BIOQUIMICA AGUIRRE CUBILLAS LISBETH CAQUI CABALLERO JOSE MEZA RODRIGUEZ DIANA REYES DEL VALLE ROY OLIVARES RIOS DAVID
INFORME DE PRACTICA 5, 6, 7,8 Y 9 Ing. SolrzanoGutirrez Mara 2do
DEDICATORIA
A todos los docentes por su sabidura y esfuerzo que comparten, todos los das buscando una calidad de enseanza y aprendizaje en el campo de la Investigacin e Innovacin Educativa.
GRADECIMIENTO Al docente del curso de bioqumica de la Facultad de Ciencias agrarias de la escuela acadmica profesional ingeniera agroindustrial de la UNHEVAL; quien nos incentiva para hacer este tipo de trabajos; por nuestro bien y para los estudiantes y la juventud que nos espera en el camino, con quienes seguiremos la misin de ser ingenieros.
INDICE LABORATIO DE BIOQUIMICA
I. INFORME N 5 -RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS CON EL REACTIVO DE SUDAN III II. INFORME N 6 - SAPONIFICACION DE GRASAS III. INFORME N 7 - RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS IV. INFORME N 8 - DESNATURALIZACION DE PROTEINAS V. INFORME N 9 - ANALISIS CUANTITATIVO DE ENZIMAS VI. INFORME N 10- ACCION DE LA ENZIMA CATALASA
INFORME N5
RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS CON EL REACTIVO DE SUDAN III
I. OBJETIVO Determinar la presencia de lpidos en alimentos. Poner de manifiesto ciertas propiedades de los lpidos, algunas de las cuales pueden servirnos para su identificacin.
II. MATERIALES , MATERIA PRIMA Y REACTIVOS
- MATERIALES - Tubo de ensayo - Vaso de precipitado con agua - Aceite vegetal - Gradillas - Solucin de sudan III en frasco de cuentagotas guinda, rojo, cereza. - matraz Erlenmeyer - Alcohol - MATERIA PRIMA - clara de huevo - yema de huevo - aceite - REACTIVOS - SUDAM III
III. PROCEDIMIENTO
1) aceite + Reactivo sudan III
2) clara de huevo
+ Sudan III
3) Yema de huevo + Sudan III
ACEITE 1ml CLARA 1ml YEMA 1ml
IV. RESULTADOS Segn la muestra analizada
V. CONCLUCION - El reactivo Sudn III, por contener un solvente orgnico, solubiliza la grasa, permitiendo la determinacin cualitativa de lpidos. VI. ANEXOS.
PRACTICA N 6
SAPONIFICACION DE GRASAS Grasas esteres hidrolisisacido Base
I. OBJETIVO - Elaboracin de jabn a partir de grasas y aceites caseros por medio de la reaccin de saponificacin.
II. MATERIALES , MATERIA PRIMA Y REACTIVOS Materiales. Tubos de ensayo Pipeta Gradilla Mechero Bunsen Pinzas para tubo de ensayo MATERIA PRIMA aceite REACTIVOS NaOHEtanol HCl 0,2 N Aceite vegetal H2SO4(cido sulfrico) Agua destilada
III. PROCEDIMIENTO
1) ACEITE + CALENTAR. NaOH
2) SOL SAPO + 5 GOTAS + Cl Na H2 S04
IV. RESULTADOS
Cuando hemos disuelto la sosa que estaba en estado slido en el agua, hemos observado que ha tenido lugar una reaccin exotrmica ya que la disolucin del agua con NaOH se calienta al desprender calor. Al mezclar el aceite con NaOH obtenemos una mezcla de color amarillento-marrn, y cuando mezclamos la grasa con NaOH obtenemos una mezcla de color ms blanquecino. Cuando hemos calentado estas mezclas y pasado un tiempo, hemos podido observar en el recipiente 3 capas: la inferior que contiene la solucin de sosa sobrante con la glicerina formada; la intermedia, semislida, constituida por jabn, y la superior, amarilla de aceite que no ha reaccionado. Esta reaccin ha tenido lugar por un proceso de saponificacin en la que a partir de grasa y NaOH obtenemos jabn y glicerina. V. CONCLUSIONES: - Los jabones se forman por saponificacin que es la hidrlisis en medio bsico de las grasas. - Las conclusiones a las que hemos llegado tras la realizacin de la prctica son que los jabones se forman mediante una reaccin denominada saponificacin. Esta reaccin consiste en una hidrlisis en medio bsica de las grasas, que, de este modo, se descomponen en sales de potasio o sodio (jabones) y glicerina..
