94024091

N dordre Anne 2010
UNIVERSITE DE LA REUNION
UFR DES SCIENCES ET TECHNOLOGIES

THESE

En vue de lobtention du grade de

DOCTEUR EN SCIENCES
Discipline : CHIMIE

par

Mohamed SAID HASSANI

Titre

VALORISATION DE QUATRE PLANTES ENDEMIQUES ET
INDIGENES DES COMORES

prsente et soutenue publiquement le 21 septembre 2010

Composition du jury

Madame A. GAUVIN-BIALECKI Matre de Confrences-HDR LCSNSA - Universit de La Runion

Madame E. GIRARD-VALENCIENNES Matre de Confrences LCSNSA - Universit de La Runion

Madame A. GURIB-FAKIM Professeur- Universit de Maurice

Madame C. MENUT Professeur ENSC de Montpellier

Madame J. SMADJA Professeur LCSNSA - Universit de La Runion

Madame S. ZRIRA Professeur - IAV de Rabat Maroc

2

R E M E R C I E M E N T S

Je tiens exprimer ma reconnaissance Madame le Professeur Jacqueline SMADJA
de m'avoir donn l'opportunit de raliser une partie de ce travail au sein de son
laboratoire. Je la remercie galement de m'avoir permis de finaliser et soutenir cette
thse lUniversit de la Runion.
Mes remerciements les plus vifs sadressent Madame le Professeur Chantal MENUT
et Madame le Professeur Saadia ZRIRA pour mavoir accueili au sein de leurs laboratoires
respectifs, pour avoir accept dtre rapporteurs de cette thse et faire partie de mon
jury.
Je remercie chaleureusement Madame le Professeur Ameenah GURIB-FAKIM pour
mavoir accueilli au sein de son laboratoire et pour avoir accept de faire partie de mon
jury de thse en qualit dexaminateur.
J'aimerais remercier tout particulirement Madame le Docteur-HDR Anne GAUVIN-
BIALECKI pour sa grande disponibilit, ses prcieux conseils et son total investissement
dans cette thse aussi bien pour les travaux raliss dans les autres laboratoires que pour
ceux raliss au sein du LCSNSA.
Je remercie Madame Emmanuelle GIRARD-VALENCIENNES pour son soutien et ses
conseils aviss.
Je remercie galement le Professeur Jean-Louis LABAT, le Docteur Roger
LAVERGNE, Monsieur Yahaya Ibrahim et Madame Ramadhoini Islame dont les comptences
botaniques mont t d'un grand secours pour la rcolte et l'identification des plantes.
Toute ma reconnaissance galement Messieurs les Professeurs Franois FRAPPIER
et Mohamed OUKESSOU et Mesdemoiselles Marie-Caroline JONVILLE et Siham MEHDI pour
les tests biologiques effectues au cours de ce travail.
Je ne saurai oublier toutes les personnes sans qui ces quelques annes ne se
seraient pas passes aussi agrablement, tant Montpellier (France), qu Rabat (Maroc),
Rduit (Maurice) et Saint Denis (La Runion) lors de la ralisation de cette thse.
Un grand merci, du fond du cur, l'ensemble du personnel et doctorants du
LCSNSA, en particulier le Professeur Bertrand ILLIEN, les Docteur-HDR Isabelle GRONDIN,
Alain SHUM CHEONG SING et Bertrand PAYET, les Docteurs Thomas PETIT, Arnaud
Marvilliers, Audrey MARTINEZ et Patricia RABIER, les doctorants Sabrina ELISE, Sophie
TECHER, Clara DONADIO, Marie WATSON, William PIANG SIONG et Sbastien PICCINO, sans
oublier Mademoiselle Suzelle POULMANE et Monsieur Julien LEBON.
Un merci tout spcial mes ami(e)s pour tous les moments de dtente passs
ensemble qui m'ont permis de retrouver une certaine srnit dans les moments difficiles.
Merci galement mes collgues et ami(e)s de lONG ULANGA Ngazidja (Comores)
et de lAssociation Terre et Faune (Suisse) pour avoir t indulgents mon gard
concernant les activits de protection de lenvironnement aux Comores.
Enfin, ce travail naurait pas abouti sans le soutien constant et les encouragements
de ma femme et mes enfants. La confiance quils mont tmoigne tous les jours a vaincu
les moments de doute et de dcouragement.
Je terminerai par un grand merci feu mes parents et grands parents qui ont su me
transmettre leurs prcieux messages avant leur dpart ternel. QuALLAH leur accorde le
Paradis.
3

A V A N T - P R O P O S

Les rsultats de ce travail de thse sont le fruit dune collaboration internationale et rgionale
de divers laboratoires :

Le Laboratoire de lInstitut des Biomolcules Max Mousseron de lEcole Nationale Suprieure de
Chime de Montpellier (ENSCM) du Professeur Chantal MENUT de Montpellier en France,

Le Laboratoire des Substances Naturelles et des Armes (Labo subnarme), de lInstitut
Agronomique et Vtrinaire (IAV) Hassan II du Professeur Saadia ZRIRA de Rabat au Maroc,

Le Dpartement de Chimie de la Facult des Sciences de lUniversit de Maurice du Professeur
Ameenah FAKIM-GURIB de Rduit Maurice,

Le Laboratoire de Chimie de Substances Naturelles et des Sciences des Aliments (LCSNSA) de la
Facult des Sciences et Technologies de lUniversit de la Runion du Professeur Jacqueline
SMADJA de Saint Denis La Runion.

Par ailleurs, les tests dactivit ont t mens dans les laboratoires suivants :

Le Laboratoire de Microbiologie, de lInstitut Agronomique et Vtrinaire (IAV) Hassan II de Rabat
au Maroc,

Institute of Pharmaceutical Chemistry de lUniversit de Vienne, Autriche.

LInstitut de Pharmacognosie et Phytochimie (IPP) de lEcole de Pharmacie de lUniversit de
Lausanne, Suisse.

Le Laboratoire de Chimie et Biochimie des Substances Naturelles, Musum National dHistoire
Naturelle (MNHN), USM 0502, CNRS, UMR 5154, Paris, France.

Lensemble de ces travaux ont bnfici du soutien financier de plusieurs partenaires :

LUniversit des Comores,

LAgence Universitaire de la Francophonie (AUF) dans le cadre des Bourses de perfectionnement
scientifique ou pdagogique,

La Banque Islamique de Dveloppement (BID) dans le cadre de la Coopration Technique des
pays membres,

Le Ministre Franais des Affaires Etrangres dans le cadre de la coopration universitaire et
recherche entre la France et lUnion des Comores.

Ce travail de thse a, dores et dj, donn lieu en 2002 et en 2005 deux publications:

[1] MENUT C., BESSIRE J.M., SAID HASSANI M., BUCHBAUER G., SCHOPPER B., Chemical and biological
studies of Ocotea comoriensis bark essential oil, Flavour and Fragrance Journal, 2002, 17, 459 461.

[2] SAID HASSANI M., SAD ABDALLAH B., ZRIRA S., BENJILALI B., Chemical composition of the essential
oil of Laggera alata var. alata (D. Don) Sch. Bip. Ex Oliv. (Asteraceae) from Comoros Islands, Part I,
Journal of Essential Oil Bearing Plants, 2005, 8(1), 15 18.

Une troisime publication est en cours de rdaction :

[3] SAID HASSANI M., MEHDI S., ZAINATI I., ZRIRA S., OUKESSOU M., Chemical composition and
antimicrobial activity of Plectranthus amboinicus (Lour) Spring. (Lamiaceae) leaves dried essential
Oil from Archipelago of Comoros.
4

L I S T E D E S A B R E V I A T I O N S

AcOEt : Actate dthyle

APT : Attach Proton Test

CCM : Chromatographie sur Couche Mince

CDCl
3
: Chloroforme deutri

CG-DIF : Chromatographie Gazeuse couple un Dtecteur Ionisation de Flamme

CG-SM : Chromatographie Gazeuse couple la Spectromtrie de Masse

CH
2
Cl
2
: Dichloromthane

CHCl
3
: Chloroforme

CLMP : Chromatographie Liquide Moyenne Pression

CI
50
: Concentration Inhibitrice 50%

CMI : Concentration Minimale Inhibitrice

DMAPP : Dimethylallyldiphosphate

DMSO : Dimthylsulfoxyde

EtOH : Ethanol

GPP : Geranyldiphosphate

GPPS : Geranyldiphosphate synthase

IPP : Isopentyldiphosphate

IRR : Indice de Rtention Relatif

LIS : Linalol synthase

MeOH : Mthanol

RMN : Rsonance Magntique Nuclaire

TSB : Tryticase Soja Bouillon

UV : Ultra-Violet

5

S O M M A I R E

REMERCIEMENTS 2
AVANT-PROPOS 3
LISTE DES ABREVIATIONS 4
INTRODUCTION GENERALE 8
CHAPITRE I : Laggera alata var. alata (D. Don) Sch. Bip. Ex Oliv.(Asteraceae) 13
I.1 Description botanique 14
I.2 Travaux antrieurs 15
I.2.1. Utilisations des espces du genre Laggera en mdecine traditionnelle 15
I.2.2. Les huiles essentielles des espces du genre Laggera 15
I.3 Etude de Laggera alata var. alata de lArchipel des Comores 19
I.3.1. Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles 19
I.3.1.1 Principe de ltude 19
I.3.1.2 Rsultats 19
I.3.1.3. Discussion 21
I.3.2. Conclusion et perspectives 22
CHAPITRE II : Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng (Lamiaceae) 24
II.1 Description botanique 25
II.2 Travaux antrieurs 26
II.2.1. Utilisations des espces du genre Plectranthus en mdecine traditionnelle 26
II.2.2. Les huiles essentielles des espces du genre Plectranthus 27
II.3 Etude de Plectranthus amboinicus de lArchipel des Comores 28
II.3.1. Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles 28
II.3.1.1 Principe de ltude 28
II.3.1.2 Rsultats 28
II.3.1.3 Discussion 30
II.3.2. Activit biologique de lhuile essentielle des feuilles 31
II.3.2.1 Principe de ltude 31
II.3.2.2 Rsultats 31
II.3.2.3 Discussion 33
II.3.3. Conclusion et perspectives 33
CHAPITRE III : Ocotea Comoriensis Kostermans (Lauraceae) 35
III.1 Description botanique 36
III.2 Travaux antrieurs 37
III.2.1. Utilisations des espces du genre Ocotea en mdecine traditionnelle 37
III.2.2. Les huiles essentielles des espces du genre Ocotea 37
6

III.3 Etude de lOcotea comoriensis de lArchipel des Comores 40
III.3.1. Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles, fruits et corces 40
III.3.2.1 Principe de ltude 40
III.3.1.2 Rsultats 40
III.3.1.3 Discussion 47
III.3.2. Activits biologiques de lhuile essentielle dcorce (Ec2) 48
III.3.2.1 Principe de ltude 48
III.3.2.2 Rsultats 48
III.3.2.2 Discussion 49
III.3.3. Conclusion et perspectives 49
CHAPITRE IV : Teclea boiviniana (H. Perr.) Baillon (Rutaceae) 51
IV.1 Description botanique 52
IV.2 Travaux antrieurs 53
IV.2.1. Utilisations des espces du genre Teclea en mdecine traditionnelle 53
IV.2.2. Composition chimique des espces du genre Teclea 53
IV.2.2.1 Les composs volatils 53
IV.2.2.2 Les composs non volatils 54
IV.2.3. Activits biologiques des espces du genre Teclea 58
IV.3 Etude de Teclea boiviniana de lArchipel des Comores 58
IV.3.1. Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles 58
IV.3.2.1 Principe de ltude 58
IV.3.1.2 Rsultats 59
IV.3.1.3 Discussion 60
IV.3.2. Criblage chimique des feuilles et des racines 62
IV.3.3. Isolement et analyse de composs non volatils des racines 63
IV.3.4. Activits biologiques des extraits non volatils des feuilles et des racines 66
IV.3.4. Conclusion et perspectives 67
CONCLUSION GENERALE 68

7

PARTIE EXPERIMENTALE 73
I Collecte 74
I.1 Laggera alata var. alata 74
I.2 Plectranthus amboinicus 74
I.3 Ocotea comoriensis 74
I.4 Teclea boiviniana 74
II Les huiles essentielles 75
II.1 Extraction des huiles essentielles 75
II.1.1 Laggera alata var. alata 75
II.1.2 Plectranthus amboinicus 75
II.1.3 Ocotea comoriensis 75
II.1.4 Teclea boiviniana 75
II.2 Analyse des huiles essentielles 75
II.2.1 Laggera alata var. alata 75
II.2.2 Plectranthus amboinicus 77
II.2.3 Ocotea comoriensis 77
II.2.4 Teclea boiviniana 80
III Teclea boiviniana : tude des composs non volatils des feuilles et des racines 80
III.1 Obtention des extraits apolaires et polaires des feuilles et des racines 80
III.2 Criblage phytochimique 83
III.3 Fractionnement et analyse de lextrait apolaire des racines 86
III.3.1 Fractionnement 86
III.3.2 Analyse structurale par Rsonance Magntique Nuclaire (RMN) 86
IV Tests dactivit biologiques 87
IV.1 Activit antibactrienne 87
IV.1.1. Matriel 87
IV1.2. Mthode 87
IV.2 Activit larvicide 88
IV.3 Activit antipaludique 88
IV.4 Activit antioxydante 88
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 89
LISTE DES TABLEAUX 96
LISTE DES FIGURES 97
LISTE DES CLICHES 97

INTRODUCTION GENERALE

9

Introduction Gnrale

Situ dans lOcan Indien, lentre du canal du Mozambique, 300 Km des cts
Africaines et 400 Km au Nord Ouest de lle de Madagascar, lArchipel des Comores est
compos de quatre les : Grande Comore, Anjouan, Mohli et Mayotte, avec une superficie
totale de 2236 Km
2
. Seules les trois premires les forment actuellement lUnion des
Comores, vaste de 1660 Km
2
. Mayotte, quant elle, fait partie de la Rpublique franaise
en tant que collectivit territoriale dOutre-Mer.

Les les Comores prsentent un potentiel dun grand intrt du point de vue de la
diversit biologique aussi bien au niveau de la flore que de la faune. Ces les occupent la
deuxime place, derrire Madagascar, sur lendmisme dans lOcan Indien.
Concernant tout dabord la flore, le nombre despces vgtales est estim
2000 espces sur les trois les, selon la mission dAdjanohoun (1982). Toutefois, les
inventaires connus de la flore sont lheure actuelle largement insuffisants. Des rcents
travaux du Centre National de Documentation et de Recherche Scientifique (CNDRS),
notamment dans le cadre du projet rgional COI PLARM (Etude des caractristiques et
composants des plantes aromatiques et mdicinales) font tat dau moins 350 espces
inventories, dont 120 familles, 118 genres et 132 espces. A lheure daujourdhui, plus
de 50 plantes sont reconnues comme tant endmiques de lArchipel. Parmi les familles
les plus importantes rpertories aux Comores, on trouve notamment les familles
suivantes : Amaranthaces, Anacardiaces, Apocynaces, Araliaces, Bignociaceae,
Celastraceae, Cunoniaces, Euphorbiaces, Ebenaces, Lauraces, Moraces,
Melastomaces, Myrtaces, Myristicaces, Monimiaces, Oleaces, Rubiaces, Rutaces et
Verbenaces. Dune manire gnrale, la diversit des formations vgtales rsulte de la
multiplicit des microclimats et de la nature des sols : sols nus (coules de laves rcentes),
forts primaires pluviales, mangroves dans les plaines, vgtation anthropise (arbres
fruitiers, cocotiers), passage de la vgtation semi-xrophile ricode. Aujourdhui
cependant, en raison de lintroduction au cours des sicles de nombreuses espces
exotiques et de lexploitation incontrle des terres, les espces indignes, endmiques et
les associations vgtales sont en danger.
Concernant la faune, on peut estimer quelle est, dans lUnion des Comores,
diversifie et quilibre. Bien que pauvre en grands mammifres, tous les grands groupes
zoologiques y sont reprsents. On recense actuellement 17 espces de mammifres (avec
2 espces et 3 sous-espces endmiques), 98 espces doiseaux (35 sous-espces
endmiques et 14 espces formant un genre endmique), 24 espces de reptiles (10
endmiques). Parmi ces espces, un grand nombre dentre elles sont menaces en
particulier par le braconnage et la chasse. Il convient de citer par exemple la chauve-
10

Introduction Gnrale

souris gante appele communment Roussette de Livingstone (Pteropus livingstonii), le
petit lmurien Lemur mongoz L., le Founingo des Comores (Alectroenas sganzini) ou pigeon
bleu ou encore Treron australis, le pigeon vert. La faune marine nest pas en reste. Citons
par exemple le coelacanthe, Latimeria chalumnae, taxon relique et mal connu, dcouvert
en 1938. Son aire de distribution lchelle mondiale est rduite la seule zone constitue
par la fosse marine entre Grande Comore et Anjouan. Enfin, il y a galement le mammifre
marin Dugong (Dugong dugon, nomm localement gouva) dont lhabitat semble limit
autour de Mohli.
Les Comores sont donc riches despces vgtales et animales dimportance
mondiale, introuvables ailleurs. Cette richesse et cette spcificit de la biodiversit ont
permis aux les Comores dtre classes hotspot de la biodiversit. Daprs Mittermeier,
prsident de Conservation International, les hotspots en biodiversit sont des sites
durgence cologiques de notre plante. Historiquement, ce concept de hotspots a t
cr en 1988 par un cologiste britannique nomm Norman Myers, pour qualifier les
cosystmes gnralement situs dans les forts tropicales et qui concentrent un trs haut
pourcentage de la diversit biologique globale. En 2000, une classification a permis de
dnombrer 25 hotspots en biodiversit dans le Monde. En 2004, une rvalution des
hotspots dans le Monde, ralise avec la participation de 400 spcialistes de la
biodiversit, a conduit la reconnaissance de 34 rgions classes comme hautement riches
en diversit biologique et en mme temps, comme des zones critiques pour la prservation
de la vie. LArchipel des Comores avec Madagascar, Les Seychelles, Maurice (incluant
Rodrigues) et La Runion, constitue lune de ces 34 rgions.

Paradoxalement, lUnion des Comores est aussi lun des pays les plus pauvres au
Monde et o la biodiversit est davantage menace cause de la pauvret associe la
croissance dmographique, aux modes de production adopts depuis plusieurs dcennies et
aux pratiques agricoles dangereuses pour lenvironnement naturel. Comme bon nombre de
pays du Sud hautement dots en ressources naturelles, lArchipel des Comores est class
pays moins avanc (PMA). Daprs le Ministre de la Production et de lenvironnement
de lUnion des Comores, les Comores occupent le 141
me
rang des 174 pays classs en
fonction de leur richesse.

Le constat dune perte continuelle de la biodiversit associe une grande
pauvret, a amen lUnion des Comores mettre en place une politique de dveloppement
conciliant conservation de la biodiversit et valorisation marchande. Ainsi, lUnion des
Comores priorise parmi plusieurs alternatives, la valorisation des substances naturelles et
11

Introduction Gnrale

en particulier des huiles essentielles, pour la recherche pharmaceutique, les industries
cosmtiques et agroalimentaires. Les autorits misent beaucoup sur cette activit pour
financer la conservation de la biodiversit et pour permettre aux communauts locales
damliorer leur niveau de vie. Les substances naturelles issues des plantes mdicinales et
aromatiques de lUnion des Comores, constitue une source potentielle de plus-value
importante. Au niveau international, le commerce de substances naturelles peut avoir un
impact non ngligeable sur le dveloppement conomique. Les communauts rurales ainsi
que les petites et les moyennes entreprises peuvent jouer un grand rle et bnficier de ce
commerce.

La note conjoncturelle de la Banque Centrale des Comores (BCC) davril 2010 sur
lvolution de la situation conomique, financire et montaire des Comores au cours de
lanne 2009 montre un PIB plus de 52% sur le secteur primaire : levage, pche et
production agricole dont la vanille, lylang ylang et le girofle ; trois produits de rente qui
toutefois, subissent chaque anne une dimunition non seulement de leur production mais
aussi de leur prix. Cette chute a contribu dcourager les paysans qui dlaissent
progressivement lentretien des plantations. A cet effet, une diversification des produits
de rente simpose.

Cest dans cette optique dune diversification des produits de rente et dune
valorisation conomique des substances naturelles des les Comores quil a t envisag au
cours de cette thse, ltude chimique de quatre plantes endmiques ou indignes :

Laggera alata var. alata (D. Don) Schp. Ex Oliv (Asteraceae).
Cette plante pantropicale a t slectionne pour sa richesse en huile essentielle.

Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng (Lamiaceae).
Plante pantropicale, connue aux Comores sous le nom des nyadombwe et
parawuve , Plectranthus amboinicus a t choisie non seulement pour sa richesse en
huile essentielle mais aussi pour ses nombreuses utilisations traditionnelles aux Comores.

