Dra.

Enedina Jimnez Cardoso

Laboratorio de Investigacin en Parasitologa
Hospital Infantil de Mxico Federico Gmez
CONTROL DE CALIDAD
EN PARASITOLOGA
Programa de control de calidad
Toma de muestra
5-10g en un recipiente de boca
ancha limpio, seco y libre
de detergentes
Toma de muestra
5-10g en un recipiente de boca
ancha limpio, seco y libre
de detergentes
Calibrar el equipo
(centrifuga y microscopio)
Verificar el buen estado de los
reactivos y que la muestra no
presente interferencias
Calibrar el equipo
(centrifuga y microscopio)
Verificar el buen estado de los
reactivos y que la muestra no
presente interferencias
Reporte Post-Analtica
Reporte Post-Analtica
Transporte en Formalina al 5%
Transporte en Formalina al 5%
PROCEDIMIENTO
Realizar anlisis coproparasitos-
cpico por concentracin:
flotacin o sedimentacin
PROCEDIMIENTO
Realizar anlisis coproparasitos-
cpico por concentracin:
flotacin o sedimentacin
Archivar una copia del resultado
con los datos del paciente, de la
muestra, del analista y del
laboratorio
Archivar una copia del resultado
con los datos del paciente, de la
muestra, del analista y del
laboratorio
Recepcin
Datos completos del paciente,
fecha y hora de la recoleccin
fecha de recepcin, cdigo de
la muestra
Recepcin
Datos completos del paciente,
fecha y hora de la recoleccin
fecha de recepcin, cdigo de
la muestra
Identificacin de las formas parasi-
tarias teidas con lugol, usando
micrmetro Incluir control positivo,
comparar con fotografas
y laminillas de coleccin
Identificacin de las formas parasi-
tarias teidas con lugol, usando
micrmetro Incluir control positivo,
comparar con fotografas
y laminillas de coleccin
Evaluacin de resultados
Reportar casos raros para los
estudios epidemiolgicos y realizar
una coleccin con tincin
permanente
Evaluacin de resultados
Reportar casos raros para los
estudios epidemiolgicos y realizar
una coleccin con tincin
permanente
Fase Pre-analtica
Fase Pre-analtica
Fase Analtica
Fase Analtica
Fase Post-Analtica
Fase Post-Analtica
Diagnstico de Parsitos intestinales
Diagnstico de Parsitos intestinales
Analisis coproparasitoscopico
Fase preanaltica
Toma de Muestras
Condiciones
Aceptables.
La muestra ser la primera de la maana y remitida al
Laboratorio.
Si es un Beb, la muestra se tomar del paal.
Tres das consecutivos.
Se enviar en un frasco de boca ancha.
Inaceptables.
Contaminadas con orina.
Mas de cinco das de emisin.
Almacenadas en temperaturas inferiores a 0C, mayores a 50C.
MANEJO.
Rotularla con la siguiente informacin.
- Fecha de coleccin
- Nombre y nmero de identificacin del paciente.
- Historia clnica con datos de importancia para el
diagnstico correcto.
Coproparasitoscopico, transporte, ejecucin
Fase preanaltica
Fase Analtica
LABORATORIO (a, b, c).
Debe contar con un rea de recepcin de muestras y otra para desarrollar la
metodologa restringido para actividades tales como comer, beber, fumar.
a) MATERIAL. b) CRISTALERIA c) REACTIVOS
Centrifuga. Cubreobjetos Formalina 5%
Microscopio ptico. Portaobjetos Lugol-Yoduro 2%
Densmetro Tubos de ensaye Sulfato de Zinc
Balanza granataria. (13x100mm) 33% 1.180.
Embudo de plstico.
Malla de alambre galvanizado.
Fase Analtica
Control de Calidad
a) CALIBRACIN DEL MICROSCOPIO.
Controles, fotografas y laminillas de parsitos conocidos.
b) PRECAUCIONES.
Uso de guantes, bata y trabajar en un rea destinada nicamente
al procesamiento de las muestras.