VI. ANEXO :
INFORME N 07
RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
I. OBJETIVO Determinar la presencia de protenas Extraer la casena de la leche y reconocer su naturaleza proteica. Utilizar misma tcnica para reconocer la naturaleza proteica de otras muestras. Identificar a travs de pruebas bioqumicas las protenas existentes en soluciones problemas.
II. MATERIALES , MATERIA PRIMA Y REACTIVOS MATERIALES: Tubos de ensayo Pipeta Gradilla Mechero Vasos de precipitados
MATERIA PRIMA: Glicina Albmina Chocho Arveja
REACTIVOS: NaOH HNO3 CuSO 4
III. PROCEDIMIENTOS
a) REACCION DE BIORET. Entre las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven portanto para su identificacin, destaca la reaccin del Biuret. Esta reaccin laproducen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos ya que se debea la presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye al liberarse losaminocidos.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa, y el Cu, en un mediofuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptdicos formando uncomplejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentracin de protenas. Valina + NaOH obs + CuSo4 = azul, negro
Glicina + NaOH obs + CuSo4 = verde oscuro, negro
Albumina + NaOH obs + CuSo4 = lila y protena
Chocho + NaOH obs + CuSo4 = celeste, v erde y tiene protena y lila
Valina + NaO3 obs + NaOH Glicina + NaO3 obs + NaOH = se ha hecho negativo Albumina + NaO3 obs + NaOH = blanco + la protena se separa
Chocho + NaO3 obs + NaOH = se ha hecho positivo
Arveja + NaO3 obs + NaOH = normal se ha vuelto hinchar en blanco y es positivo.
IV. RESULTADOS Y DISCUCIONES Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo? La desnaturalizacin de protenas se da en la clara de los huevos, que son en gran parte albminas en agua. En los huevos frescos, la clara es transparente ilquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa slida intercomunicada. Esa misma
desnaturalizacin puede producirse a travs de una desnaturalizacin qumica, por ejemplo volcndola en un recipiente con acetona Desnaturalizacin irreversible de la protena de la clara de huevo y prdida disolubilidad, causada por la alta temperatura (mientras se la fre) Cul de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalizacin? El efecto de la temperatura, cuando la temperatura es elevada aumenta la energa cintica de las molculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las protenas y, se desnaturalizan. Cmo podramos saber que una sustancia desconocidas una protena? Para saber si una sustancia desconocida, es una protena se utiliza el Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin desconocida. Est hecho de hidrxido potsico (KOH) y sulfato cprico (CuSO4), junto con(KNaC4O64H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y a rosa cuando se combina con polipptidos de cadena corta. El Hidrxido de Potasio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar. Qu coloracin da la reaccin del Biuret? La coloracin que presenta es el color violeta, indicando la presencia de protenas. Una protena coagulada podra dar la reaccin del Biuret? Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 C o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. Si una protena coagulada podra dar la reaccin de Biuret, porque el reactivo reacciona con cualquier protena, liquida o slida, por ejemplo cuando haces una cuantificacin de protenas en suero (liquida) o cuando haces una prueba cualitativa en huevos, carne, papas, etc, Si se realiza la reaccin del Biuret sobre un aminocido cmo la Glicina es positiva o negativa? Por qu?
La glicina no reaccion con el reactivo de Biuret porque est en forma libre y no hay enlaces peptdicos con los que pueda reaccionar este reactivo. De esta manera, la glicina dio una prueba negativa. Adems en la reaccin xantoprotica da negativo porque carece de grupos aromticos. V. RECOMENDACIONES Este siguiente practica su uso es muy importante ya que se para asi saber el reconocimiento de dicho producto.
