Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia

Escuela de Qumica
Departamento de Fisicoqumica
Anlisis Instrumental II
Dulce Flor de Mara Gudiel Hernndez 201113461
Mara Rene Arrivillaga Herrera 201113559
Fernando Andrs Hernndez Cordero 201119629
Helena Alejandra Reyna Corado 201119561
Jose Len Castillo Arroyave 201123956

Reporte No. #10: Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (HPLC)
Determinacin Cuantitativa de Cafena en Formulaciones de Analgesicos.

1. Instrumentacin:

La cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC) es un proceso analtico que utiliza
un instrumento especialmente diseado para separar, cuantificar y analizar los
componentes de una mezcla qumica. Un equipo de HPLC consiste esecialmente de un
sistema de inyeccin, un reservorio para el disolvente, una bomba peristalica, una
columna, un detector y un aparato de registro. (Anaya, et al; 2001). El papel esencial de
las bombas es impulsar a la fase mvil con presin y flujo constante, el proceso de
inyeccin de la muestra en la actualidad es automtica, las columnas que se utilizan
normalmente son de acero inoxidable y los detectores su papel fundamentalmente es de
indicar el momento de aparicin de los diferentes componentes que constituyen la
muestra, calificarlo cuantitativamente como cualitativamente. (HPLC, s.f.).

Los detectores ms comunes de los que se dispone son 2: El detector ultravioleta-visible
de longitud de onda variable y el detector LSD (evaporative light-scattering detector) pero
pueden ser muchos ms detectores como detectores de refraccin, detectores de
espectrmetro de masas y RMN. Un aparato de HPLC moderno se equipa con uno o ms
recipientes de vidrio o acero inoxidable, cada uno de los cuales contiene unos 500ml de un
disolvente. Los recipientes a menudo se equipan con un sistema para eliminar los gases
disueltos en general oxigeno y nitrgeno que interfieren formando burbujas en los
sistemas de deteccin. Con frecuencias estos sistemas tambin contienen un dispositivo
para la filtracin del polvo y de las partculas solidas en suspensin de disolventes.

2. Como funcionan:

Para purificar una mezcla de compuestos, un pequeo volumen de muestra es inyectado
en el aparato donde es acarreado por el disolvente o fase mvil hacia la columna y eludo
hasta salir de la columna por la fase mvil seleccionada ms adecuada basado en las
caractersticas de la muestra. La elusin de la muestra puede ser obtenida con disolventes
de composicin constante o con disolventes de composicin variable lo que se determina
una cromatografa co gradiente de solvente. (Anaya, et al; 2001). Las tcnicas
cromatografas en columna son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase mvil
como se menciono con anterioridad la cual consiste en un fluido (gas, lquido, o fluido
supercrtico) que en el caso de cromatografa de HPLC es un fluido que es arrastrado a la
muestra con un flujo constante de presin proporcionado por una bomba que suele ser
una bomba reciproca constituida por un piston que mueve el fluido a presiones mayores
de 6000 psi esta bomba necesita de un amortiguador de pulsaciones para evitar que los
picos se vean afectados en sensibilidad, esta fluido se hacer pasar por todo el aparato
hasta llegar al bucle de inyeccin donde arrastra la muestra hasta llegar al punto donde es
introducida la muestra a la columna. Siguiendo el flujo de presin la lleva a una columna
donde se encuentra la fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido fijado en un
slido, donde lo usual utilizado en cromatografa por HPLC es como soporte silica gel
sustituida con grupos octadecilo que dan un excelente rendimiento para la mayora de
muestras utilizadas. (HPLC, s.f.).

