En procariotas, factor sigma En eucariotas, sequencias cis-regulatorios, TATA, inr, enhancer In eucariotas, Pol II, TF, iniciacion, elongacion, terminacion Transcritos primarios y procesados
Dr. Gudrun Kausel, Instituto de Bioquimica, UACh Acido ribonucleico RNA En RNA U aparea con A Sntesis de RNA: hebra crece de 5!3 RNA
Estructura primaria: secuencia de los ribonucletidos
Estructura secundaria y terciaria: apareamiento intramolecular
! In vivo: complejos con protenas! RNAs cumplan funciones estructurales y catalticas Ej. Funcion estructural en formacin de ribosomas, ej: cataltica durante el empalme de intrones Flujo de la informacin gnica El mensajero (mRNA) lleva el mensaje, es la secuencia codificante que tiene los codones, tiene la misma secuencia que la hebra codificante, el templado es la hebra antisentido sentido sentido antisentido hebra El RNA mensajero lleva la informacin La RNA polimerasa se une al promotor y sintetiza RNA dependiente de DNA a partir del +1 en direccin 5-3, no necesita partidor (RNA) n + NTP ! (RNA) n+1 + PPi - Precursor activado: NTPs (= ATP, CTP, GTP, UTP) - RNA polimerasa - TEMPLADO (y no necesita partidor) - RNA polimerasa dependiente de DNA Biosntesis del RNA, RNA crece 5!3 Regiones promotoras con elementos consensus Sntesis del RNA mensajero en eucariotas y procariotas en procariotas la transcripcin esta acoplada espacial- y temporalmente a la traduccin RNA polimerasa en procariotas se compone de un core de ! ! ! !" y la holoenzima con subunidad sigma Solamente iniciacin de la transcripcin con subunidad sigma Transcripcin en procariotas iniciacin elongacin terminacin diferentes factores sigma para los distintos promotores en procariotas TIPO GENES TRANSCRITOS RNA pol I genes del rRNA 18S, 5.8S, 28S RNA pol II genes que codifican protenas RNA pol III tRNA genes, 5S rRNA genes, genes de pequeos RNAs En eucariotas hay tres RNA polimerasas Localizacin Inhibicin por !-amanitin nucleolo nucleo nucleo - +++ + Amanita phalloides RNA Pol I nucleolus no inhibicin RNA Pol II nucleus fuerte inhibicin RNA Pol III nucleus inhibicion
Inhibicin de transcripcin en eucariotas Antibioticos, inhibidores de transcripcin Seminsintetico, inhibe elongacin de transcripcin, Inhibe formacin del segundo o tercer enlace fosfodiester Rifampicin inhibe la elongacin despus de la unin de los primeros nucletidos (en procariotas) Otro antibiotico (en pro- y eucariotas) Actinomycin D Une DNA (intercala) y impide unin de la RNA Pol ! no hay transcripcin Transcritos primarios y transcritos maduros en pro- y eucariotas pre-rRNA ! rRNA procariota eucariota pre-tRNA ! tRNA mRNA pre-mRNA ! mRNA El nico transcrito primario que no se procesa es el mRNA de procariotas porque la transcripcin esta acoplada a la traduccin En eucariotas transcripcin de genes que codifican protenas RNA Pol II eucariotas Secuencia de consenso en promotor de gen transcrito por la RNA Pol II tss +1 Intiation site downstream promoter element TATA-Box eucariotas RNA Pol II Iniciacin de la transcripcin con factores de transcripcin generales general TFs TATA-Box binding protein TBP Se inicia la formacin del complejo de iniciacin con la unin del TBP en el TATA-box complejo de iniciacin fosforilacin del C-termino de la RNA Pol II ! elongacin reclutamiento de TFs generales de la RNA Pol II entrada de la RNA Pol II eucariotas Regulacin de la iniciacin de la transcripcin elementos cis- y trans-regulatorios enhancer factores de transcripcin generales factor de transcripcin especifico Secuencia DNA que une una protena regulatoria ! efecto a la estabilidad del complejo de iniciacin eucariotas Procesamiento del pre-mRNA al mRNA en el ncleo proteccin del 5 eliminacin de intrones proteccin del 3 eucariotas En eucariotas modificacin del 5 del mensajero por CAP eucariotas Eliminacin de los intrones por empalme (splicing) spliceosoma snRNAs (small nuclear RNA) que tambin se llaman U-RNAs, porque estn ricos en uridina participan los RNAs pequeos U1, U2, U4, U5, U6 cortar+ligar el pre-mRNA se forman particulas ribonucleoproteicas, que se componen de proteinas y pequeos RNAs nucleares procesamiento de eliminacin de intrones en el eucariotas RNA Pol II: terminacin de transcripcin y procesamiento del pre-mRNA en el 3 Clivaje de una parte del 3 del pre-mRNA poliadenilacin, en el 3 se sintetiza una cola poli-A eucariotas Exportacin del RNA por el poro nuclear al citoplasma eucariotas En eucariotas el mensajero maduro, el mRNA en el citoplasma eucariotas Ej. del tamao del gen y mensajero maduro eucariotas Hibridacin del mRNA con la secuencia del gen DNA Eucariotes tienen genes mosaicos, exon-intron eucariotas Varias protenas se pueden producir por empalme alternativo (alternative splicing) a partir de un pre-mRNA ! un gen varias protenas eucariotas En eucariotas - Genes interrumpidos (mosaic genes), grandes intrones - exones pueden determinar dominios de protenas - exon shuffling, adquisicin de nuevos combinaciones, nuevas protenas, sistema combinatoria (lego) - empalme alternativo aumenta numero y variabilidad de productos gnicos - evolucin Porque existen intrones, que importancia tienen intrones? Algunos genes no tienen intrones Ej: histonas, citoquinas, Porque? Genes de rRNA estn en mltiples copias en el genoma en tandem Secuencia intergenica no- transcrita (IGS)
secuencia transcrita 18S rRNA 5,8S rRNA 28S rRNA pre-rRNA procesamiento (cortar) 5ETS External transcribed sequence 3ETS External transcribed sequence ITS1 internal transcribed sequence ITS2 internal transcribed sequence Cluster de gen rRNA produce 18S, 5.8S y 28S rRNA UNIDAD SVEYDBERG S U3 En el procesamiento participa el pequeo RNA U3 Procesamiento del pre-rRNA En procariotas: pre- 16S, 5S, 23S rRNA rRNA RNA ribosomal
- >80% del RNA total de una clula, - muestra mucha estructura secundaria y terciaria - complejo macromolecular con protenas forma ribosomas ribosomas aprox. 2/3 rRNA y 1/3 protenas - funcin estructural y actividad cataltica Estructura secundaria Estructura terciaria rRNAs y protenas forman complejos macromoleculares, las ribosomas Biosntesis de ribosomas en el nucleolo tRNA - aprox. 15% del RNA total de una clula - aprox. 80 nt - muchas bases modificadas post- transcripcionalmente - estructura tridimensional oja de trebol, - un brazo 3CCA aceptor del aa, - un brazo anticodon Procesamiento del pre-tRNA Transcrito primario Pre-tRNA