UNC

CIENCIAS AGRARIAS
INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

CURSO: MICROBIOLOGA DE LOS
ALIMENTOS I

TEMA: PRCTICA DEL NMP

NOMBRE: JUDIT SANDINA
ABANTO ATALAYA.

PROFESOR: LIC. RODOLFO
OREJUELA CHIRINOS

FECHA: 20/04/14







PRACTICA DEL NMP
I. OBJETIVOS:
*Aprender los mtodos de recuento , especialmente con el NMP.
*Determinar la presencia de coliformes totales y fecales por el mtodo del Nmero Ms
Probable.
*Detectar si la muestra trada es apta para el consumo humano.
II. INTRODUCCION
Debido a que las aguas residuales son de composicin variada provenientes de descargas
de usos municipales, industriales, comerciales, de servicios, agrcolas, pecuarios,
domsticos, incluyendo fraccionamientos y en general de cualquier uso, as como la
mezcla de ellas, contienen diferentes tipos de microorganismos contaminantes y las
diferentes concentraciones, dependiendo de su fuente.
La variada poblacin de microorganismos en esta agua, proviene del suelo y de origen
intestinal, incluyen aerobios y anaerobios estrictos y facultativos as como tambin
numerosos virus como:
Poliovirus y virus de la hepatitis. Igualmente pueden contener formas parasitarias variables
como quistes de Protozoarios y huevecillos de Helmintos (Metazoarios). Asimismo, existe
en nuestro pas el grave problema de contaminacin de ros, lagos acuferos y costas
debido a que estos son utilizados como depsito de todos los desechos generados por las
actividades humanas.
Estos microorganismos pueden sobrevivir al tratamiento, por lo que su reuso p.ej., en
riego agrcola, actividades recreativas:
Aguas de piscinas, baos de hidromasaje, aguas potables naturales, actividades pisccolas y
aguas marinas superficiales (playas), representan un riesgo potencial a la salud pblica.
Por todo lo anterior, adems del estudio de las caractersticas fisicoqumicas del agua se
requiere de un estudio microbiolgico.
Para este propsito se debern obtener muestras representativas usando los
procedimientos de toma de muestras establecidos en las Normas Oficiales Mexicanas.
Para la determinacin del NMP de Coliformes Totales y Fecales en este tipo de aguas, es
necesario proceder a preparar diluciones decimales de la muestra, debido a que se espera
que la concentracin de coliformes sea superior en stas que en un agua potable.
El nmero de diluciones vara mucho, dependiendo del origen de la muestra a tratar. Por
lo dems, para su anlisis de procede en la misma forma que para una muestra de agua
potable.





