Dr. Luis Rebolledo Prof.

Ivn Rebolledo
Enzimas
Enzimas Enzimas
Introduccin
Las sustancias que aceleran la
velocidad de reaccin de las
reacciones qumicas se denominan
catalizadores. En el mundo vivo, los
catalizadores se denominan enzimas
las cuales son protenas de aspecto
globular. El mundo mineral (no vivo)
carece de enzimas, pero posee
catalizadores inorgnicos, los cuales
tambin actuan en el mundo vivo.
Las reacciones qumicas
orgnicas en una clula son lentas
en condiciones de temperatura y
presin normales, por ende, las
enzimas ayudan acelerando las
velocidades de dichas reacciones
qumicas.
Las caractersticas propias de la
qumica de diferentes clulas o de
diferentes compartimentos de una
clula, pueden derivar del contenido
y actividad enzimtica diferentes.
Estas caractersticas enzimticas
propias son el producto de la
actividad gentica, tanto para su
sntesis como para su regulacin.
Como decamos en el captulo
anterior de cidos nucleicos, una
mutacin puede provocar la
aparicin de una enzima (protena)
que no acte correctamente.
Nomenclatura y clasificacin de
las enzimas
El sufijo asa identifica a la mayora
de las enzimas con excepcin de
algunas, como la tripsina,
amilopsina, quimiotripsina, etc; que
por tradicin siguen manteniendo su
nomenclatura. Se han asignado, por
la Comisin Internacional de
Enzimas, 6 clases :
1. Oxido-reductasas : participan en
reacciones de xido-reduccin. En
estas reacciones se transfiere un
electrn ( un H
+
) de un donante a
un receptor. Caso del NADH
+
que
entrega electrones a complejo I en
la membrana interna de la
mitocondria.
Las enzimas se caracterizan por 3
propiedades fundamentales :
(a) estn presentes en pequeas
cantidades,
(b) aumentan la velocidad de las
reacciones qumicas sin que se
consuman o alteren por la reaccin,
(c) aumentan la velocidad de las
reacciones qumicas sin alterar el
equilibrio qumico entre los
reactantes y los productos.
2. Transferasas : transfieren grupos
de un donante a un aceptor. Los
grupos transferidos con ms
frecuencia son el metilo, glucosdico
y fosfato. Caso de la glucosil-
transferasa (transfiere un
monosacrido) y proten quinasa
(transfiere un fosfato).
3. Hidrolasas : participan en
reacciones de hidrlisis, es decir,
rompimiento de enlaces como C-O,
C-N y C-C por adicin de agua.
Caso de los enlaces glucosdicos
(entre monosacridos) y peptdicos
(entre aminocidos).
4. Liasas : producen dobles enlaces
al romper uniones C-O, C-C y C-N.
Tambin pueden romper dobles
enlaces agregando grupos. Caso de
la piruvato descarboxilasa que
elimina un CO
2
al piruvato.
5. Isomerasas : catalizan una
redistribucin de tomos de los
grupos qumicos dentro de la misma
molcula. Caso de la alanina
racemasa que convierte L-alanina en
D-alanina. Ambos son ismeros.
6. Ligasas : catalizan la unin de 2
molculas por hidrlisis de ATP u
otro trifosfato (GTP, por ejemplo).
Actividad enzimtica
La primera enzima aislada en forma
cristalina fue la ureasa (J .B.
Summer, 1926) que cataliza la
hidrlisis de la urea.
ureasa
(NH
2
)
2
CO +H
2
O CO
2
+2NH
3
La hidrlisis de la urea puede
ocurrir espontneamente en
presencia o ausencia de un
catalizador, originando los mismos
productos y la misma energa.
La velocidad de reaccin
espontnea puede ser acelerada si
se aaden iones H
+
como
catalizador y puede ser acelerada
an ms cuando se aade la ureasa
en lugar de los iones H
+
.
El grfico muestra las relaciones energticas
de la reaccin entre urea y agua (reactantes),
el logro del estado de transicin [ES] y la
obtencin de los productos (CO
2
y NH
3
). Note
la magnitud de la energa de activacin.