Ocotea comoriensis Kostermans (Lauraceae)
Endmique de lArchipel des Comores, cette plante y est connue sous les noms de
Mnaliwa , Mrihali Gandje et Mkanfure . Aux Comores, le bois dOcotea
comoriensis est particulirement apprci pour lbnisterie, la charronerie, la
12

Introduction Gnrale

construction dembarcations, les boiseries intrieures et les mortiers. Cette plante a t
slectionne pour son endmicit et pour sa richesse en huile essentielle.

Teclea boiviniana (Baillon) H. Perr (Rutaces)
Le choix de cette plante repose non seulement sur son endmicit mais aussi sur
son utilisation traditionnelle, tant sur laspect mdicinal que spirituel.

Chacune de ces quatre plantes fera lobjet dun chapitre de ce mmoire. Chaque
chapitre comprend :
une description botanique de la plante
un rcapitulatif des usages traditionnels de la plante et des espces du mme
genre ainsi quun bilan des travaux chimiques antrieurs. Cette synthse bibliographique
sur la composition chimique se limite aux composs volatils pour les genres Laggera,
Plectranthus et Ocotea et stend aux composs non volatils pour le genre Teclea.
un expos des travaux chimiques raliss sur la plante, accompagn des rsultats
des tests dactivits mens sur les huiles essentielles ou les extraits non volatils (
lexception de lespce Laggera alata var. alata qui na t soumise aucun test
dactivit).

CHAPITRE I

Laggera alata var. alata (D. Don) Sch. Bip. Ex Oliv.
(Asteraceae)

Laboratoireimpliqu:
LaboratoiredesSubstancesNaturellesetdesArmes(Labosubnarme)delInstitutAgronomique
etVtrinaire(IAV)HassanII,Rabat,Maroc. (Extraction et analyse des composs volatils)

Publication:
SAID HASSANI M., SAID ABDALLAH B., ZRIRA S., BENJILALI B., Chemical composition of the essential
oil of Laggera alata var. alata (D. Don) Sch. Bip. Ex Oliv. (Asteraceae) from Comoros Islands, Part I,
JournalofEssentialOilBearingPlants,2005,8(1),1518.
14

Chapitre I - Laggera alata var. alata (D. Don) Sch. Bip. Ex Oliv. (Asteraceae)
I.1 Description botanique

Famille : Asteraceae
Synonymes : Blumea alata (D. Don) DC
Conyza alata (D. Don) Roxb
Erigeron alatum D. Don
Description botanique [1] :
Plante herbace (de 0,3 2,5 m) tige annuelle, un peu lignifie la base.
Feuilles oblongues ordinairement dcurrentes en ailes. Capitules pdonculs,
ordinairement penchs, disposs en grappe rameuse feuille plus ou moins ample.
Involucre bractes involucrales externes couvertes de trs petits poils glanduleux dense
ou lches, parfois presque glabres. Fleurs lilas ou purpurines. Fleurs externes mles
multisries fertiles, fleurs du disque femelles nombreuses, fertiles. Rceptales plan, nu.
Corolles des fleurs mles filiformes, finement dentes au sommet, plus courtes que le
style ; corolles de fleurs femelles rgulires, tubuleuses, peu largies vers le haut, 5
dents. Elles sont jauntres ou roses. Anthres trs brivement bilobes la base ou
sagittes, auricules obtuses ou subaigues non caudicules, non connes avec celles des
anthres voisines. Style des fleurs femelles branches linaires subules, papilleuses.
Ailes, galant ou dpassant lentre nud infrieur, entires.

Clich 1 : Laggera alata var alata
[M. SAID HASSANI]
15

I.2 Travaux antrieurs

Les diffrents types de recherche bibliographique informatise ou non quil est
possible deffectuer ne font rfrence aucune publication sur Laggera alata var. alata de
larchipel des Comores. Il apparat donc ncessaire dlargir nos recherches pour cette mme
espce originaire des autres pays, ainsi quaux autres espces du genre Laggera. Deux types
dinformations ont t rassembls : (1) les usages traditionnels des espces du genre Laggera
en Afrique, en Chine et Madagascar : (2) la composition chimique et lactivit biologique
des huiles essentielles extraites des espces du genre Laggera.

I.2.1. Utilisations des espces du genre Laggera en mdecine traditionnelle

Le tableau I illustre quelques utilisations traditionnelles des espces du genre Laggera
en mdecine traditionnelle.

I.2.2. Les huiles essentielles des espces du genre Laggera

Les compositions chimiques des huiles essentielles extraites de feuilles, racines et
tiges de huit espces du genre Laggera sont rassembles dans le tableau II. Seuls les composs
volatils majoritaires isols de ces huit espces y figurent.

Les activits biologiques releves pour les huiles essentielles de six espces du genre
Laggera sont regroupes dans le Tableau III.

1
6

Tableau I
Utilisations d'espces du genre Laggera en mdecine traditionnelle

Espce Origine
Partie de la
plante utilise
Mode de
prparation
Voie Actions thrapeutiques Rfrences
L. alata Rwanda Feuilles Dcoction Orale Trypanosomiase

[2-5]
Inde Plante entire Anti venin
Gabon Feuilles Fumigation Narcotique
Plante entire Douleurs intercostales, douleurs rhumatismales et fivres
Madagascar Plante entire Paludisme
L. brevipes Afrique de lEst Racines Dcoction Orale Aprs Accouchement [6]
Rwanda Tiges Externe Herpes
[7,8]
Tanganyika Plante entire Dcoction Orale Dsordre sexuel
L. pterodonta Chine Plante entire Dcoction Orale Anticancreux

[9-11]
Malaria
Anti-inflammatoire
Grippe
Bronchites
Externe Antibactrien
Dmangeaison
L. sp Nigria Huile essentielle Antimicrobien, Analgsique [12]

1
7
Tableau II
Composs volatils majoritaires (% > 2) isols d'espces du genre Laggera
Composs

L. aurita

[13,14]

L. alata

[15,16]

L. alata var.
alata [17]
L. alata
var.
montana
[18]

L. gracilis

[18]

L. oloptera

[18,19]

L. pterodonta

[20,21]

L. tomentosa

[22]

Burkina
Faso
Inde

Nigria

Madagascar

Cameroun

Cameroun

Burkina
Faso
Cameroun

Bnin Cameroun

Ethiopie
Alcanes

n-heptacosane

- + (f) - - - - - - - - -
n-dotriacontane - + (f) - - - - - - - - -
Monterpnes hydrogns
-pinne

- - - - - - 72,1 (f) - - - -

limonne

- - - - - - 14,8 (f) - - - -
sabinne - - 16,0 (f) - - - - 2 28 (f) - - -
Monterpnes oxygns
m-menth-6-n-8-ol

- + (f) - - - - - - - - -
6-hydroxycarvotanactone-7-O-anglate

- - 2,0 (f) - - - - - - - -
chrysanthnone - - - - - - - - - - 58 (f)
Sesquiterpnes hydrogns
-caryophyllne

9,6 (f) - 10,1 (f) - - 7,0 (f) - 15 20 (f) - - -
-humulne

6,4 (f) - 14,2 (f) - - - - - - - -
-slinne

- - - + (f) - - - - -
germacrne D - - - - - - - 10 17 (f) - - -
Sesquiterpnes oxygns
-cadinol

- + - - - - - - - - -

laggrol

- + (f) - - - - - - - - -

camphre

- - - - 7,0 (f) - - - 7,5 (f) 4 12 (f) -
-eudesmol

- - 12,6 (f) - - - - - - - -
7-pi--eudesmol

- - - + (f) 21,0 (f) - - - - - -
7-pi--eudesmol

- - - + (f) - - - - - - -
7-pi--eudesmol

- - - + (f) - - - - - - -
-eudesmol

- - - - - - - - - 4 15 (f) -
-eudesmol

- - - - - 10,0 (f) - 20 (t) - 17 45 (f) -
10-pi--eudesmol - - - - - - - - 24,6 (f) - -
Composs aromatiques

2,3-dimthoxy-p-cymne

- + (f) - - - - - - - - -

2,5-dimthoxy-p-cymne

27,7 (f) - 11,744,0 (f) - 34,0 (f) 33,0 (f) - 67 (r), 36(t) 30,5 (f) 4 50 (f) -
f : feuilles, r : racines, t : tige, + : prsence dtecte

1
8
Tableau III
Activits biologiques despces du genre Laggera

Activits biologiques Souches/Lignes
Laggera
alata
[2]

aurita
[23]

brevipes
[7]

decurrens
[24]

flava
[13]

pterodonta
[8,25]
Rwanda Inde Rwanda Namibie Inde Inde Soudan
Antibactrienne Bacillus anthracis

+ (f, v)

+ (f, v)

Bacillus subtilus

+ (f, v)

+ (f, v)

Corynebacterium pyogenes

+ (f, v)

+ (f, v)

Klebsiella species

+ (f, v)

+ (f, v)

Proteus vulgaris

+ (f, v)

+ (f, v)

Pseudomonas aeruginosa

+ (f, v)

+ (f, v)

Salmonella newport

+ (f, v)

+ (f, v)

Staphyllococus aureus

+ (f, v)

+ (f, v)

Antitrichomonale Trichmonas vaginalis + (f, n.v.)

Antivirale Virus coxsackie

+ (t, n.v.)

Virus poliovirus

+ (t, n.v.)

Virus herpes

+ (t, n.v.)

Virus semlick forest

+ (t, n.v.)

Virus measles

+ (t, n.v.)

virus vaccinia

+ (pe,n.v.)
Cytotoxicit CA-9KB

+ (pe,n.v.)
Phytotoxique

+ (f,n.v.)

f : feuille, pe : plante entire, t : tige, v : extrait volatil; n.v. : extrait non volatil
+ : activit biologique dtecte

19

I.3 Etude de Laggera alata var. alata de lArchipel des Comores

Les parties ariennes de Laggera alata var. alata ont t rcoltes au mois de
septembre 2004, dans le village de Mwandzaza Djumbe ( 13 Km au Sud de Moroni Grande
Comore). Les travaux mens sur cette plante ont t exclusivement consacrs ltude de
la composition chimique de son huile essentielle.

I.3.1. Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles

I.3.1.1 Principe de ltude

Lhuile essentielle, obtenue par hydrodistillation des feuilles sches avec un
rendement de 0,10% (1 mL HE / 100 g de matire sche) a t analyse par
chromatographie gazeuse couple un dtecteur ionisation de flamme (CG-DIF) et par
chromatographie gazeuse couple un spectromtre de masse (CG-SM). Ces deux
techniques permettant respectivement une approche quantitative et qualitative du
mlange de composs volatils.

I.3.1.2 Rsultats

Les analyses ont conduit lidentification de 85,0% de la composition totale de
lhuile essentielle de Laggera alata var. alata (D. Don) Sch. Bip. Ex Oliv. (Asteraceae).
Les 37 composs identifis sont rassembls par famille dans le tableau IV. Ce
tableau comprend en outre les indices de rtention relatifs calculs pour chacun des
constituants sur colonne apolaire (SE54).

20

Tableau IV
Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles de Laggera alata var. alata

Composs
IRR Composition

SE 54

(%)
Monoterpnes hydrocarbons
-pinne

932 0,5
camphne

946 tr
sabinne

971 0,1
-pinne

974 0,2
-myrcne

989 0,1
-phellandrne

1002 tr
-terpinne

1014 tr
limonne

1027 0,2
cisocimne

1036 tr
transocimne

1047 0,5
-terpinne

1057 tr
terpinolne

1086 tr
Total

1,6
Monoterpnes oxygns

1,8cinole

1029 tr

linalol

1099 0,2

camphre

1142 tr

terpinn-4ol

1176 0,1

propionate de linalyle

1190 0,1

carvnone

1261 tr
Total

0,4
Sesquiterpnes hydrocarbons

-lmne

1338 0,9
-cubbne

1350 1,5
-ylangne

1372 0,1
-copane

1377 2,3
-bourbonne

1386 0,5
-cubbne

1391 0,7
-cdrne

1414 tr
-caryophyllne

1426 30,5
-caryophyllne

1459 16,2
-muurolne

1487 21,2
-gurjunne

1497 tr
-cadinne

1516 tr

trans-calamnne

1526 1,8
-lmne

1560 0,3
Total

76,0

oxyde de caryophyllne

1588 2,8

Cdrol

1607 0,8
Total 3,6
Composs aromatiques

pcymne

1022 tr

thymolmthylther

1242 tr

Carvacrol

1305 3,4
Total 3,4
% Total d'identification

85,6
n.i. : non identifi, tr : trace (%<0,1%)

21

La composition chimique de lhuile essentielle de Laggera alata var. alata de
larchipel des Comores est domine principalement par des sesquiterpnes hydrocarbons
(76,0%).
Parmi ces sesquiterpnes, les composs suivants se trouvent en proportion
importante : le -caryophyllne (30,5%), l-muurolne (21,2%) et l-caryophyllne
(16,2%). Dautres sesquiterpnes hydrocarbons ont t dtects en faibles proportions. Il
sagit de l-copane 2,3%, du trans-calamnne 1,8%, de l-cubbne 1,5%, du -
lmne 0,9%, du -cubbne 0,7%, du -bourbonne 0,5% et du -lmne 0,3%.
Les sesquiterpnes oxygns quant eux sont au nombre de 2 : loxyde de
caryophyllne et le cdrol, dtects hauteur de 2,8% et 0,8%, respectivement.

Les monoterpnes bien quun peu plus nombreux que les sesquiterpnes ne
reprsentent en fait que 2,0% de la composition totale dont 1,6% de monoterpnes
hydrogns et 0,4% de monoterpnes oxygns. Nous pouvons citer l-pinne (0,5%), le
transocimne (0,5%), le limonne (0,2%), le -pinne (0,2%), le linalol (0,2%), le sabinne
(0,1%), le -myrcne (0,1%), le propionate de linalyle (0,1%) et le terpinn-4ol (0,1%).
Lhuile essentielle des feuilles de Laggera alata var. alata comprend galement des
composs aromatiques qui sont au nombre de 3 : le carvacrol avec une proportion, dont le
pourcentage slve hauteur de 3,4%, le pcymne et le 2-isopropyl-1-mthoxy-4-
mthylbenzne tous deux dtects ltat de trace.

I.3.1.3. Discussion

Lhuile essentielle des feuilles de Laggera alata var. alata est riche en composs
terpniques (20 monoterpnes et 16 sesquiterpnes). Cependant ce sont les sesquiterpnes
hydrogns qui constituent la classe dominante de cette huile en raison de leur
pourcentage lev, valu hauteur de 76,0% de la totalit de constituants. Parmi ces
sesquiterpnes hydrocarbons, le -caryophyllne (30,5%), l-muurolne (21,2%) et l-
caryophyllne (16,2%) reprsentent eux seuls 67,9%.

Ltude bibliographique rsume dans le tableau II p.17, sur la composition
chimique des huiles essentielles de huit espces du genre Laggera de diffrentes origines,
nous permet de rpartir ces huit espces en quatre groupes selon la classe des composs
volatils dominants comme indiqu dans le tableau V ci-dessous.

22

Tableau V
Classement par composition chimique significative des espces du genre Laggera

Groupe
Composs volatils
dominants

Espces

Origine

Rfrences
1

dimthoxy-p-cymne
et sesquiterpnes

L. aurita

Burkina Faso, Inde

[13,14]

L. alata

Nigria

[15,16]

L. alata var montana

Cameroun

[18]

L. gracilis

Cameroun

[18]

L. oloptera (t,r)

Cameroun

[18]

L. pterodonta

Bnin, Cameroun

[20,21]
2
Monoterpnes et
Sesquiterpenes

L. oloptera (f)

Cameroun

[18]
3

Monoterpnes

L. oloptera

Burkina Faso

[19]

L. tomentosa

Ethiopie

[22]
4

Sesquiterpnes

L. alata var. alata

Madagascar

[17]
f : feuilles, t : tiges, r : racines

Lespce Laggera alata var. alata de lArchipel des Comores renferme dans ses
feuilles une huile essentielle riche en sesquiterpnes ; elle peut par consquent tre
classe dans le groupe 4 et rejoint ainsi lespce Laggera alata var. alata de Madagascar.
Soulignons cependant que bien quil sagisse de la mme espce et de la mme varit,
toutes deux ne sont pas identiques. En effet, lhuile essentielle du spcimen se
dveloppant aux Comores renferme majoritairement du -caryophyllne, de l-muurolne
et de l-caryophyllne alors que celle extraite du spcimen se dveloppant Madagascar
comprend principalement du -slinne, du 7-pi--eudesmol, du 7-pi--eudesmol et du
7-pi--eudesmol. Peut-on ds lors dire que nous avons mis en vidence deux chemotypes
pour lespce Laggera alata var. alata, lun se trouvant Madagascar, lautre aux
Comores ? Le terroir est-il responsable de cette variation de la composition chimique de
lhuile essentielle ? Ny a-t-il pas eu une erreur didentification des spcimens tudis ?
Autant dinterrogations auxquelles il faudra rpondre par une multiplication des analyses
des huiles essentielles de cette espce collecte dans diffrentes zones gographiques.

I.3.2. Conclusion et perspectives

A lissue de ce travail consacr ltude chimique de lhuile essentielle des feuilles
de cette espce, il semble que cette huile, prsente une spcificit de terroir vis--vis de
celles extraites de la mme varit se dveloppant Madagascar [17] et des autres
espces du genre Laggera.
23

Cette amorce dtude chimiotaxonomique devra lavenir tre renforce par
lanalyse de lhuile essentielle de Laggera alata var. alata collect sur diffrentes zones
gographiques afin de confirmer que lespce se dveloppant au Comores prsente bien
une spcificit.

Pour une valorisation conomique, ces travaux devraient par ailleurs tre
complts par une valuation de lactivit biologique de cette huile essentielle.

CHAPITRE II

Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng
(Lamiaceae)

Laboratoiresimpliqus:
LaboratoiredesSubstancesNaturellesetdesArmes(Labosubnarme)delInstitutAgronomique
etVtrinaire(IAV)HassanII,RabatMaroc. (Extraction et analyse des composs volatils)
Laboratoire de Microbiologie de lInstitut Agronomique et Vtrinaire (IAV) Hassan II, Rabat

Maroc. (Tests anti-bactriens)

Publication:
SAID HASSANI M., MEHDI S., ZAINATI I., ZRIRA S., OUKESSOU M., Chemical composition and
antimicrobial activity Plectranthus amboinicus (Lour) Spring. (Lamiaceae) leaves dried essential oil
fromArchipelagoofComoros.(Encoursderedaction)
25

Chapitre II Plectranthus amboinicus (Lour) Spring. (Lamiaceae)
II.1 Description botanique

Famille : Lamiaceae (anciennement Labiateae)
Synonymes : Plectranthus aromaticus Benth
Coleus amboinicus Lour.
Coleus aromaticus Benth.
Herbe prenne, fortement aromatique.
Tiges plusieurs, dcombantes, rostres, atteignant 1 m de long ou plus, senracinant
souvent aux nuds, poils courts ou longs, non glanduleux ; axes de linflorescence
visqueux (poils glanduleux). Feuilles charnues, paisses, ptioles, largement oves,
atteignant 5 x 5 cm, pubescentes (poils denses) laineuses tomenteuses, serres
crneles au sommet, largement en coin tronques la base ; ptiole velu, long de 1
2 cm. Inflorescence spiciforme, peu ou non ramifie ; faux verticilles 10 15, trs
courtement pdonculs, 10 20 fleurs, velus hirsutes, espacs la floraison et la
fructification. Bractes oves, atteignant 5 x 3 mm, persistantes. Pdicelle dress,
de longueur variable, atteignant 5 mm de long. Calice ca. 2,5 mm de long, velu,
atteignant 5 mm sur le fruit ; lvre suprieure dresse, ove, apicule, nettement plus
large et plus longue que les 4 subgales dents infrieures. Corolle blanche mauve,
velue, longue de 7 10 mm ; tube long de 4 5 mm, lgrement gnicul ; lvre
suprieure dresse, 1,5 2 mm de long ; lvre infrieure troitement navicule, longue
de 4 5 mm, tale. Filets des tamines 4, dont 2 plus courtes, souds la base ; paire
dtamines les plus grandes lgrement plus longues que la lvre infrieure ; thques
uniloculaires, rtrcies au milieu. Style longuement bifides, lobes gaux, atteignant
ca. 0,8 mm de long. Nucules largement oblongues, luisantes, finement ponctues, ca.
0,8 x 0,6 mm.

Clich 2 : Plectranthus amboinicus
[H. ABDEREMANE]

Clich 3 : Feuilles sches de Plectranthus amboinicus
au march de Volo volo
[H. ABDEREMANE]

26

II.2 Travaux antrieurs

Les recherches bibliographiques menes sur lespce Plectranthus amboinicus et sur
le genre Plectranthus en gnral nous ont conduits deux types dinformations : (1) les
usages traditionnelles des espces du genre Plectranthus en Afrique, Madagascar et aux
Comores ; (2) la composition chimique et lactivit biologique des huiles essentielles
extraites des espces du genre Plectranthus.

