SUMRIO - Aplicao de tcnicas citogenticas no controlo da reproduo - Hibridizao interespecfica - Manipulao cromossmica - Induo de poliploidia - Populaes monosexuais - Reverso sexual Fator importante para um bom desenvolvimento da aquacultura: Controlo do processo de reproduo dos peixes Mtodos - Hibridizao interespecfica - Manipulao cromossmica (induo de poliploidia) - Populaes monosexuais - Reverso sexual
Aplicao de tcnicas de citogentica A aplicao de tcnicas de anlise citogentica permite:
- Verificar a eficcia das tcnicas de controlo de reproduo utilizadas ( a partir do conhecimento do caritipo normal da espcie em causa)
- Estudar possveis alteraes do genoma causadas pelas tcnicas de controlo de reproduo, tais como: - Assimetria genmica dos hbridos - Alterao da homozigotia nos organismos ginogenticos e androgenticos - Aberraes cromossmicas nos peixes em que foi feita manipulao cromossmica - Desenvolvimento de poliploides alterado - Distrbios funcionais nos peixes com reverso de sexo - Hibridizao interespecfica - Manipulao cromossmica - induo de poliploidia - populaes monosexuais - Reverso sexual Mtodos de controlo do processo de reproduo dos peixes Amplamente espalhada, naturalmente e artificialmente Hibridizao interespecfica Ex. de hibridizao interespecfica natural: - salmo do Atlntico (Salmo Salar) e a truta (Salmo trutta) Hibridizao interespecfica em aquacultura (artificial): Obter modificaes desejveis nas populas de peixes com interesse comercial
Objetivos: - Aumento do ndice de crescimento - Aumento da resistncia a doenas - Aumento do rendimento da colheita - Nalguns casos: aplicao da hibridizao para o estabelecimento de stocks de peixes monosexuais e estreis Citoplasma materno (genomas nucleares de diferentes espcies) Sem perturbaes visveis Incompatibilidade dos genomas parentais (diferenas no n, tamanho e morfologia dos cromossomas) Ncleo materno Ncleo paterno Re-organizao e modificao do genoma Eliminao parcial de cromossomas Eliminao total de um genoma parental Desenvolvimento de poliploidia Inviabilidade dos hbridos Verificao da eficcia da hibridizao: identificao dos cromossomas parentais Hibridizao interespecfica - Hibridizao interespecfica - Manipulao cromossmica - induo de poliploidia - populaes monosexuais - Reverso sexual Mtodos de controlo do processo de reproduo dos peixes Manipulao cromossmica Manipulao cromossmica: - Envolve sempre alterao do n haploide, nunca aneuploidias ou alteraes estruturais - Os seus princpios baseiam-se fundamentalmente no processo de meiose feminina - choques trmicos frios quentes
- choques de presso hidrosttica
- tratamentos qumicos Citocalasina B Colchicina
- cruzamentos (fmeas 2n com machos 4n e vice-versa) Mtodos de induo de poliploidia Manipulao cromossmica Induo de poliploidia Induo de poliploidia por choques trmicos - desova da fmea e extrao do esperma nos machos por presso abdominal - fecundao durante 2m - lavagem - incubao dos ovos, durante 15m, em gua bem oxigenada - submerso dos ovos num sistema termoregulado de gua quente (28C) durante 10m - recolocao dos ovos tratados no sistema de incubao Os choques trmicos, quentes ou frios, podem no ser efetivos quando aplicados a temperaturas aqum ou alm do limite tolerado pela espcie: - Choques com intensidades entre 8 e 11C para peixes de guas quentes (ex: Tilapia aurea) - Choques com intensidades entre 26 e 28C para peixes de guas frias (ex: salmondeos) Induo de poliploidia por choques trmicos Fundamento da induo de triploidia Influncia da temperatura na taxa de sobrevivncia Fundamento da induo de tetraploidia Desvantagens - difcil obter uma populao tetraploide vivel e frtil Resultados - choque 8 minutos depois da fecundao - triploides - choque mais tardio - tetraploides Procedimento introduo dos ovos fecundados num cilindro de ao cheio de gua temperatura constante de 10C e fechado com pisto
- fazer subir a presso entre 408 a 476 atmosferas num tempo curto Induo de poliploidia por presso hidrosttica Fundamento bloqueio da metafase (colchicina) inibio da citocinese (citocalasina B) Desvantagens - a % de poliploides depende de fatores como a temperatura e o tempo de tratamento - no se conhecem ainda as consequncias para a sade humana Induo de poliploidia por agentes qumicos Induo de triploidia por cruzamento de fmeas 2n com machos 4n Vantagens? Desvantagens? A viabilidade e a sobrevivncia destes indivduos esto dentro dos limites permitidos pela seleo e pela adaptao
- aparecem espontneamente na natureza - possvel induzi-los artificialmente Triploides VS Diploides - A viabilidade menor quando as espcies cultivadas so triploides (menor % de ovos que chegam a eclodir, devido ao choque do tratamento) - A sobrevivncia dos triploides depois da ecloso igual dos diploides respetivos Tetraploides - Viabilidade menor nas espcies com interesse comercial - Quando frteis apresentam elevada taxa de anomalias cromossmicas e malformaes nos seus gmetas Viabilidade dos poliploides Mtodos identificao dos poliploides - Caritipo, marcadores cromossmicos (NORs, bandas C...) - Volume nuclear dos eritrcitos diploidia triploidia tetraploidia Identificao de poliploidia Consequncias da triploidia nos peixes Esterilidade