Las muestras diarreicas deben analizarse en los treinta minutos
siguientes a su emisin.
c) ERRORES.
El que los reactivos no estn en condiciones ptimas.
(Frascos con fecha de elaboracin).
Confusin de artefactos con formas parasitarias.
Confusin de genero yo especie del parsito observado.
Densidad del sulfato de Zinc a una densidad diferente
d) LIMITES DE REPORTE.
Estadio del parsito.
Gnero del parsito
Especie del parsito.
Fase Analtica
Control de Calidad
Artefactos ms comunes en el anlisis de
concentracin por flotacin
1. La materia fecal contiene en muchos componentes entre ellos se
encuentran:
1.1.- Residuos de alimentos.
1.2.- Productos de digestin.
1.3.- Clulas epiteliales, leucocitos, eritrocitos.
1.4.- Levaduras y bacterias.
2. Es necesario hacer la diferencia entre los parsitos, de otros
elementos presentes en las heces.
2.1.- Material derivado de clulas humanas.
2.2.- Cristales de Charcot-Leyden
Fase Analtica
Control de Calidad
2.3.- Clulas epiteliales.
2.4.- Macrfagos
2.5.- Leucocitos polimorfonucleares
2.6.- Eritrocitos
3. Otros elementos.
3.1.- Algas
3.2.- Conidias
3.3.- Esporas
3.4.- Elementos de plantas
3.5.- Granos de polen
3.6.- Esporas
3.7.- Artefactos de tincin
3.8.- Espirales vegetales
3.9.- Levaduras
Fase Analtica
Control de Calidad
artefactos
Fase Analtica
Diagnstico Presuntivo (1)
Procedimiento
Protozoarios
Quistes/Huevos
Helmintos
Larvas
Protozoarios
Quistes/Huevos
Helmintos
Larvas
Heces no preservadas
0.85% NaCL
Formalina al 5 10% Fijador de Schaudinns
Obtencin Directa
Concentracin Tinciones permanentes
Protozoarios
Quistes/Huevos
Helmintos
Larvas
Protozoarios
Trofozoitos
Y Quistes
Motilidad Morfologa
General
Morfologa
Precisa
Fase Analtica
Diagnstico presuntivo (2)
Procedimiento
Heces
Muestra lquida
Heces
Muestra lquida
5 a 10% de
Formalina
Mezclar 3-4 gotas con
PVA con la 2 gotas
de la muestra
Fijador de
Schaudinns
Concentrarla
Tincin
permanente
Tinciones
permanentes
Huevecillos o larvas
de Helmintos
Protozoarios
Helmintos
Protozoarios
Helmintos
Morfologa
General
Morfologa precisa
Protozoarios
y/o Helmintos
Morfologa Precisa
Protozoarios
y/o Helmintos
Van Leewenhoek conocido
como el padre de la
microbiologa (1632)
Realizo la primera
observacin de Giardia
Ninguna relacin entre el
microorganismo y su
patologa
En 1859, Vilem Lambl
observo Giardia en
muestras de nios con
diarrea
Comensal
Giardia lamblia
Es el agente etiolgico parsito ms importante que
causa diarrea en nios.
Lewis, D.J. Dig Dis. 1992;10(2):102-11. Farthing, M. J. Gastoenterol
Clin North Am. 1996;25(3):493-515.
En Asia, Africa y Latinoamerica se reportan 200 millones
de personas con Giardiasis sintomtica y 500,000 casos
nuevos de Giardiasis por ao.
WHO (1996) The World Heath Report 1996, WHO.
Afecta un gran mmero de mamferos entre ellos a los
animales domsticos. Por lo que adems de la
importancia mdica y veterinaria este parsito se hace
peculiar por sus caractersticas genticas que lo ubican
ocmo el eukariote ms primitido.
Upcroft, J; Upcroft, P. Bioessays. 1998;20(3):256-63.
