Metabolismo microbiano

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Metabolismo microbiano
Raquel de los A. Junco Daz
Carlos M. Rodrguez Prez
INTRODUCCIN
El crecimiento microbiano requiere la formacin de estructuras bioqumicas complejas
como protenas, cidos nucleicos, polisacridos y lpidos a partir de elementos preformados
en el medio de crecimiento o ser sintetizados por la propia clula; a su vez, este crecimiento
necesita de una fuente de energa para ser llevado a efecto; todo este proceso se designa
con el nombre de metabolismo, que se define como todas las transformaciones qumicas que
ocurren en una clula. Cuando este va dirigido a la sntesis de macromolculas se le nombra
biosntesis o anabolismo, el cual requiere de un aporte de energa que proviene del metabo-
lismo degradativo o catabolismo; la forma qumica usual en que se encuentra la energa es
el adenosn-trifosfato (ATP), el cual es generado por diversos mecanismos como la fotosn-
tesis y a partir de compuestos inorgnicos y orgnicos. Estos elementos constitutivos o
macromolculas tienen su gnesis en unos pocos precursores denominados metabolitos
focales: glucosa-6-fosfato, fosfoenolpiruvato, oxalacetato y -cetoglutarato, estos se
interrelacionan y originan compuestos intermediarios: fosfatos de azcares, piruvato, acetil
CoA, aspartato, glutamato, etc.; y productos terminales como: aminocidos, bases
pirimidnicas, polisacridos, lpidos, entre otros (Fig. 6.1).
La formacin de una macromolcula se produce por los siguientes mecanismos:
1. Dirigidos por una plantilla: ADN y protenas.
a) ADN: sirve como modelo para la autorreplicacin y formacin de los ARN (mensajero,
ribosomal y de transferencia).
b) Protenas: el ARNm sirve de modelo para la sntesis de protenas.
2. Dirigidos por enzimas: lpidos y carbohidratos.
Estos elementos se autoensamblan y originan diversas estructuras celulares como:
ribosomas, pared celular, flagelos, membranas, etctera.
Es necesario que todo el proceso anterior (biosntesis) sea regulado en su velocidad y
actividad de las vas para que resulte equilibrado.
El metabolismo es un complejo proceso donde pueden utilizarse diversas vas o rutas
para asimilarse un compuesto simple y una sola de ellas puede poseer varios mecanismos de
control.
Microbiologa y Parasitologa Mdicas
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Oxalacetato
cido
cido asprtico
Homoserina
diaminopimlico
Metionina Treonina Lisina
Isoleucina
*
**
Piruvato
Alanina
Valina
Leucina
-cetoisovalerato
-cetoisocaproato
-cetoglutarato
3-fosfoglicerato
Triptfano
cido glutmico
Semialdehdo glutmico
Prolina Arginina
*
En bacterias.
**
En hongos
Serina
Glicina Cistena
Cistina
Indoglicerofosfato +
Lisina
.
Fig. 6.1. Familias biosintticas de
aminocidos.
METABOLISMO DEGRADATIVO
Todas las rutas biosintticas requieren la participacin de ATP, que dona grupos
fosfatos a diversos intermediarios metablicos convirtindolos en formas activadas, y tam-
bin enlaces ricos en energa; aunque existen otros compuestos con enlaces de alta energa
que son utilizados en ciertas vas como:
1. Guanina-trifosfato (GTP).
2. Uridina-trifosfato (UTP).
3. Citidina-trifosfato (CTP).
4. Acetil coenzima A (Acetil CoA).
GENERACIN DEL ATP
El ATP es generado por los siguientes mecanismos que tienen lugar a nivel de
membranas:
1. Fosforilacin a nivel de sustrato.
2. Transporte de electrones.
MODOS DE METABOLISMO GENERADOR DE ATP
1. Oxidacin biolgica:
a) Fermentacin: exclusiva de bacterias.
b)Respiracin: exclusiva de bacterias y tres gneros de hongos.
2. Fotosntesis.
Fermentacin
Proceso metablico generador de ATP en el que compuestos orgnicos sirven tanto
de donadores (oxidacin) como de aceptores de electrones (reduccin) (Cuadro 6.1). Los
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principales sustratos de la fermentacin son los carbohidratos, aunque las bacterias pueden
utilizar tambin cidos orgnicos, aminocidos, purinas y pirimidinas.
