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" Si los amantes del vino y del amor van al infierno..., vaco debe estar el paraso." Omar Khayyam, Astrnomo Persa (Siglo XI)
NOCIONES BSICAS DE MICROBIOLOGA Las primeras formas de vida que aparecieron en la tierra fueron unos seres unicelulares, de una sola clula, de pequeas dimensiones, que se desarrollaron en el agua. A partir de estas formas primarias de vida, difciles de clasificar, como animales o vegetales, aparecieron en etapas sucesivas seres de estructuras ms complicadas. Desde el agua se extendieron a toda la tierra, aire, suelo, ros, lagos, etctera. Hoy en da, esas formas primitivas, iniciadoras de la vida en nuestro planeta, siguen teniendo un papel decisivo, porque realizan acciones que, desde el punto de vista humano, se consideran benficas como por ejemplo: Descomponer los animales muertos. Descomposicin de la materia orgnica (vegetal o animal), presente en el suelo, hacindola asimilable para las plantas. Algunos de estos microorganismos (rizobium y azobcter) son capaces de fijar el nitrgeno atmosfrico, que despus es utilizado por las plantas para formar sus propias estructuras protenicas. Se utilizan en procesos de elaboracin de bebidas y alimentos (vino, cerveza, vinagre, yogur, queso, etctera). Entre sus acciones dainas, algunos microorganismos (slo unos pocos entre los miles existentes), pueden provocar intoxicaciones, enfermedades e incluso la muerte de los seres superiores (plantas, animales y seres humanos). En el caso de la especie humana, muchas de estas intoxicaciones o enfermedades son causadas por microorganismos (salmonela, clostridium) que estn presentes en los alimentos mal conservados, manipulados o que han sido contaminados en los procesos de elaboracin y distribucin.
Biotecnologa alimentaria La biotecnologa alimentaria se define como el conocimiento y utilizacin de los microorganismos para producir ms y mejores alimentos, adems de la manipulacin gentica en plantas y animales con los mismos fines. Aunque es muy reciente el uso de la palabra biotecnologa en la industria alimentaria, desde hace miles de aos el hombre ha utilizado los microorganismos para la obtencin de determinados alimentos y bebidas. Algunos ejemplos son: La fermentacin del mosto de uva para producir vino, La produccin de cerveza a partir de cebada tostada, lpulo, agua y levaduras. El uso de bacterias lcticas para la acidificacin de la leche para obtener yogur. Fermentacin actica para la produccin de vinagres.
Microorganismos: Definicin y clasificacin Se conocen como microorganismos todos los seres vivos, de tamao diminuto, que no se pueden observar a simple vista. Suelen tener una estructura unicelular y es difcil clasificarlos en el reino vegetal o animal. Debido a su tamao tan pequeo, se utiliza como unidad de medida la micra, que es la milsima parte de un milmetro (0,001 milmetros). Su clasificacin ms comnmente aceptada es la siguiente: CURSO: PRODUCCIN DE VINOS Por: Jse Carlos Garca Giraldo josecarlos137@hotmail.com 2 - Bacterias. - Levaduras. - Mohos. - Virus. Los microorganismos se encuentran presentes en el aire, agua, suelo, plantas, animales, etc., y su desarrollo, crecimiento y reproduccin depende de ciertos factores, como son la posibilidad de encontrar un sustrato que les proporcione los nutrientes necesarios (protenas, sales), temperaturas adecuadas y humedad suficiente. Al igual que los seres superiores, los microorganismos se han clasificado en familias, gneros y especies, teniendo en cuenta sus caractersticas externas, tales como: - Tamao. Forma. - Movilidad. - Apariencia. Etctera. Se les da nombres latinos (bacillus, enterobacter, leuconostoc, proteus, aspergillus, penicillium, etctera). Las bacterias, aunque extendidas por toda la tierra, son muy frecuentes en el agua, mientras que las levaduras son poco comunes en medios acuosos, estando presentes en el suelo, sobre la cubierta de los frutos, hojas, etctera.