G. intestinalis
Colonizacin
La ingestin de quistes permite pasar a stos por el estmago y el
desenquestamiento se lleva a cabo por al breve exposicin con el
cido clordico pH2, despus de 5 a 10 minutos los trofozotos
colonizan la parte alta del intestino delgado.
Adherencia
Los trofozotos se adhieren a la mucosa intestinal por el disco ventral
suctorio mediante microtbulos que adheridos a la microbellocidad
intestinal provoca un aplanamiento de ellas y como consecuencia su
disfuncin.
Anaerbico
Amitocondrial
Sensible a
frmacos
Plsmido o virus
Gen para toxina
Dos ncleos
simtricos
Citoesqueleto
desarrollado
Cromosomas
mltiples
1. Ncleo
2. Cuerpo medio
3. Axonema
4. flagelos
1. Ncleo
2. Axonema
3. Pared
4. Cuerpos obscuros
Asintomtica
Portador
Sintomtica
Diarrea
Perdida de apetito
Calambres
Nausea
Prdida de peso y deshidratacin
Sndrome de malabsorcin
giardiasis
diagnstico
El diagnstico se hace al identificar los
quistes y/ o trofozotos en heces.
aspirado o biopsia duodeno-yeyunal.
El examen simple de una sola muestra de
heces no es suficiente (50-70%).
3 muestras en un perodo de una semana
(90-95%).
Parasitosis intestinal por protozoarios
GIARDIASIS
HISTORIA
NEGATIVO
NO DESCARTAR
DIAGNSTICO
POSITIVO
TROFOZOITOS EN
DUODENO
NEGATIVO
POSITIVO
DIAGNSTICO
CONFIRMADO
NEGATIVO
NEGATIVO
POSITIVO
DIAGNSTICO
CONFIRMADO
POSITIVO
TRATAMIENTO
DIARREA PERSISTENTE
MALA ABSORCIN
FLATULENCIAS
TROFOZOITOS O QUISTES
EN MATERIA FECAL
DIAGNSTICO
1 200pb
1 2 3 4
Electroforesis en gel de
agarosa al 1% en el que se
observa:
1.- Marcadores de pesos
moleculares.
2, 3, 4.- Producto de RCP,
fragmento de 1200pb que
codifica para la enzima
glutamato deshidrogenasa
(gdh) de Giardia lamblia.
Reaccin en Cadena de la Polimerasa
Anlisis de los genes tsp11 y gdh de Giardia intestinalis
tsp11 gdh
Kpn I Xha I Hind III Sph I Apa I BspH I EcoRI Kpn I
Genogrupo Producto Producto
Kb Kb
AI 1.80 + + + + 1.20 + + + +
AII 1.80 - - - - 1.20 + + + +
B No 1.20 - - - -
Amplifica
transmisin zoontica
transmisin zoontica
10% en perros bien
tratados
36 a 50% en cachorros
hasta 100% en
criaderos.
En gatos es de 1,4-11%
(dificultad para
identificar el organismo)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
A A2 A3 A4 B G
ASINTOMATICOS
SINTOMATICOS
CULTIVOS
PERROS
Genogrupos de Giardia intestinales y su
relacin al origen del aislamiento
rbol filogentico del gen ribosomal 16S, de
aislados de Giardia intestinalis humanos y
caninos
Aislado Grupo
1) Ad23 F
2) Ad28 B
3) Ad137 C
4) Ad148 D
5) Ad13 A
6) Bris136 AII
7) Rat G
PM F B E C D AI AII G
pb
2000 -
1500 -
1000 -
500 -
Multiplex
Muestras
Assemblage A
AI AII
Cultivo
n=6
6/6
(100%)
0/6
Humano
n=12
5/12
(41.66%)
7/12
(58.33%)
Perro
n=20
11/20
(55%)
9/20
(45%)
Total
n=38
22/38
(57.89%)
16/38
(42.10%)
Genotipo de Giardia intestinalis en aislados obtenidos de
perros y humanos, mediante la restriccin del gen de -
giardina