Cuadro. 6.1. Patrones de reacciones de oxidorreduccin suministradoras de energa utilizadas por las
bacterias
Donador de H
2
Aceptor de H
2
O
2
NO
3

, SO
4

, fumarato Compuestos orgnicos

(respiracin anaerobia) (respiracin anaerobia) (fermentacin)
Sustancias I. Respiracin aerobia II. Respiracin anaerobia de
inorgnicas de sustancias inorgnicas sustancias inorgnicas (Ninguno)
Ej.: (Nitrosomonas) Ej.: (Thiobacillus denitrificans)
NH
3

NO

S SO

O
2
H
2
O NO N
2
Sustancias III. Respiracin aerobia IV. Respiracin anaerobia de V. Fermentacin de or
de sustancias orgnicas sustancias orgnicas sustancias orgnicas
Ej.: (Muchos organismos) Ej.: (Desulfovibrio) Ej.: (Streptococcus)
Glucosa CO
2
cido lctico CO
2
- 4 H
O
2
H
2
O SO

H
2
S Glucosa 2-piruvato
+ 4H
2 cido lctico
Tomado de: Jawetz, E y cols.: Manual de Microbiologa Mdica. 14ta ed., 1981.
La fosforilacin a nivel de sustrato es el nico modo posible de formacin de ATP como
resultado de una fermentacin, la cual puede ser realizada por los siguientes grupos de
microorganismos:
1. Anaerobios estrictos.
2. Facultativos.
3. Anaerobios aerotolerantes.
En los dos primeros, la presencia de oxgeno modifica el metabolismo generador de
ATP; en el tercero esto no ocurre.
Respiracin
Proceso metablico generador de ATP en el que tanto compuestos orgnicos (organis-
mos hetertrofos) como inorgnicos (littrofos, exclusivo de las bacterias) sirven para donar
electrones, y para aceptar los mismos, slo los inorgnicos (reduccin) (Cuadro 6.2). En el
caso de los microorganismos aerobios, el ltimo aceptor es el oxgeno y en los anaerobios,
los sulfatos, nitratos y carbonatos; los facultativos pueden generar ATP por fermentacin
como los anaerobios.
La respiracin aerobia es la ms completa, eficiente y evolucionada; consta de tres
etapas fundamentales:
1. Formacin de piruvato a partir de azcares, grasas o protenas.
2. Ciclo del cido tricarboxlico.
3. Cadena de transporte de electrones.
En todo proceso respiratorio lo ms distintivo es la presencia de compuestos que pue-
den ser oxidados y reducidos de forma reversible, estos forman la cadena de transporte de
electrones, donde se forma ATP mediante un mecanismo denominado fosforilacin oxidativa.
Fotosntesis
Utilizacin de la luz como fuente de energa. Aqu el ATP es producido por transferencia
de energa de la luz absorbida por pigmentos fotosintticos, anlogo a la fosforilacin oxidativa.
3
4 2
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Microbiologa y Parasitologa Mdicas
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Cuadro. 6.2. Vas de metabolismo de los carbohidratos
Vas Compuestos intermedios claves generados
Va de Embden-Meyerhof Glucosa-1-fosfato
3-fosfogliceraldehdo
Fosfoenolpiruvato (PEP)
Piruvato
Va oxidativa directa Pentosafosfatos
D-eritrosa-4-fosfato
Descarboxilacin del piruvato Acetil CoA
CO
2
Ciclo de los cidos Oxalacetato
tricarboxlicos (CAT) y su -cetoglutarato
regeneracin por la carboxi- CO
2
lacin del PEP
Tomado de: Jawetz E y cols. Manual de Microbiologa Mdica. 14ta ed., 1981.
Los organismos fotosintticos (plantas, algas, cianobacterias) utilizan el CO
2
como
fuente de carbono y el hidrgeno como aceptor final, el cual se oxida y se forma agua. Ciertos
procariotas fotosintticos (bacterias rojas y verdes) emplean compuestos inorgnicos como
el hidrgeno y el cido sulfhdrico como aceptor final.
VAS O RUTAS CATABLICAS COMUNES
EN EL METABOLISMO FERMENTATIVO Y RESPIRATORIO
CON UN METABOLITO INTERMEDIARIO CLAVE:
EL CIDO PIRVICO
1. Va de Embden-Meyerhof- Parnas (glucoltica): mecanismo comn de fermentacin de
la glucosa, transforma al fosfato de hexosa en dos triosas y a estos en dos molculas de
piruvato. Esta va produce un rendimiento neto de dos moles de ATP por mol de glucosa
fermentada y forma 2 NADH. Proceso poco eficiente por la cantidad de energa que an
queda en el sustrato. Donantes y aceptores son molculas orgnicas y en muchas oca-
siones son la misma molcula. Para que el NADH sea reoxidado por necesidades celula-
res, el cido pirvico debe reducirse y esto depende de la clula. La fermentacin es
distintiva de grupo y especie (Cuadro 6.3).
