BIOLOGIA

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EFECTOS DE DIVERSAS SUSTANCIAS SOBRE
LA MITOSIS
1. OBJETIVO
1.1. Reconoce con microscopia ptica las distintas fases de la mitosis, ordenanadolas
secuencialmente y cuntificando cada una de ellas.
1.2. Reconoce la inportencia de la desterminacion del ndice mittico para fines para
ticos en estudios de genotoxicidad.
1.3. Reconoce los efectos de diferentes sustancias al nivel mittico en pices de
Allium cepa.

2. INTRODUCCION
La Mitosis es una simple divisin en la que de originan 2 clulas hijas con el mismo
numero de cromosomas (diploide = 2n) que la celula progenitora. Las clulas hijas
cromosomicamente son idnticas entre si y a sus antecesoras. Aunque el proceso de mitosis
en general es semejante en todas las clulas eucariotas, hay variaciones entre los distintos
tipos celulares, particularmente entre clulas animales y vegetales.
Loa Meristemos vegetales son muy convincentes para estudiar la divisin celular , puesto
que hay entre un 10 a 15 % de clulas en mitosis.
Por mitosis se dividen las clulas somticas del ser humano. Comprende 4 fases: Profase,
Metafase, Anafase y Telofase.
PROFASE: Los cromosomas estan compuestos de finos
filamentos enrollados, las cromtidas se acortan y el centrmero
se hace mas visible. El nuclelo se reduce de tamao, se
fragmenta y desaparece, en el citoplasma se encuentra dos pares
de centriolos, cada uno rodeado por el ster, se forma entre los
polos de huso mittico (huso acromtico), la desintegrasin de la
membrana nuclear indica el fin de la profase.
METAFASE: Los cromosomas de ubican en el plano ecuatorial
de la clula mediante sus centrmeros se unena algunas fibras de
huso, las cuales se extienden de polo a polo.
ANAFASE: Se separan los centmeros de todos los cromosomas
simultneamente, los hemicrosomas se dirigen hacia los polos,
con el centromero hacia adelante atrados por las fibras
cromosomicas del huso , las cuales posteriomente se acortan, las
fibras continuas se alargan fibras interzonales.
TELOFASE: Los cromosomas poco a poco se vuelven menos
condnesados, se comienza a formar la membrana nuclear de las
dos clulas hijas, reaparece el nuclelo. Ocurre finalmemte la
citocinesis (citodiresis). Los steres atienden a desaparecer y los
organelos se distribuyen equitativamente entre las clulas hijas.
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3. MATERIALES
Microscopio, acete de cedro, lmina, laminillas, raicillas de cebolla previamente tratadas,
HCl al 10%, Orcena actica, luna de reloj, pinzas, mecheros, lpices, alcohol.
12 cebollas, jugo de guanbana, jugo de rococto, gel se sbila y agua oxigenada.

4. PROCEDIMIENTOS:
Acondicionamiento del material biologico:
Se selecciona 12 bulbos de cebolla, (Allium cepa L ), secas y sin formacin de raz. Se
lavan, despojan de la scatfilas secas y se limpian cuidadosamente los
discosradiculareseliminando todas las raicillas secas preexistentes, con el fin de dejar
expuestos los primordios radicales.
Los bulbos son colocados en vasos plsticos transparentes de 100 mL con agua potable,
precurando mantener sumergidos solo el disco radicular. Los vasos se mantendrn bajo
permanente aireacin en oscuridad y a temperatura constante entre 24 y 25 C. Se
realizan cambio total de agua cada 24 horas hasta culminar un periodo de 48 horas.

Seleccin de bulbos:
Despues de emergencia de laa raicillas, los bulbos se agrupan por eleccion al azar para
conformar los diferentes tratamientos, con 2 bulbos cada uno: el primero se mantiene en
agua potable (control negativo), el segundo expuesto a gel de sbila ( 10 mL de gel de
sbila diluida en 1 Lt de agua, luego filtrar), el tercero expuesto a jugo de rocoto (1
rocoto de 20 gr triturado en un mortero, luego filtrar), el cuarto expuesto a jugo de
guanbana (100 gr de guanbana licuadas en 1 Lt de agua, luego filtrar) y el quinto
expuesto a cafeina, el sexto expuesto a agua oxigenada (control positivo). Considere que
cada bulbo de cebolla repreenta aun sistema experimental y que cada raicilla e suna
unidad experimental.

Tratamiento Mesa 1 Mesa 2 Mesa 3 Total
T0 Agua potable control (-) 2 bulbos 2 bulbos
T1 Jugo de rocoto 2 bulbos 2 bulbos
T2 gel de sbila 2 bulbos 2 bulbos
T3 Jugo de guanbana 2 bulbos 2 bulbos
T4 cafena 2 bulbos 2bulbos
T5 Agua oxigenada control (+) 2 bulbos 2 bulbos

El periodo de exposicin ser de 48 horas. Dos veces al da durante el perodo de
exposicion, se deber reponer el volumen perdido por evaporacion o absorcin. Para
reponer este volumen se utilizar la muestra o dilucin correspondiente. Se recomienda
inclinar el bulbo sin sacar las races del vaso, adicionando cuidadosamente el
volumencon ayuda de una pipeta Pasteur.