Testculos de tamanho e forma semelhantes aos normais, mas os seus gmetas so cromossomicamente desequilibrados dando origem a embries aneuploides e inviveis
Nas fmeas o desenvolvimento gonadal est completamente inibido ( maioria das espcies)
Em algumas espcies as fmeas, atingindo a puberdade um ano depois do macho, no sofrem consequncias negativas do amadurecimento sexual (taxas de crescimento, qualidade e mortalidade mais favorveis)
A taxa de crescimento dos triploides superior dos diploides
Controlo da maturao sexual pela triploidia Controlo da maturao sexual pela triploidia Repovoamento de rios e zonas marinhas, sem efeitos ambientais negativos, uma vez que a esterilidade faz deles uma populao neutra e controlada - Hibridizao interespecfica - Manipulao cromossmica - induo de poliploidia - populaes monosexuais - Reverso sexual Mtodos de controlo do processo de reproduo dos peixes Ginogenticos indivduos resultantes da induo do desenvolvimento embrionrio, em ocitos normais, por fecundao com esperma funcional mas inativo, com posterior diploidizao do DNA de origem materna Androgenticos indivduos resultantes da induo do desenvolvimento embrionrio em ocitos em que foi eliminado o DNA, por fecundao com esperma normal, com posterior diploidizao do DNA de origem paterna Populaes monosexuais Podem ocorrer espontneamente (ex: carpa) ou podem ser formadas artificialmente Controlo sexual produo de populaes todas fmeas ou machos com importncia comercial Ginogenticos meiticos (heterozigticos) Ginogenticos mitticos (homozigticos) Formao de ginogenticos Para evitar a elevada taxa de mortalidade do embrio, aps aplicao do choque para induo de diploidia, podem-se usar ovos diploides provenientes de fmeas tetraploides Para evitar a elevada taxa de mortalidade do embrio, aps aplicao do choque para induo de diploidia, podem-se inseminar os ovos com espermatozoides diploides de machos tetraploides Formao de androgenticos Sobrevivncia dos ginogenticos e androgenticos
A sobrevivncia menor nas espcies com manipulao cromossmica
- elevado ndice de mortalidade - percentagem significativa de embries malformados
Consequncia das manipulaes drsticas nos gmetas A radiao usada para inativar o DNA dos ocitos e/ou espermatozoides pode: - induzir danos no DNA mitocondrial dos ocitos, o qual tem funes essenciais durante as primeiras fases do desenvolvimento embrionrio - produzir fragmentos cromossmicos, podendo estes resduos de cromossomas interferir com o desenvolvimento embrionrio dos organismos androgenticos ou ginogenticos - Dar origem a mosaicismo, quando a radiao induzida durante a primeira diviso mittica
Avaliao da taxa de sucesso na formao de ginogenticos e androgenticos
- avaliao da eficcia: utilizao de espcies albinas - aplicao dos mtodos em bivalves: menor taxa de sucesso - influncia materna: diferente susceptibilidade radiao UV - Hibridizao interespecfica - Manipulao cromossmica - induo de poliploidia - populaes monosexuais - Reverso sexual Mtodos de controlo do processo de reproduo dos peixes Reverso sexual: formao de neomachos X + X X XX X + 17-alfa-metiltestosterona XX XX Obteno dos neomachos triploides Administrao da hormona de crescimento 17-alfa- metiltestosterona por injeco ou na dieta, durante os primeiros meses de alvinagem
Cruzamento dos neomachos com fmeas normais
Ovos submetidos a um dos tratamentos de ploidizao j referidos
Neomachos triploides
Masculinizao de indivduos XX com tratamentos hormonais adequados - processo lento e complicado Vantagens das populaes s de fmeas triploides Produo massiva de variedades favorveis sob o ponto de vista gentico e comercial Crescimento mais rpido por desaparecimento da competio com os machos Populaes sem stress sexual, logo mais estveis Neomachos - processo mais lento e complicado Devido ao progresso das tcnicas citogenticas, estas tornaram-se parte integrante das experincias biotecnolgicas em aquacultura, pois: - Contribuem largamente para estudos relacionados com hibridizao e manipulao cromossmica - Permitem identificao de hbridos vs espcies parentais - Permitem detetar incompatibilidade genmica, que pode causar rearranjos cromossmicos drsticos, que resultam na morte dos hbridos durante a embriognese - Ajudam a avaliar a eficcia dos processos , verificando os nveis de ploidia e os ndices de sexo feminino vs masculino entre os progenitores manipulados - Podem fornecer dados sobre resduos de genomas parentais irradiados em clulas de peixes com manipulao genmica - Disponibilidade de marcadores cromossmicos que podem melhorar a anlise das perturbaes cromossmicas em hbridos e espcies manipuladas Concluso sobre a importncia da citogentica em aquacultura Temperature affects methylation of the myogenin putative promoter, its expression and muscle cellularity in Senegalese sole larvae Catarina Campos,1,2,3 Lusa M.P. Valente,1 Lus E.C. Conceio,2 Sofia Engrola2 and Jorge M.O. Fernandes3,* 1CIIMAR/CIMAR, Centro Interdisciplinar de Investigao Marinha e Ambiental and ICBASInstituto de Cincias Biomdicas de Abel Salazar; Universidade do Porto; Porto, Portugal; 2CC MAR/CIMAR, Centro de Cincias do Mar; Universidade do Algarve; Campus de Gambelas; Faro, Portugal; 3Faculty of Biosciences and Aquaculture; Produo e melhoramento de espcies com interesse comercial ?Melhoramento citogentico vs melhoramento epigentico?