EL PAPEL DE LOS MICROORGANISMOS EN LA ELABORACIN DEL VINO INTRODUCCIN Sin microorganismos no hay vino ya que ellos son los responsables de la transformacin del mosto de la uva en vino. Las levaduras son los microorganismos que por medio de un proceso bioqumico denominado fermentacin alcohlica, transforman los azcares del mosto de la uva en etanol, C02 y otros compuestos qumicos, es decir, transforman el mosto en vino. Desde principios del siglo XX se sabe que en la elaboracin de algunos vinos pueden intervenir, adems de las levaduras, otros microorganismos cuya misin es transformar el cido mlico del vino en cido lctico. Esta transformacin, que se denomina fermentacin malolctica se lleva a cabo por diversas especies de bacterias lcticas, es considerada una fermentacin que suaviza el vino, y que conviene a todos los vinos tintos y a aquellos vinos blancos cuyo contenido en cido mlico es muy elevado Ahora se sabe que, la transformacin del jugo de la uva en vino es realizada por la presencia de unos microorganismos llamados levaduras y que se consideran beneficiosos, tambin existen microorganismos que causan alteraciones en el vino y que se consideran perjudiciales.
Los microorganismos relacionados con el vino pueden ser distribuidos en 4 grupos: Las levaduras, que son las encargadas de realizar la fermentacin alcohlica Las bacterias lcticas, que llevan a cabo la fermentacin malolctica. Las bacterias acticas, que junto con algunas levaduras y algunas bacterias lcticas son causantes de alteraciones en los vinos. Sobre ellas se tratar al hablar de las enfermedades de los vinos. Los mohos, algunas de cuyas especies pueden desarrollarse sobre la uva y en las vides causando mermas importantes en la cantidad y en la calidad de la uva. Por entender que son microorganismos ms relacionados con la viticultura que con la enotecnia no se abordar su estudio. CURSO: PRODUCCIN DE VINOS Por: Jse Carlos Garca Giraldo josecarlos137@hotmail.com 3
LAS LEVADURAS Caractersticas generales Son seres de mayores dimensiones que las bacterias, tambin unicelulares y con formas variables (esfricas, ovaladas, cilndricas). Pueden tener de dos a 100 micras de longitud y de dos a 10 micras de dimetro: Al igual que las bacterias, tienen ncleo, citoplasma, pared celular y membrana citoplasmtica. El ncleo no tiene membrana de separacin y queda incluido dentro del citoplasma. En este ltimo puede haber una o ms vacuolas, que son bolsas con material de reserva (azcares, grasas) o con productos de desecho del metabolismo celular. La membrana citoplasmtica es semipermeable, dejando pasar los elementos nutritivos que necesita la clula y permitiendo la salida de los desechos de la misma. Las levaduras se reproducen de dos formas: 1. Por gemacin, a la levadura le sale una protuberancia con formacin de un nuevo ncleo y compartiendo el citoplasma durante un perodo de tiempo. Despus se forma una doble pared de separacin y finalmente se forman dos organismos completos En muchos casos, las nuevas clulas formadas siguen unidas a la original formando a su vez otras, con lo que se llegan a formar racimos. 2. Por esporas, que se forman dentro de la clula que se abre cuando stas maduran. Esas esporas se desarrollan posteriormente, reproducindose por gemacin si las condiciones del medio son adecuadas. Las levaduras se encuentran presentes de forma abundante en suelos, frutas, verduras, etctera. Las levaduras son hongos unicelulares pertenecientes en su mayor parte al grupo de los Ascomicetos, es decir, al grupo de hongos capaces de formar esporas contenidas en el interior de un asca. Se hallan diseminadas por toda la naturaleza. Llegan a la uva transportadas por el viento, los insectos y las aves, quedando retenidas en la pruina, una sustancia de consistencia cerosa que recubre la piel de la uva y se forma durante el proceso de maduracin. De ah pasan al mosto cuando se rompe el grano de uva en las operaciones de estrujado y prensado. Su morfologa es uno de los caracteres utilizados en su clasificacin, como tambin su forma de reproduccin y sus caractersticas bioqumicas Algunas de las caractersticas usadas para la clasificacin de las levaduras son: El tipo de azcares que pueden fermentar. El rendimiento en la produccin de alcohol, hay variedades que para producir 1 grado de alcohol consumen de l7 a 18 g de azcar, otras en cambio de menor rendimiento necesitan de 21 a 22 g. Su poder alcoholgeno, o grado mximo de alcohol que pueden resistir, algunas detienen su actividad a los 5 % Vol. mientras que otras llegan a 17 o 18% Vol. Formacin de productos secundarios durante la fermentacin. Resistencia al anhdrido sulfuroso SO 2 , Capacidad para asimilar diferentes sustancias nitrogenadas.