II.2.1. Utilisations des espces du genre Plectranthus en mdecine traditionnelle

Il a t relev dans la littrature un bon nombre dusages en mdecine
traditionnelle non seulement pour lespce Plectranthus amboinicus mais aussi pour neuf
autres espces du mme genre [27].

Aux Comores, Plectranthus amboinicus est connu sous les noms vernaculaires :
Nyadombwe ou Parawuve . La pharmacope locale utilise ses racines pour lutter
contre la malaria [28] et ses feuilles pour leur activit antitussive [29]. Le dcoct de la
plante entire peut avoir quant lui un triple usage : sdatif des coliques abdominales,
mdication de la dysurie et laxatif [30].
En Afrique, la plante est galement utilise par la pharmacope traditionnelle pour
lutter contre les fivres et infections [31], les problmes urinaires ou gnitaux [32] et pour
son action anti-inflammatoire [33].

Les usages traditionnels relevs pour les autres espces du genre Plectranthus ont t
rassembls dans le tableau VI.

Tableau VI
Utilisations despces du genre Plectranthus en mdecine traditionnelle

Espces Origine
Actions thrapeutiques
Fivre/Infections Urinaire/Gnitale Inflammation
P. barbatus Afrique (Est, Centre et Nord) [34] [35] [36]
P. coeruleus Afrique de l'Est [32] - -
P. lactiflorus Tanzanie [32] - -
P. lanceolatus Madagascar [32] - -
P. laxiflorus Afrique (Est, Centre-Ouest et Sud) [32,34] [32,34] [32,34]
P. melleri Madagascar [37] - -
P. montanus Afrique de l'Est [34] - -
P. prostratus Uganda - [38] -
P. tetensis Afrique de l'Est [32,34] - -
27

II.2.2. Les huiles essentielles des espces du genre Plectranthus

Une revue exhaustive a t ralise en 2002 sur la composition chimique des
espces du genre Plectranthus [39]. Cette revue reprend lensemble des composs volatils
contenus dans les huiles essentielles, des diterpnes (environ 140 composs), des
alkylphnols longues chanes, des flavonodes et des acides gras isols des espces de ce
genre.
Concernant plus prcisment la classe des composs volatils, seuls ceux contenus
dans lhuile essentielle de spcimens de P. amboinicus se dveloppant dans lOcan Indien,
ont retenu notre attention. Ces rsultats sont reports dans le tableau VII.

Tableau VII
Composition chimique des huiles essentielles des espces Plectranthus amboinicus de lOcan Indien

Composs
P. amboinicus
Runion [40] Maurice [41] Inde [42] Inde [43]
Alcools aliphatiques

1-octn-3-ol - 1,1 - -
Monoterpnes hydrogns

-phellandrne
-
0,2
- -
-3-carne 16,3
1,0
- -
terpinne -
0,4
- -
limonne -
0,7
- -
-terpinne 11,9 1,0 - -
Monoterpnes oxygns

linalol
-
1,2
- -
camphre
12,3
39,0
- -
1,8-cinole
-
-
0,8 -
terpinn-4-ol
-
2,4
0,2 -
graniol - 0,2 - -

copane -
0,4
- -
-caryophyllne
-
1,7
- 13,1
humulne -
0,5
- -
muurolne -
0,5
- -
slinne -
1,4
- -
slinne -
0,1
- -
cadinne -
0,6
- -
cisbergamotne -
1,5
- -
patchoulane - - - 8,7

spathulnol
-
-
0,2 -
-cadinol
-
-
0,3 -
-cadinol
-
-
0,3 -
(Z,E)farnsol - - 0,5 -
Composs aromatiques

carvacrol
13,4
41,3
1,2 50,7
thymol
-
0,2
94,3 -
p-cymne
-
0,7
0,3 -

Par ailleurs, seule lhuile essentielle de P. amboinicus originaire de lInde [42] a t
teste pour ses activits biologiques. Il a t ainsi rvl pour cette huile essentielle, une
forte activit insecticide contre les termites.
28

II.3 Etude de Plectranthus amboinicus de lArchipel des Comores

Les travaux mens sur Plectranthus amboinicus ont t consacrs dune part,
ltude de la composition chimique de son huile essentielle et dautre part, lvaluation
de lactivit anti-bactrienne de cette huile essentielle.

II.3.1. Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles

II.3.1.1 Principe de ltude

Extraite par hydrodistillation des feuilles sches achetes au march de Volo volo,
de Moroni, lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus a t obtenue avec un
rendement de 1,25% (1,25 mL HE / 100 g de matire sche) et analyse quantitativement
et qualitativement respectivement par chromatographie gazeuse couple un dtecteur
ionisation de flamme (CG-DIF) et par chromatographie gazeuse couple un spectromtre
de masse (CG-SM).

II.3.1.2 Rsultats

Les analyses ont conduit lidentification de 98,3% de la composition totale de
lhuile essentielle de feuilles de Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng (Lamiaceae).
Les 27 composs identifis sont rassembls par famille dans le tableau VIII. Ce
tableau comprend en outre les indices de rtention relatifs calculs pour chacun des
constituants sur colonne apolaire DB-5.
29

Tableau VIII
Composition chimique de lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus des Comores

Composs
IRR
%
DB-5

-thujne 940
0,6
-pinne 948
0,8
camphne 965
1,1
sabinne 971
tr
-pinne 1005
1,0
-phellandrne 1018
0,7

-3-carne
1023
15,0
-terpinne 1028
4,7
cis-ocimne 1038
1,6
-terpinne 1065
8,4
-terpinolne 1092
1,3
Total 35,3
Monoterpnes oxygns

linalol 1102
0,6

camphre
1140
22,2
bornol 1160
tr
terpinn-4-ol 1170
0,6
-terpinol 1182
tr
Total 23,3

-cubbne
tr
-copane 1359
0,4
-caryophyllne 1399
2,3
Z--trans-bergamotne 1415
1,2
-caryophyllne 1434
0,7
-slinne 1467
1,9
n.i. 1475
0,5
n.i. 1495
0,3
n.i. 1502
0,5
Total 7,8

oxyde de caryophyllne 1532 1,1
n.i. 1765 0,4
total 1,5
Composs aromatiques

o-cymne 1034
7,7
thymolmthylether 1235
0,8
thymol 1297
0,6

carvacrol
1299
23,0
Total 32,1
% total d'identification
98,3
n.i. : non identifi, tr : trace

30

La composition chimique de lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus (Lour.)
Spreng (Lamiaceae) est domine principalement par des monoterpnes 58,6% et des
composs aromatiques 32,1%. Avec 9,3%, les sesquiterpnes quant eux ne constituent
quune faible proportion de lhuile essentielle.

Concernant la classe des monoterpnes, les composs hydrocarbons y sont
majoritaires : 35,3% de drivs hydrocarbons contre 22,3% de drivs oxygns.
Parmi les drivs hydrocarbons, on relvera en particulier la prsence majoritaire
du -3-carne (15,0%), du -terpinne (8,4%) et de l-terpinne (4,8%).
Parmi les drivs oxygns, le camphre dtect hauteur de 22,2% est lunique
compos majoritaire de ce groupe.

Les composs aromatiques sont principalement reprsents par le carvacrol (23,0%)
et lo-cymne (7,7%). Le thymolmthylther et le thymol sont des teneurs faibles, 0,8%
et 0,6%, respectivement.
Concernant la classe des sesquiterpnes, les composs hydrocarbons y sont
majoritaires : 7,8% de drivs hydrocarbons contre 1,5% de drivs oxygns.
Parmi les sesquiterpnes hydrocarbons, les composs dtects teneur non
ngligeable sont : le -caryophyllne (2,3%), le -slinne (1,9%) et le (Z)--trans-
bergamotne (1,2%).
Parmi les sesquiterpnes oxygns, seul loxyde de caryophyllne a t lucid
avec un faible pourcentage de 1,1%.

II.3.1.3. Discussion

Lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus des Comores renferment 5 composs
majoritaires reprsentant eux seuls 81,0% de la totalit de la composition, savoir : le
carvacrol (23,0%), le camphre (22,2%), le -3-carne (15,0%), le -terpinne (8,4%), lo-
cymne (7,7%) et l-terpinne (4,7%).

Dans la littrature, sont donnes les compositions chimiques des huiles essentielles
de cette mme espce se dveloppant la Runion [40], Maurice [41] et en Inde [42,43]
(Tableau VII p.27). En Inde, ltude a t ralise par deux quipes distinctes. La premire
[42] montre que lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus est compose 94,2% de
thymol ; la seconde [43] a tudi un spcimen dont lhuile essentielle tait caractrise
par une forte teneur en carvacrol (50,7%), en -caryophyllne (13,1%) et en patchoulane
31

(8,7%). A la Runion [40], Plectranthus amboinicus renferme une huile essentielle dont les
composs majoritaires sont le -3-carne (16,3%), le carvacrol (13,4%), le camphre (12,3%)
et le -terpinne (11,9%). Plectranthus amboinicus de lle Maurice se caractrise quant
lui, par une huile essentielle particulirement riche en carvacrol (41,3%) et en camphre
(39,0%).
Au vu de ces rsultats, il apparat que Plectranthus amboinicus des Comores
prsentant galement une forte teneur en carvacrol (23,0%) et en camphre (22,2%) se
rapproche trs nettement du chemotype se dveloppant lle Maurice et la Runion.

II.3.2. Activit biologique de lhuile essentielle des feuilles

II.3.2.1 Principe de ltude

Lactivit anti-bactrienne de lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus a t
teste sur deux souches : lune Gram ngatif (-) (Escherichia coli) et lautre Gram positif
(+) (Staphylococcus aureus).

II.3.2.2 Rsultats

Les premiers essais raliss partir de solutions dhuile essentielle dont les
dilutions taient de 1/2, 1/4 et 1/8, ont montr une inhibition totale des deux souches
bactriennes. En consquence, une diminution des concentrations a t envisage et des
essais complmentaires ont t effectus. Le tableau IX, ci-dessous, prsente les valeurs
moyennes du diamtre daction inhibitrice sur les souches testes en fonction des
concentrations de lhuile essentielle.

Tableau IX
Valeurs moyennes du diamtre d'action inhibitrice en fonction
des concentrations de lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus

Dilution
Diamtre* daction inhibitrice (moyenne)

Escherichia coli

Staphylococcus aureus
1/16

13

22
1/32

12

17
1/64

11

15
1/128

10

14
1/256

10

13
1/512

10

12
* unit : le millimtre

32

Les courbes 1 et 2 (Figures 1 et 2) illustrent galement cette inhibition de E. coli et
S. aureus, par lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus, en fonction de la dilution de
cette dernire. Les courbes obtenues prsentent une modlisation polynomiale dordre 2,
dont les quations mathmatiques et les coefficients de dtermination (CD) sont donns. Il
est relever que les CD sont trs levs traduisant ainsi une bonne corrlation entre le
taux de dilution et le niveau dinhibition.

Figure 1
Courbe dinhibition dEscherichia coli en fonction de la dilution de lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus

Figure 2
Courbe dinhibition de Staphylococcus aureus en fonction de la dilution de lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus

33

La Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) de lhuile essentielle de Plectranthus
amboinicus i.e. la plus faible concentration de lhuile capable dinhiber totalement la
croissance bactrienne, a ensuite t value 0,2% et 0,1% sur Escherichia coli et
Staphylococcus aureus, respectivement.

II.3.2.3 Discussion

Il est bien souvent difficile dattribuer lactivit biologique dune huile essentielle
la prsence dun compos unique car cette activit est le plus souvent le rsultat dune
synergie entre diffrents composs. Toutefois, lactivit antibactrienne mise en vidence
pour lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus des Comores peut probablement tre
attribue en grande partie la prsence du carvacrol (23,0%), du camphre (22,2%) et du
thymol (0,6%) reconnus pour leur activit antibactrienne importante tant sur Gram (+)
que sur Gram (-) [44]. En outre, il est galement intressant de relever la prsence non
ngligeable du -3-carne (15,0%), de l-terpinne (4,7%) et du -terpinne (8,4%), tous
trois reconnus non seulement pour leur action inhibitrice sur diffrentes souches
bactriennes tels que Beneckea natrigens, Klebsiella pneumonia et Salmonelle pullorum
[45,46] mais aussi comme agents anti-oxydants [47-50]. Cette activit anti-oxydante serait
par ailleurs grandement renforce par le carvacrol et le thymol [48].
Ainsi, la combinaison des actions anti-bactrienne et anti-oxydante permettrait
lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus des Comores dtre valorise comme agent
de conservation naturel aussi bien dans le domaine de lalimentaire que dans celui des
cosmtiques.
Soulignons par ailleurs, que les activits biologiques de lhuile essentielle de
Plectranthus amboinicus mises en vidence (activit anti-bactrienne) ou souponnes
(activits anti-oxydante) viennent complter la liste dj consquente des proprits
biologiques releves pour cette plante : effet modulateur sur lthylneglycol provoquant
des calculs rnaux chez le rat ; activit antifongique sur les souches Candida albicans, C.
guilliermondii, C. krusei, C. stellatoidea, C. tropicalis ; agent potentiel contre les
rhumatismes inflammatoires [49-52].

II.3.3. Conclusion et perspectives

Dans la perspective dune dmarche de diversification des plantes valeur ajoute
des Comores (Ylang ylang, Girofle, etc.), Plectranthus amboinicus, plante aromatique des
Comores, a t choisie comme candidat potentiel. Les premiers rsultats de nos travaux
34

effectus sur lhuile essentielle extraite des feuilles de cette plante ont confort ce choix.
En effet, lhuile essentielle riche en carvacrol, camphre, -3-carne, -terpinne et o-
cymne, prsente un rel potentiel de valorisation en tant quagent de conservation
naturel aussi bien dans lindustrie alimentaire que dans lindustrie des cosmtiques. Ce
rle dagent de conservation naturel, elle le doit son activit antibactrienne dmontre
sur les souches Gram (-) Escherichia coli et Gram (+) Staphylococcus aureus et son
activit anti-oxydante souponne en raison de sa composition chimique ; les
monoterpnes tels que l-terpinne, le -terpinne, le carvacrol ou encore le thymol sont
en effet reconnus pour leur activit anti-oxydante. Face la ncessit de rduire les
agents de conservation chimiques ou synthtiques, le recours aux produits naturels tels
que les huiles essentielles semble de plus en plus apprci. Lhuile essentielle de
Plectranthus amboinicus a donc toutes ses chances en rpondant cette demande du
march actuel.

Nos premiers rsultats forts prometteurs ne sont que les prmices dune tude qui
reste approfondir. Afin daboutir rellement au dveloppement et la valorisation
conomique de Plectranthus amboinicus, les futurs travaux de recherche devront
comprendre :

- une multiplication des extractions aussi bien des huiles essentielles que des extraits
bruts obtenus par macration de la plante sche, froid, dans des solvants
organiques.
- une multiplication des valuations des activits biologiques de ces extraits :
cytotoxicit, activits anti-bactrienne, anti-fongique, anti-oxydante,
- un fractionnement bioguid des huiles essentielles et des extraits bruts afin
didentifier le (ou les) constituant(s) responsable(s) des activits observes.
- un suivi de la plante durant une anne entire afin dvaluer leffet ventuel du
cycle vgtatif sur le rendement en extrait et sur la composition chimique de ce
dernier.

CHAPITRE III

Ocotea comoriensis Kostermans
(Lauraceae)

DpartementdeChimiedelaFacultdesSciencesdelUniversitdeMaurice,Rduit,Maurice.
(Extraction des huiles essentielles)
Laboratoire de lInstitut des Biomolcules Max Mosseron de lEcole Nationale Suprieure de Chimie de
Montpellier(ENSCM),France. (Analyse des composs volatils)

LaboratoiredeChimiedesSubstancesNaturellesetdesSciencesdesAliments(LCSNSA)delUniversitdela
Runion,France. (Analyse des composs volatils)
InstituteofPharmaceuticalChemistry,UniversitdeVienne,Autriche. (Tests anti-oxydants)
Institut de Pharmacognosie et Phytochimie (IPP) de lEcole de Pharmacie de lUniversit de Lausanne,

Suisse. (Tests larvicides)
Laboratoire de Chimie et Biochimie des Substances Naturelles, Musum National dHistoire Naturelle
(MNHN),USM0502,CNRS,UMR5154,Paris,France. (Tests antipaludiques)

Publication:
MENUTC.,BESSIEREJ.M.,SAIDHASSANIM.,BUCHBAUERG.,SCHOPPERB.,ChemicalandBiologicalstudiesof
Ocoteacomoriensisbarkessentialoil,FlavourFragr.J.,2002,17,459461.
36

Chapitre III Ocotea comoriensis Kostermans (Lauraceae)
III.1 Description botanique

Famille : Lauraceae
Synonymes : /
Arbre, gnralement de 20 m de haut, ramilles subanguleuses, glabres ou montrant
vers le sommet, sous la loupe, de trs petits poils pars, bourgeons densment
poilus, soyeux, rameaux gristres, un peu verruqueux. Feuilles ovales - elliptiques,
de 6 19 cm sur 2 8 cm, distinctement triplinerves, les cts basilaires creuss
linsertion, rseau dense et un peu saillant. Inflorescences terminales et axillaires
en panicule. Fleurs (et panicules) densment tomentelleuses, blanches, de 1 1,5
mm de long et jusqu 6 mm de diamtre. 6 petits ptales jaunes alternent avec 6
spales blancs plus grands; extrmit du stigmate noire. Ovaire glabre ou faiblement
poilu, ellipsodal, long de 1 mm environ, attnu en style cylindrique-conique assez
pais, atteignant 1,5 mm de long stigmate discode. Fruit au bout d'un pdoncule
long de 6 11 cm, charnu (drupe), ovale, forme variable (quelquefois, apparence
d'un gland), rugueux.

Clich 4 : Feuilles et fruits dOcotea comoriensis
[M. SAID HASSANI]

Clich 5 : Ecorces dOcotea Comoriensis
[M. SAID HASSANI]
37

III.2 Travaux antrieurs

Hormis un rapport [54] faisant mention de lutilisation de son bois pour la
construction de maison et la fabrication des meubles, aucune donne bibliographique na
t trouve sur lOcotea comoriensis. Il nous a donc sembl judicieux dlargir nos
recherches aux autres espces du genre Ocotea.
Deux types dinformations ont t retenus : (1) les usages traditionnels des espces
du genre Ocotea en Afrique ; (2) la composition chimique et lactivit biologique des huiles
essentielles extraites de plusieurs espces du genre Ocotea.

III.2.1. Utilisations des espces du genre Ocotea en mdecine traditionnelle

Lespce Ocotea comoriensis Kostermans (Lauraceae) ne semble navoir aucune
application en mdecine traditionnelle. En revanche, trois autres espces du mme genre :
O. bullata, O. kenyensis et O. usambarensis sont utilises par la pharmacope locale
africaine (Tableau X).