VI. CONCLUCION La albmina, el chocho y la arveja contienen protenas y la glicina no por ser un aminocido. Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el organismo ya que cumplen muchas funciones Las protenas estn constituidas por aminocidos por los cuales los mtodos se basan en el reconocimiento de los aminocidos Al realizar las diferentes pruebas con la albmina se pudo comprobar experimentalmente efectivamente que se trata de una protena Las protenas son sensibles con las sales metlicas pesadas (mercurio, cobre ,plomo) formando precipitados En las reacciones donde se obtuvo precipitacin se debi a un cambio en el estado fsico de la protena , mientras que en la coagulacin se ha producido un cambio en el estado fsico y en la estructura qumica por eso es irreversible
VII. ANEXOS
INFORME N 07 DESNATURALIZACION DE PROTEINAS
I. OBJETIVO Identificar los diferentes factores que afectan la estabilidad de las protenas Observar el comportamiento de una protena globular hidrosoluble en solucin acuosa en funcin de la fuerza inica.
II. MATERIALES, MATERIA PRIMA Y RACTIVOS MATERIALES: Tubos de ensayo Pipeta Gradilla Mechero Bunsen Pinzas para tubo de ensayo MATERIA PRIMA: Albmina REACTIVOS: HCl NaOH HNO3 CuSO4
III. PROCEDIMIENTO
1) Clara de huevo + Albumina H20
2) albumina + calentar NaOH HCl
3) Albumina + Calentar NaOH HNO3
4) Albumina + Calentar NaOH Cu SO4 enfriar
5) albumina + + Cu SO4 NaOH
6) albumina + calentar Acetado de plomo
IV. RECOMENDACIONES MUESTRAS OBSERVACIONES Albmina con Acetona se desnaturaliz, qued como peganda en las paredes del vaso Albmina con Etanol se desnaturaliz. Se separ un poco y una parte qued flotando sobre el etanol Albmina con Bicarbonato de Na Saturado. se desnaturaliz una parte ya que se vea slo de unas partes como separado Albmina con Jugo de Limn si se desnaturaliz Albmina con Aceite de cocina no se esnaturaliz, se vea normal pero grasoso y ya Albmina con Jugo de Naranja no desnaturaliz, no pas nada Albmina con Cloruro de Na Saturado. si se desnaturaliz un poco Albmina con Vinagre si hay desnaturalizacin.
V. CONCLUCION Existen diversos factores que contribuyen a la desnaturalizacin de las protenas, por ejemplo cambio de temperatura, pH de las sustancias, etc. en este caso vimos ms con pH, cuando el pH es cido hay una desnaturalizacin o por lo menos ms notoria al instante y en medio bsico por lo regular no ocurre nada. VI. ANEXOS
INFORME N 08 ANALISIS CUANTITATIVO DE ENZIMAS
I. OBJETIVO
Determinar la presencia de enzimas en productos de origen animal o vegetal mediante reacciones qumicas especficas. Identificar la accin de la catalasa, perxidos y tirosidasa.
II. MATERIALES 3.1 Muestra Papa cruda. Trocitos de tomate Jugo de limn
Zanahoria Carne cruda Rbano
3.2 Material de vidrio
Tubos de ensayo Gradilla Varillas de vidrio Mechero Cocina elctrica Rejilla de asbesto por cocina Vasos de precipitado de 150 250 ml (12 unidades) Pipetas Rallador Cronmetro Embudo Papel de filtro alimentario (para infusiones filtrantes) Gasa Mortero
3.3 Reactivos
Perxido de hidrgeno (Agua Oxigenada) III. PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS,
1) hojas + Perxido de H
2) papas + Perxido de H
3) hojas papas + Perxido + perxido Lega de H. lega de H.
IV. RECOMENDACIN
En esta prctica de laboratorio de bioqumica que con las diferentes muestras que tenamos solamente algunas reaccionaban dando asi la presencia de enzimas en ellas.