CURSO: PRODUCCIN DE VINOS Por: Jse Carlos Garca Giraldo josecarlos137@hotmail.com 4 CLASIFICACIN DE LAS LEVADURAS La clasificacin de las levaduras es complicada aunque el desarrollo de nuevas tcnicas de clasificacin basadas en la Biologa Molecular, particularmente en el anlisis de ADN ha permitido separar o reagrupar las especies. Las levaduras pertenecen al Reino Fungi y dentro de l a la divisin Eumicota que agrupa a los denominados hongos verdaderos. Dentro de esta divisin las levaduras se incluyen en 2 de las 5 subdivisiones de los Eumicetos , la Ascomycotina representada por las levaduras capaces de producir ascosporas, llamadas por ello esporgenas, y la Deuteromycotina representada por las levaduras incapaces de formar esporas llamadas por ello asporgenas o no esporgenas. Los gneros de levaduras esporgenas, incluidos todos ellos en la familia Saccharomycetaceae, se distribuyen en 3 subfamilias. Los de las levaduras no esporgenas constituyen la familia Cryptococeaceae. Conviene aclarar que los Deuteromicelos constituyen en realidad un "cajn de sastre" en el que se incluyen levaduras haploides que tienen su correspondiente fase diploide clasificada en los Ascomicetos. As por ejemplo la especie Kloeekera apiculata es la fase imperfecta (o haploide) de la especie hanseniaspora uvarum. Por lo tanto ambas especies son la misma. Asimismo conviene resear que por debajo de los taxones gnero y especie las levaduras pueden ser clasificadas en subespecies y variedades que a menudo adquieren el rango de especies tras nuevas revisiones taxonmicas, o por el contrario, varias especies son unificadas en una sola como subespecies de la misma con lo que la clasificacin se complica an ms y se incrementa el nmero de sinonimias.
ESPECIES DE LEVADURAS MS IMPORTANTES EN ENOLOGIA Manteniendo la distincin hecha entre levaduras esporgenas y asporgenas, a continuacin se detallan algunas de las especies mas destacadas para la enologa. Entre las levaduras espargenas denominadas frecuentemente de segunda fase por que aparecen cuando la fermentacin est avanzada con capacidad para producir gran cantidad de etanol sobresalen:
Saccharomyces cerevisiae (S. ellipsoideus) es una de las ms importantes en la produccin de vinos ya que es la responsable de la fermentacin de la mayor parte de los azcares del mosto. Su poder alcoholgeno es elevado 17% y es bastante resistente al sulfuroso (SO 2 250 mg / L),
Saccharomyces bayanus (S oviformis), es semejante a la anterior resiste tambin 250 mg de SO 2 / L, pero su poder alcoholgeno es mayor pudiendo superar los 18%. Es la levadura tpica de las etapas finales de la fermentacin y normalmente es la responsable de la refermentacin de los vinos embotellados debido a su resistencia al alcohol.
Saccharomyces acidifcienes (S. baillii), Tiene un poder alcoholgeno bajo, 10%, pero se caracteriza por su resistencia al SO 2 , (250 a 400 mg / L.) Lo que la hace ideal para iniciar la fermentacin de mostos muy sulfitados, comportndose CURSO: PRODUCCIN DE VINOS Por: Jse Carlos Garca Giraldo josecarlos137@hotmail.com 5 en estos casos como levadura de primera fase.
Torulaspora rosei (S. rosei) tiene un poder alcoholgeno (de 8 a 14 % y su caracterstica mas importante es que realiza la fermentacin de una manera muy lenta, de esta manera la acidez voltil que se produce es muy baja.
Entre las levaduras asporgenas, generalmente de primera fase, que se caracterizan por ser iniciadoras de la fermentacin alcohlica y producir gran cantidad de compuestos secundarios enriquecedores del sabor y aroma del vino, se destacan:
Kloeckera apiculata, es la forma imperfecta o haploide de Hanseniospora uvarum. Junto con S. cerevisiae es la levadura ms frecuentemente encontrada en los mostos. Su poder alcoholgeno es muy bajo (4-5) y tambin lo es su rendimiento en alcohol pues para producir 1% de alcohol necesita de 21 a 22 g de azcar. Produce mucha acidez voltil por lo que no es apreciada en las fermentaciones. Se la elimina fcilmente con el sulfitado dada su baja resistencia al SO 2 .