Tableau X
Utilisations despces du genre Ocotea en mdecine traditionnelle

Espce Origine Partie de la plante utilise Prparations Actions thrapeutiques Rfrences
O. bullata Afrique du Sud Ecorces
Poudre sniffe ou
fume en cigarette

Complication urinaire
Maux de tte

[55,56]

O. kenyensis Kenya Ecorces [57]
O. usambarensis Afrique de lEst Ecorces Dcoction Maux destomac [56]

III.2.2. Les huiles essentielles des espces du genre Ocotea

Les tudes bibliographiques ralises ont contribu lobtention de deux types de
donnes relatives aux huiles essentielles du genre Ocotea. A savoir :
dune part, la composition chimique des huiles essentielles extraites de leurs fruits,
feuilles et bois ou encore corces. Le tableau XI prsente les composs volatils
majoritaires (>3%) isols pour 19 espces recenses du genre Ocotea.
et dautre part, les activits biologiques de quelques unes des ces huiles essentielles
(tableau XII).
38

Tableau XI
Composs volatils majoritaires (% > 3) isols d'espces du genre Ocotea
Composs

O. austinii
[58]

O. bofo
[59]

O. bracteosa
[60]

O. brenesii
[61]

O. floribunda
[62-64]

O. holdridgeana
[63,64]
Costa Rica Equateur Brsil Costa Rica Costa Rica Costa Rica
Aldhydes

trans-2-hexnal

- -

-

-

- -

-

-

-pinne

33,2 (f) 14,9 (b)

-

-

- -

22,4 - 22,5 (f)

29,9 (f)

-pinne

13,0 (f) 8,2 (b)

-

-

- -

12,6 - 21,3 (f)

9,1 (f)

camphne

3,6 (f) -

-

-

- -

-

-

sabinne

- -

10,4 (fr)

-

- -

-

-

-phellandrne

- -

19,6 (fr)

-

5,2 (f) -

-

-

limonne

- -

5,0 (fr)

-

- -

-

-

terpinolne

- -

-

-

- -

-

-

trans--ocimne

- -

-

-

- -

-

-
Monoterpnes oxygns

actate de bornyle

- -

-

-

- -

-

-

1,8-cinole

- -

-

-

- -

-

-

granial

- -

-

-

- -

-

-

nral

- -

-

-

- -

-

-

-terpinol

- -

-

-

- -

-

-

linalol

- -

-

-

- -

-

-

-cadinne

5,7 (f) -

-

12,4 (e)

9,2 (f) -

-

-

germacrne D

3,3 (f) -

-

-

- -

-

19,9 (f)

-gurjunne

3,3 (f) -

-

-

- -

-

-

-caryophyllne

3,1 (f) -

-

-

- 6,1 (b)

-

-

-cadinne

- 4,6 (b)

-

-

- -

-

-

viridiflorne

- 5,0 (b)

-

-

- -

-

-

ldne

- -

-

11,1 (e)

- -

-

-

aromadendrne

- -

-

4,2 (e)

- -

-

-

-copane

- -

-

-

21,1 (f) 6,6 (b)

-

-

-cubbne

- -

-

-

- -

-

-

kaurne

- -

-

-

- -

34,0 (f)

-

germacrne A

- -

-

-

- -

-

-

-slinne

- -

-

-

- -

-

-

germacrne B

- -

-

-

- -

-

-

-cadinne

- -

-

-

- -

-

-

-eudesmol

- 9,1 (b)

-

-

- -

-

-

-eudesmol

- 8,8 (b)

-

-

- -

-

-

globulol

- -

-

10,1 (e)

5,6 (f) 5,0 (b)

-

-

spathulnol

- -

-

-

7,3 (f) -

-

-


- -

-

-

- 6,3 (b)

-

-

oxyde d'humulne II

- -

-

-

- 4,6 (b)

-

-

nrolidol

- -

-

-

- -

-

-

4-muurolne-10-ol

- -

-

-

- -

-

-

-cadinol

- -

-

-

- -

-

-

bulnsol

- -

-

-

- -

-

-

actate de farnsyle

- -

-

-

- -

-

-
composs aromatiques

p-cymne

- -

4,8 (fr)

-

- -

-

-

mthylchavicol

- -

48,7 (fr)

-

- -

-

-

asaricine

- -

-

-

- -

-

-

trans-cinnamaldhyde

- -

-

-

- -

-

-

cinnamate de mthyle

- -

-

-

- -

-

-

actate de cinnamyle

- -

-

-

- -

-

-

benzaldhyde

- -

-

-

- -

-

-
b : bois, e : corce, f : feuilles, fr : fruits, m : mlange

3
9

Tableau XII
Activits biologiques des huiles essentielles despces du genre Ocotea

Activits
biologiques
Ocotea
bofo
[59]
bracteosa
[60]
floribunda
[62,64]
holdridgeana
[64]
meziana
[64,65]
notata
[66]
quixos
[68,69]
sp1
[64-66]
sp2
[64,65]
tonduzii
[64]
usambarensis
[71]
valeriana
[64]
veraguensis
[65,72]
Whitei
[64,65,72]
Antithrombotique +
Antibactrienne + +
Antifongique + +
Antimicrobienne +
Antioxydante + +
Antiplaquettaire +
Cytotoxique + + + + + + +
Inhibitricice de la
cruzane
a

+ + + + + + + + +
Molluscicide +
a
Cystine protease du parasite Tripanosoma cruzi

40

III.3 Etude de lOcotea comoriensis de lArchipel des Comores

Slectionne pour sa richesse en huile essentielle, lOcotea comoriensis a tout
dabord fait lobjet dune analyse comparative des composs volatils contenus dans ses
feuilles, fruits et corces collects en priode de fructification (avril). Puis, la variation de
la composition chimique de lhuile essentielle extraite des corces dun mme individu a
galement t tudie en fonction de la saison. Pour cela, deux collectes ont t
ralises, lune en avril (priode de fructification), lautre en septembre (priode de repos
vgtatif).
Enfin, ce travail a t complt par lvaluation de lactivit biologique (activits
anti-larvaire, anti-paludique et anti-oxydante) de lhuile essentielle extraite des corces.

III.3.1. Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles, fruits et corces

III.3.2.1 Principe de ltude

Les huiles essentielles des feuilles, des fruits et des corces collects sur le site de
la Grille la Grande Comore, ont t ralises par hydrodistillation de la matire sche.
Leurs analyses qualitative et quantitative ont t ralises respectivement par
chromatographie gazeuse couple un dtecteur ionisation de flamme (CG-DIF) et par
chromatographie gazeuse couple un spectromtre de masse (CG-SM).

III.3.1.2 Rsultats

Rendements

Le tableau XIII ci-dessous, indique le rendement en huile essentielle pour chacun
des organes tudis.

Tableau XIII
Rendement en huile essentielle de lespce Ocotea comoriensis

Code Parte de la plante extraite Priode de collecte Rendement* (%) Aspect de lhuile
Ec1 Ecorces Avril 0,20 Orange
Ec2 Ecorces Septembre 0,35 Jaune
Fe1 Feuilles Avril 0,35 Orange
Fr1 Fruits Avril 0,39 Jaune-orange (odeur puissante)
(*) : Rendement calcul par rapport la masse des corces, feuilles et fruits secs
41

Composition chimique

Les analyses qualitatives et quantitatives ont conduit lidentification de 75,8%,
96,1%, 76,8% et 94,6% de la composition totale des huiles essentielles des corces (Ec1 et
Ec2), des feuilles (Fe1) et des fruits (Fr1), respectivement. Les 86 composs identifis dans
Ec1, Ec2, Fe1 et Fr1 sont rassembls par famille dans le tableau XIV.
Ce tableau comprend en outre les indices de rtention relatifs (IRR) calculs pour
chacun des constituants de Ec1, Fe1 et Fr1, sur deux types de colonnes capillaires ; lune
apolaire (SPB-5), lautre polaire (Supelcowax). Sont inclus galement dans ce tableau les
indices de rtention relatifs (IRR) des composs volatils de Ec2 ; indices calculs pour une
colonne capillaire apolaire (OV101).

Les huiles essentielles des corces, des feuilles et des fruits collects en avril
contiennent respectivement :
0,4% ; 1,8% et 18,4% de monoterpnes
84,7% ; 80,4% et 78,6 de sesquiterpnes
5,8% ; 0,9% et 1,3% de drivs aromatiques
Ces trois huiles essentielles sont donc principalement constitues de
sesquiterpnes. Chacune dentre elles affiche cependant des particularits.

42

Tableau XIV
Composition chimique des huiles essentielles des corces (Ec1, Ec2), des feuilles (Fe1) et des fruits (Fr1)
de lOcotea comoriensis

Composs

IRR

Composition (%)

Ecorces

Feuilles

Fruits

SPB-5 OV101 Supelcowax

Ec1 Ec2

Fe1

Fr1

tricyclne

926

n.d.

- -

-

tr

-thujne

920

- 0,2

-

-

-pinne

937 931 1021

- 13,7

0,3

1,2

camphne

953 945 1057

- 18,1

0,4

3,9

sabinne

976 963 n.d.

- 0,1

-

tr

-pinne

982 971 1096

- 8,4

0,3

1,6

-myrcne

981 982 1148

- 2,6

-

tr

-phellandrne

1009

n.d.

- -

-

tr

-terpinne

1020

n.d.

- -

-

tr

limonne

1028 1024 1198

Tr 5,6

0,5

0,2

-terpinne

1061 1051 n.d.

- 0,1

-

tr

terpinolne

1092 1080 n.d.

- 0,2

-

tr

4-actyl-1-mthylcyclohexne

1136

n.d.

- -

tr

tr

n.i.

1337

n.d.

- -

-

0,3
total

<0,1 49,0

1,4

7,2
Monoterpnes oxygns

1,8-cinole (eucalyptol)

1035 1022 1208

- 2,1

-

tr

linalol

1104 1087 1533

Tr 0,7

-

0,1

fenchol (endo)

1123

n.d.

- -

-

0,1

cis-p-menth-2-n-1-ol

1130

n.d.

Tr -

-

tr

trans-p-menth-2-n-1-ol

1148

n.d.

Tr -

-

tr

trans-pinocarvol

1149

n.d.

- -

-

tr

hydrate de camphne

1159

n.d.

- -

-

tr

isobornol

1168

n.d.

- -

-

tr

bornol

1177 1155 1693

- 2,3

tr

1,4

terpinn-4-ol

1186

1593

- -

-

0,2

-terpinol

1200

1690

- -

tr

0,4

cis-p-menthan-2-one

1207

n.d.

Tr -

-

tr

cis-pipritol

1218

n.d.

Tr -

-

tr

citronellol

1234

n.d.

Tr -

-

tr

carvotanactone

1256

1677

0,4 -

-

tr

n.i.

1289

n.d.

- -

0,2

tr

actate d'isobornyle (ou de bornyle)

1293 1271 1576

- 13,8

0,2

9,0
Total
0,4 18,9

0,4

11,2

-lmne 1345
1468

0,6 -

0,7

tr
-cubbne 1357
1349 1454

0,3 4,5

1,5

3,4
-ylangne 1350
1481

8,2 -

0,5

tr
-copane 1385
1377 1493

3,1 1,6

0,7

1,8
-bourbonne 1394
1515

- -

tr

-
-cubbne 1397
1387 1533

Tr 1,5

tr

-
-lmne 1399
1586

1,0 -

2,0

1,3
sativne 1400
n.d.

0,3 -

-

-
7-pi-sesquithujne 1409
1548

- -

0,3

-
-cis-bergamotne 1421
1560

- -

0,3

-
(E)-caryophyllne 1431 1419
1595

1,8 0,6

4,0

0,6
trans--bergamotne 1441
n.d.

- -

tr

-
-guaine 1446
n.d.

0,3 -

tr

tr
guaia-6,9-dine 1452
1598

2,0 -

tr

-
4bH,10aH-guaia-1(5),6-dine 1458
n.d.

0,6 -

0,4

-
n.i. (compos C1) 1460
1727

2,6 -

-

0,6
(E)--farnsne 1461
1650

- -

1,9

-
43

Tableau XIV (suite)

Composs

IRR

Composition (%)

Ecorces

Feuilles

Fruits


Ec1 Ec2

Fe1

Fr1
Sesquiterpnes hydrocarbons (suite)

-humulne 1466
1453 1667

Tr 0,9

0,9

1,8
drima-7,9(11)-dine 1481
1678

- -

-

2,6
n.i. 1483

- -

-

1,3
-muurolne 1487
1685

5,1 -

0,9

3,5
-amorphne 1490
1472 1681

4,4 0,4

2,4

tr
germacrne D
1478

0,5

-

-
-slinne 1499
1715

2,4 -

6,7

tr
-muurolne 1510
1502 1717

5,0 1,0

-

1,9
bicyclosesquiphellandrne 1504

n.d.

- -

-

tr
-bisabolne 1514

1718

- -

0,9

-
trans--guaine 1516

1701

- -

-

1,5
-cadinne 1525
1510 1752

2,8 1,1

tr

tr
-cadinne 1533
1521 1748

3,3 2,5

-

10,8
trans-calamnne 1534
1518 1824

Tr 0,7

4,0

0,4
trans-cadina-1(2),4-dine 1544

1775

Tr -

tr

0,4
-cadinne 1548

1785

- -

-

1,6
n.i. 1576

n.d.

Tr -

-

0,8
total 43,8 15,3 28,2 34,3

n.i. (compos C2)

1472

1708

7,6 -

-

0,6

n.i. (compos C3)

1475

1634

2,4 -

-

-

n.i.

1492

- -

1,3

-

1,11-poxide calamnne

1501

n.d.

- -

-

tr

pi-cubbol

1508

1880

- -

4,0

-

cubbol I

1508

- 1,2

-

-

cubbol (cubbol II)

1529 1518 n.d.

- 0,7

-

tr

italicne poxide

1560

1866

- -

-

1,2

lmol

1563

2070

- -

1,9

-

nrolidol (isomre Z/E n.i.)

1569

2024

1,1 -

2,5

0,5

germacrne D-4-ol

1570

- 1,2

-

-

spathulnol

1594

2115

- -

-

2,5


1598 1574 1983

11,3 1,3

8,5

-

gleenol

1608

n.d.

- -

-

1,0

n.i.

1609

n.d.

Tr -

0,7

-

n.i.

1614

n.d.

- -

0,5

0,1

n.i.

1621

n.d.

- -

-

0,2

poxyde d'humulne II

1626 1598 2037

3,6 0,7

2,4

3,6

1,10-di-pi-cubnol

1630

2064

- -

-

3,3

n.i.

1635

n.d.

- -

-

0,8

n.i. (compos C4)

1637

2159

2,6 -

0,7

-

1-pi-cubnol

1643 1621 2058

- 1,0

1,6

tr

T-muurolol + T-cadinol

1636

- 3,0

-

-

n.i. (compos C5)

1648

1958

- -

3,0

-

pi--cadinol

1656

2162

6,1 -

3,6

14,9

-eudesmol

1671

2221

3,9 -

21,6

-

-cadinol

1672 1647 2231

2,4 3,0

-

15,9
total 40,9 12,1 52,2 44,3

44

Tableau XIV (suite)

Composs

IRR

Composition (%)

Ecorces

Feuilles

Fruits


Ec1 Ec2

Fe1

Fr1
Drivs aromatiques

cymne (o ou p)

1028

1264

1,9 -

tr

tr

-calacorne

1556

1910

1,7 -

-

0,6

cadalne

1691

2216

1,0 -

0,9

0,7

thymolmthylther

1249

n.d.

tr -

-

tr

safrole

1300

1867

1,2 -

-

-

carvacrol

1323

n.d.

tr -

-

tr

3,4,5-trimthoxyphnyl-isopropylctone

1790

- 0,8

-

-
total 5,8 0,8 0,9 1,3

75,8 96,1

76,8

94,6
t.i. : tentative didentification, tr : trace (% < 0,1%), n.d. : non dtect, n.i. : non identifi

Lhuile essentielle dcorces Ec1
Lhuile essentielle dcorces prsente une forte proportion en sesquiterpnes
lgrement domins par les drivs hydrocarbons dtects hauteur de 43,8% contre
40,9% de drivs oxygns.
Pour les drivs hydrocarbons, les composs suivants se trouvent en proportion
importante : lylangne (8,2%), le muurolne (5,1%), lmuurolne (5,0%), l
amorphne (4,4%), le cadinne (3,3%), lcopane (3,1%), le cadinne (2,8%), le
slinne (2,4%) et un compos non identifi C1 (2,6%) dont le spectre de masse est donn
au tableau XV p.46.
Pour les drivs oxygns : loxyde de caryophyllne (11,3%), lpicadinol
(6,1%), le eudesmol (3,9%) et lpoxyde dhumulne II (3,6%) constituent les composs
majoritaires. Parmi les sesquiterpnes oxygns, trois composs C2, C3 et C4 non
identifis sont galement prsents en forte proportion (7,6%, 2,6% et 2,4%
respectivement). Le tableau XV p.46 reprend les donnes de leur spectre de masse.

Les monoterpnes, sont quant eux largement minoritaires et nont t dtects
quen faibles pourcentages (carvotanactone 0,4%) ou ltat de trace (limonne, linalol,
cis-p-menth-2-n-1-ol, trans-p-menth-2-n-1-ol, cis-p-menthan-2-one, cis-pipritol et
citronellol).

Les composs aromatiques, au nombre de six, comprennent en particulier le
cymne (1,9%), l-calacorne (1,7%), le safrole (1,2%) et le cadalne (1,0%).

45

Lhuile essentielle dcorces Ec2
Lhuile essentielle de lcorce (Ec2) collecte en priode de repos vgtatif au mois
de septembre est exclusivement compose de monoterpnes et de sesquiterpnes. Elle
comprend en effet : 67,9% de monoterpnes et 27,4% de sesquiterpnes.

Sa forte teneur en monoterpnes est due principalement aux pourcentages levs
de camphne (18,1%), dactate de bornyle (13,8%), d-pinne (13,7%), de -pinne
(8,4%) et le limonne (5,6%).

Parmi les sesquiterpnes identifis, on relve en particulier l-cubbne (4,5%) et
l-cadinol (3,0%).

Lhuile essentielle des feuilles Fe1
Lhuile essentielle des feuilles prsente une forte proportion de sesquiterpnes
domins par les drivs oxygns dont la proportion a t value 52,2% contre 28,2% de
drivs hydrocarbons.
Pour les drivs oxygns, les composs suivants se trouvent en proportion
importante : le eudesmol (21,6%), loxyde de caryophyllne (8,5%), lpicubbol (4,0%),
lpicadinol (3,6%), le nrolidol (2,5%), lpoxyde dhumulne II (2,4%) et un compos
non identifi C5 (3,0%) dont le spectre de masse est dtaill tableau XV p.46.
Les drivs hydrocarbons sont marqus par la prsence majoritaire : de slinne
(6,7%), du (E)-caryophyllne (4,0%), du transcalamnne (4,0%), de lamorphne (2,4%)
et du lmne (2,0%).

Les monoterpnes sont quant eux largement minoritaires. 9 monoterpnes ont t
identifis, tous trs faible pourcentage dont lpinne (0,3%), le camphne (0,4%), le
pinne (0,3%), le limonne (0,5%) et lactate de bornyle (0,2%).

Le cymne (< 0,1%) et le cadalne (0,87%) sont les uniques reprsentants de la
classe des composs aromatiques pour Fe1.

46

Lhuile essentielle des fruits Fr1
Lhuile essentielle de fruits prsente une forte proportion de sesquiterpnes parmi
lesquels les composs oxygns sont majoritaires : 44,3% de drivs oxygns contre 34,3%
de drivs hydrocarbons.
Pour les drivs oxygns, les composs suivants se trouvent en proportion
importante : lcadinol (15,9%), lpi-cadinol (14,9%), lpoxyde dhumulne II (3,6%),
le 1-10-di-pi-cubnol (3,3%) et le spathulnol (2,5%).
Pour les drivs hydrocarbons se distinguent par leurs pourcentages relativement
levs : le cadinne (10,8%), le muurolne (3,5%), lcubbne (3,4%) et le drima-
7,9(11)-dine (2,6%).

Contrairement aux huiles essentielles dcorce (Ec1) et de feuilles (Fe1), lhuile
essentielle des fruits (Fr1) est marque par une proportion non ngligeable de
monoterpnes (18,4%) dont lactate disobornyle (9,0%), le camphne (3,9%), le - et l-
pinne (respectivement 1,6 et 1,2%).

Les composs aromatiques ont t dtects pour Fr1 au nombre de 5, tous des
teneurs extrmement faibles dont l-calacorne (0,6%) et le cadalne (0,7%)

Tableau XV
Spectres de masse des composs C1-C5 non identifis dtects dans les huiles essentielles de lOcotea comoriensis

Composs
IRR
MM

m/z (intensit relative, 70 eV)
SPB-5 Supelcowax
C1 1460 1727 204 (27), 189 (16), 161 (100), 147 (11), 133 (25), 119 (29), 105 (37),
91 (39), 81(15), 79 (17), 77 (15), 69 (11), 67(11), 55 (10), 41 (17)
C2 1472 1708 220 220 (36), 205 (66), 187 (26), 177 (100), 163 (43), 149 (43), 138 (57),
135 (73), 123 (36), 107 (43), 91 (50), 79 (31), 67 (14), 55 (27), 43
(31), 41 (34).
C3 1475 1634 222 222 (14), 205 (7), 193 (7), 179 (19), 161 (16), 151 (10), 136 (53),
127 (100), 125 (36), 123 (42), 122 (44), 121 (36), 119 (6), 107 (53),
95 (45), 81 (37), 71 (32), 67 (27), 55 (29), 43 (71), 41 (31)
C4 1637 2159 222 222 (6), 204 (58), 189 (35), 185 (28), 179 (26), 161 (100), 147 (35),
135 (51), 121 (51), 109 (71), 105 (72), 95 (52), 93 (63), 91 (71), 81
(74), 79 (55), 77 (46), 67 (35), 55 (38), 43 (80), 41 (55)
C5 1648 1958 222 (1), 204 (267), 189 (25), 179 (16), 161 (100), 147 (14), 133 (14),
119 (7), 105 (30), 95 (14), 93 (18), 91 (23), 81(14), 79 (14), 77 (10),
69 (11), 67(8), 59 (15), 55 (10), 43 (28), 41 (14)

47

III.3.1.3 Discussion

Rendements

Les rsultats obtenus montrent quen priode de fructification (avril), les fruits et
les feuilles sont les plus riches en huile essentielle : 0,39% et 0,35% respectivement contre
0,20% pour les corces. Par ailleurs, pour les corces le rendement en huile essentielle
apparait un peu plus important en priode de repos vgtatif (0,35%) quen priode de
fructification (0,20%). Signalons toutefois que ces variations de rendements observes
entre les diffrents organes pour une saison donne, ou pour un seul organe (corce) sur
deux saisons, restent relativement faibles et peu significatifs.