Enzimas
Enzima
Sustrato
Complejo enzima
Sustrato
Estado de
transicin
Producto
+
El complejo activado enzima
sustrato [ES] tiene menor necesidad
de energa de activacin; as, habr
ms cantidad de molculas de
sustrato que puedan pasar la barrera
por unidad de tiempo. Un nmero
pequeo de molculas de enzima
pueden manejar millones de
molculas de sustrato por segundo.
Para que la urea pueda reaccionar
con el agua debe haber suficiente
energa, para que la molcula de
urea y el agua lleguen a formar un
complejo activado y entren a un
estado de transicin (estado de
alta energa). La energa necesaria
para llegar a dicho estado se llama
energa de activacin, la cual
constituye una barrera para que la
reaccin prosiga. Por tanto, la
disminucin de la barrera de la
energa de activacin es mayor en
un sistema de reaccin catalizada
por una enzima; de esta manera, la
reaccin procede ms rpidamente
en presencia de ureasa que en
presencia de H
+
o sin catalizador.
En conclusin, la funcin principal de
una enzima es disminuir la barrera
de la energa de activacin.
Las enzimas aumentan la
probabilidad de que las molculas
reaccionantes crucen la barrera y
prosigan a la consumacin de la
reaccin. Una enzima (E) hace esto
al unirse con el sustrato (S), en una
asociacin temporal (estado de
transicin [ES] ).
Enzimas
La mayor parte de las enzimas
opera dentro de un margen estrecho
de pH : es el pH ptimo. La gran
mayora de las enzimas tiene su pH
ptimo dentro del rango fisiolgico
de la clula (pH 6.5 a 7.2). Algunas
enzimas, como la pepsina del
estmago, posee un pH ptimo en el
rango cido (pH 1.0 a 2.0). Enzimas
intestinales como la tripsina y
lipasas, poseen un pH ptimo en
rangos alcalinos, cercano a 10.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
pH
Velocidad
de reaccin
pepsina amilasa
tripsina
Considerando que las enzimas
son protenas, estn expuestas a
una desnaturalizacin (cambio en la
estructura terciaria) por accin de
altas temperaturas. As, puede
producirse una inactivacin a causa
del rompimiento de varios enlaces
dbiles. Muchas enzimas se
inactivan a 45 C y la mayora se
desnaturalizan rpidamente desde
los 55 C.
Como cosa curiosa, hay bacterias
termfilas que viven en aguas
termales calientes, alrededor de los
80 C. Sus sistemas enzimticos
resisten la desnaturalizacin a altas
temperaturas.
Como en cualquier reaccin
qumica, el aumento de temperatura
de los reaccionantes produce un
aumento en la velocidad de
reaccin, pero en el caso de los
sistemas catalizados por enzimas,
esto es vlido hasta cierto grado de
temperatura.
34 35 36 37 38 39 40
T C
Velocidad
de reaccin
Enzimas
Del ejemplo expuesto, el sitio activo
ocupa un rea relativamente
pequea de la superficie de la
molcula de enzima. Esto significa
que una pequea porcin de la
molcula de enzima participa
realmente en la catlisis. Las otras
regiones de la superficie de la
enzima pueden permitir la unin con
otras molculas involucradas en la
regulacin de la actividad enzimtica
Especificidad del sustrato
La especificidad est determinada
por el sitio activo de la enzima, es
decir, un sector de la molcula que
contiene los grupos funcionales
particulares que le permiten unirse
especficamente con el sustrato. Por
ejemplo, la quimiotripsina posee una
cadena polipeptdica conformada por
245 aminocidos de los cuales los
nmeros 57 (histidina), 102 (cido
asprtico) y 195 (serina) constituyen
el sitio activo. El plegamiento
(estructura terciaria) de la cadena
provoca el acercamiento de estos 3
aminocidos en una estrecha regin:
este es el sitio activo de la enzima.
Las enzimas aceleran las
reacciones alterando la
conformacin de sus sustratos para
que logren llegar al estado de
transicin. El modelo ms simple
para entender esta interaccin
enzimasustrato es el modelo de la
llave y la cerradura, en el cual el
sustrato encaja perfectamente en el
sitio activo de la enzima (ver dibujo)
Sustrato
Enzima
Esquema molecular de la quimiotripsina,
mostrando el sitio activo de esta enzima.