Cndida stellata (Torulopsis stellata, T. bacillaris) tiene un poder alcoholgeno de 10 a 11 y se caracteriza fundamentalmente por aparecer con ms frecuencia en mostos de uvas atacadas de podredumbre
UTILIZACIN DE LAS LEVADURAS EN V INIFICACIN La fermentacin del mosto suele desencadenarse de forma natural y espontnea a partir de las propias levaduras presentes en el mosto, a este tipo de fermentacin se le denomina fermentacin espontnea. Se caracteriza porque en el transcurso de la misma intervienen varias especies de levaduras, algunas de las cuales coexisten en el tiempo y otras se suceden secuencialmente en funcin de su poder alcoholgeno. En la sucesin de especies primero suelen intervenir las levaduras de primera fase generalmente asporgenas y luego las de segunda fase en su mayora esporgenas, de modo que S. cerevisiae domina durante la mayor parte del tiempo, pudiendo ser desplazada al final por S. bayanus. Cuando un productor de vinos desea realizar la fermentacin con un tipo concreto de levaduras, se recurre a la siembra de levaduras seleccionadas al mosto, para lo cual se emplean levaduras autctonas, preparando lo que se ha llamado pie de cuba, o bien levaduras comerciales. En el primer caso se parte de una fraccin pequea de la propia vendimia, las uvas ms sanas, cuyo mosto se deja fermentar espontneamente y cuando la fraccin est en plena fermentacin puede ser utilizada como inculo para el resto del mosto. En el segundo caso se suele recurrir al empleo de las denominadas levaduras secas activas (LSA). Son levaduras que vienen en forma de pequesimos pellets, que necesitan ser hidratados en agua tibia antes de su utilizacin, las levaduras secas activas existen en diferentes marcas comerciales son levaduras deshidratadas generalmente pertenecientes a las especies S. cerevisiae y S. bayanus. CURSO: PRODUCCIN DE VINOS Por: Jse Carlos Garca Giraldo josecarlos137@hotmail.com 6 LA FERMENTACIN ALCOHOLICA La fermentacin alcohlica se define como el proceso bioqumico por el cual las levaduras transforman los azcares del mosto en etanol y CO 2 . Para que la fermentacin se realice de manera eficiente, el mosto ha de hallarse en condiciones anaerobias. En condiciones aerobias las levaduras se multiplican abundantemente con un rendimiento en biomasa muy alto ya que se consigue 1 g de levadura por cada 4 g de azcares consumidos los productos obtenidos son muy poco etanol, agua y CO 2 . En condiciones anaerobias las levaduras realizan la fermentacin., es decir degradan los azcares de forma incompleta generando etanol, CO 2 y energa. En estas condiciones el rendimiento en biomasa es de tan slo 1 g de levadura por cada 100 g de azcares consumidos.
PRODUCTOS SECUNDARIOS DE LA FERMENTACIN ALCOHOLICA. Durante la fermentacin alcohlica, adems de etanol y C02 se produce cierta cantidad de otros compuestos, que en gran medida contribuyen al sabor y aroma final del vino. Los ms significativos son los siguientes: Glicerol o glicerina: En cantidad es el segundo componente mayoritario del vino despus del etanol. Se encuentra en cantidades de 6 a 10 g/L y a l se atribuyen los caracteres de suavidad y aterciopelamiento del vino. Se genera a partir de la fosfodihidroxiacetona por reduccin y defosforilacin de la misma. Aldehdo actico o Acetaldehdo: Aparece durante la fermentacin por descarboxilacin del cido pirvico, aunque tambin puede proceder de la oxidacin del etanol. En exceso provoca en el vino la denominada maderizacin o gusto oxidado. cido actico: Componente mayoritario de la acidez voltil se produce por la condensacin de 2 molculas de acetaldehdo, aunque puede tener otros orgenes no relacionados con la fermentacin, tambin se puede formar como producto de una contaminacin con bacterias acticas. En exceso transmite al vino gusto a picado. cido succnico: Presente siempre en el vino transmite a ste el tpico sabor entre salado y amargo que caracteriza a las bebidas fermentadas. Procede de la carboxilacin del cido pirvico y posteriores reacciones de oxido - reduccin. cido lctico: Procede de la hidrogenacin del cido pirvico, aunque puede tener su origen en intervenciones bacterianas. Acetona, diacetilo y 2-3 butanodiol: Son los metabolitos del ciclo diacetilo - acetonico. Siempre presentes en el vino, en exceso confieren sabores lcteos y amargos no deseables. Tienen su origen en la condensacin y descarboxilacin de 2 molculas de cido pirvico. Otros compuestos: Procedentes de los azcares se forman diversos cidos cuantitativamente minoritarios como ctrico, propinico, fumrico y frmico. Con origen en las sustancias nitrogenadas se forman alcoholes superiores como isoamilico isoproplico que proceden de la desaminacin y descarboxilacin de los aminocidos. Por combinacin entre cidos y alcoholes se generan steres con un impacto importante en el buqu final del vino, siendo el acetato de etilo el que tiene una repercusin mayor. CURSO: PRODUCCIN DE VINOS Por: Jse Carlos Garca Giraldo josecarlos137@hotmail.com 7