Composition chimique

Lespce Ocotea comoriensis, rcolte en avril, priode o la plante est en fruits,
prsente aussi bien dans son huile essentielle dcorce (Ec1) que celles des feuilles (Fe1)
et de fruits (Fr1) une forte proportion de sesquiterpnes quils soient hydrocarbons ou
oxygns. Il est noter cependant que chacune de ces huiles essentielles offre une
composition chimique qui leur est spcifique tant dun point de vue qualitatif que
quantitatif.
Lhuile dcorce (Ec1) est domine par loxyde de caryophyllne (11,3%), l
ylangne (8,2%), lpicadinol (6,1%), le muurolne et lmuurolne (5,1% et 5,0%,
respectivement), lamorphne (4,4%), le cadinne (3,3%), lcopane (3,1%), le
cadinne (2,8%) et le slinne (2,4%).
Lhuile essentielle des feuilles (Fe1) comprend majoritairement comme lhuile
essentielle dcorce (Ec1), de loxyde de caryophyllne (8,5%), mais aussi du eudesmol
(21,6%), du slinne (6,7%), de lpicubbol (4,0%), du (E)-caryophyllne (4,0%), du
transcalamnne (4,0%) et de lpicadinol (3,6%).
Lhuile essentielle des fruits se distingue quant elle par de fortes proportions d
cadinol (15,9%), dpi-cadinol (14,9%), de cadinne (10,8%), dpoxyde dhumulne II
(3,6%), de muurolne (3,5%), dcubbne (3,4%) et de 1-10-di-pi-cubnol (3,3%).
De plus, hormis cette diffrentiation au niveau des composs majoritaires, on
remarque que sur les 99 composs dtects, seuls 20 composs sont communs aux trois
huiles. Citons titre dexemple le -lmne, le (E)-caryophyllne, l-muurolne, le -
muurolne et lpi--cadinol.
48

Par ailleurs, concernant plus spcifiquement lhuile essentielle dcorce tudie
deux moments du cycle vgtatif pour un mme spcimen dOcotea comoriensis (en fruits
et au repos vgtatif), dimportantes diffrences au niveau de sa composition chimique
peuvent tre releves. Alors quen priode de fructification, lhuile essentielle (Ec1) est
largement domine par les sesquiterpnes (84,7%), en priode de repos vgtatif (Ec2), sa
proportion en monoterpnes devient nettement plus importante passant de 0,4% pour Ec1
67,9% pour Ec2. Ltude mene met donc en vidence une variation de la composition
chimique de lcorce en fonction du cycle vgtatif. Il est noter cependant que les
diffrences observes entre Ec1 et Ec2, en particulier au niveau des composs minoritaires
dont les composs aromatiques prsents chez Ec1 et Ec2, ne sont pas forcment toutes
attribuables la priode dtude. Elles peuvent tre dues galement la sensibilt de
lappareillage (chromatographe, colonne capillaire, etc.) qui ntait pas le mme pour Ec1
et Ec2.

III.3.2. Activits biologiques de lhuile essentielle dcorce (Ec2)

III.3.2.1 Principe de ltude

Les activits biologiques anti-larvaire (Aedes aegypti), antipaludique (Plasmodium
falciparum) et antioxydante ont t values uniquement pour lhuile essentielle dcorce
Ec2 collecte en Septembre, priode de repos vgtatif.

III.3.2.2 Rsultats

Les rsultats des tests anti-larvaire, anti-paludique et antioxydant appliqus
lhuile essentielle dcorce Ec2 sont les suivants :

125 ppm (activit anti-larvaire sur les larves dAedes aegypti),
10 g/mL (activit antipaludique sur Plasmodium falciparum)
33,1 g/mL (activit antioxydante)
49

III.3.2.2 Discussion

Si les rsultats obtenus lors des tests dactivits anti-larvaire et antioxydante sur
lhuile essentielle dcorce (Ec2) dOcotea comoriensis ne sont pas vraiment significatifs,
celui obtenu pour lactivit antipaludique est en revanche prometteur. Une CI
50
de 10
g/mL est en effet plus quintressante, au vu des critres de slection (Tableau XVI) [73-
75].
Tableau XVI
Critre de slection des activits biologiques [73-75]

CI
50
(g/mL) Activit
< 10 Bonne
10 50 Modre
50 100 Faible
> 100 Inactive

III.3.3. Conclusion et perspectives

Notre travail, ax sur les composs volatils dOcotea comoriensis des Comores, a
montr dans un premier temps, quen priode de fructification (avril), lcorce, les
feuilles, et les fruits taient riches dune huile essentielle marque par une forte teneur
en sesquiterpnes hydrocarbons et oxygns. Chacune de ces trois huiles prsente
cependant sa spcificit tant dun point de vue qualitatif que quantitatif.
Puis dans un deuxime temps, pour un unique spcimen, la comparaison de la
composition chimique de lhuile essentielle dcorce obtenue, au mois davril (priode de
fructification) avec celle obtenue au mois de septembre (priode de repos vgtatif) a
permis de mettre en vidence la variation de la quantit et de la qualit de lhuile
essentielle dcorce en fonction du cycle vgtatif. On retiendra en effet que dune part,
le rendement en huile essentielle volue entre 0,20% en avril et 0,35% en septembre, et
dautre part que largement domine par les sesquiterpnes en avril, lhuile essentielle
dcorce devient riche en monoterpnes en septembre.
Ces premiers rsultats nous encouragent poursuivre nos investigations sur les
composs volatils de lOcotea comoriensis. Il serait intressant en effet de voir si la
variation saisonnire mise en vidence pour lhuile essentielle dcorce est galement
observe pour lhuile essentielle des feuilles. Par ailleurs, nous pourrions complter ce
travail en effectuant aprs isolement et purification, lanalyse par Rsonance Magntique
Nuclaire (RMN) de composs majoritaires non identifis par la technique de la CG-SM tels
que les sesquiterpnes C1 C4 dtects hauteur de 2,6%, 7,6%, 2,4% et 2,6%
50

respectivement dans lhuile essentielle dcorce (Ec1) obtenue en priode de
fructification.
Enfin, la recherche dactivits anti-larvaire, anti-paludique et anti-oxydant
effectue uniquement partir de lhuile essentielle dcorce Ec2 du mois de septembre
pourrait tre largie aux autres huiles essentielles. Les premiers rsultats obtenus pour Ec2
lors du test dactivit antipaludique en particulier sont en effet encourageants.

CHAPITRE IV

Teclea boiviniana (H. Perr.) Baillon
(Rutaceae)

Laboratoire de Chimie des Substances Naturelles et des Sciences des Aliments (LCSNSA) Universit de la
Runion,France. (Extractions et analyses des composs volatils et non volatils)
LaboratoiredePharmacognosie(B36)delUniversitdeLige,Belgique. (Tests anti-paludiques)

52

Chapitre IV Teclea boiviniana (H. Perr.) Baillon (Rutaceae)

IV.1 Description botanique

Famille : Rutaceae
Synonymes : /
Arbre toujours vert, denviron 2 10 mtres de haut, glabre, except les parties
jeunes trs lgrement pubescentes, rameaux gristres, finement stris, avec de
petites lenticelles plus claires, en gnral allonges.
Feuilles alternes, trifolioles, membraneuses ; ptiole de 1,5 5 cm de long, troit,
bien canalicul en dessus mais sans rebords ; folioles sossiles, les latrales
inquilatrales dans la moiti inferieure et un peu plus petites (5,3 13 x I,6 - 3,7cm)
que la mdiane (7,3 17 x 2,5 - 4,5cm), toutes assez troitement oblancoles, du
point large attnues - aigus sur la basse et vers le sommet troitement obtus ;
nervures fines et nombreuses, bien visibles sur les deux faces, la mdiane blanche,
les secondaires un peu rougetres par transparence ; ponctuations trs petites,
visibles en noir (loupe) sur la page infrieure, citrines par transparence et difficiles
voir, mme au binoculaire. Inflorescences en petite grappe dense de 6 - 12 fleurs,
sessile, trs courte, ne dpassant pas 1cm de long : axe et pdicelles pubescents ;
pdicelles allongs (3 - 4 mm) et grles ; fleurs 4- mres ; Calice cupuliforme,
limbe rduit un troit rebord trs obscurment lob ; ptales valvaires in
dupliqus, ovales-oblongs (3 x 1,3 mm), larges ds la base et attnus vers le
sommet subaigu ; staminodes nuls, disque jaune, adu la base de lovaire, 4 gros
tubercules ; ovaire sphrique, blanchtre, surface mamelonne (rservoirs
glanduleux), chaque mamelon termin par un long poil raide, caduc ds que lovaire
se dveloppe ; une seule loge biovule ; ovules collatraux ; style pais et trs court,
termin par un large stigmate pelt, noir, pais et bords inflchis. Inflorescences
fleurs plus nombreuses et pdicelles de longueur plus variable (0,5 3mm) ;
calice cupuliforme pubescent lextrieur, plus petit (1 mm de large), 4 lobes trs
petits et ciliols ; ptales semblables ; tamines la fin plus longues (3,5 mm) que
les ptales, anthre orbiculaire (0,6 mm diam.) ; disque obsolte ; rudiment
dovaire conique, haut de 1 mm, prolong ou non en style, couvert de long poils.

Il est noter que depuis 2005, selon Labat et al. [77], le genre Teclea est
aujourdhui combin au genre Vepris.

Clich 6 : Teclea boiviniana
[M. SAID HASSANI]
53


IV.2 Travaux antrieurs

Les recherches bibliographiques ralises ont montr quun bon nombre de travaux,
concernant aussi bien les utilisations traditionnelles que la composition chimique, ont dj
t mens sur Teclea boiviniana (Baillon) H. Perr. (Rutaceae).
Toutefois, il nous a paru judicieux dlargir notre recherche et de recenser la
totalit des travaux effectus sur les diffrentes espces du genre Teclea afin d'apprcier
l'ensemble des utilisations traditionnelles, des tudes biologiques et chimiques relatives
ce genre botanique.

IV.2.1. Utilisations des espces du genre Teclea en mdecine traditionnelle

La littrature fait mention de cinq espces du genre Teclea qui seraient utilises
par la pharmacope traditionnelle. Le tableau XVII rcapitule les donnes de la littrature
sur ce point.

Tableau XVII
Utilisations despces du genre Teclea en mdecine traditionnelle

Espce Origine
Partie de la plante
utilise
Actions thrapeutiques Rfrences
T. afzelii Cameroun Feuilles
Infections dues des blessures
Douleurs abdominales
Toux
Fivre et Asthme
[78]
T. boiviniana Comores Feuilles en association Paludisme [29]
T. gerrardii Afrique du Sud Ecorces Maux de poitrine [79,80]
T. nobilis Afrique du Sud et de lEst Feuilles
Gonorrhes,
Activit analgsique
Activit antipyrtique
[78,81]
T. unifoliolata Comores Feuilles en association Paludisme [29]

IV.2.2. Composition chimique des espces du genre Teclea

IV.2.2.1 Les composs volatils

Seules deux rfrences bibliographiques [82,83] font mention de la composition
chimique des huiles essentielles extraites des espces du genre Teclea : T. boiviniana, T.
nobilis et T. unifoliolata. Lensemble de ces donnes bibliographiques sont rsumes dans
le tableau XVIII.
54


Tableau XVIII
Composs volatils majoritaires (>2%) isols despces du genre Teclea

Composs

T. boiviniana
[82]

T. nobilis
[83]

T. unifoliolata
[82]
Archipel des Comores Arabie Saoudite Archipel des Comores

-pinne
+ (f) -

-

-
-pinne
+ (f) -

-

-
limonne
+ (f) -

-

-
isomre de l'ocimne
- -

13,0 (f)

-
isomre de l'ocimne - -

8,8 (f)

-

-cadinne
- + (e)

-

-
-lmne
- + (e)

-

+ (f)
sesquiterpne
+ (f) -

-

-
-lmne
+ (f) -

-

-
germacrne D + (f) -

19,0 (f)

-

-lmol
+ (f) -

-

-
n.i. (alcools ou oxydes)
- -

-

+ (f)
guaiol
- -

3,9 (f)

-
lmol
- -

2,9 (f)

-
bulnsol - -

2,5 (f)

-
e : corce, f : feuilles, + : prsence dtecte

IV.2.2.2 Les composs non volatils

12 espces du genre Teclea ont t examines pour leur composition chimique en
mtabolites secondaires non volatils. Plus dune cinquantaine de composs ont t isols.
Il sagit pour la majorit dentre eux dalcalodes (Tableaux XIX, XX et XXI),
essentiellement de type acridone et furoquinoline ; quelques rares composs terpniques
(sesquiterpnes, triterpnes, limonodes) sont galement cits (Tableau XXII).


5
5
Tableau XIX
Alcalodes, type acridone, isols despces du genre Teclea

Composs
Teclea
boiviniana
[82,84,85]
gerrardii
[86]
nobilis
[78]
trichocarpa
[87]
1,2,3-trimthoxy-10-mthylacridone
+
1,3,5-trimthoxy-10-mthylacridone
+
1,3-dimethoxy-10-mthoxyacridone
+
6-mthoxytclanthine
+ +
arborinine
+ + +
voxanthine
+ +
mlicopicine
+ +
normlicopicine
+
tclanthine
+ +
tgerrardine A
+
tgerrardine B
+
+ : prsence dtecte
N
O
R
1
CH
3
R
8
R
7
R
6
R
5
R
4
R
3
R
2


5
6
Tableau XX
Alcalodes, type furoquinoline, isols despres du genre Teclea

Composs
Teclea
afzelii
[88,89]
boiviniana
[86,88]
gerrardii
[79,87]
natalenis
[90]
nobilis
[78,91,92]
ouabanguiensis
[93]
simplicifolia
[94]
sudanica
[95]
trichocarpa
[87]
unifoliolata
[82,96]
verdoorniana
[97,98]
4,8-dimthoxy-6,7-
mthylnedixyfuro[2,3-b]quinoline

+

anhydrovoxine
+
chlorodesnkolbisine
+
dictamine
+ +
voxine
+ +
flindersiamine
+ + + +
isohalpopine
+
isohalpopine-3,3-dimthylther
+ +
isotcloxine
+
kokusaginine
+ + + +
maculine
+ + +
mthylnkolbisine
+
montrifoline
+ + + +
nkolbisine
+ +
nobiline
+
ptline
+
skimmianine
+ + + + +
tclabine
+
teclamine
+ +
teclanatalensis A1
+
teclanatalensis B2
+
tclanine A
+
teclaverdoornine
+ + + +
teclaverdine
+
tecline
+ + +
tcloxine
+
+ : prsence dtecte
N
O
R
1
R
2
R
3
R
4
R
5
R
6
R
7


5
7
Tableau XXI
Autres alcalodes isols despces du genre Teclea

Composs
Teclea
nobilis
[78,91]
ouabanguiensis
[93]
verdoorniana
[99]
cyclomgistine
+
cyclomgistine B
+
duline
+
isoplatydesmine
+
8-mthoxyflindersine
+
tclanone
+
ribalinie
+ +
+ : prsence dtecte

Tableau XXII
Terpnes isols despces du genre Teclea

Composs
Teclea
afzelii
[88,89]
nobilis
[100,101]
ouabanguiensis
[102]
7-dactylprocranone
+
7-dactylazadirone
+
7-dactoxy-7-oxoazadirone
+
lupol
+ + +
ouabanginone
+
-sitostrol glucopyranoside
+
tclanine
+
tclnone A
+
tclnone B
+
1-hydroxy-4(15)-oppositne (driv)
+
+ : prsence dtecte
58


IV.2.3. Activits biologiques des espces du genre Teclea

Parmi les diffrentes publications relatives lespce Teclea boiviniana, aucune ne
mentionne la recherche ou l'existence d'activit biologique. En revanche, plusieurs
activits biologiques sont dcrites pour d'autres espces de Teclea, comme indiqu dans le
tableau XXIII suivant.

Tableau XXIII
Activits biologiques des extraits volatils et non volatils despces du genre Teclea

Activits biologiques
Teclea
afzelii
[88,89]
gerrardii
[79]
nobilis
[83,103]
trichocarpa
[87]

Analgsique

+ (f, v)
Antibactrienne

+ (e, n.v.)
Anti-inflammatoire

+ (f, n.v.)
Antipaludique

+ (e, n.v.) + (e, n.v.) + (f, n.v.)
Antipyrtique

+ (f, v)
e : corces de tiges, f : feuilles, v : extrait volatil, n.v. : extrait non volatil

IV.3 Etude de Teclea boiviniana de lArchipel des Comores

Teclea boiviniana a t collecte deux reprises sur le site de Maluzini ( 5 Km au
Sud de Moroni Grande Comore). La premire collecte, effectue en septembre 2004
(priode de fructification), tait destine ltude des composs volatils contenus dans
lhuile essentielle des feuilles ; la seconde, ralise au mois daot 2009, a t utilise
pour une tude prliminaire des composs non volatils des feuilles et des racines.
Paralllement ce travail relatif la composition chimique de Teclea boiviniana des
Comores, lactivit antipaludique de la plante a galement t value.

IV.3.1. Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles

IV.3.2.1 Principe de ltude

Lhuile essentielle, obtenue par hydrodistillation des feuilles fraches avec un
rendement de 0,01% (pourcentage massique) a t analyse par chromatographie gazeuse
couple un dtecteur ionisation de flamme (CG-DIF) et par chromatographie gazeuse
couple un spectromtre de masse (CG-SM). Ces deux techniques permettant
respectivement une approche quantitative et qualitative du mlange de composs volatils.
59


IV.3.1.2 Rsultats

Les analyses qualitative, effectue par CG-SM, et quantitative, effectue par CG-
DIF, ont conduit lidentification de 90,8% de la composition totale. Les 15 composs
identifis sont rassembls par famille dans le tableau XXIV. Ce tableau comprend en outre
les indices de rtention relatifs calculs pour chacun des constituants sur deux types de
colonnes capillaires, lune apolaire (SPB-5), lautre polaire (Supelcowax).

Tableau XXIV
Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles de Teclea boiviniana

Composs

IRR

Composition
(%)

SPB-5 Supelcowax

Alcools

3-hexn-1-ol
864 1372

7,6
2-hexn-1-ol
870 1396

2,6
hexan-1-ol
872 1339

total

10,2
Monoterpnes oxygns

trans-oxyde de linalol (furanode)
1072 1464

3,8
cis-oxyde de linalol (furanode)
1088 1436

3,6
linalol
1097 1535

55,9
terpinne-4-ol
1180 n.d.

1,6
-terpinol
1192 1690

1,5
graniol
1253 1834

2,1
total

68,5

trans--bergamotne
1545 1780

tr
total

<0,1%

-acornol
1638 n.d.

0,4
pi--cadinol
1646 2160

3,3
-cadinol
1661 2220

7,0
total

10,7
Composs aromatiques

benzneacetaldhyde
1043 1645

1,3
2-(1,Z) propnylphnol
1163 n.d.

tr
Total

1,3
Composs non identifis

C6
1222 2023

8,1
C7. 1323 1588
1,1
total

9,2

90,8
n.d. : non dtect, n.i. : non identifi, tr : trace (% < 0,1%)

60


Le classement par famille, des 15 constituants identifis, montre que lhuile
essentielle de T. boiviniana comprend :
3 alcools aliphatiques (10,2%) dont le 3-hexn-1-ol dtect hauteur de 7,6%.
6 monoterpnes oxygns (68,5%) dont le constituant majoritaire de lhuile
essentielle : le linalol (55,9%).
1 sesquiterpne hydrocarbon, le trans--bergamotne dtect ltat de trace.
3 sesquiterpnes oxygns (10,7%) parmi lesquels lcadinol dont le pourcentage
slve 7,0%.
2 composs aromatiques : le benzne actaldhyde (1,3%) et le 2-(1,Z)-propylphnol
ltat de trace.

On relvera en outre, parmi les composs non identifis, la prsence dun compos
C6 de pourcentage relativement lev (8,1%). Les fragments observs sur son spectre de
masse ne nous permettent pas de le classer parmi les monoterpnes, les sesquiterpnes ou
encore les composs aromatiques (Tableau XXV).

Tableau XXV
Spectres de masse des composs C6 et C7 non identifis dtects dans lhuile essentielle des feuilles de Teclea bioviniana

Composs
IRR
MM

m/z (intensit relative 70 eV)
SPB-5 Supelcowax
C6 1222 2023 ? 137 (3), 113 (100), 96 (64), 84 (11), 67 (23), 55 (17), 43(30), 42
(20), 41 (17), 39 (8)
C7 1323 1588 210 210 (10), 177 (4), 168 (3), 150 (14), 140 (17), 135 (23), 125
(100), 109 (33), 99 (14), 91 (7), 84 (13), 77 (7), 69 (16), 55
(14), 43 (80)

IV.3.1.3 Discussion

Les travaux de Vaquette mens en 1974 [82] sur lhuile essentielle des feuilles de
Teclea boiviniana de lArchipel des Comores, relatent la prsence dans cette huile
essentielle, uniquement de l- et du -pinne, du limonne, de l-lmne, du
germacrne D et du -lmol. (Tableau XVIII p.54)
Contrairement ces travaux, notre tude a mis en vidence une huile essentielle
forte teneur en monoterpnes oxygns dont le linalol (55,9%), compos reconnu pour ses
nombreuses proprits biologiques, savoir : dtergent, sdatif, anticonvulsif et
anxiolytique [104-110]. Le linalol est galement un ingrdient utilis dans les produits de
beaut, les produits dcoratifs, la parfumerie fine, les shampooings, la savonnerie et
autres articles de toilette [104].