3. Qu tipo de muestras analiza, condiciones y/o tratamientos especiales que deben de
realizarse a las muestras?

En este tipo de estudios, los proveedores recomiendan que se filtre y se desgasifique todo
componente antes de ser introducido a un sistema de HPLC, esto con el propsito de
evitar daos futuros (HPLC, s.f.). El tamao de la muestra deseable tiende a ser de 10mg,
en este caso como ejemplo se realiza un triturado de aspirina forte la cual posee un
contenido de cido acetilsaliclico y cafena la cual se desea detectar por medio de este
instrumento esta se debe de diluir en un disolvente para poder ser analizada en este caso
se debe de utilizar agua para disolverla debido a su fcil solubilizacion y ahorrar costos en
la cromatografa, de ah esta muestra para evitar precipitados y formacin de cristales que
puedan daar el equipo se realiza una dilucin con metanol siempre en las proporciones
correctas para obtener una disolucin de concentracin conocida terica para su posterior
cromatografa como se indic anteriormente antes de introducir cualquier muestra para
evitar interferencias esta tiene que ser desgasificada lo que se hace por medio de un
sistema de ultrasonido para eliminar el oxgeno y nitrgeno principalmente disueltos.

4. Cmo presenta los resultados el equipo?

La cromatografa liquida de alta eficacia es la tcnica analtica de separacin mas
ampliamente utilizada en la actualidad debido a su sensibilidad, a su adecaucion para
realizar determinaciones cuantitativas exactas y a su gran aplicabilidad a diferentes tipos
de sustancias, En principio se utiliz una alta presin para incrementar la velocidad lineal y
reducir la difusin de los compuestos en el interior de las columnas empaquetadas
mejorando asi la resolucin de la cromatografa. Hay 3 caracterisiticas principales que se
pueden usar para conseguir una separacin de HPLC, por polaridad, la carga elctrica y el
tamao molecular, despus de realizar la separacin por cualquiera de los tres mtodos el
equipo enva los datos mediante los anlisis posteriores por un detector el cual manda los
datos dependiendo de cul sea el detector dando caractersticas cualitativas y
cuantitativas de cada eluato que se logra separar (Mndez, M., 2009).



5. Aplicaciones En qumica Farmacutica.
La cromatografa por HPLC ha llegado a ser una de las tcnicas ms importantes para el
anlisis qumico y purificacin de compuestos en muchos laboratorio modernos. (Anaya,
et al; 2001) Por ser una cromatografa de gran versatilidad y capacidad de acoplar a gran
variedad de detectores se ha hecho muy importante en la industria farmacutica para
control de calidad cuando se necesitan saber cantidades de compuestos puros contenidos
en mezclas, tambin se utiliza para identificacin y caracterizacin de muestras
farmacuticas para determinar impurezas dentro de los medicamentos, para determinar
homogeneidad entre lotes as como otras aplicaciones para identificacin de sustancias
peligrosas en aguas para uso farmacutico.


Conclusiones:

Un equipo de HPLC es un equipo sofisticado que nos brinda una gran resolucin y
versatilidad de deteccin y acoplamientos.

El tratamiento previo de solventes y muestras para utilizar en el equipo es de gran
importancia para obtener mejores resultados y mantener el equipo en ptimas
condiciones.

El equipo de HPLC es de gran importancia en el uso farmacutico debido a que se puede
hacer una gran cantidad de muestras diferentes convirtindose en un equipo fundamental
en un laboratorio de anlisis farmaceutico.



Bibliografa:

Anaya, A; et al. (2001). Relaciones Qumicas entre Organismos: Aspectos Bsicos y Perspectivas
de su Aplicacin. Mxico: Plaza y Valds, S.A. Pp.186.
Mndez, M. (2009) Desarrollo de mtodos para el aislamiento y la deteccin de toxinas
marinas en productos de la pesca y la agricultura, (1 edicin) Editorial de la
universidade de Santiago de Compostela, Galicia, Espaa, Pag. 55
PHLC. (s.f.). Extrado el 17 diciembre 2013 desde:
http://tesis.uson.mx/digital/tesis/docs/19630/Capitulo2.pdf

Anexos: