mismo producto independientemente de que protn se haya sustituido stos son qumicamente equivalentes. Integracin en RMN de protn El valor del rea (integracin) bajo una determinada seal de un espectro de RMN de protn es siempre proporcional al nmero de protones responsables de dicha resonancia. Por ello, el clculo de las integrales de todas las seales del espectro nos proporciona una informacin muy valiosa: el nmero relativo de cada tipo protones. Hay que tener en cuenta, no obstante, un error del 10% en dicho valor. Acoplamiento espn-espn en RMN de protn En trminos generales el fenmeno del acoplamiento espn-espn se produce por la interaccin entre ncleos no equivalentes a travs del enlace qumico que los conecta. As, un ncleo es capaz de sentir las orientaciones posibles de los ncleos vecinos. El acoplamiento entre espines nucleares produce un desdoblamiento de la seal que toma la apariencia de multiplete (doblete, triplete, cuadruplete, etc). Para predecir el tipo de acoplamiento entre los protones de una molcula podemos hacer uso de las siguientes reglas: Los protones qumicamente equivalentes no se acoplan entre s (los protones equivalentes pueden estar situados en el mismo carbono o en carbonos distintos).
El grado de desdoblamiento o multiplicidad de la seal depender del nmero de protones adyacentes y se puede calcular por la regla (n+1): un determinado tipo de protn que tiene (n) protones adyacentes equivalentes presentar una seal con (n+1) picos. Esta regla es slo valida en espectros de primer orden. b) Resonancia magntica nuclear de carbono Aunque se trata de la misma tcnica, las caractersticas de los espectros de RMN de 13 C difieren notablemente de las de los espectros de protn. Esto es debido principalmente a que el carbono 13 se encuentra en muy baja abundancia (11%) lo que provoca una gran disminucin de la sensibilidad. Los espectrmetros con transformacin de Fourier han permitido que la deteccin de la seal de carbono 13 sea factible en un tiempo razonable pero aun as, es necesaria una cantidad de muestra diez veces mayor que la utilizada para medir un espectro de RMN de protn. Debido a esta baja abundancia, la probabilidad de encontrar dos tomos de carbono 13 situados en posiciones adyacentes es prcticamente cero, por lo que no se observa acoplamiento homonuclear ( 13 C- 13 C). S es posible observar, no obstante, acoplamiento heteronuclear ( 13 C- 1 H) aunque habitualmente ste se elimina (desacoplamiento de banda ancha de protn) pues provoca una prdida considerable de sensibilidad as como un aumento notable de la complejidad del espectro. Gracias a este desacoplamiento, las seales observadas en los espectros de carbono son lneas estrechas de las que se determina fcilmente el desplazamiento qumico. Teniendo en cuenta adems que el intervalo de desplazamiento qumico en un espectro de carbono es mucho mayor que en uno de protn (0-200 ppm), los espectros de carbono estn en la mayora de los casos bien resueltos y se puede asignar un singlete a cada carbono no equivalente de la molcula, incluso tratndose de estructuras complejas. Otra diferencia a tener en cuenta respecto a la RMN de protn es que, por cuestiones tcnicas, las intensidades de las seales obtenidas en las condiciones habituales de medida no son proporcionales al nmero de tomos de carbono que contribuyen a las mismas. Este hecho dificulta la identificacin de grupos de ncleos equivalentes. En determinacin estructural la utilidad de la RMN de carbono es sumamente importante. Aunque las resonancias de los carbonos cuaternarios son ms dbiles normalmente que las de los carbonos que tienen protones, existen distintas tcnicas monodimensionales que permiten identificar las resonancias en un espectro de RMN de carbono de acuerdo al nmero de protones unido a cada carbono como los experimentos con desacoplamiento off-resonance, y los experimentos DEPT o APT . El espectro de carbono 13 off-resonancees una tcnica tradicional que consiste en el desacoplamiento parcial de protones. Esto se traduce en que prcticamente slo se observen los acoplamientos a un enlace por lo que las seales aparecen entonces como singletes, dobletes, tripletes o cuadrupletes segn se deban a las resonancias de carbonos cuaternarios, metino, metileno o metilo, respectivamente. La sensibilidad de estos experimentos es bastante baja debido al desdoblamiento y ensanchamiento de las lneas. Adems, en molculas complejas, la identificacin de las multiplicidades puede no ser sencilla debido al solapamiento de las mismas. Actualmente, gracias a continuos avances en este campo, se han puesto a punto tcnicas bidimensionales que permiten obtener informacin extremadamente detallada de la estructura de la molcula. 3. Espectrometra de Masa: La espectrometra de masas es, junto con la espectroscopia de infrarrojo y la de resonancia magntica nuclear, la tcnica ms utilizada para la elucidacin estructural de compuestos orgnicos. Los espectros obtenidos mediante esta tcnica adems de la masa de la molcula muestran la de los fragmentos resultantes de la ruptura de la molcula mediante un proceso de ionizacin. Este espectro constituye una identificacin prcticamente inequvoca del compuesto analizado. Sin embargo, existe una diferencia sustancial entre esta tcnica y los mtodos espectroscpicos. La espectroscopia se trata de un mtodo de anlisis no destructivo ya que se basa en la excitacin de las molculas desde su estado fundamental a un estado excitado mediante radiacin electromagntica de frecuencia adecuada, tras la cual la molcula vuelve al estado fundamental. Por el contrario, en un espectrmetro de masas las molculas se fragmentan tras un proceso de ionizacin, por lo que la muestra no es recuperable.
Fig. . Espectro de masa de 11-metoxytubotiwina
4. ULTRA VIOLETA (UV/VIS) Se correlaciona con las transiciones electrnicas, es decir la transicin de un electrn desde un estado fundamental a un estado excitado. La absorcin de la energa requerida para esta transicin se registra en la regin UV (190nm- 380nm) y en la regin visible (380nm-70nm).- las seales del UV son muy anchos a diferencia de las seales del RMN e IR debido a los mltiples cambios de estados vibracionales y rotacionales que acompaan a las transiciones electrnicas. Para que se observe una absorcin mxima debe existir en la N O CH 3 N O O CH 3 C H 3 H 9 10 11 12 8 13 2 7 20 19 21 6 5 15 14 16 3 22 23 18 molcula un cromforo generalmente conjugado, por un sistema de instauraciones mltiples, tal como dienos, enona, aromtico etc.
Referencia bibliogrfica http://perso.wanadoo.es/sergioram1/espectrofotometria.htm http://ocw.uv.es/ocw-formacio-permanent/1.espectrofotometria.pdf http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf http://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/FQpractica4.pdf