2. Va de las pentosas-fosfato: cumple dos funciones vitales para el metabolismo:
a) Produce la ribosa-5-fosfato para la sntesis de cidos nucleicos.
b)Elabora gran parte de NADPH requerido en la biosntesis.
3. Va de Entner-Doudoroff: produce slo una molcula de fosfato de triosa a partir de la
glucosa, por tanto, la produccin de energa es baja, slo un ATP y dos NADH.
Las vas 1 y 2 se observan en muchos organismos (procariotas y eucariotas); la 3 se halla
restringida a ciertos grupos de procariotas.
4. Ciclo del cido tricarboxlico: ruta principal de produccin de ATP en aerobios. Genera
compuestos intermediarios requeridos en rutas biosintticas. Se oxida una molcula de
cido actico a CO
2
, se producen tres molculas de NADH y un par de electrones que
entran en la cadena de transporte de electrones (complejos enzimticos asociados a
membranas) independientes del NADH.
Esta cadena de transporte de electrones se caracteriza por poseer protenas con un
ncleo de Fe++ (citocromos a, b, c), que permiten el paso de protones de una mlecula a
otra; esto es reversible, crendose una diferencia de energa utilizada para la sntesis del
ATP; a esto se llama fosforilacin oxidativa, finalmente el O
2
acepta el H
2
y se forma H
2
O.
El paso de electrones de un citocromo a otro se efecta por la presencia de enzimas
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citocromoxidasas y ATPasas. En bacterias, la cadena de electrones es la misma, slo que la
variedad de citocromos y citocromoxidasas es mayor, lo cual permite simultanear varias
cadenas; por ello, en condiciones adversas, pueden utilizar la que ms le convenga.
VAS BIOSINTTICAS
Muchos microorganismos son capaces de asimilar los principales bioelementos (carbo-
no, nitrgeno, azufre, hidrgeno y oxgeno) en forma inorgnica: el carbono como CO
2
; el
nitrgeno como amonaco, nitrato o N
2
; el azufre como sulfato, y el oxgeno y el hidrgeno
como agua. La utilizacin de CO
2
como nica fuente de carbono y energa es caracterstica de
los microorganismos auttrofos, incluidas las algas y muchas bacterias fotosintticas y
quimioautotrficas. El amonaco puede ser utilizado como nica fuente de nitrgeno por
muchos organismos pertenecientes a todas las categoras nutricionales; algunos de estos
microorganismos tambin emplean nitratos. La capacidad de utilizar N
2
como fuente de
nitrgeno (fijacin del nitrgeno) est restringida a procariotas y es relativamente rara,
incluso, dentro de este grupo. La mayora de los microorganismos pueden utilizar sulfato
como fuente de azufre.
SNTESIS DE COMPONENTES DE LA PARED CELULAR
La sntesis de los componentes de la pared es nica entre los biopolmeros porque la
polimerizacin tiene lugar fuera de la membrana celular, en donde no hay ATP disponible. La
biosntesis de la capa de peptidoglucano de la pared sirve de ejemplo til para ver como
pueden ser sintetizados polmeros extra-membrana.
Cuadro 6.3. Fermentaciones microbianas basadas en la va de Embden-Meyerhof-Parnas
Fermentacin Organismos Productos
Alcohol etlico Algunos hongos Alcohol etlico, CO
2
(en especial algunas
levaduras)
cido lctico Streptococcus cido lctico (representa
(homofermentacin) Algunas especies de cuando menos 90 % de
Lactobacillus la fuente energtica
del carbono)
Butilenglicol Enterobacter Alcohol etlico, acetona,
Aeromonas 2,3butilenglicol, CO
2
,
Bacillus polymyxa cido lctico, cido ac-
tico, cido frmico
(cidos totales = 21 moles)
cido propinico Clostridium propionicum cido propinico, cido
Propionibacterium actico, cido succnico, CO
2
Corynebacterium
diphtpheriae
Algunas especies de:
Neisseria, Veillonella,
Micromonospora
cidos mixtos Escherichia cidos: lctico, actico,
Salmonella frmico, succnico, H
2
, CO
2
,
Shigella alcohol etlico (cidos tota-
Proteus les = 159 moles)
Alcohol butlico-cido butlico Butyribacterium Alcohol butlico, cido
Zymosarcina maxima butrico, acetona,
Algunas especies de isopropanol, cido actico,
Clostridium y Neisseria alcohol etlico, H
2
, CO
2
Tomado de: Jawetz E y cols. Manual de Microbiologa Mdica. 14ta ed., 1981.