V. CONCLUCION los agentes precipitantes inhiben la actividad enzimtica por desnaturalizacin de la enzima. La velocidad de una reaccin enzimtica depende de varios factores. Entre estos est el pH. Cada enzima tiene un rango de pH en el que su actividad enzimtica es ptima. Fuera de este rango la enzima por ser una protena empieza a desnaturalizarse por la protonacin o desprotonacin de susaminocidos constituyentes. La temperatura es otro factor importante en la actividad enzimtica. Se puededecir que a mayor temperatura aumenta la velocidad de la
reaccin hasta quellega un punto en el que la velocidad disminuye con el aumento en el calor. Otro factor fundamental en la velocidad a la que se realiza una reaccin es laconcentracin de enzima y de sustrato. Esto se sabe tericamente debido aque todas las reacciones cumplen con la reaccin de Michaelis- Menten, donde si la concentracin de sustrato o de enzima es muy baja, la velocidadaumenta proporcionalmente al aumento de concentracin VI. ANEXOS.
PRACTICA N 10 ACCION DE LA ENZIMA CATALASA
I. OBJETIVO Determinar la accin de la enzima catalasa en diferentes sustancias orgnicas
Comprobar si la enzima catalasa contenida en los peroxisomas del hgado y rin degrada el perxido de hidrgeno.
II. MATERIALES , MATERIALES Y RACTIVOS
MATERIALES: Tubos de ensayo Pipeta
MATERIA PRIMA: Papa Hgado Hojas
REACTIVOS: Perxido de hidrgeno HCl
III. PROCEDIMIENTO 1). PAPA Obs + perxido de H HCl
2). Hgado Obs. + Perxido de H. HCl
3). HOJAS Obs + perxido de H HCl
4).
Papa hojas hgado
Perxido dePerxido de Perxido de H H H
IV. CONLUCION hemos logrado cumplir con nuestro objetivo, es decir comprobar la actividad catalasica en diversos tejidos animales y vegetales. El equipo llego a la conclusin, que el cambio de ph si afecta la actividad enzimtica por que cuando se le agrego el hcl disminuyeron las reacciones con las muestras, por lo consiguiente, con el perxido de hidrogeno ya que el hcl desnaturalizo a la catalasa que esta es una protena. tambin en el caso del azcar y la sal no hubo reaccin ya que estos son seres no vivos por lo tanto no tiene enzimas. Una reaccin para ver la presencia de catalasa en nuestro organismo es Cuando sufrimos una cortada y en ese momento le agregamos agua oxigenada muchas personas solo saben que es para matar a las bacterias, pero no porque hay efervescencia y el motivo es por la presencia de catalasa en nuestros tejidos.
V. ANEXOS
CUESTIONARIO 1. QUE SON ENZIMAS? 2. ENZIMAS HOLOSTRICAS 3. ENZIMAS LUDUCIBLES 4. COFACTOR 5. COENZIMA 6. APOENZIMA 7. MENCIONE UNA TCNICA DE RECONOCIMIENTO DE ENZIMAS
1. Qu son enzimas?
Sustancia macromolecular, natural o sinttica, compuesta principalmente de protena, que cataliza una o ms reacciones bioqumicas de forma ms o menos especfica, a temperaturas
relativamente bajas. En algunos casos, lasenzimas poseen iones metlicos, grupos prostticos o carbohidratos unidos de forma covalente o fuertemente asociados. Los RNA con actividad cataltica (ribosomas) tambin se incluyen en esta categora.
Se encuentran en todo tipo de clulas y catalizan las reacciones qumicas de los seres vivos (biocatalizadores).Un catalizador es una sustancia que aumenta la rapidez o velocidad de una reaccin qumica, sin verse alterada ella misma en el proceso global. Son por tanto, las responsables del metabolismo celular. Son especficas de las reacciones que catalizan y de los sustratos que intervienen.