Generalmente el sitio activo se
encuentra en una grieta, en una leve
depresin en la superficie de la
molcula proteica. La geometra del
sitio activo est estrechamente
relacionada con la conformacin
tridimensional de la molcula del
sustrato.
En muchos casos, las
conformaciones tanto de la enzima
como del sustrato son modificadas
cuando logran unirse : es el llamado
modelo de encaje inducido. Esta
alteracin de las conformaciones
hace que logren llegar ms rpido al
estado de transicin (ver dibujo).
Enzimas
El los sitios activos de la
molcula de enzima permite,
primeramente, orientar a la molcula
de sustrato; luego, establecer los
enlaces qumicos necesarios para la
formacin del complejo enzima-
sustrato y, finalmente, romper (o
formar) los enlaces qumicos
necesarios para formar el o los
productos. Una vez ocurrida la
reaccin qumica, los productos de
la reaccin catalizada se separan y
la enzima queda nuevamente
disponible para una nueva catlisis.
As, la ecuacin mostrada ejempli-
fica la generalidad de la reaccin :
E + S [ES] P + E
En muchas enzimas la velocidad
de catlisis o velocidad de
reaccin (V) vara de acuerdo a la
concentracin molar del sustrato.
Cuando la concentracin del
sustrato [S] es baja, la velocidad es
linealmente proporcional a la
concentracin. Pero cuando [S] es
alta, V es independiente de [S].
La desnaturalizacin de una
protena enzimtica provoca un
desplazamiento de los aminocidos,
alejndolos, con lo cual desaparece
el sitio activo. La inactivacin
enzimtica puede explicarse por el
desplazamiento de solo un
aminocido.
Cintica enzimtica
El anlisis cuantitativo de la
actividad enzimtica se denomina
cintica enzimtica. Este anlisis
puede aportar informacin til
acerca del modo de accin de una
enzima y establecer comparaciones
con otras enzimas o de la misma
enzima bajo condiciones diferentes.
Sustrato
Enzima
Enzimas
La velocidad mxima (Vmax) puede
revelar el nmero de recambio de
una enzima, es decir, el nmero de
molculas de sustrato convertidas a
producto por unidad de tiempo,
cuando la enzima se encuentre
completamente saturada con
sustrato.
Normalmente, se expresa como el
nmero de molculas de sustrato
que pueden ser convertidas a
producto por una molcula de
enzima por segundo. Algunos
valores ilustrativos :
A concentraciones ms altas del
sustrato, cuando [S] es mayor que
Km, la velocidad viene a ser
independiente de [S].
Enzimas Nrecamb/seg
Anhidrasa carbnica 600.000
Catalasa 93.000
Acetilcolinesterasa 25.000
Quimiotripsina 100
ADN polimerasa I 15
En donde Vmax es la velocidad
mxima de la reaccin y Km es la
concentracin del sustrato a la que
la velocidad de reaccin es igual a la
mitad de su valor mximo. Es decir,
cuando la [S] sea igual a Km
entonces la velocidad de la reaccin
ser igual a la mitad de Vmax.
Observando el grfico de la pgina
anterior, a concentraciones bajas del
sustrato, cuando [S] es menor que
Km , la velocidad de reaccin es
directamente proporcional a [S].
Leonor Michaelis y Maud Menten
(en 1913) propusieron un modelo
sencillo para describir la cintica
enzimtica : es la ecuacin de
Michaelis-Menten.
[ ]
[ ] m K S
S
V V max
+
=
Ahora bien, Km indica la afinidad
de la enzima por el sustrato : menor
Km mayor afinidad, lo que significa
que hay una unin muy fuerte entre
la enzima y el sustrato en la
formacin del intermediario [ES] en
la catlisis.