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SNTESIS DEL PEPTIDOGLUCANO
Las unidades repetitivas del peptidoglucano se sintetizan dentro del citoplasma, mien-
tras estn unidas al nucletido uridn difosfato (UDP); luego, son transferidas a un lpido
transportador que facilita su desplazamiento a travs de la membrana. Finalmente, se
polimerizan dando peptidoglucano en la cara externa de la membrana, gracias a enzimas
localizadas en esta regin.
El peptidoglucano difiere de todos los biopolmeros en que es una red bidimensional en
lugar de una cadena de molculas; rodea la clula como si fuera un saco. Por ello, su sntesis
requiere que las unidades repetitivas sean enlazadas qumicamente en dos dimensiones. La
composicin qumica del saco del peptidoglucano es similar en todos los procariotas, dife-
rencindose slo en la composicin de aminocidos dentro de la cadena tetrapeptdica y en
la naturaleza y frecuencia de los enlaces entre las distintas cadenas tetrapeptdicas.
El cido N-acetilmurmico se va sintetizando gradualmente en el citoplasma, mientras
est unido al UDP; luego es transferido a un lpido C
55
isoprenoide (bactoprenol) que acta
de transportador y est en la membrana. De esta manera se aade un resto de N-acetil-
glucosamina, completndose la subunidad monomrica del peptidoglucano. Unida a la larga
cadena del lpido, la subunidad puede atravesar la membrana hasta llegar a la cara externa, en
donde es polimerizada mediante enlaces 1,4-glucosdicos, en un punto de crecimiento del
saco de peptidoglucano. Finalmente, si la nueva subunidad monomrica ha de estar implica-
da en un enlace transversal entre cadenas peptdicas, una enzima de la porcin externa de la
membrana cataliza una reaccin de transpeptidacin rompiendo el enlace peptdico entre los
dos restos subterminales de D-alanina y el grupo amnico libre del cido diaminopimlico de
una cadena peptdica adyacente. Si el pptido no est implicado en un enlace transversal, la
misma enzima elimina el grupo terminal de D-alanina sin formar un nuevo enlace peptdico.
Como la capa de peptidoglucano es responsable de la fortaleza estructural que resiste la
presin osmtica interna, tpica de las bacterias que crecen en la mayora de los ambientes,
mientras la clula crece debe quedar intacta en su mayor parte. Sin embargo, el peptidoglucano
puede compararse con una red. La rotura de la malla en un punto no reduce su fuerza
estructural de manera significativa. Durante el crecimiento, el saco de peptidoglucano se va
abriendo en distintos puntos gracias a enzimas autolticas sumamente controladas, permi-
tiendo as su agrandamiento mediante la insercin de nuevas subunidades monomricas.
SNTESIS DEL LIPOPOLISACRIDO
La capa ms externa de la pared de las bacterias gramnegativas aparece en las
microfotografas electrnicas similar a la membrana celular. Sin embargo, su estructura qumi-
ca es diferente. Contiene un material lipdico complejo, el lpido A, que a su vez contiene
pares de restos de glucosamina sustituidos por cidos grasos de cadena larga y por fosfato.
El lpido A est unido a un carbohidrato complejo el cual est compuesto por una variedad de
azcares, incluido el 2-ceto-3-desoxioctanato, un compuesto que slo se halla en la capa de
polisacridos. Al final, en la parte externa de la capa se encuentran cadenas de polisacridos
que penetran en el medio, estas son las cadenas especficas O (antgeno O), las cuales
confieren propiedades antignicas especficas a las bacterias gramnegativas.
Actualmente se conoce que la ruta de sntesis del antgeno O tiene cierto parecido con
la del peptidoglucano, ya que durante su sntesis est unida a un lpido isoprenoide C
55
. Sin
embargo, difiere en que la sntesis compleja tiene lugar mientras est unida al lpido C
55
.
SNTESIS DE LOS POLMEROS CAPSULARES
EXTRACELULARES
Los polmeros capsulares se sintetizan de manera enzimtica a partir de subunidades
activadas. Este proceso no requiere de la participacin de ningn portador lpido fijo a la
membrana. La presencia de cpsulas depende a menudo del ambiente, por ejemplo, se pue-
den sintetizar dextranos y levanos slo si se dispone de sacarosa en el medio.
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SNTESIS DE GRNULOS ALIMENTICIOS DE RESERVA
Las bacterias convierten algunos de los nutrientes en exceso en grnulos alimenticios
intracelulares de reserva. Los principales son: almidn, glucgeno, poli--hidroxibutirato y
volutina, la cual consiste en polifosfato inorgnico. El tipo de grnulo formado es especfico
de especie. Los grnulos se degradan cuando se agotan los nutrientes exgenos.