Los enzimas son catalizadores muy potentes y eficaces (aumentan la velocidad de las reacciones entre 10 3 y 10 9 veces). No llevan a cabo reacciones que sean energticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios qumicos, sino que aceleran su consecucin. Simplemente se alcanza ms rpido el estado de equilibrio.
2. Qu son Enzimas Alostricas?
Las enzimas alostricas son las que adquieren otras formas, otra conformacin, por la unin de moduladores. Estos moduladores pueden ser inhibidores o activadores que se unen a la enzima en un sitio diferente al sitio activo e inducen un cambio conformacional en la estructura de la enzima tal que cambia la estructura del sitio activo.
3. Que son Enzimas Inducibles?
Enzima sintetizada por la clula en cantidades muy pequeas y cuya velocidad de sntesis puede ser aumentada por otra molcula denominada inductor. Son aquellas enzimas que se sintetizan cuando su sustrato est presente en la clula.
4. Qu son Cofactores?
Son sustancias de caractersticas no proteicas que, actan junto con la enzima y el sustrato, en algunas reacciones. Estas sustancias: no se modifican al finalizar la reaccin, si sufren alguna modificacin durante la reaccin, pero se regenera en una reaccin acoplada.
Tipos de cofactores:
Iones: manejan las cargas de los sitios activos. Ej.: Mg es cofactor de las enzimas que transfieren grupos fosfato. Coenzimas: produce interacciones dbiles y colaboran con los procesos anexos a las funciones catalticas en s. Ej.: NAD, NADH y ATP. Grupos prostticos: Son sustancias que se unen en forma covalente con la enzima siendo imposible separarlas. Holoenzima = Apoenzima + Grupo prosttico
Ej.: En las catalasas y peroxidasas de los peroxisomas, es el Hemo. Las flavinas (FAD, FMN).
5. Que son Coenzima? Muchas enzimas realizan su funcin cataltica en presencia de otras molculas generalmente ms pequeas, no proteicas y denominadas coenzimas (algunos las denominan grupos prostticos si la asociacin de estas con la enzima es de carcter covalente). El complejo resultante se denomina holoenzima donde la parte proteica se llama apoenzima (termolbil, no dializable) y la parte no proteica y relativamente pequea se denomina coenzima (termoestable, no proteica). Tanto oxido reductoras, isomerasas y ligasas requieren de coenzimas. Las coenzimas participan activamente en la reaccin, por ejemplo en las oxidorreductasas aceptan o ceden hidrgenos o electrones y en las transferasas aceptan o ceden los grupos. Adems se asocian a vitaminas (como las del grupo B) lo que demuestra la importancia fisiolgica de las mismas y su ingesta Luego, tenemos que una coenzima no es especfica para un tipo de reaccin sino que la porcin de la enzima que da la especificidad es la apoenzima Por ejemplo, el lactato deshidrogenasa, malato deshidrogenasa y glutamato deshidrogenasa utilizan NAD como coenzima (aceptora de H) as como tambin otras oxidorreductasas 6. Que son Apoenzima?
Parte proteica de una enzima que, para ser activa, requiere estar unida a la correspondiente coenzima. Tambin se denomina apoprotena. No puede llevar a cabo su accin cataltica desprovista de los cofactores necesarios, ya sean iones metlicos (Fe, Cu, Mg, etc.) u orgnicos, que a su vez puede ser
una coenzima o un grupo prosttico, dependiendo de la fuerza de sus enlaces con la apoenzima. La apoenzima, es por tanto, catalticamente inactiva, hasta que se le une el cofactor adecuado.
7. MENCIONE UNA TCNICA DE RECONOCIMIENTO DE ENZIMAS
HIDRLISIS DEL ALMIDN
Mediante esta experiencia, vamos a ver la actividad de otra enzima, la amilasa o ptialina, presente en la saliva. Esta enzima acta sobre el polisacrido almidn, hidrolizando el enlace O-glicosdico, por lo que el almidn se terminar por transformar en unidades de glucosa. Es importante recordar las reacciones caractersticas de glcidos para comprender esta experiencia.