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Observacin microscpica de raicillas
Los parmetros macroscpicos por analizar son: longitud
promedio de las races, cuantificacin y tipificacin de las
anomalas apicales tales como ganchos, necrosis y
coloracion. La medicinde longitud promedio de las
races, se analizar con ayuda de una regla comn con
escala en milmetros. Se lleva a cabo ubicandoel valor de
longitud mnimo y maximo donde se inicia la mayoria de
las races y el punto medio se define comoel promedio.
Se efecta la estimulacion en cada vaso y se obtiene el
promedio matemtico de dos rplicas (los dos valores ms extremos se descartan). Para
obtener el porcentaje de efecto de inhibicin se debe realizar la siguiente operacin:





Operacin de las raicillas
Para cada tratamiento, se seleccionaron al azar dos raicillas de cada bulbo. Se cortan con
hoja de bistur o navaja las raicillas, tomando solamente la parte apical de 1-2 cm, las
cuales previamente se lavarn con agua potable.

Coloracin y Observacin de preparados citolgicos.
Las raicillas, se depositan sobre una una de reloj, sometidos a cido clorhdrico 1 N,
durante 5 min. Luego se colorean con orcena-actica al 2%. Se flamean hasta la emisin
de vapores, evitando la ebullicin. Se deja enfriar y se repite dos o tres veces durante 10
min. Aada orcena siempre que se corra el riesgo de que se sequen las races.
Con ayuda de una pinza , los pices son retirados de la luna de reloj y colocados en
lminas portaobjetos, se corta un fragmento apical de aproximadamente 2 milmetros (la
regin meristemtica) al que se le aade una gota de colorante. Se coloca un cubreobjeto
y con ayuda de un lapiz nuevo, se golpear el cubreobjeto en forma de espiral
(aplastamiento mcanico llamado squash).
Se realizan 2 preparados por bulbos de cebolla para cada tipo de tratamiento. El anlisis
microscpico se realiza a 400X y 1000X, cuantificando el nmero de clulas en mitosis,
as como el de microncleo y aberraciones cromosomicas presentes en clulas.
Se hace un recuento de 1000 clulas meristemticas por pice y por cada uno de los
tratamientos, para establecer el ndice mittico (IM) que estima el porcentaje de clulas
en divisin que existe en un tejido y, por lo tanto, es una medida del potencial
proliferativodel mismo. Para el clculo del IM y la duracin de cada fase del ciclo celular
se emplearn las siguientes frmulas:



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Para determinar el ndice mittico:

ndice Mittico (IM) =




Para determinar el ndice de fases:

ndice de fase (IF) =




Tiempo (minutos) de cada fase =









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Observaciones micrscopicas de raicillas:
Mesa 2 (Jugo de rocoto y Agua oxigenada)
Tratamiento Ganchos Necrosis Coloracin Tumoracin
T0 Agua potable (control +) 3 0 0 0
T1 Coca cola 1 10 25 4
T2 Jugo de rocoto 4 0 0 0
T3 gel de sbila 1 0 0 0
T4 jugo de guanbana 8 0 0 2
T5 Agua oxigenada (control -) 4 0 0 0

Longitud de las raicillas:
Tratamiento Mesa 1 Mesa 2 Mesa 3
Prome-
dio
Portentaje
de efecto de
inhibicin
T0 Agua potable (control) 6.5 6.5
T1 Coca cola 2 2.0 69%
T2 Jugo de rocoto 2.6 2.6 60%
T3 gel de sbila 3.7 3.7 43%
T4 Jugo de guanbana 1.9 1.9 71%
T5 Agua oxgenada 4.3 4.3 34%

Promedios de los ndices Mitticos (%) e ndices de fases (%).
Indices

Tratamiento
Interfase Mittico
FASES
Profase Metafase Anafase Telofase
T0 60% 40% 40% 20% 20% 20%
T1 17.5%
T2
T3
T4
T5

Estimacin de la duracin real de las fases del ciclo celular:
Interfase Profase Metafase Anafase Telofase Total
% Clulas 73% 70% 11% 4% 15% 100 %
Tiempo 137min 79min 29min 108 min ?



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Promedios de alteraciones en el material gentico (%).
Tratamiento
Rupturas
cromosmicas
(%)
Punetes
anafasicos (%)
Clulas
binucleadas
(%)
Otras
alteraciones
(%)
T0 Agua potable 0 0 0 0
T1 Jugo de rocoto
T2 gel de sbila
T3 Jugo de guanbana
T4 Cafena
T5 Agua oxigenada



















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INFORME DE PRACTICA N 19
MITOSIS CELULAR

RESULTADOS:

























Observacion: Mitosis
Muestra: Apice de Cebolla (Agua Potable)
Coloracin: Orcena Actica
Aumento total: 10x x 40x = 400x
Observacin: Mitosis
Muestra: Apice de Cebolla (Rocoto)
Coloracin: Orcena Actica
Aumento total: 10x x 40x = 400x
Observacin: Mitosis
Muestra: Apice de Cebolla (gel de sbila)
Coloracin: Orcena Actca
Aumento total: 10x x 40x = 400x

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Observacion: Mitosis
Muestra: Apice de Cebolla (Jugo guanbana)
Coloracin: Orcena Actica
Aumento total: 10x x 40x = 400x
Observacin: Mitosis
Muestra: Apice de Cebolla (Coca Cola)
Coloracion: Orcena Actica
Aumento total: 10x x 40x = 400x
Observacin: Mitosis
Muestra: Apice de Cebolla (AguaOxigenada)
Coloracin: Orcena Actica
Aumento total: 10x x 40x = 400x

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Analiss de Resultados (CONCLUSIONES):