61


La prsence plus de 50% du linalol dans lhuile essentielle de Teclea boiviniana
pourrait donc confrer cette huile des proprits biologiques intressantes quil faudra
sefforcer de mettre en vidence lavenir.

Par ailleurs, le linalol, en raison de sa forte teneur dans lhuile essentielle de
Teclea boiviniana pourrait galement tre utilis comme marqueur chimiotaxonomique de
lespce.

Enfin, on relve dans lhuile essentielle un pourcentage non ngligeable de cis et
trans oxydes de linalol (furanodes) (3,6+3,8=7,4%). Au regard de la forte teneur en linalol,
la prsence de ces deux composs volatils biosynthtiss partir du linalol, nest pas
tonnante. Rappelons que la biosynthse du linalol et de ses drivs comprend les tapes
suivantes :
1. La synthse biologique du granyldiphosphate (GPP) partir de lisopentyldiphosphate
(IPP) et/ou dimthylallyldiphosphate (DMAPP) par lintermdiaire de lenzyme
granyldiphophate synthase (GPPS).
2. Lobtention du linalol par raction enzymatique du GPP avec le linalol synthase (LIS).
3. La formation du cis- et du trans-oxydes de linalol (furanodes) partir du linalol. Cette
synthse comprend elle-mme, deux tapes :
a. Le linalol est transform en 6,7-poxyde de linalol
b. Un rarrangement intramolculaire du 6,7-poxyde de linalol par une attaque
nuclophile dun des doublets de loxygne de la fonction alcool sur lpoxyde.

Figure 3
Biosynthse du linalol et de ses drivs cis-trans oxydes de linalol (furanodes) [110,111]

OPP
OPP
IPP
DMAPP
GPPS
OPP
GPP
LIS
OH
Linalol
O
H
OH
O
H
OH
cis-oxyde de linalol
(furanode)
trans-oxyde de linalol
(furanode)

62


IV.3.2. Criblage chimique des feuilles et des racines


Il sagit de tests qualitatifs prliminaires permettant de mettre en vidence laide
de ractifs plus ou moins spcifiques quelques grandes familles de composs chimiques
prsents dans les feuilles et les racines de Teclea boiviniana.
Pour ce faire, les extraits bruts apolaires et polaires obtenus par puisement de la
matire vgtale laide du dichloromthane puis du mthanol, sont dilus des
concentrations connues (10 mg/mL) et dposs sur des plaques de Chromatographie sur
Couche Mince (CCM) de silice. Ces plaques sont alors lues grce des mlanges de
polarit variable selon le type dextraits. Il peut y avoir pulvrisation dun seul ractif ou
bien de plusieurs successivement, avec rvlation par chauffage ou non. Plante Drug
Analysis [112].

IV.3.2.2 Rsultats

Le tableau XXVI est une synthse des rsultats du criblage effectu pour chacun des
extraits (apolaire et polaire) des feuilles et des racines de Teclea boiviniana.

Tableau XXVI
Bilan du criblage chimique sur les extraits apolaires et polaires des feuilles et racines de Teclea bioviniana

Test Substances dtectes
Feuilles Racines
Extrait
apolaire
Extrait
polaire

Extrait
apolaire
Extrait
polaire
T1 Coumarines + - + -
T2 Valpotriates - - - -
T3 Substances amres, Huiles essentielles, Principes astringents, Saponines + + + +
T4 Naphtoquinones - - - -
T5 Arbutine, Phnols simples + + + +
T6 Cardnolides - - - -
T7 Flavonodes, Lactones sesquiterpniques - - - -
T8 Tanins, Polyphnols - - - -
T9 Alcalodes + - + -
T10 Substances phnoliques, Flavonodes - - - -
T11 Cardnolides - - - -
T12 Anthraquinones, Anthones, Coumarines - - - -
T13 Flavonodes, Alcalodes, Coumarines - - - -
T14 Terpnes, Substances amres, Saponines, Huiles essentielles - - - -

+ : prsence dtecte

63


IV.3.2.3 Discussion

Le criblage chimique effectu au moyen de 14 tests sur les extraits bruts des
feuilles et des racines de Teclea boiviniana a mis en vidence pour les extraits polaires et
apolaires, la prsence probable :
de substances amres, de principes astringents, de saponines ou encore de
composs volatils dhuiles essentielles (Test T3) ;
et de composs phnoliques (Test T5).
Les extraits apolaires des feuilles et des racines contiendraient en outre :
des coumarines (Test T1) ;
et des alcalodes (Test T9).

Cette premire approche de la composition chimique par CCM montre que Teclea
boiviniana, comme la plupart des espces du genre Teclea cites dans la littrature
(Tableaux XIX XXI p.55-57), contiendrait dans ces feuilles et ses racines, des alcalodes.
Par ailleurs, le test T3 rvlant pour les quatre extraits de multiples spots colors (violet,
bleu, vert, jaune) indique que Teclea boiviniana des Comores comme T. afzelii du
Cameroun, T. nobilis dArabie Saoudite et T. ouabanguiensis du Cameroun (Tableau XXII
p.57), pourrait contenir des terpnes et en particulier des limonoides (substances amres)
tels que le 7-dactylazadirone, le 7-dactylprocranone, le 7-dacetoxy-7-oxoazadirone,
louabanginone ou encore la tclanine [102]. Lespce Teclea boiviniana semble
cependant se distinguer des autres espces du genre par la prsence probable de composs
phnoliques et de coumarines.

IV.3.3. Isolement et analyse de composs non volatils des racines


Suite au criblage chimique, il a t dcid dapprofondir ltude de la composition
chimique de lextrait apolaire des racines de Teclea boiviniana. Cette extrait semble en
effet contenir un grand nombre de mtabolites secondaires appartenant des familles de
composs aux proprits biologiques intressantes : alcalodes, phnols, coumarines ou
encore terpnes.
Un fractionnement par Chromatographie Liquide Moyenne Pression (CLMP) de
lextrait apolaire a donc t envisag sur gel de silice. Llution a t ralise au moyen
64


dun gradient de solvant de polarit croissante (Cyclohexane/AcOEt/MeOH). 30 fractions
(F1-F30) ont t recueillies. Un suivi du fractionnement sur plaque CCM a permis de
slectionner 24 de ces fractions (F1-F5, F8-F9, F11-F24, F26-F28) pour une analyse
prliminaire par Rsonance Magntique Nuclaire du proton (RMN
1
H) et du carbone
(RMN
13
C).

IV.3.3.2 Rsultats

Lanalyse prliminaire en RMN des 24 fractions slectionnes a permis de
slectionner 3 de ces fractions (F11, F16 et F20) desquelles dors et dj, ont pu tre
caractriss trois alcalodes de structure connue.

La mlicopicine

Cet alcalode de type acridone ttramthoxyle, a t obtenu sous forme dun
mlange avec un second compos non identifi, dans la fraction F11.

Donnes RMN :

1
H : 3,80 (s, 3H, N-OMe); 3,93 (s, 3H, OMe); 3,97 (s, 3H, OMe); 4,03 (S, 3H, OMe); 4,14
(s, 3H, OMe); 7,25 (t, 1H, H-6); 7,45 (d, 1H, H-5); 7,68 (t, 1H, H-7); 7,38 (d, 1H, H-
8).

13
C : 41,84 (N-Me); 61,45 (OMe en 4); 61,71 (OMe); 61,78 (OMe); 62,05 (OMe en 1);
115,41 (C9a); 115,70 (C5); 115,81 (C7); 127,08 (C8a); 127,12 (C8); 133,16 (C6);
137,36 (C2); 138,85 (C4a); 141,89 (C4); 144,90 (C10a); 154,76 (C1); 155,34 (C3);
173,48 (C9).

N
O
CH
3
OCH
3
OCH
3
OCH
3
OCH
3
1
65


La tclanthine

Cet alcalode de type acridone dimthoxyle, a t identifi dans la fraction F16.

Donnes RMN :

1
H : 3,82 (s, 3H, N-OMe); 3,92 (s, 3H, OMe en 1); 4,14 (s, 3H, OMe en 5); 6,00 (s, 2H, O-
CH
2
-O); 6,52 (s, 1H, H-4); 7,20 (d, 1H, H-6); 7,35 (t, 1H, H-7); 7,95 (d, 1H, H-8).

13
C : 42,58 (N-Me); 56,33 (OMe en 5); 60,83 (OMe en 1); 90,68 (C4); 101,63 (O-CH
2
-O) ;
112,14 (C9a); 114,28 (C6); 118,74 (C8); 122,11 (C7); 127,13 (C8a); 132,40 (C2);
134,40 (C10a); 142,31 (C4a); 145,17 (C1); 149,40 (C5); 153,62 (C3); 177,24 (C9).

La 6-mthoxytclanthine

Cet alcalode de type acridone trimthoxyle, tait contenu dans la fraction F20.

Donnes RMN :

1
H : 3,82 (s, 3H, N-OMe); 3,92 (s, 3H, OMe en 1); 4,14 (s, 3H, OMe en 5); 6,00 (s, 2H, O-
CH
2
-O); 6,52 (s, 1H, H-4); 7,20 (d, 1H, H-6); 7,35 (t, 1H, H-7); 7,95 (d, 1H, H-8).

13
C : 42,58 (N-Me); 56,33 (OMe en 5); 60,83 (OMe en 1); 90,68 (C4); 101,63 (O-CH
2
-O) ;
112,14 (C9a); 114,28 (C6); 118,74 (C8); 122,11 (C7); 127,13 (C8a); 132,40 (C2);
134,40 (C10a); 142,31 (C4a); 145,17 (C1); 149,40 (C5); 153,62 (C3); 177,24 (C9).

N
O
CH
3
OCH
3
OCH
3
H
3
CO
N
O
CH
3
OCH
3
OCH
3
2
3
66


IV.3.3.3 Discussion

Les premiers rsultats de ce criblage par RMN, confirment bien la prsence
dalcalodes dans la plante ; prsence qui avait t suppose dans un premier temps par
les tests phytochimiques. Par ailleurs, comme J. Vaquette [82, 84, 85] qui stait consacr
ltude de Teclea boiviniana de Madagascar, nous avons identifi dans les racines de T.
boiviniana des Comores, trois alcalodes de type acridone : la mlicopicine, la tclanthine
et la 6-mthoxytclanthine. Il est par consquent possible de proposer aujourdhui ces
trois alcalodes comme marqueurs potentiels de lespce. En outre, au vu des donnes de
la littrature et de nos premiers rsultats, il semble que lune des caractristiques des
espces du genre Teclea soit leur richesse en alcalodes.

IV.3.4. Activits biologiques des extraits non volatils des feuilles et des racines


Lactivit antipaludique a t value partir des extraits apolaires et polaires des
feuilles et des racines de Teclea boiviniana.

IV.3.4.2 Rsultats

Les rsultats du test anti-paludique sont prsents dans le tableau XXVII ci-dessous.

Tableau XXVII
Bilan du du test anti-paludique sur les extraits apolaires et polaires des feuilles et racines de Teclea bioviniana

Activit anti-paludique
Feuilles Racines
Extrait
apolaire
Extrait
polaire

Extrait
apolaire
Extrait
polaire
CI
50
(g/mL) 99 52 59 58

IV.3.4.3 Discussion

Une activit biologique est considre comme faible lorsque la concentration
inhibitrice 50% est comprise entre 50 <CI
50
< 100 g/mL (Tableau XVI p.49). Il apparat
donc que les quatre extraits tests offrent une activit anti-paludique faible. Remarquons
toutefois que les rsultats proches de la limite infrieure (entre 52 et 58 g/mL) pour
lextrait polaire des feuilles ainsi que pour les extraits apolaire et polaire des racines
67


demeurent intressants et peuvent laisser prsager de lexistence dans ces fractions, de
composs activit anti-paludique.

IV.3.4. Conclusion et perspectives

Teclea boivinia des Comores a, dans un premier temps, fait lobjet dune tude
dtaille de sa composition en composs volatils. Suite ces travaux, il apparat que la
plante renferme dans ses feuilles une huile essentielle dont on a pu identifier 90,8% de la
composition. Cette huile se particularise par sa forte teneur en linalol (55,9%), suivi de
trs loin par le 3-hexn-1-ol (7,6%), l-cadinol (7,0%) ainsi que le cis- et le trans-oxyde de
linalol (3,6 et 3,8% respectivement). Elle renferme en outre un compos non identifi
dtect hauteur de 8,1% quil serait bien lavenir, disoler et de purifier pour une
identification par RMN.
Lhuile essentielle de Teclea boiviniana (Baillon) H. Perr. forte teneur en linalol,
reconnu pour ses multiples usages (sdatifs, hypnotiques, ) [97, 106, 108-111], constitue
donc une possibilit de valorisation conomique de la plante. Il faudra bien entendu au
pralable, dune part vrifier la stabilit de la composition chimique de lhuile essentielle
en fonction de la saison et dautre part, dterminer la saison laquelle le rendement en
huile essentielle est le plus lev. Ces travaux doivent tre par ailleurs renforcs par une
valuation de lactivit biologique de cette huile partir dune gamme de souches
bactriennes.

Dans un deuxime temps, il a t men une amorce dtude sur les composs non
volatils contenus dans les feuilles et les racines de la plante. De ce travail prliminaire
effectu partir de tests phytochimiques et dun criblage par RMN, il en ressort que
Teclea boivinia, comme bon nombre des espces du genre Teclea, renferme des
alcalodes, en particulier la mlicopicine, la tclanthine et la 6-mthoxytclanthine,
trois alcalodes de type acridone. Cette tude des composs non volatils nen est qu ses
dbuts et mriterait dtre largement approfondie dans lavenir.

Enfin, les rsultats des tests anti-paludiques effectus sur les extraits apolaires et
polaires des feuilles et des racines nous laissent entrevoir un espoir disoler de Teclea
boiviniana un (ou des) compos(s) activit anti-paludique. Cet espoir est galement
renforc par les donnes de la littrature qui mettent en avant lactivit anti-plasmodique
dun grand nombre dalcalodes en particulier les alcalodes de type furoquinoline tels
que ceux isols despces du genre Teclea [87,89].

CONCLUSION GENERALE
69

Conclusion gnrale
Aprs une tude bibliographique sur les genres Laggera, Plectranthus, Ocotea et
Teclea, notre travail a t consacr ltude de quatre plantes collectes dans les les de
lUnion des Comores et plus particulirement lle Ngazidja (Grande Comore) : Laggera
alata var. alata ; Plectranthus amboinicus, Ocotea comoriensis et Teclea boiviniana. Le
premier objectif de notre tude tait la dtermination de la composition chimique de leurs
huiles essentielles. Le second objectif, non moins important, tait de dceler dans ces
plantes la prsence de substances bioactives volatiles ou non. Lintrt majeur de ce
travail tant de mettre en vidence une valorisation conomique potentielle de la flore
des Comores, permettant ainsi une diversification de la commercialisation de produits
haute valeur ajoute issus de plantes, essentiellement limits jusqu ce jour, lYlang
ylang, la vanille et le clou de girofle. Une exploitation de ces ressources naturelles de
faon durable et prenne contribuerait ainsi une amlioration de la vie de la population
de lArchipel des Comores, en particulier celle des femmes fortement impliques dans la
culture des plantes parfum.
De nos travaux, il en ressort que :

L'huile essentielle extraite des feuilles de Laggera alata var. alata des Comores
prsente une richesse particulire en sesquiterpnes (79,6%). Daprs la littrature, les
spcimens se dveloppant Madagascar renferment eux aussi majoritairement des
sesquiterpnes. Cependant, si les spcimens des Comores se caractrisent par de fortes
proportions de -caryophyllne, d-muurolne et d-caryophyllne, les spcimens de
Madagascar se distinguent quant eux par la prsence majoritaire du -slinne, et des 7-
pi--, - et -eudesmol. L. alata var. alata semble donc avoir une variation de la
composition de son huile essentielle en fonction de sa zone gographique de
dveloppement.

Lhuile essentielle des feuilles de Plectranthus amboinicus des Comores montre
non seulement une teneur importante en monoterpnes (58,6%) dont le -3-carne (15,0%)
et le camphre (22,2%) mais galement une quantit notable de composs aromatiques
(32,1%) tels que le carvacrol (23,0%) et lo-cymne (7,7%). Ces rsultats compars aux
donnes de la littrature ont permis de constater que dans la zone Ocan Indien, il se
dveloppe La Runion, lle Maurice et aux comores, un mme chemotype de
Plectranthus amboinicus caractris par de fortes teneurs en camphre et en carvacrol. Ce
chemotype se distinguant de ceux rencontrs en Inde. En outre, lhuile essentielle de
Plectranthus amboinicus des Comores prsente un rel potentiel de valorisation en tant
quagent de conservation naturel aussi bien dans lindustrie alimentaire que dans
70

Conclusion gnrale
lindustrie des cosmtiques. Ce rle dagent de conservation naturel, elle le doit son
activit antibactrienne dmontre sur les souches Gram (-) Escherichia coli et Gram (+)
Staphylococcus aureus et son activit anti-oxydante souponne en raison de sa
composition chimique ; les monoterpnes tels que l-terpinne, le -terpinne, le
carvacrol ou encore le thymol sont en effet reconnus pour leur activit anti-oxydante.
Face la ncessit de rduire les agents de conservation chimiques ou synthtiques, le
recours aux produits naturels tels que les huiles essentielles semble de plus en plus
apprci. Lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus en rpondant cette demande du
march actuel, prsente donc quelques espoirs de valorisation conomique.

Les huiles essentielles de feuilles, de fruits et dcorce dOcotea comoriensis
extraites en priode de fructification affichent toutes trois une richesse significative en
sesquiterpnes (80,4%, 78,6% et 84,7% respectivement pour les feuilles, les fruits et
lcorce). Cependant, chacune des huiles prsente une composition spcifique.
Lhuile essentielle des feuilles comprend majoritairement de loxyde de
caryophyllne (8,5%), mais aussi du eudesmol (21,6%), du slinne (6,7%), de lpi
cubbol (4,0%), du (E)-caryophyllne (4,0%), du transcalamnne (4,0%) et de lpi
cadinol (3,6%).
Lhuile essentielle des fruits se distingue quant elle, par de fortes proportions
dcadinol (15,9%), dpi-cadinol (14,9%), de cadinne (10,8%), dpoxyde
dhumulne II (3,6%), de muurolne (3,5%), dcubbne (3,4%) et de 1-10-di-pi-
cubnol (3,3%).
Enfin, lhuile dcorce est domine par loxyde de caryophyllne (11,3%), l
ylangne (8,2%), lpicadinol (6,1%), le muurolne et lmuurolne (5,1% et 5,0%,
respectivement), lamorphne (4,4%), le cadinne (3,3%), lcopane (3,1%), le
cadinne (2,8%) et le slinne (2,4%).
Par ailleurs, concernant plus spcifiquement lhuile essentielle dcorce tudie
pour un mme spcimen, deux moments du cycle vgtatif dO. comoriensis (en fruits et
au repos vgtatif), dimportantes diffrences au niveau de sa composition chimique
peuvent tre releves. Alors quen priode de fructification, lhuile essentielle (Ec1) est
largement domine par les sesquiterpnes (84,7%), en priode de repos vgtatif (Ec2), sa
proportion en monoterpnes devient nettement plus importante passant de 0,4% pour Ec1
67,9% pour Ec2. Ltude mene met donc en vidence une variation de la composition
chimique de lcorce en fonction du cycle vgtatif.
Enfin, lactivit antipaludique dcele pour lhuile essentielle dcorce dO.
comoriensis en priode de repos vgtatif (CI
50
= 10 g/mL) est encourageante et nous
71

Conclusion gnrale
incite poursuivre nos investigations pour une valorisation dO. comoriensis en tant que
source dagents anti-paludiques.

Lhuile essentielle extraite des feuilles de Teclea boiviniana prsente une
importante teneur en monoterpnes dont le linalol (55,9%) et ses drivs de type furanode
(cis- et trans-oxyde de linalol hauteur respective de 3,6 et 3,8 %). La prsence
majoritaire du linalol se rvle tre intressante non seulement dun point de vue
chimiotaxonomique mais aussi mdicinal. Ce compos est en effet connu pour ses
multiples usages (sdatifs, anxiolytiques). Avec la prsence majoritaire du linalol, il se
dessine donc une valorisation conomique possible pour T. boiviniana.
Par ailleurs, il a t men une amorce dtude sur les composs non volatils
contenus dans les feuilles et les racines de la plante. De ce travail prliminaire effectu
partir de tests phytochimiques et dun criblage par RMN, il en ressort que T. boivinia,
comme bon nombre des espces du genre Teclea, renferme des alcalodes, en particulier
la mlicopicine, la tclanthine et la 6-mthoxytclanthine, trois alcalodes de type
acridone. Cette tude des composs non volatils nen est qu ses dbuts et mriterait
dtre largement approfondie dans lavenir.
Enfin, les rsultats des tests anti-paludiques effectus sur les extraits apolaires et
polaires des feuilles et des racines nous laissent entrevoir un espoir disoler de Teclea
boiviniana un (ou des) compos(s) activit anti-paludique.