III. MARCO TEORICO:
El mtodo se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos
especficos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir
de muestras de suelo u otros ambientes. Se basa en el principio de que una nica clula
viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. El mtodo requiere la realizacin de
una serie de diluciones en serie de la muestra de cultivo, en un medio lquido adecuado
para el crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se
incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos
tubos que recibieron una o ms clulas microbianas procedentes de la muestra, se
pondrn turbios, mientras que los tubos que no recibieron ninguna clula permanecern
transparentes.
Al aumentar el factor de dilucin, se alcanza un punto en el que algunos tubos contendrn
tan slo un microorganismo y otros tubos no contendrn ninguno. Al calcular la
probabilidad de que los tubos no hayan recibido ninguna clula, se puede estimar el
nmero ms probable de microorganismos presentes en la muestra original, a partir de
una tabla estadstica.1
La precisin del mtodo del nmero ms probable aumenta con el nmero de tubos que
se usan; cinco tubos por dilucin se considera como una relacin adecuada entre precisin
y economa.
Una condicin del mtodo es la necesidad de poder reconocer un atributo especfico de la
poblacin en el medio de crecimiento que se emplee. La estimacin de la densidad
poblacional se obtiene del patrn de ocurrencia de ese atributo en sucesivas diluciones en
serie y el empleo del clculo probabilstico.2
Hay muchas entidades discretas que son fciles de detectar pero difciles de contar. Una
aplicacin es el de cualquier clase de reaccin de amplificacin o reaccin de catlisis que
impide una cuantificacin fcil, pero permite que su presencia sea detectada de modo muy
sensible. Algunos ejemplos comunes son: crecimiento de microorganismos, accin
enzimtica, o catlisis qumica. El mtodo del NMP supone tomar la disolucin original o
muestra y subdividirla en un factor (frecuentemente 10 veces, o 2 veces) y evaluar la
presencia/ausencia en mltiples subdivisiones.
El grado de dilucin para el cual comienza a aparecer la ausencia indica que los elementos
se han diluido tanto que hay muchas submuestras en las que no aparece. Un juego de
repeticiones para cualquier concentracin dada permite una resolucin ms fina, para usar
el nmero de muestras positivas y negativas que estiman la concentracin original dentro
del apropiado orden de magnitud.
Este mtodo se usa para contar microorganismos difciles de cultivar en medio slido, o
para determinar el nmero de clulas que pueden crecer en un medio lquido
determinado, como el anlisis para determinar la contaminacin del agua potable,
determinando el nmero de bacterias Escherichia coli que pueden crecer en un medio con
lactosa. La presencia de E. coli en el agua potable es una prueba de contaminacin.
En microbiologa, el mtodo se emplea habitualmente realizando diluciones en serie de un
cultivo de bacterias en un medio de crecimiento, y luego divisiones adicionales en serie
hasta obtener partes alcuotas. Los cultivos son incubados y evaluados a ojo, eludiendo el
tedioso recuento de colonias, o el caro y tedioso recuento microscpico.
En biologa molecular, una aplicacin habitual se da en las plantillas de ADN diluidas para
la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
Las reacciones slo se dan si una plantilla est presente, permitiendo una forma de PCR
cuantitativa, para as evaluar la concentracin original de las molculas de la plantilla. Otra
aplicacin consiste en diluir los depsitos de enzima en la disolucin que contiene un
sustrato cromognico, o diluir antgenos en disoluciones para ensayos ELISA (Enzyme-
Linked ImmunoSorbent Assay) o alguna otra reaccin de deteccin en cascada de
anticuerpos, para medir la concentracin original de enzima o de antgeno.
La principal debilidad de los mtodos del nmero ms probable es la necesidad de un gran
nmero de copias duplicadas con la dilucin adecuada para estrechar los intervalos de
confianza. Sin embargo, es un mtodo muy importante para recuento cuando el orden de
magnitud es desconocido a priori y el muestreo es necesariamente destructivo.
La potabilidad del agua es de gran importancia en cuanto a Salud Pblica, ya que sta
puede servir como vehculo de microorganismos patgenos, es decir, productores de
enfermedades llamadas comnmente "de origen hdrico" tales como Salmonelosis
(Tifoidea y Paratifoidea), Shigelosis, Clera, Hepatitis, etc. Estos microorganismos son
todos de origen entrico. Se sabe que los microorganismos patgenos que llegan a los
depsitos de agua, proceden de las descargas intestinales de hombres y animales.
Adems, ciertas especies de bacterias, particularmente Escherichia coli, y varios
microorganismos similares, denominados coliformes, Estreptococos fecales (como
Streptococcus fecales) y Clostridium perfringens, son habitantes normales del intestino
grueso de hombres y animales y en consecuencia siempre estn en las materias fecales.
As pues, la presencia de cualquiera de estas especies en el agua es evidencia de
contaminacin fecal y el camino est abierto a los patgenos ya que se encuentran en las
materias fecales.
La evaluacin rutinaria del agua en busca de microorganismos patgenos, como
Salmonella spp. Y Shigella spp. puede ser difcil de realizar ya que el nmero de estas
bacterias es relativamente escaso, por lo que se tiene que recurrir a pruebas
bacteriolgicas del agua potable que demuestren la presencia de microorganismos
indicadores que siempre estn presentes en materia fecal, fcil de demostrar y que sirva
de gua para conocer el grado de contaminacin fecal.
Surge as el concepto de "Indicador de contaminacin fecal", el cual ser utilizado para la
valoracin de la potabilidad bacteriolgica de las aguas. De acuerdo con lo anterior, se ha
adoptado con carcter general, el "Grupo Coliforme" como indicador ms digno de
confianza. La OMS incluye dentro del grupo Coliforme todos los bacilos aerobios y
anaerobios facultativos Gram negativos, no esporulados, que producen cido y gas al
fermentar la lactosa, a 35 37 C.
Las especies clsicas de este grupo son Escherichia coli y Enterobacter aerogenes. El
microorganismo indicador ms comnmente utilizado es Escherichia coli, considerando la
OMS preferible emplear la expresin "Coliforme fecal" que comprende un nmero
ligeramente mayor de variedades, todas ellas de claro origen fecal e indicadores de
contaminacin fecal. En cuanto a la investigacin de patgenos en agua, no existe un
mtodo nico que permita aislar e identificar todos estos microorganismos.


El grupo Coliforme incluye todos los bacilos gram-negativos aerobios o anaerobios
facultativos no esporulados, que fermentan la lactosa con produccin de gas, dentro de
24-48horas a 35C
Si consideramos este grupo en relacin con la familia enterobacteriaceae se ver que
incluye los gneros: escherichia, citrobacter, enterobacter y klebsiella.

prueba presuntiva
Todas las operaciones debern efectuarse en absolutas condiciones de asepsia.
1. Agitar vigorosamente la muestra por lo menos 20 veces para lograr una distribucin
uniforme de los microorganismos.

2. Dependiendo del origen de la muestra y el contenido bacteriano esperado, preparar
diluciones.
3. Para preparar las diluciones, con una pipeta estril tomar una alcuota de 1 mL de la
muestra original y llevarlo a uno de los tubos conteniendo 9 mL de agua de dilucin estril,
obteniendo de esta manera una dilucin de 10
-1
.
4. Agitar el tubo de la dilucin 10
-1
y con otra pipeta estril tomar una alcuota de 1 mL y
llevarlo a otro tubo con 9 mL de agua de dilucin estril para obtener una dilucin de 10
-2
.
5. Proceder de la misma manera hasta obtener una dilucin de 10
-3
o hasta donde sea
necesario.
6. Inocular aspticamente con 1 mL de muestra por quintuplicado, tubos de fermentacin
conteniendo caldo lactosado o caldo lauril triptosa, a partir de las ltimas 3 diluciones y
conservar todas las anteriores en refrigeracin por si se requiere su utilizacin posterior.
7. Incubar todos los tubos a una temperatura de 35 C durante 24-48 horas.
8. Despus de 24 horas de incubacin efectuar una primera lectura para observar si hay
tubos positivos, es decir, con produccin de cido, si el medio contiene un indicador de
pH, turbidez y produccin de gas en el interior de la campana Durham.
9. Al hacer esta verificacin es importante asegurarse que la produccin de gas sea
resultado de la fermentacin de la lactosa, en cuyo caso se observar turbidez en el medio
de cultivo, y no confundir con burbujas de aire.
10. Para evitar este tipo de confusiones es recomendable revisar las campanas Durham
antes de proceder a la inoculacin y desechar aquellos tubos cuyas campanas contengan
burbujas de aire de alguna manera eliminar stas y as poder utilizarlos.
11. De los tubos que en la primera lectura den positivos, ya se pueden hacer las pruebas
confirmatorias para coliformes totales y coliformes fecales.
12. En caso de no apreciarse crecimiento en el resto de los tubos, continuarn en
incubacin 24 horas ms.
13. Despus de 48 horas (2h) a partir de la inoculacin, se hace la lectura final.
14. Si pasadas 48 h tampoco se aprecia crecimiento ni produccin de gas, los tubos se
toman como negativos.
interpretacion:
si el total de tubos son negativos: el examen se da por terminado, reportando la ausencia
de coliformes totales y fecales en la muestra analizada.
todos aquellos tubos que den positivos para prueba presuntiva se anotarn
convenientemente y se proceder a realizar la prueba confirmatoria para coliformes
totales y fecales.
prueba confirmatoria para coliformes totales:
1. A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva,
agitndolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo Lactosa
Bilis Verde Brillante (LBVB).
2. Incubar durante 48 3 h a 35 0.5 C.
3. Despus de la incubacin observar la presencia de turbidez y de gas.
interpretacion:
Si se observa turbidez y produccin de gas:
La prueba se considera positiva, debiendo anotar el nmero de tubos positivos para
posteriormente hacer el clculo del NMP.
Si en ninguno de los tubos se observa produccin de gas, aun cuando se observe
turbidez:
Se consideran negativos, establecindose el Cdigo 0,0,0 para efecto del clculo del NMP
Si todos los tubos dan negativos todos dan positivos, con base en los grados de dilucin
analizados, considerar la necesidad de repetir el anlisis a partir de grados de dilucin
menores (mayores volmenes de muestra) mayores (menores volmenes de muestra),
respectivamente.
prueba confirmatoria para coliformes fecales:
1. A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva,
agitndolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo E.C.
(Escherichia coli).
2. Incubar durante 24 horas a 44.5 0.2 C. y despus de este perodo, observar presencia
de turbidez y gas.
interpretacion:
si se observa turbidez y produccin de gas: la prueba se considera positiva, debiendo
anotar el nmero de tubos positivos para posteriormente hacer el clculo del nmp.
si no se observa produccin de gas, aun cuando se observe turbidez: se reporta la
ausencia de coliformes fecales.
calculos : De acuerdo a los tubos positivos en las pruebas confirmativas para Coliformes
Totales y Fecales, establecer los cdigos correspondientes para calcular por referencia en
las tablas estadsticas el NMP de Coliformes Totales y Fecales en 100 mL de agua.
En caso de no encontrar en las tablas la combinacin de tubos adecuada, emplear para los
clculos la siguiente ecuacin:


elaboracion y presentacion de resultados.
Los resultados se elaboran de la siguiente manera:
Si se han realizado diluciones, se ha de obtener una serie final con valor cero.
A continuacin se establece el triplete de valores correspondiente a las tres series
anteriores a la del valor cero que podr ser leda en la tabla del NMP.
Para efectos de expresar el valor obtenido basndose en 100 mL de muestra habr de
dividirse el resultado de la tabla por el volumen real de muestra inoculada en cada tubo de
la serie central de cada triplete escogido.
En general se tiene:

Los resultados obtenidos se expresarn de la siguiente manera:
NMP DE COLIFORMES TOTALES: __________ / 100 mL
NMP DE COLIFORMES FECALES: __________ / 100 Ml
PRUEBAS BIOQUIMICAS
Produccin de Indol
El indol es uno de los productos de degradacin metablica del aminocido triptfano. Las
bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptfano
con produccin de indol, cido pirvico y amonaco. La produccin de indol es una
caracterstica importante para la identificacin de muchas especies de microorganismos.
La prueba de indol est basada en la formacin de un complejo rojo cuando el indol
reacciona con el grupo aldehdo del p-dimetilaminobenzaldehdo. Este es el principio
activo de los reactivos de Kovacs y Ehrlich. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en
triptfano.
Un anillo rosa-rojizo en la superficie indica que se ha formado un complejo coloreado
entre el indol y el p-dimetilamino benzaldehdo. El alcohol amlico concentra el complejo
coloreado en la superficie
A la izquierda se observa un cultivo de E. coli y a la derecha otro de Salmonella s
Rojo de metilo (RM)
Detecta la fermentacin cido-mixta. Se acumulan cidos (actico, frmico, etc.),
relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5. Dicho cambio de pH se detecta
aadiendo un indicador (rojo de metilo) al cultivo.
Voges-Proskauer
Detecta la fermentacin butanodilica. En esta fermentacin se producen menor cantidad
de cidos que en la fermentacin cido-mixta, y una gran cantidad de butanodiol.
Mediante un reactivo, (alfa-naftol y KOH al 40%), se detecta la presencia de un precursor
del butanodiol (acetilmetilcarbinol o acetona). La acetoina en presencia de oxgeno se
oxida a diacetilo. El diacetilo oriigina una coloracin roja al reaccionar con los restos
guanidnicos de algunos aminocidos de la peptona del medio (Ej. Arginina).
La acetona en contacto con el oxgeno y la potasa origina diacetilo. El alfa naftol
incrementa la sensibilidad de la reaccin. El diacetilo origina un compuesto de color
rosado. La prueba ser positiva si en 20 minutos aparece una coloracin roja. Los cultivos
negativos se incuban 1-2 horas a 37 oC en posicin inclinada efectundose de nuevo la
lectura. (El contacto con el oxgeno y la elevada temperatura favorecen la reaccin).
A la izquierda cultivo de Serratia spp. Y a la derecha de E. coli
Prueba TSI (Triple Sugar Iron Triple Azcar Hierro)
El TSI es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de produccin
de cido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un nico medio. Tambin permite
la identificacin de la produccin de SH2.
Esta es una prueba especfica para la identificacin a nivel de gnero en la familia
Enterobacteriaceae, con objetivo de diferenciar entre: bacterias fermentadoras de la
glucosa bacterias fermentadoras de la lactosa bacterias fermentadoras de sacarosa
bacterias aerognicas bacterias productoras de SH2 a partir de sustancias orgnicas que
contengan azufre.
Resultados