Enzimas
Inhibicin de la actividad
enzimtica
La inhibicin de la actividad
enzimtica es el medio importante
en el control de los sistemas
biolgicos. La inhibicin puede ser
reversible o irreversible. En el
primer caso, el inhibidor no modifica
las regiones funcionales de la
enzima; en el segundo caso, el
inhibidor modifica la molcula de
enzima y se une tan fuertemente a
ella que la disociacin de ambas es
muy lenta o nula. Varios venenos
que actan sobre el sistema
nervioso, incluyendo insecticidas, lo
hacen como inhibidores irreversibles
de la actividad enzimtica.
Un inhibidor no-competitivo es
el que puede unirse a la enzima en
un sitio diferente al sitio activo . As,
tanto el sustrato como el inhibidor
pueden unirse simultneamente a la
molcula de enzima. La accin del
inhibidor no-competitivo es disminuir
el nmero de recambio de una
enzima.
La inhibicin reversible puede
lograrse mediante 2 mecanismos :
competitivo y no-competitivo. Un
inhibidor competitivo es el que
compite con el sustrato por el mismo
sitio activo de la enzima, ya que el
inhibidor y el sustrato poseen una
estructura qumica similar. La
velocidad de catlisis del sustrato se
reduce dado que la cantidad de
sustrato que se une a la enzima es
menor.
sustrato sustrato
Inhibidor
no-competitivo
Inhibidor
competitivo
Coenzimas
Adems de unir a sus sustratos, los
sitios activos de muchas enzimas,
pueden unir otras molculas que
participan en la catlisis. Los
llamados grupos prostticos son
pequeas molculas que se unen a
las protenas en las cuales juegan
un papel muy importante. Por
ejemplo, el oxgeno transportado por
la hemoglobina se encuentra unido
al grupo hem, que viene a ser el
grupo prosttico.
Enzimas
Adems, varias molculas
orgnicas de bajo peso molecular en
tipos especficos de reacciones
enzimticas. Estas molculas se
llaman coenzimas debido a que
trabajan junto con las enzimas para
favorecer a las reacciones catalticas
Tambin, ellas pueden participar en
mltiples reacciones enzimticas.
Aplicacin mdica
Todas las enzimas son protenas y
estn distribudas ampliamente en el
organismo cumpliendo funciones
mltiples. Se darn de ejemplo slo
algunos casos :
(1) el pncreas es una glndula que
cumple la funcin de secretar
mltiples enzimas que intervienen en
la digestin normal : tripsina,
quimiotripsina, elastasas, lipasas,
amilasas,etc. Cuando el pncreas no
secreta estas enzimas conduce a
una mala digestin de los alimentos,
transtorno llamado dispepsia. En
estos casos el paciente presenta
nuseas, llenura, distensin
abdominal, diarreas, entre otras.
(2) si un individuo es mordido por
una serpiente venenosa, sta le
inocula al paciente mltiples
enzimas que tienen la capacidad de
destruir glbulos rojos, factores de
coagulacin, nervios, msculos, etc.;
por lo que el paciente presenta
dolor, edema, hemorragias, necrosis
y hasta neuropatas. El tratamiento
se basa en tratar de destruir estas
enzimas nocivas con sueros
antiofdicos.
(3) la coloracin de la piel y el pelo
depende de un pigmento llamado
melanina. Este pigmento, se
produce en una clula de la piel
llamada melanocito. Para que este
melanocito produzca melanina,
requiere de la presencia de una
enzima llamada tirosinasa, la cual
degrada la tirosina en precursores
del pigmento. La falta de actividad
de esta enzima tirosinasa, por un
defecto gentico, causa hipopig-
mentacin de la piel, como en el
caso del albinismo.
Enzimas
1. Cules son las principales funciones de una enzima?
2. Siempre se necesita una molcula de enzima por cada molcula de sustrato?
3. Mencione y explique dos factores que influyen directamente sobre las molculas
de enzimas.
4. Qu explicacin molecular tiene la desnaturalizacin?
5. Molecularmente hablando, qu es el sitio activo de una enzima?
6. Cules son las 3 acciones de los aminocidos que constituyen el sitio activo
de la quimiotripsina?
7. Qu indica el Km de una enzima
8. A qu se refiere el nmero de recambio en las enzimas?
9. Cundo una inhibicin enzimtica es competitiva? y no-competitiva?
Enzimas