Ces travaux effectus sur quatre plantes de la Flore de lArchipel des Comores sont
porteurs despoir et mriteraient dtre poursuivis en multipliant en particulier les tests
dactivits sur les huiles essentielles extraites. Noublions pas en effet que les huiles
essentielles, en raison de leurs cinq proprits fondamentales connues (proprits
antiseptique, de dfloculation, de diurse, osmotique et biolectronique) offrent un large
spectre dapplications. Elles sont par exemple utilises dans les domaines de la
cosmtologie, de laromatisation culinaire ou encore des complments alimentaires. Par
ailleurs, du fait de leurs compositions chimiques varies, les huiles essentielles possdent
chacune une action unique : antiseptique, diurtique, tonique, antispasmodique,
antirhumatismale, antitussive, etc. Elles peuvent galement tre utilises dans la lutte
biologique. En tant quinsecticides naturelles, elles peuvent en effet servir de protection
des vgtaux notamment dans lagriculture biologique. Toutes ces proprits et
applications releves dans la littrature indiquent que nous avons tout intrt poursuivre
nos investigations dans le domaine des huiles essentielles ; en particulier des huiles
72

Conclusion gnrale
essentielles provenant de la Flore de lArchipel des Comores qui est loin davoir t
totalement explore, encore moins exploite.

PARTIE EXPERIMENTALE

74

Partie exprimentale
I Collecte

I.1 Laggera alata var. alata

La plante a t collecte au mois davril 2010, dans le village de Mwandzaza Djumbe ( 13
Km au Sud de Moroni), avec laide de Monsieur Yahaya Ibrahim, technicien botaniste au Centre
National de Documentation et de Recherche Scientifique (CNDRS, Moroni). Un chantillon est
conserv lHerbier National du CNDRS (Rfrence : RL 2780).

I.2 Plectranthus amboinicus

Les feuilles sches de la plante ont t achetes au march de Volo volo Moroni.

I.3 Ocotea comoriensis

La plante a t collecte aux mois de septembre 1998 et davril 2009, dans la fort de la
Grille au nord de lle de Ngazidja (Grande Comore), avec laide du Professeur Jean-Nol LABAT, du
Musum National dHistoire Naturelle (MNHN) de Paris (France), assist de Monsieur Yahaya Ibrahim
technicien botaniste au Centre National de Documentation et de Recherche Scientifique (CNDRS,
Moroni) et de Madame Ramadhoini Islame enseignant-chercheur la Facult des Sciences et
Techniques de lUniversit des Comores. Un chantillon dherbier a t dpos aux Herbiers du
CNDRS (Rfrence : RL 2881), de la Facult des Sciences de lUniversit des Comores, sis Moroni
et du MNHN (Paris- France).

I.4 Teclea boiviniana

Le matriel vgtal a t collect au mois davril, dans la zone de Maluzini, prs de la ville
dIconi 5 km au Sud de Moroni, en prsence de Madame Ramadhoini Islame, enseignant-chercheur
la Facult des Sciences et Techniques de lUniversit des Comores. Lidentification botanique a
t pratique par Yahaya Ibrahim, technicien botaniste, du Centre National de Documentation et de
Recherche Scientifique (CNDRS), sis Moroni. Un chantillon dherbier a t dpos aux herbiers du
CNDRS (Rfrence : RL 2725) et de la Facult des Sciences de lUniversit des Comores.
75

Partie exprimentale

II Les huiles essentielles

II.1 Extraction des huiles essentielles

II.1.1 Laggera alata var. alata

Lhuile essentielle a t extraite par hydrodistillation des feuilles sches de la plante
laide dun montage de type Clevenger quip dun ballon de 2 L. Aprs 5 heures dextraction,
lhuile essentielle est rcupre par dcantation et sche sur sulfate de magnsium.

II.1.2 Plectranthus amboinicus

Lhuile essentielle a t extraite par hydrodistillation des feuilles sches de la plante
laide dun montage de type Clevenger quip dun ballon de 2 L. Aprs 3 heures dextraction,
lhuile essentielle est rcupre par dcantation et sche sur sulfate de magnsium.

II.1.3 Ocotea comoriensis

Les huiles essentielles dOcotea comoriensis ont t extraites par hydrodistillation de la
matire sche (feuilles, fruits et corces), laide dun montage de type Clevenger quip dun
ballon de 2 L. Aprs 5 heures dextraction, les huiles essentielles ont t rcupres par
dcantation et sches sur sulfate de magnsium.

II.1.4 Teclea boiviniana

Lhuile essentielle a t extraite par hydrodistillation de la matire frache, laide dun
montage de type Clevenger quip dun ballon de 10 L. Aprs 4 heures dextraction, lhydrodistillat
dun volume de 80 mL, est soumis une extraction liquide-liquide par 4 x 50 mL de
dichloromthane. La phase organique contenant lhuile est ensuite sche sur sulfate de magnsium
et vapore sous pression rduite laide dun vaporateur rotatif.

II.2 Analyse des huiles essentielles

II.2.1 Laggera alata var. alata

Lanalyse quantitative de lhuile essentielle a t ralise laide dun chromatographe
DANI MONOCOLUM EXPENDER, quip dun dtecteur ionisation de flamme. La colonne utilise est
apolaire de type SE 54. Le tableau XXVIII rcapitule les conditions danalyse appliques.

76

Partie exprimentale

Tableau XXVIII
Analyse par CG-DIF de lhuile essentielle de Laggera alata var. alata (conditions opratoires)

Paramtres danalyse
Colonne

SE-54
Longueur

50 m
diamtre interne

0,32 mm
paisseur de phase 0,25 m
Gaz vecteur

azote
dbit constant 0,7 mL/min
Injecteur

Temprature

220C
Mode splitless
Pas de programmation du four

50C (5 min)

50C 225C (4C/min)
Quantit injecte

huile essentielle dilue dans le pentane (10%) 1 L
Dtecteur ionisation de flamme

Temprature

230C

Lanalyse qualitative de lhuile essentielle a t ralise par CG-SM partir dun
chromatographe Hewlett Packard 6890 Series coupl un spectromtre de masse Hewlett Packard
5970, quip dune colonne apolaire de type DB-5. Les conditions danalyse sont rcapitules dans
le tableau XXIX.

Tableau XXIX
Analyse par CG-SM des huiles essentielles de Laggera alata var. alata (conditions opratoires)

Paramtres danalyse
Chromatographe HP 6890 Series
Colonne DB-5

Longueur 30 m

diamtre interne 0,25 mm

Gas vecteur hlium

dbit constant 1 mL/min
Injecteur

Temprature 200C

Mode splitless
60C (5 min)

60C 210C (4C/min)

210C (5 min)
Quantit injecte

Dtecteur

Temprature 270C
Spectromtre de masse HP 5970
courant d'ionisation 70 eV
gamme de masse 30 550 uma

77

Partie exprimentale
Paralllement ces analyses par CG-SM, les indices de rtention relatifs (IRR) propres
chacun des composs ont t calculs sur la colonne utilise, partir dalcanes standards de C
8

C
22

Les identifications ont t effectues dune part, par comparaison des indices de rtention
relatifs avec ceux de la littrature [113-117] et dautre part, par comparaison des spectres de
masse avec ceux contenus dans la banque de donnes informatise NIST02, ainsi quavec ceux parus
dans la littrature [113-117].

II.2.2 Plectranthus amboinicus

DANI MONOCOLUM EXPENDER, quip dun dtecteur ionisation de flamme. La colonne utilise est
apolaire de type SE 54. Les conditions danalyse sont identiques celles appliques lhuile
essentielle de Laggera alata var. alata (tableau XXVIII p.76).

chromatographe Hewlett Packard 6890 Series coupl un spectromtre de masse Hewlett Packard
5970, quip dune colonne apolaire de type DB-5. Les conditions danalyse et didentification sont
identiques celles appliques lhuile essentielle de Laggera alata var. alata (tableau XXIX p.76).

II.2.3 Ocotea comoriensis

Analyse des huiles essentielles des corce Ec1, des feuilles Fe1 et des fruits Fr1

Lanalyse quantitative des huiles essentielles a t ralise laide dun chromatographe
Varian CP 3800 quip dun dtecteur ionisation de flamme. La colonne utilise est apolaire de
type SPB-5. Le tableau XXX rcapitule les conditions danalyse appliques.

Tableau XXX
Analyse par CG-DIF des huiles essentielles Ec1, Fe1 et Fr1 dOcotea comoriensis (conditions opratoires)

Paramtres d'analyse
Colonne SPB-5

Longueur 60 m


Gaz vecteur azote

dbit constant 0,7 mL/min
Injecteur

Temprature 250C

Mode splitless
Pas de programmation du four 60C 230C (4C/min)

230C (60 min)
Quantit injecte

huile essentielle dilue dans CH
2
Cl
2
0,1 L
Temprature 300C
78

Partie exprimentale
Lanalyse qualitative des huiles essentielles a t ralise par CG-SM partir dun
chromatographe Hewlett Packard 6890 coupl un spectromtre de masse Hewlett Packard 5972 et
partir dun chromatographe Hewlett Packard 6890N coupl un spectromtre de masse Hewlett
Packard 5973N. Deux colonnes capillaires ont t utilises : lune polaire de type Supelcowax
TM
10,
lautre apolaire de type SPB-5. Les conditions danalyse variables selon le type de colonne utilise,
sont rcapitules dans le tableau XXXI.

Tableau XXXI
Analyse par CG-SM des huiles essentielles Ec1, Fe1 et Fr1 dOcotea comoriensis (conditions opratoires)

Paramtres d'analyse
Colonnes
longueur (L), diamtre interne (di), paisseur de phase (e)
Supelcowax
TM
10 SPB-5
L : 60 m L : 60 m
di : 0,32 mm di : 0,32 mm
e : 0,25 m e : 0,25 m
Chromatographe HP 6890 HP 6890 N
Gaz vecteur Hlium hlium

dbit constant 0,8 mL/min 0,7 mL/min
Injecteur

Temprature 250C 250C

Mode Split split
Pas de programmation du four 50C 230C (4C/min) 60C 230C (4C/min)

230C (30 min) 230C (60 min)
Quantit injecte

huile essentielle non dilue 0,01 L 0,01 L
huile essentielle dilue dans CH
2
Cl
2
0,1 L 0,1 L
Spectromtre de masse HP 5972 HP 5973N
70 eV
gamme de masse 30 550 uma
30 550 uma

chacun des composs ont t calculs sur les diffrents types de colonne utilise, partir dalcanes
standards de C
8
C
22
pour la colonne apolaire (SPB-5) et de C
8
C
28
pour la colonne polaire
(Supelcowax).
masse avec ceux contenus dans les banque des donnes informatises NIST02 et Wiley7n, ainsi
quavec ceux parus dans la littrature [113-117].

Analyse de lhuile essentielle des corce Ec2

Shimadzu GC-14A quip dun dtecteur ionisation de flamme et dun intgrateur CR4A. La
colonne utilise est apolaire de type OV-101. Le tableau XXXII rcapitule les conditions danalyse
appliques.

79

Partie exprimentale
Tableau XXXII
Analyse par CG-DIF de lhuile essentielle Ec2 dOcotea comoriensis (conditions opratoires)

Paramtre d'analyse
Colonne OV101

Longueur 50 m


Gaz vecteur azote

dbit constant 1 mL/min
Injecteur

Temprature 210C

Mode splitless
Pas de programmation du four 50C 200C (5C/min)
Quantit injecte

Temprature 250C

chromatographe Hewlett Packard coupl un spectromtre de masse Hewlett Packard 5970 et
quip dune colonne capillaire apolaire de type DB-1. Les conditions sont rcapitules dans le
tableau XXXIII.

Tableau XXXIII
Analyse par CG-SM de lhuile essentielle Ec2 dOcotea comoriensis (conditions opratoires)

Conditions opratoires
Chromatographe HP 5970
Colonne DB-1

Longueur 25 m


Gas vecteur hlium

dbit constant 0,9 L/min
Injecteur

Temprature 180C

Mode splitless
50C (3 min)

50C 200C (3C/min)
Quantit injecte

huile essentielle dilue dans du pentane (2%) 1 L
Spectromtre de masse HP 5970

chacun des composs ont t calculs sur la colonne utilise, partir dalcanes standards de C
8

C
22

masse avec ceux contenus dans la banque de donnes informatise NIST02, ainsi quavec ceux parus
dans la littrature [113-117].
80

Partie exprimentale
II.2.4 Teclea boiviniana

Varian CP 3800 quip dun dtecteur ionisation de flamme. La colonne utilise est apolaire de
type SPB-5. Les conditions danalyse sont identiques celles appliques aux huiles essentielles Ec1,
Fe1 et Fr1 dOcotea comoriensis (tableau XXX p.77).

chromatographe Hewlett Packard 6890 coupl un spectromtre de masse Hewlett Packard 5972 et
partir dun chromatographe Hewlett Packard 6890N coupl un spectromtre de masse Hewlett
Packard 5973N. Deux colonnes capillaires ont t utilises : lune polaire de type Supelcowax
TM
10,
lautre apolaire de type SPB-5. Les conditions danalyse et didentification sont identiques celles
appliques aux huiles essentielles Ec1, Fe1 et Fr1 dOcotea comoriensis (tableau XXXI p.77).

III Teclea boiviniana : tude des composs non volatils des feuilles
et des racines

III.1 Obtention des extraits apolaires et polaires des feuilles et des racines

Le matriel vgtal (feuilles et racines) sch est tout dabord pulvris au moyen dun
broyeur (FRITSCH). La poudre sche est alors puise par des solvants de polarit croissante :
dichloromthane puis mthanol afin dobtenir les extraits apolaires et polaires respectivement.
Cette extraction squentielle est ralise grce un extracteur ASE 300 Dionex
.

Principe de lASE 300

L'ASE 300 est un systme automatique pour l'extraction rapide des composs organiques
partir d'chantillons solides ou semi-solides. L'ASE 300 acclre les processus traditionnels
d'extraction en utilisant des solvants des tempratures leves. Une pression est applique la
cellule d'extraction pour maintenir le solvant chauff l'tat liquide durant l'extraction. Aprs la
phase de chauffage, l'extrait est rinc et transfr de la cellule de l'chantillon vers le flacon de
rcupration. La figure 4 illustre les diffrents composants de l'ASE 300 et la figure 5 indique les
circuits fluidiques du solvant et du gaz.

81

Partie exprimentale

Figure 4 : Composants de lASE 300 (source : Dionex
)

Figure 5 : Circuits fluidiques du solvant et du gaz (source : Dionex
)

82

Partie exprimentale
Conditions dextraction appliques

Chauffage : 5 min.
Extraction statique : 6 min.
Durant le chauffage et la phase statique, la vanne statique s'ouvre priodiquement pour
maintenir la pression dans la cellule.

Rcupration : 100 % Volume
La vanne statique s'ouvre et l'extrait va vers le flacon de rcupration et un nouveau solvant
est pomp travers la cellule (normalement de 50 100 % du volume de la cellule).

Purge : 120 secondes

Le solvant restant est dplac avec le gaz de purge. Le flacon de rcupration contient tout
le solvant et les espces extraites de l'chantillon.

Cycles : 5 cycles pour une cellule
Pression exerce lors de lextraction : 1500 psi (103.38 bars)
Temprature 40C : temprature de chauffage

Rendements des extractions

Les extraits apolaires et polaires sont rcuprs aprs vaporation sous pression rduite des
contenus des flacons de rcupration de lASE 300. Les rendements dextraction sont donns dans le
tableau XXXIV ci-dessous.

Tableau XXXIV
Rendements des extractions aux solvants des feuilles et des racines de Teclea boiviniana

Partie de la plante tudie Feuilles Racines
Type dextrait
Extrait apolaire
(CH
2
Cl
2
)
Extrait polaire
(MeOH)
Extrait apolaire
(CH
2
Cl
2
)
Extrait polaire
(MeOH)
Rendements (%)* 1,6 11,7 1,5 6,3
* Calcul par rapport la masse de matire sche extraite

83

Partie exprimentale
III.2 Criblage phytochimique

Les extraits bruts sont dilus une concentration de 10 mg/mL de solvant adquat : CH
2
Cl
2

pour les extraits apolaires, MeOH pour les extraits polaires.
A laide dun capillaire, 10 L (soit 100 g) de la solution sont dposs sur une plaque CCM
(Macherey-Nagel) du type Silica gel 60 F
254
(avec indicateur de fluorescence UV
254
), le dpt doit
tre linaire environ 6 mm.

Deux mlanges dluants sont utiliss pour la migration :
- Cyclohexane/AcOEt 50:50 (v:v) pour les extraits apolaires (extraits CH
2
Cl
2
)
- CHCl
3
/MeOH/H
2
O 65:35:5 (v:v) pour les extraits polaires (extraits MeOH)
Les plaques sont alors rvles aux UV (254 et 365 nm) et par pulvrisation de diffrents
ractifs.

Liste des ractifs pulvriss

Test T1 : Dtection des coumarines
Prparer une solution thanolique d'actate de plomb 5 %. Pulvriser.
Les coumarines apparaissent sous forme de taches fluorescentes vertes 365 nm.

Test T2 : Dtection des valpotriates
Mlanger de lacide chlorhydrique concentr et de lacide actique glacial (8:2 v:v). Chauffer
aprs pulvrisation.
Les valpotriates apparaissent sous forme de taches brunes et bleues (VIS et UV 365 nm).

Test T3 : Dtection de substances amres, huiles essentielles, principes astringents, saponines
0,5 mL daldhyde anisique sont mlangs, dans lordre, 10 mL dacide thanoque glacial, puis
85 mL de MeOH et enfin 5 mL de H
2
SO
4
concentr, puis le ractif complet est pulvris.
La rvlation de taches colores est faite par chauffage.

Test T4 : Dtection des naphtoquinones
100 mg de bleu de mthylne sont dissous dans 100 mL d'thanol en y ajoutant 1 mL dacide
thanoque et 1 g de zinc. Pulvriser.
La prsence de naphtoquinone se dtermine par lapparition de taches bleues.

Test T5 : Dtection des larbutine et de phnols simples
Prparer une solution mthanolique 1 % (m/V) de 2,6-dichloroquinone-4-chloronimide.
Pulvriser puis exposer la plaque aux vapeurs dammoniaque.
Les phnols simples et larbutine apparaissent sous forme de taches violet-bleu intense en
visible.
84

Partie exprimentale
Test T6 : Dtection des cardnolides
2 volumes dune solution aqueuse de chloramine 1 % (m/V) sont mlangs 8 volumes dune
solution thanolique dacide trichloroactique 25 % (m/V). Pulvriser et chauffer.
La prsence de fluorescences bleu-clair et jaune-bruntre sont caractristiques des
cardnolides.

Test T7 : Dtection des flavonodes et des lactones sesquiterpniques
Une solution thanolique de chlorure daluminium (AlCl
3
) 5 % (m/V) est pulvrise.
A 365 nm, lapparition de taches jaunes aprs un lger chauffage indique une raction positive
pour les flavonodes et une fluorescence de couleurs diverses indique la prsence de lactones
sesquiterpniques (VIS et UV 365 : jaune, jaune fluorescent, orange ou bleu fluorescent).

Test T8 : Dtection des tanins et des polyphnols
La recherche des tanins et des polyphnols est effectue par pulvrisation d'un ractif base de
chlorure de fer (FeCl
3
) dilu 10 % (m/V) dans une solution de MeOH 50 %.
Les colorations sont trs variables allant du vert au brun-bleu.

Test T9 : Dtection des alcalodes
Prparer deux solutions :
Solution A : on dissout 0,85 g de nitrate basique de bismuth, 10 g dacide tartrique dans 40 mL
deau.
Solution B : on dissout 16 g diodure de potassium dans 40 mL deau.
Au moment de lemploi mlanger 5 mL de solution A + 5 mL de solution B + 100 mL deau + 20 g
dacide tartrique. (Ractif de Draggendorf).
La prsence dalcalodes est dcele par la prsence de taches oranges (qui disparaissent au
cours du temps).

Test T10 : Dtection des substances phnoliques et des flavonodes
Pulvriser dune solution aqueuse de Sel de bleu solide (FBS : Fast Blue Salt) 0, 5% puis dune
solution dhydroxyde de potassium 0,1 N.
Les substances phnoliques se caractrisent par la prsence de taches rouge-brun ou oranges.
Les flavonodes se caractrisent par des taches bleues ou bleu-violet.

Test T11 : Dtection des cardnolides
Prparer une solution thanolique 3% dacide 3,5-dinitrobenzoque mlange de la lessive de
soude (Ractif de Kedde). Pulvriser.
Ce ractif permet la dtection du cycle -lactone. Apparition de taches roses ou bleu-violet. Les
bufadinolides ne ragissent pas.