REGULACIN
En la clula operan dos mecanismos diferentes de regulacin: la regulacin de la sntesis
enzimtica y la regulacin de la actividad enzimtica. En ambos casos, actan de mediadores
componentes de bajo peso molecular, los cuales o bien son formados en la clula como
metabolitos intermediarios, o bien entran en ella procedentes del medio. En ambos mecanis-
mos reguladores actan protenas alostricas.
Las protenas alostricas son aquellas cuyas propiedades cambian si se les unen mo-
lculas especficas denominadas efectores. Existen dos clases de protenas alostricas: las
enzimas alostricas cuya actividad se incrementa o se inhibe cuando se combinan con sus
efectores, y las protenas alostricas reguladoras que modulan la actividad de enzimas espe-
cficas.
REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Las protenas alostricas estudiadas con mayor detalle han sido las enzimas alostricas,
cuyo ejemplo lo constituye la aspartato transcarbamilasa (ATCasa), que cataliza la primera
reaccin de la biosntesis de las pirimidinas y cuya actividad es inhibida por un producto
final, la citidina trifosfato (CTP). Concentraciones intracelulares elevadas de CTP inhiben el
funcionamiento de la ATCasa y, en consecuencia, la formacin de ms CTP hasta que su
concentracin disminuye a un nivel ptimo. El ATP, un segundo efector de la ATCasa, activa
la enzima, sirviendo para coordinar la sntesis de nuletidos de purina y pirimidina. Las
enzimas alostricas son siempre protenas de peso molecular relativamente elevado, com-
puestas por mltiples subunidades. Por regla general, estas subunidades son idnticas,
poseyendo cada una un lugar cataltico y otro alostrico. No obstante, la ATCasa se compo-
ne de dos clases diferentes de subunidades, una con funcin cataltica y otra con funciones
reguladoras.
REGULACIN DE LA SNTESIS ENZIMTICA
La inhibicin por el producto final mediada por enzimas alostricas es en gran medida
suficiente para asegurar que todas las rutas catablicas y biosintticas operen en equilibrio.
Sin embargo, cuando no es necesario el producto de una ruta metablica, las enzimas que
catalizan las reacciones de las mismas resultan innecesarias.
Muchas bacterias son capaces de utilizar un amplio espectro de compuestos orgnicos
diferentes como fuente de carbono y energa, pero en un momento dado, puede que slo uno
de estos compuestos est presente en el medio. Aunque la informacin gentica necesaria
para sintetizar las enzimas importantes se encuentra siempre presente, su expresin fenotpica
est determinada por el medio, y una enzima determinada se sintetiza en respuesta a la
presencia de su sustrato.
RESUMEN
Se describe el concepto de metabolismo, su subdivisin en anabolismo o biosntesis
con el consiguiente consumo energtico, y catabolismo o metabolismo degradativo provee-
dor de la energa necesaria para la biosntesis. Son expuestos los metabolitos focales (gluco-
sa-6-fosfato), fosfoenolpiruvato, oxalacetato y -cetoglutarato, como precursores de las
macromolculas y la generacin del ATP para formar los mismos mediante la fosforilacin
Microbiologa y Parasitologa Mdicas
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oxidativa y el transporte de electrones. Se detallan aspectos de los modos de metabolismo
generador de ATP (fermentacin, respiracin y fotosntesis) con el balance energtico gene-
ral, tambin las vas o rutas catablicas comunes en el metabolismo fermentativo y respirato-
rio, donde existe un metabolito intermediario clave: el cido pirvico.
Se brindan algunos aspectos de las principales vas biosintticas, tales como la sntesis
de los componentes de la pared celular (peptidoglucano y lipopolisacrido), los polmeros
capsulares extracelulares y los grnulos alimenticios de reserva. Adems, se describen los
dos mecanismos diferentes de regulacin: la regulacin de la sntesis enzimtica y la regula-
cin de la actividad enzimtica.
BIBLIOGRAFA
Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. Microbiologa mdica de Jawetz, Melnick y Adelberg. 15ta ed. Mxico
D.F.: Ed. El Manual Moderno, 1996.
Jurtshuk P. Bacterial Metabolism. In: Medical Microbiology. 4th ed. Samuel Baron (ed.). USA: The
University of Texas Medical Branch at Galveston, 1996.
Stanier RY, Adelberg EA, Ingraham JL. Microbiologa. 4ta ed. Barcelona: Editorial Revert SA, 1984.