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA FERMENTACIN ALCOHOLICA. Existen diversos factores tanto fsicos como qumicos que inciden positiva o negativamente en el transcurso de la fermentacin alcohlica, ya sea actuando sobre el desarrollo de las levaduras o incidiendo directamente sobre la propia fermentacin. Los ms relevantes son los siguientes:
La temperatura.- A mayor temperatura la fermentacin transcurre ms rpidamente, sin embargo es menos pura, es decir, se produce menos etanol y ms cantidad de compuestos secundarios que a menudo no conllevan a mejorar de la calidad del vino. Adems las levaduras a 30 C tienen su temperatura ptima de desarrollo. Por encima de 35 C la actividad disminuye rpidamente y mueren a antes de 45 C. Por debajo de 10 C la mayor parte de las levaduras silvestres son inactivas.
El oxgeno: Aunque la fermentacin alcohlica es un proceso anaerbico, las levaduras mantienen una leve respiracin utilizando pare ello el oxigeno disuelto en el mosto. En caso de carencia de este oxigeno pueden necesitarse hacer remontados del mosto con aireacin para que no se paralice la fermentacin.
Los nutrientes: Por un lado estn los azcares, que son fuente de energa para las levaduras. Por otro lado estn las sustancias nitrogenadas, las sales y las vitaminas que actan como factor de crecimiento. Sin embargo en casos de vendimias atacadas de podredumbre en las que los mohos han consumido parte de estos nutrientes, puede ser necesario adicionar al mosto complejos vitamnicos y sales de amonio para lograr una buena fermentacin.
Los compuestos qumicos de accin negativa.- Por un lado la acumulacin de los propios productos de la fermentacin alcohlica pueden ralentizarla. Por otro lado, esos mismos compuestos junto a otros presentes en el mosto de forma natural (taninos) o artificial (pesticidas. SO 2 etc.) pueden actuar como inhibidores del crecimiento de las levaduras.
LAS BACTERIAS LCTICAS DEL VINO CARACTERES GENERALES Las bacterias lcticas son un grupo no taxonmico de bacterias que agrupa a todas aquellas bacterias capaces de producir cido lctico a partir de azcares. Dentro de este grupo hay especies capaces de desarrollarse en el vino a pesar de ser un medio inhspito dado su contenido en alcohol y su bajo pH. A estas especies se las denomina bacterias lcticas del vino. A su vez algunas de estas gneros son capaces, bajo determinadas condiciones, de transformar el cido mlico del vino en cido lctico; el proceso se denomina fermentacin malolctica y las especies capaces de hacerlo se denominan bacterias malolcticas. Las bacterias lcticas son muy abundantes en la naturaleza y tambin llegan a la uva por el viento y los insectos y de ah pasan al mosto durante el estrujado y prensado de la uva. Sin embargo lo ms frecuente es que las bacterias lcticas presentes en mostos y vinos procedan de los utensilios y recipientes vinarios de CURSO: PRODUCCIN DE VINOS Por: Jse Carlos Garca Giraldo josecarlos137@hotmail.com 8 las propias bodegas. Su morfologa cocoide o bacilar junto a sus caractersticas bioqumicas son los caracteres ms frecuentemente utilizados en su clasificacin, aunque hoy se recurre tambin a tcnicas ms modernas como la de anlisis de fragmentos de ADN. Entre las caractersticas bioqumicas utilizadas destaca la pureza fermentativa de los azcares; lo que permite agrupar estas bacterias en homofermentativas, aquellas que llevan a calo una fermentacin lctica pura generando exclusivamente cido lctico y heterofermentativas, aquellas que a partir de azcares producen, adems de cido lctico, gran cantidad de CO 2 y otros compuestas como etanol, cido actico, succnico, manitol, etc. La utilizacin de las pentosas como xilosa y arabinosa, la de otros azcares, y el metabolismo de otros compuestos como el cido mlico, ctrico y tartrico son utilizados para clasificar las distintas especies. De todas estas especies la ms frecuentemente aislada en los vinos en plena fermentacin malolctica, es Leuconostoc oenos a la que actualmente se denomina Oenococcus oeni. Esta especie, considerada la principal responsable de la fermentacin malolctica de los vinos es hoy uno de los microorganismos ms estudiados en el campo de la vinicultura.
UTILIZACIN DE LAS BACTERIAS LCTICAS EN VINIFICACIN. El inters enolgico de las bacterias lcticas deriva de le capacidad que poseen algunas de sus especies para realizarla fermentacin malolctica. A stas se las denomina "bacterias tiles" y se caracterizan por su incapacidad para metabolizar cido tartrico y glicerol, producir poca acidez voltil y resistir los bajos pH siendo selectivas en estas condiciones para la utilizacin de cido mlico frente a los azcares Dentro de ellas predominan los cocos heterofermentativos. Existen, sin embargo, otras bacterias lcticas denominadas "perjudiciales" que se caracteriza por metabolizar preferentemente los azcares, el cido tartrico y el glicerol y elevar la acidez voltil causando con ello las enfermedades del vino, que se citan en un apartado posterior, dentro de ellas predominan los lactobacilos. La fermentacin malolctica suele desencadenarse espontneamente al finalizar la fermentacin alcohlica o algn tiempo despus cuando las condiciones sean favorables a las bacterias lcticas. Si la malolctica no conviene a un vino puede evitarse trasegando y sulfitando el vino tras finalizar la fermentacin alcohlica, pues de esta manera se evita adems el riesgo de enfermedades causadas por las "bacterias patgenas". Si en un vino se necesita la fermentacin malolctica y esta no se realiza, a pesar de existir las condiciones adecuadas para ello, entonces se puede inducir mediante la adicin de "bacterias tiles" al vino. Existen varios mtodos aceptables para inocular el vino con bacterias lcticas: La mezcla de estos vinos con otros en los cuales la fermentacin malolctica se este llevando a cabo. La adicin de los sedimentos de vinos que acaben de terminar la fermentacin malolctica. Al igual que en el caso de las levaduras para la fermentacin alcohlica, en el mercado se encuentran formulaciones para inocular el vino con bacterias que realicen la fermentacin malolctica. CURSO: PRODUCCIN DE VINOS Por: Jse Carlos Garca Giraldo josecarlos137@hotmail.com 9
LA FERMENTACION MALOLCTICA. La fermentacin malolctica es una segunda fermentacin que, ocurre en los vinos tintos jvenes una vez que ha terminado la fermentacin alcohlica a menos que se use algn mtodo que la impida. Bioqumicamente es un proceso llevado a cabo por las bacterias lcticas que consiste en la transformacin del cido mlico del vino en cido lctico ms CO 2 . Enolgicamente va a tener importantes consecuencias para el vino ya que: Lo estabiliza, porque mientras haya cido mlico en un vino hay la posibilidad de que ocurra la fermentacin malolctica hacindolo inestable. Le mejora el gusto, debido a que el cido mlico, con carcter cido muy agresivo al gusto, se transforma en cido lctico que es ms suave. Disminuye la acidez debido a que el A. mlico tiene dos funciones COOH (dicido) se convierte en un monocido (lctico). Esta disminucin de la acidez implica cambios importantes en las propiedades organolpticas del vino, tanto en el color como en el sabor. Adems de estos cambios, considerados positivos en muchos vinos, se producen otros menos deseables que conviene controlar, son el incremento de acidez voltil, que se debe bsicamente a la transformacin del cido ctrico en cido actico por las mismas bacterias lcticas
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA FERMENTACIN MALOLCTICA. La ocurrencia de la fermentacin malolctica en un vino Joven depende de una serie de factores, entre los ms importantes estn: El ciclo bacteriano. El ciclo bacteriano pasa por tres fases. Una primera fase de multiplicacin, y empieza en el mismo momento en que se obtiene el mosto. En esta fase las bacterias se multiplican en paralelo con las levaduras. La produccin de etanol y el consumo de nutrientes por parte de las levaduras paraliza el crecimiento de las bacterias cuya poblacin empieza a disminuir desde aproximadamente desde 100.000 hasta 1000 bacterias / mL. Sigue una segunda fase denominada fase de latencia, en la que las bacterias se van adaptando al nuevo medio en espera de condiciones ms favorables para su desarrollo. Esta fase puede durar desde unos das o algunas semanas hasta varios meses, es decir, hasta cuando las condiciones sean aptas, entonces en ese momento tiene lugar la fase de multiplicacin, en la que intervienen la temperatura y la cantidad de levaduras disminuye drsticamente al finalizar la fermentacin alcohlica, entonces empieza el aumento de la poblacin de bacterias lcticas hasta alcanzar valores de 106 bacterias /mL entonces en ese momento se inicia la fermentacin malolctica que termina cuando se agota el cido mlico en el vino. Cuando finaliza la fermentacin malolctica, la poblacin bacteriana vuelve a disminuir hasta 102 bacterias / mL en vinos sanos y bien conservados. El pH: El pH influye en la fermentacin malolctica en dos sentidos. Por un lado, actuando sobre la multiplicacin de las bacterias lcticas ya que stas tienen su pH ptimo de desarrollo comprendido entre 4.2 y 4.5. Teniendo en cuenta que el pH de un mosto vino puede oscilar entre 2.8 y 3.8, cuanto ms bajo sea ste mayor dificultad para el desarrollo de las bacterias. Por otro lado, el pH determina el tipo de sustrato que metabolizan las bacterias lcticas. En general a pH bajos CURSO: PRODUCCIN DE VINOS Por: Jse Carlos Garca Giraldo josecarlos137@hotmail.com 10 utilizan cido mlico aunque haya azcares residuales en el vino y a pH altos suelen utilizar preferiblemente los azcares. La temperatura. La temperatura influye de manera importante en la fermentacin malolctica ya que esta presenta su actividad mxima entre 20 C y 25 C. Con temperaturas por encima de 30 C puede llegar a pararse por completo, por debajo de 15 C se realiza de manera lenta pero segura pues as se evita que las bacterias lcticas ataquen a otros compuestos distintos del cido mlico e incrementen con ello la acidez voltil. El oxigeno. El oxigeno es tal vez el factor menos importante ya que entre las bacterias lcticas hay microaerfilas y anaerobias facultativas, por lo tanto en general conviene cierta aireacin para favorecer el proceso, pero no saturacin con oxigeno ya que retarda la fermentacin malolctica. Con el oxigeno captado durante el primer trasiego o descube es suficiente. Los nutrientes: Las bacterias lcticas son mas exigentes nutricionalmente que las levaduras. Despus que ha termina do la fermentacin alcohlica, el vino puede no contener la cantidad requerida de nutrientes, lo que puede provocar retardo o incluso ausencia de f. malolctica El grado alcohlico: Las bacterias lcticas del vino son resistentes al etanol, se desarrollan y sobreviven en el vino, pero a medida que el grado alcohlico aumenta, se hace mas difcil su crecimiento y por tanto la fermentacin malolctica. El sulfuroso SO 2 : Las bacterias en general son poco resistentes al sulfuroso, por lo tanto las bacterias lcticas resisten menos mientras el vino es mas cido. As por ejemplo en regiones fras, donde por razones de la cantidad de sol recibida por las uvas, el vino es muy cido, 5 g de SO 2 /HL de mosto evitaran la fermentacin malolctica; en regiones tibias se requieren de 10 a 15 g de SO 2 /HL de mosto para impedirla; en regiones clidas donde el vino es poco cido, 20 g de S0 2 /HL de mosto pueden ser insuficientes para impedir la fermentacin malolctica
TENDENCIAS ACTUALES DE LA MICROBIOLOGA ENOLOGICA. Las investigaciones actuales sobre los microorganismos del vino, se concentran en dos aspectos fundamentales: a) el diseo de cultivos iniciadores, los denominados "estrter" que no son otra cosa que el desarrollo de levaduras secas activas de diferentes variedades, las cuales deben ser elaboradas con una seleccin optima de diferentes variedades de levaduras, que sean capaces de iniciar y terminar la fermentacin con baja produccin de aquellos metabolitos indeseables para el vino b) el desarrollo de nuevas tcnicas de identificacin microbiana. De nuevo aqu se buscan mtodos seguros y rpidos que permitan la identificacin de los microorganismos que participan y estn activos en determinado momento de la fermentacin alcohlica o malolctica.
CARACTERSTICAS ENOLOGICAS DE LOS CULTIVOS INICIADORES Las caractersticas enolgicas deseables para los cultivos iniciadores, ya sean de levaduras o de bacterias lcticas, se pueden agrupar en caractersticas comunes a todos ellos y caractersticas particulares de algunas cepas de levaduras. En el grupo de las comunes se pueden citar las siguientes: CURSO: PRODUCCIN DE VINOS Por: Jse Carlos Garca Giraldo josecarlos137@hotmail.com 11 Curva de crecimiento.- Un "estrter" es excelente porque inicia su fase de crecimiento exponencial en poco tiempo y es capaz de competir con la flora silvestre - normal que haga parte del mosto-vino. Debe adems ser fcil de conseguir, usar, conservar y de bajo precio. Adems debe ser resistente a factores difciles como pH fuertemente cidos, bajas temperaturas, altas concentraciones de alcohol. Capacidad fermentativa: A un buen cultivo iniciador se le debe exigir un alto poder alcoholgeno, si se trata de una levadura vnica, y una elevada actividad malolctica, si se trata de una bacteria lctica. No conviene olvidar que el principal objetivo de los "estrter" es llevar a cabo el proceso para el que han sido diseados con el mayor rendimiento posible. Produccin de metabolitos: En el diseo de buenos cultivos iniciadores se busca siempre incrementar en la posible la produccin de productos enriquecedores de la calidad organolptica del vino y reducir a cero la produccin de metabolitos indeseables. En este sentido a las bacterias lcticas se les exige adems que no metabolicen el cido ctrico, el cido tartrico y la glicerina. Liberacin de aromas: Una tendencia muy reciente en el diseo de nuevas cepas enolgicas, consiste en seleccionar aquellas que poseen elevada actividad glucosidasa ya que esta enzima hidroliza los precursores de aromas procedentes de la uva, que suelen ser terpenos unidos por enlace - glucosdico a un resto azucarado, liberando con ello el verdadero compuesto aromtico, que es el terpeno libre. En el grupo de las caractersticas enolgicas particulares de levaduras, que son deseables para aplicaciones concretas se pueden citar las siguientes
Carcter floculante- Es la propiedad que tienen algunas levaduras de aglomerarse, es decir unirse unas a otras durante la fermentacin o al finalizar sta y dar flculos o grumos que sedimentan en el fondo del recipiente ayudando de esta manera a la clarificacin. Esta propiedad se busca en cepas destinadas a la produccin de champaas de fermentacin en botella, ya que facilita las operaciones de eliminacin de las levaduras.
Poder desacidificante- La desacidificacin biolgica de los vinos llevada a cabo por Las bacterias lcticas mediante La fermentacin malolctica, tiene una alternativa en el empleo de las levaduras desacidificantes. A tal efecto se suelen emplear especies del gnero .Schizosaccharomyces capaces de realizar la denominada fermentacin maloalcohlica, consistente en transformar directamente cido mlico en etanol. Tambin se est intentando la transferencia de material gentico de las bacterias malolcticas a Saccharomyces cerevisiae con el fin de lograr una cepa que realice la fermentacin alcohlica y la fermentacin malolctica de forma simultnea. Crolevaduras: Son levaduras seleccionadas por su capacidad para llevar a cabo la fermentacin an a temperaturas muy bajas (6 a 10 C). Su principal inters est en los pases de climas fros en donde a menudo las fermentaciones no arrancan o con frecuencia se paralizan dejando las fermentaciones incompletas. Factor "killer": Es la caracterstica de algunas cepas capaces de producir una CURSO: PRODUCCIN DE VINOS Por: Jse Carlos Garca Giraldo josecarlos137@hotmail.com 12 protena "asesina" que destruye a otras cepas permitiendo a la poseedora de este carcter dominar el cultivo. El factor "killer" es especfico para cada cepa de moda que una cepa A puede ser "killer" para una cepa H y sta a su vez ser "killer" para otra cepa- Este carcter, en principio ventajoso para un cultivo "estrter", tiene muchos detractores en la industria enolgica, ya que una vez establecidas cepas con factor "killer" en una bodega es difcil erradicarlas