85

Partie exprimentale
Test T12 : Dtection des anthraquinones, des anthones et des coumarines
Prparer une solution thanolique dhydroxyde de potassium 5 % (m/V). Pulvriser. (Test de
Borntrger).
Lobservation de taches rouges la lumire visible avant et aprs chauffage indique une raction
positive lanthraquinone et lobservation de taches jaunes, indique la prsence danthrones.
- Anthraquinones : VIS + UV 365 = rouge
- Anthrones : VIS + UV 365 = jaune
- Coumarines : UV 365 = fluorescences bleues

Test T13 : Dtection de flavonodes, dalcalodes et de coumarines
Vaporiser successivement une solution mthanolique de diphnylboryloxy-thylamine 1 % et
une solution thanolique de polythylneglycol 4000 5 % (= PEG) (pour abaisser le seuil de
dtection) sur les plaques.
Les flavonodes apparaissent sous forme de taches fluorescentes, oranges, rouges, jaunes, bleues
et vertes sous UV 366 nm :
- flavonols (glycosides querctine, myrictine) : UV 365 : orange fluorescent
- flavonols (glycosides kaempfrol, isorhamntine) : UV 365 : vert-jaune fluorescent
- flavones (glycosides lutoline) : UV 365 : orange fluorescent
- flavones (glycosides apignine) : UV 365 : vert-jaune fluo
- alcalodes : UV 365 : intensification des fluorescences bleues
- coumarines : UV 365 : intensification des fluorescences bleues
- anthrones, anthranols : UV 365 : intense fluorescence jaune
- arbutine : UV 365 : intense orange ou bleu
- acides dicaffoylquiniques : UV 365 : bleu bleu-vert intense

Test T14 : Dtection de substances varies
(ractif gnral et polyvalent pour terpnes, substances amres, saponines et huiles essentielles)
Prparer deux solutions :
Solution A : un mlange de volumes gaux dune solution thanolique de vanilline 1 % avec une
solution dacide perchlorique 3 % (Ractif de Godin).
Solution B : solution thanolique dacide sulfurique 10%.
Pulvriser A puis B. Chauffer 100C jusqu apparition de taches de couleurs diverses la
lumire visible.
- Substances type terpnes et substances amres : VIS = bleu fonc ou rouge fonc
- Principes amers (got amer de lextrait) : VIS = brun-rouge, jaune-brun, vert fonc
- Huiles essentielles : VIS = bleu, brun, rouges

86

Partie exprimentale
III.3 Fractionnement et analyse de lextrait apolaire des racines

III.3.1 Fractionnement

Le fractionnement de lextrait apolaire des racines de Teclea boiviniana a t ralis par
Chromatographie Liquide Moyenne Pression (CLMP) au moyen dune pompe BCHI (C-606) quipe
dun module de contrle BCHI (C-615) et dun collecteur de fractions (C-606). La colonne de verre
borosilicat C-690 BCHI de diamtre interne 2,6 cm est remplie dune hauteur de silice (Macherey-
Nagel ; MN Kieselgel 60, 0,063-0,2 mm, 70-230 Mesh) de 46 cm. 3,5 g de lchantillon ont t pess,
dissous dans 20 mL de CH
2
Cl
2
et injects dans la boucle dinjection (20 mL). La colonne est lue
par un gradient dlution de polarit croissante Cyclohexane/AcOEt/MeOH (Figure 6).
A1/B1 et A1/B2
A1 : AcOEt
B1 : Cyclohexane B2 : MeOH
A1/B1
A1/B2
% B1 : Cyclohexane
100
100
30'
70
70
50
50
0
60'
120'
60'
120'
120'
120'
% B2 : MeOH
0
30'
50
50
60'
30'
100 100
50'
Figure 6 : Programmation du gradient dlution en CLMP (temps en minutes)

III.3.2 Analyse structurale par Rsonance Magntique Nuclaire (RMN)

Les spectres RMN ont t enregistrs sur le spectromtre Bruker Avance III 600 MHz
Ultrashield Plus de la plateforme de recherche et cyclotron de La Runion (CYROI).
Les frquences de fonctionnement pour les noyaux
1
H et
13
C sont respectivement 600,34 MHz et
150,91 MHz.
Les dplacements chimiques () sont indiqus en ppm et le solvant est utilis comme
rfrence interne (CDCl
3
).
La correspondance entre les lettres utilises en abrviations et la nature des massifs est la
suivante : s pour singulet, d pour doublet, t pour triplet, q pour quadruplet, dd pour doublet de
doublets, dt pour doublet de triplets, td pour triplet de doublets, dq pour doublet de quadruplets,
tdd pour triplet de doublets ddoubl, m pour multiplet.
A1 : AcOEt ; B1 : Cyclohexane ; B2 : MeOH
%B1 : 100
%B1 : 70
%B1 : 50
%B1 : 0
%B2 : 50
%B2 : 100
A1 / B1
A1 / B2
87

Partie exprimentale
IV Tests dactivit biologiques

IV.1 Activit antibactrienne

Ce test a t appliqu lhuile essentielle de feuilles de Plectranthus amboinicus.

IV.1.1. Matriel

Les souches bactriennes utilises sont Staphylococcus aureus CECT 239 (Gram positif) et
Escherichia coli CECT 405 (Gram ngatif).
Les diffrents milieux de culture utiliss sont : la Glose Eosine Bleu de Mthylne (milieu
slectif pour Escherichia coli), la Glose de Baird Parker (milieu slectif pour Staphylococcus
aureus), la glose Mueller Hinton, et le bouillon Trypticase Soja (TSB).
Les anneaux mtalliques circulaires en inox ont un diamtre uniforme de 8 mm.

IV.1.2. Mthode

Prparation de linoculum : Pour la prparation dun inoculum de 10
9
UFC/mL, deux ou trois
colonies de la souche sont prleves et mises en suspension dans 10 mL de TSB puis incube 37C
pendant 18h. Des dilutions sont ensuite ralises en cascade dans des tubes contenant 10 mL de TSB
pour lobtention dun inoculum de 10
7
UFC/mL. Le TSB est pralablement rchauff 37C afin
dviter tout choc thermique [118].

Test de sensibilit aux huiles essentielles par la technique de diffusion en milieu solide : Le
milieu de culture a t chauff 100C jusqu liqufaction complte, puis laiss refroidir jusqu
une temprature de 55C. Ensuite, il a t ensemenc par la suspension bactrienne frachement
prpare raison de 1%, puis rparti dans les boites de ptri raison de 20 mL/bote. Celles-ci ont
t laisses se durcir sur un support dont lhorizontalit a t pralablement vrifie laide dun
niveau bulle dair.
Les cylindres en inox ont t remplis chacun par 50 L de lchantillon (dilutions prpares partir
de lhuiles essentielle pure dans de leau physiologique 0,2% dagar), dont un cylindre a t
rserv pour tmoin (eau physiologique 0,2% dagar). Enfin, les botes ont t incubes pendant
18 24h 37C.
Au terme de la priode dincubation, les botes de ptri ont t rcupres et les diamtres des
zones dinhibition ont t mesurs.

Dtermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) : En milieu solide, lhuile
essentielle est incorpore dans un milieu glos (Mueller Hinton) coul en botes de Ptri. La
surface de la glose est ensemence avec un inoculum des souches tudier. Aprs incubation 18
24h 37C, la CMI de chaque souche est dtermine par l'inhibition de la croissance sur le milieu
88

Partie exprimentale
contenant la plus faible concentration de lhuile essentielle. La CMI permet de dfinir la sensibilit
ou la rsistance des souches bactriennes aux substances tudies.

IV.2 Activit larvicide

Test appliqu lhuile essentielle dcorce Ec2 dOcotea comoriensis :

Les ufs dAedes aegypti ont t incubs pendant 24h dans leau courante 25C. Vingt
larves sont ensuite places dans 10 mL deau, auxquels est ajoute lhuile essentielle dilue dans du
DMSO. La concentration finale de DMSO ne doit pas excder 1%. Le tout est mis sous incubation
25C. Le nombre de larves encore vivantes peut tre valu aprs 1h et 24h par simple comptage
visuel. [119]

IV.3 Activit antipaludique


Lactivit anti-paludique a t teste sur la souche Plasmodium falciparum selon le
protocole dvelopp en 1979 par Desjardins et al. [74], et en 1996 par Frappier et al. [75].

Test appliqu aux extraits bruts de Teclea boiviniana :

Deux souches de Plasmodium falciparum, lune sensible la chloroquine (3D7) et lautre
rsistante ont t testes suivant la procdure dcrite en 2002 par Frdrich et al [73].

IV.4 Activit antioxydante


Le test mesurant lactivit antioxydante de lhuile essentielle est bas sur le principe de la
rduction de radicaux libres fournis par le 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyle (DPPH). [120]
10L d'une solution dhuile essentielle sont dposs sur une plaque de chromatographie sur
couche mince de type Silicagel 60 F254 (Merck). La plaque est dveloppe dans le systme de
solvant : Butanol / Acide actique / Eau 65:25: 15 (v:v). Aprs migration, les plaques sont sches
afin dliminer toute trace de solvants puis rvles l'aide d'une solution de DPPH la
concentration de 2 mg/mL (M/V) dans le mthanol. La lecture seffectue aprs 30minutes. En
prsence de composs possdant des proprits antioxydantes, le DPPH est rduit et passe de la
couleur pourpre au jaune.

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96

Listes des tableaux, des figures et des clichs
Liste des Tableaux

Tableau I : Utilisations d'espces du genre Laggera en mdecine traditionnelle p.16
Tableau II : Composs volatils majoritaires (% > 2) isols d'espces du genre Laggera p.17
Tableau III : Activits biologiques despces du genre Laggera p.18
Tableau IV : Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles de Laggera alata
var. alata p.20
Tableau V : Classement par composition chimique significative des espces du genre
Laggera p.22
Tableau VI : Utilisations despces du genre Plectranthus en mdecine traditionnelle p.26
Tableau VII : Composition chimique des huiles essentielles des espces du genre
Plectranthus p.27
Tableau VIII : Composition chimique de lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus
des Comores p.29
Tableau IX : Valeurs moyennes du diamtre d'action inhibitrice en fonction des
concentrations de lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus p.31
Tableau X : Utilisations despces du genre Ocotea en mdecine traditionnelle p.37
Tableau XI : Composs volatils majoritaires (% > 3) isols d'espces du genre Ocotea p.38
Tableau XII : Activits biologiques des huiles essentielles despces du genre Ocotea p.39
Tableau XIII : Rendement en huile essentielle de lespce Ocotea comoriensis p.40
Tableau XIV : Composition chimique des huiles essentielles des corces (Ec1, Ec2), des
feuilles (Fe1) et des fruits (Fr1) de lOcotea comoriensis p.42
Tableau XV : Spectres de masse des composs C1-C5 non identifis dtects dans les
huiles essentielles de lOcotea comoriensis p.46
Tableau XVI : Critre de slection des activits biologiques p.49
Tableau XVII : Utilisations despces du genre Teclea en mdecine traditionnelle p.53
Tableau XVIII : Composs volatils majoritaires (>2%) isols despces du genre Teclea p.54
Tableau XIX : Alcalodes, type acridone, isols despces du genre Teclea p.55
Tableau XX : Alcalodes, type furoquinoline, isols despres du genre Teclea p.56
Tableau XXI : Autres alcalodes isols despces du genre Teclea p.57
Tableau XXII : Terpnes isols despces du genre Teclea p.57
Tableau XXIII : Activits biologiques des extraits volatils et non volatils despces du
genre Teclea p.58
Tableau XXIV : Composition chimique de lhuile essentielle des feuilles de Teclea
boiviniana p.59
Tableau XXV : Spectres de masse des composs C6 et C7 non identifis dtects dans
lhuile essentielle des feuilles de Teclea bioviniana p.60
Tableau XXVI : Bilan du criblage chimique sur les extraits apolaires et polaires des
feuilles et racines de Teclea bioviniana p.62
Tableau XXVII : Bilan du du test anti-paludique sur les extraits apolaires et polaires des
feuilles et racines de Teclea bioviniana p.66
Tableau XXVIII : Analyse par CG-DIF de lhuile essentielle de Laggera alata var. alata
(Conditions opratoires) p.76
97

Listes des tableaux, des figures et des clichs
Tableau XXIX : Analyse par CG-SM des huiles essentielles de Laggera alata var. alata
Tableau XXX : Analyse par CG-DIF des huiles essentielles Ec1, Fe1 et Fr1 dOcotea
comoriensis (Conditions opratoires) p.77
Tableau XXXI : Analyse par CG-SM des huiles essentielles Ec1, Fe1 et Fr1 dOcotea
Tableau XXXII : Analyse par CG-DIF de lhuile essentielle Ec2 dOcotea comoriensis
Tableau XXXIII : Analyse par CG-SM de lhuile essentielle Ec2 dOcotea
Tableau XXXIV : Rendements des extractions aux solvants des feuilles et des racines de
Teclea boiviniana p.82

Liste des Figures

Figure 1 : Courbe dinhibition dEscherichia coli en fonction de la dilution de lhuile
essentielle de Plectranthus amboinicus p.32

Figure 2 : Courbe dinhibition de Staphylococcus aureus en fonction de la dilution de
lhuile essentielle de Plectranthus amboinicus p.32

Figure 3 : Biosynthse du linalol et de ses drivs cis-trans-oxydes de linalol (furanodes) p.61

Figure 4 : Composants de lASE 300 (source : Dionex
) p.81

Figure 5 : Circuits fluidiques du solvant et du gaz (source : Dionex
) p.81

Figure 6 : Programmation du gradient dlution en CLMP (temps en minutes) p.86

Liste des Clichs

Clich 1 : Laggera alata var alata [M. SAID HASSANI] p.14

Clich 2 : Plectranthus amboinicus [H. ABDEREMANE] p.25

Clich 3 : Feuilles sches de Plectranthus amboinicus au march de Volo volo
[H. ABDEREMANE] p.25

Clich 4 : Feuilles et Fruits dOcotea comoriensis [M. SAID HASSANI] p.36

Clich 5 : Ecorces dOcotea Comoriensis [M. SAID HASSANI] p.36

Clich 6 : Teclea boivniana [M. SAID HASSANI] p.52

Valorisation de quatre plantes endmiques et indignes des Comores
Rsum
Ce mmoire comprend quatre chapitres, chacun tant consacr ltude chimique et biologique dune plante
endmique ou indigne de l'Archipel des Comores: Laggera alata var. alata (Asteraceae), Plectranthus amboinicus
(Lamiaceae), Ocotea comoriensis (Lauraceae) et Teclea boiviniana (Rutaceae).
Dans le premier chapitre consacr la composition chimique de l'huile essentielle des feuilles de Laggera alata var.
alata provenant des Comores, une richesse particulire en sesquiterpnes a t dmontre (79,6%). Daprs la littrature,
les spcimens se dveloppant Madagascar renferment eux aussi majoritairement des sesquiterpnes. Cependant, si les
spcimens des Comores se caractrisent par de fortes proportions de -caryophyllne, d-muurolne et d-caryophyllne,
les spcimens de Madagascar se distinguent quant eux par la prsence majoritaire du -slinne, et des 7-pi-, et -
eudesmol. Laggera alata var. alata semble donc avoir une variation de la composition de son huile essentielle en fonction de
sa zone gographique de dveloppement.
Le deuxime chapitre prsente la composition de lhuile essentielle des feuilles de Plectranthus amboinicus. Cette
huile essentielle montre non seulement une teneur importante en monoterpnes (58,6%) dont le -3-carne (15,0%) et le
camphre (22,2%) mais galement une quantit notable de composs aromatiques (32,1%) dont le carvacrol (23,0%) et lo-
cymne (7,7%). De plus, les analyses biologiques pratiques sur lhuile essentielle de P. amboinicus ont mis en vidence une
activit antibactrienne trs intressante (Gram + et Gram -) vraisemblablement due la prsence des composs
majoritaires cits prcdemment.
Dans le troisime chapitre, la comparaison des huiles essentielles de feuilles, de fruits et dcorce dOcotea
comoriensis extraites en priode de fructification a globalement rvl pour ces trois huiles essentielles une richesse
significative en sesquiterpnes (80,4%, 78,6% et 84,7% respectivement pour les feuilles, les fruits et lcorce). Cependant,
chacune des huiles prsente une composition spcifique. Par ailleurs, linfluence de la saison sur la composition chimique de
lhuile essentielle dcorce a t tudie. Lcorce de la plante collecte en priode de fructification renferme une huile
essentielle riche en oxyde de caryophyllne (11,3%), -ylangne (8,2%) et pi--cadinol (6,1%) alors que lhuile essentielle
dcorce extraite en priode de repos vgtatif contient majoritairement des monoterpnes : 18,1% de camphne, 13,8%
dactate de bornyle, 13,7% d-pinne et 8,4% de -pinne. Une activit antipaludique a t galement dcele sur lhuile
essentielle dcorce dO. comoriensis en priode de repos vgtatif (CI
50
= 10 g/mL).
Le quatrime chapitre dcrit les rsultats obtenus pour lhuile essentielle extraite des feuilles de Teclea
boiviniana. Les analyses chimiques ont montr une importante teneur en monoterpnes dont le linalol (55,9%) et ses drivs
de type furanode (cis- et trans-oxyde de linalol hauteur respective de 3,6 et 3,8 %). Le linalol se rvle donc tre un
marqueur chimiotaxonomique de cette espce. Il est, galement, intressant de signaler que ce compos est connu pour ses
effets sdatifs et anxiolytiques. Une premire approche de la composition chimique des extraits non volatils apolaires et
polaires des feuilles et des racines de la plante a t ralise par le biais de criblages phytochimiques et danalyses RMN.

Mots-cls : Comores, plantes endmiques et indignes, Laggera alata var. alata, Ocotea comoriensis, Plectranthus
amboinicus, Teclea boiviniana, utilisation traditionnelle, huiles essentielles, activits biologiques.

Valorisation of four endemic and indigenous plants from Comoro Islands
Abstract
This manuscript includes four chapters, each of them is devoted to the chemical and biological study of an endemic
or indigenous plant of Comoro archipelago: Laggera alata var. alata (Asteraceae), Plectranthus amboinicus (Lamiaceae),
Ocotea comoriensis (Lauraceae) and Teclea boiviniana (Rutaceae).
In the first chapter the chemical composition of Laggera alata var. alata from Comoros is discribed. In the leaf
essential oil, a high sesquiterpene content was found (79.6%) among which -caryophyllene, -muurolene and -
caryophyllene. However, the literature mentions that the specimens growing in Madagascar contains chiefly -selinene, and
7-epi-, and -eudesmol. So, this study demonstrates that there is a possible relationship between essential oil composition
and geographical location.
The second chapter reports the chemical composition of the essential oil of Plectranthus amboinicus. This essential
oil presented not only, a high content of monoterpenes (58.6%) such as -3-carene (15.0%) and camphor (22.2%), but also, a
large amount of aromatic compounds (32.1%) such as carvacrol (23.0%) and o-cymene (7.7%). Besides, biological analyses
carried out on P. amboinicus essential oil revealed very interesting antibacterial activity (Gram + and Gram -) probably due
to the components cited above.
In the third chapter, the composition of the essential oils from leaves, fruits and bark of Ocotea comoriensis
collected during fruit development stage is discussed. The three oils showed a significant sesquiterpene content (80.4%,
78.6% and 84.7 respectively for leaves, fruits and bark). However, each oil was found to possess its specific composition.
Besides, season influence on bark essential oil composition was studied. The principal components from bark oil collected
during fruit stage development were found to be caryophyllene oxide (11.3%), -ylangene (8.2%) and epi--cadinol (6.1%)
while in the bark oil collected during vegetative stage, the monoterpenes camphene (18.1%), bornylacetate (13.8%), -
pinene (13.7%) and -pinene (8.4%) were the main compounds. Moreover, antimalaria activity was detected in Ocotea
comoriensis bark essential oil collected during vegetative stage (IC
50
= 10 g/mL).
The fourth chapter describes the results obtained for leaves essential oil of Teclea boiviniana. Chemical analysis
showed a high content of monoterpenes among which linalool (55.9%) and linalool furanoid type derivatives (cis- et trans-
linalool oxide respectively 3.6 and 3.8 %). Linalool could therefore be used as a taxonomic marker of this species. It is also
interesting to note that linalool is well-known for sedative and anxiolytic effects. Preliminary approach of chemical
composition of apolar and polar nonvolatile extracts of T. boiviniana leaves and roots was also carried out by using
phytochemical screening and NMR.

Key words: Comoros, endemic and indigenous plants, Laggera alata var. alata, Ocotea comoriensis, Plectranthus
amboinicus, Teclea boiviniana, traditional uses, essential oils, biological activities.

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N dordre Anne 2010

Laboratoire de Microbiologie de lInstitut Agronomique et Vtrinaire (IAV) Hassan II, Rabat

InstituteofPharmaceuticalChemistry,UniversitdeVienne,Autriche. (Tests anti-oxydants)

Institut de Pharmacognosie et Phytochimie (IPP) de lEcole de Pharmacie de lUniversit de Lausanne,

LaboratoiredePharmacognosie(B36)delUniversitdeLige,Belgique. (Tests anti-paludiques)

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