Pico alcalino/fondo alcalino: no hay fermentacin de azucares. Caracterstica de
bacterias no fermentadoras como Pseudomonas sp.
Pico alcalino/fondo cido: Glucosa fermentada, lactosa ni sacarosa fermentadas.
Shigella spp.
Pico alcalino/fondo negro: Glucosa fermentada, ni lactosa ni sacarosas fermentadas,
produccin de cido sulfhdrico. Salmonela spp.
Pico cido/fondo cido: Glucosa y lactosa y/o sacarosa fermentadas. Puede producirse
SH2 o no. Escherichia coli.
A estos resultados se les agrega el resultado de la produccin de gas.
E.M.B. agar
Contiene colorantes de azul de metileno y eosina Y, que inhiben las bacterias gram-
positivas en cierto grado. Los colorantes tambin actan como indicadores diferenciales en
respuesta a la fermentacin de la lactosa o la sacarosa por parte de los microorganismos.
Los coliformes producen colonias de color negro azulado, mientras que las colonias de
Salmonella y Shigella son incoloras o de color mbar transparente. Las colonias de
Escherichia coli pueden exhibir un brillo verde metlico caracterstico debido a la rpida
fermentacin de la lactosa.
El conjunto de medios de aislamiento de baja selectividad para Salmonella en muestras
fecales y de otros tipos incluye el EMB Agar (con y sin sacarosa). Este medio puede inhibir
el crecimiento de las bacterias gram-positivas como los estreptococos fecales,
estafilococos y levaduras, o bien favorecer su crecimiento con formacin de colonias
puntiformes.
Caracterstica de las colonias:
E. coli: Colonias grandes, color negro azulado, brillo verde metlico
Enterobacter/Klebsiella: Colonias grandes, mucoides, color negro azulado
Proteus: Colonias grandes, incoloras
Salmonella: Colonias grandes, desde incoloras hasta color mbar
Shigella: Colonias grandes, desde incoloras hasta color mbar
Pseudomonas: Colonias irregulares, incoloras
Bacterias gram-positivas: Crecimiento escaso o nulo

-Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: colonias de color negro
azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metlico.

-Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa: colonias del color del
medio, incoloras.


Mac Conkey Agar

El medio del cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de las sales biliares
y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la
flora gram positiva. El agar es el agente solidificante.
Por fermentacin de lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un
viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la
precipitacin de las sales biliares.
-Microorganismos fermentados de lactosa: colonias rosadas-rojizas. Puede observarse algo
de precipitacin biliar.
-Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio, incoloras

MATERIAL Y SUBSTANCIAS
Muestra de agua .
Mechero Bunsen.
_Placas Petri
-Bao mara para Coliformes fecales a una temperatura constante de 44 C (0.5 C).
-Asas
- Estufa
-caldo lauril sulfato triptosa
-Caldo brilla mas agua peptonada
-Caldo lactosado
-Caldo MacConkey
-Reactivo Kovacs
Cerillos encendedor.
tubos de 18 x 150 mm conteniendo 9 mL de agua de dilucin estril.
Pipetas de 1 mL estriles.
tubos de 18 x 150 mm con campana Durham, conteniendo caldo lactosado estril de
concentracin sencilla.
tubos de 18 x 150 mm con campana Durham, conteniendo Caldo Lactosa Bilis Verde
Brillante estril.
tubos de 18 x 150 mm con campana Durham, conteniendo caldo E.C. estril.
Cajas de Petri conteniendo Agar Endo estril.
Tubos de 18 x 150 mm conteniendo agar nutritivo inclinado estril.
Agitador de tubos Vortex.
Gradillas para tubos
Asa Bacteriolgica.
Incubadora a 35 C.
IV. RESULTADOS:

Segn la revisin de las tablas nos da la lectura de 0,7UFC /ct ml.
Mtodo presuntivo = coliformes totales

NMP:
- Test presuntivo
Coli total
- Test confirmamos
Coli fecal

usamos dos tubos y utilizamos caldo lauril sulfato



1. Esterilizamos el asa de siembra
2. Coger la muestra, homogenizar y esterilizar. Con el asa de siembra
sacamos una lunita y desechamos la muestra.
3. Apagar el mechero, llevar los tubos a incubar a una temperatura de
44C por un tiempo de 48 horas.
La lectura a identificar si hay presencia de gas hay presencia de coli fecal


+ + +
1 0 1
Estudio de la composicin y caractersticas de coly fecal
Pruebas bioqumicas



ROJO (COLI +) AMARILLO (COLI -)

V. DISCUSIONES:
prueba presuntiva :
Si el total de tubos son negativos: el examen se da por terminado, reportando la ausencia de
coliformes totales y fecales en la muestra analizada.
Todos aquellos tubos que den positivos para prueba presuntiva se anotarn
convenientemente y se proceder a realizar la prueba confirmatoria para coliformes totales y
fecales.
prueba confirmatoria para coliformes totales:
Si se observa turbidez y produccin de gas:
La prueba se considera positiva, debiendo anotar el nmero de tubos positivos para
posteriormente hacer el clculo del NMP.
Si en ninguno de los tubos se observa produccin de gas, aun cuando se observe turbidez:
se consideran negativos, establecindose el Cdigo 0,0,0 para efecto del clculo del NMP
Si todos los tubos dan negativos todos dan positivos, con base en los grados de dilucin
analizados, considerar la necesidad de repetir el anlisis a partir de grados de dilucin menores
(mayores volmenes de muestra) mayores (menores volmenes de muestra),
respectivamente.
prueba confirmatoria para coliformes fecales:
si se observa turbidez y produccin de gas: la prueba se considera positiva, debiendo
anotar el nmero de tubos positivos para posteriormente hacer el clculo del nmp.
si no se observa produccin de gas, aun cuando se observe turbidez: se reporta la ausencia
de coliformes fecales.


VI. CONCLUSIONES:

El mtodo del recuento del numero mas probable es de gran utilidad para saber si el agua
potable es apta o no para el consumo humano
El anlisis de coliformes totales y fecales requiere de mucho cuidado higinico, de
organizacin y de desinfeccin y esterilizado antes y despus de las tomas de las muestras.
El agua Potable de la unc como muestra es muy apta para el consumo humano, mientras
que la otra muestra tene presencia de colis totales y fecales

VII. BIBLIOGRAFA:
*Secretaria de Comercio y Fomento industrial. 1987. NNX-AA-42-1987. Calidad del agua
determinacin del numero ms probable (NMP) de coliformes totales, coliformes fecales
(termotolerantes) y Escherichia Coli presuntiva. 21 p.
* Manual de laboratorio para identificacin de prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos
de patgenos bacterianos de importancia para salud pblica en el mundo en desarrollo.
USAID, OMS, CDC 2004.
*http://es.scribd.com/doc/6456981/Microbiologia-de-Alimentos-Practica-N-05-
Determinacion-de-coliformes-totales-y-fecales
*http://www.bing.com/search?q=practica+de+GUA+NMP&form=LECNTX&pc=MALNJS&mkt=e
s-pe&scope=
*http://www.bing.com/search?q=practica+de+GUA+NMP&form=LECNTX&pc=MALNJS&mkt=e
s-pe&scope=
VIII. ANEXOS: