9 Distribucin y transporte

de protenas
Retculo endoplsmico,
aparato de Golgi y lisosomas



Retculo endoplsmico 347

Aparato de Golgi 364

Mecanismo de transporte
de vesculas 372

Lisosomas 378

EXPERIMENTO CLAVE:

Hiptesis de la seal 352

MEDICINA MOLECULAR:

Enfermedad de Gaucher 381



ADEMS DE POR LA PRESENCIA DE UN NUCLEO, las clulas eucariotas se distinguen de las
clulas procariotas por la presencia en el citoplasma de orgnulos rodeados de membrana. Estos
orgnulos proporcionan compartimentos diferenciados en los que tienen lugar actividades celulares
especficas, y la subdivisin resultante del citoplasma permite a las clulas eucariotas funcionar
eficientemente a pesar de su gran tamao (aproximadamente 1 00 veces el volumen de las bacterias).

Debido a la compleja organizacin interna de las clulas eucariotas, distribuir y dirigir a las protenas
hacia sus destinos adecuados son tareas considerables. El primer paso en la distribucin de las
protenas tiene lugar mientras an est en marcha la traduccin. Muchas protenas destinadas al
retculo endoplsmico, al aparato de Golgi, a los lisosomas, a la membrana plasmtica y a ser
secretadas se sintetizan en los ribosomas unidos a la membrana del retculo endoplsmico. A medida
que la traduccin contina, las cadenas polipeptdicas se transportan al interior del retculo
endoplsmico, donde tiene lugar el plegamiento y procesamiento de las protenas. Desde el retculo
endoplsmico, las protenas se transportan en vesculas al aparato de Golgi, donde son nuevamente
procesadas y distribuidas para el transporte a los lisosomas, a la membrana plasmtica o a ser
secretadas desde la clula. El retculo endoplsmico, el aparato de Golgi y los lisosomas se
La Clula
Coopers - Marban
Madrid 00
2 Edicin
diferencian de esta manera de otros orgnulos citoplsmicos en que intervienen conjuntamente en el
procesamiento de las protenas y en que estn conectados mediante vesculas de transporte.


Retculo endoplsmico

El retculo endoplsmico es una red de tbulos y sacos (cisternas) rodeados de membrana que se
extiende desde la membrana nuclear por todo el citoplasma (Fig. 9.1). Todo el retculo endoplsmico
est rodeado por una membrana continua y es el orgnulo ms grande de la mayora de las clulas
eucariotas. Su membrana puede representar aproximadamente la mitad de todas las membranas de la
clula, y el espacio encerrado por el RE (la luz, o espacio de las cisternas) puede representar
alrededor del 1 0 % de todo el volumen celular. Como se trat previamente, hay dos tipos distintos
de RE que realizan funciones diferentes en la clula. El RE rugoso, que est cubierto por ribosomas
en su superficie externa, participa en el procesamiento de las protenas. El Re liso no est asociado
con los ribosomas y est implicado en el metabolismo de los lpidos, en lugar de en el de las protenas.

Retculo endoplsmico y secrecin de protenas

Figura 9.1

El papel del retculo endoplsmico en el procesamiento y distribucin de las protenas fue demostrado
por primera vez por George Palade y sus colaboradores en los aos 60 (Fig. 9.2). Estos
investigadores estudiaron el destino de las protenas recin sintetizadas en unas clulas especializadas
del pncreas (clulas pancreticas acinares) que secretan enzimas digestivas al intestino delgado.
Debido a que la mayora de las protenas sintetizadas por estas clulas son secretadas, Palade y
colaboradores fueron capaces de estudiar la ruta tomada







Figura 9.2
Va secretora. Las clulas acinares pancreticas, que secretan la mayor parte de sus protenas sintetizadas de novo
en el tracto digestivo, se marcaron con aminocidos radiactivos para estudiar la va intracelular utilizada por las
protenas secretadas. Tras un corto periodo de incubacin con aminocidos radiactivos (marcaje de 3 minutos), la
autorradiografa puso de manifiesto que las protenas sintetizadas de novo se localizaban en el RE rugoso. Tras
una incubacin posterior con aminocidos no radiactivos (caza), se observ que las protenas se haban
desplazado desde el RE al aparato de Golgi y despus, en el interior de vesculas de secrecin, a la membrana
plasmtica y al exterior de la clula.
El papel del retculo endoplsmico en el procesamiento y distribucin de las protenas fue demostrado
por primera vez por George Palade y sus colaboradores en los aos 60 (Fig. 9.2). Estos
investigadores estudiaron el destino de las protenas recin sintetizadas en unas clulas especializadas
del pncreas (clulas pancreticas acinares) que secretan enzimas digestivas al intestino delgado.
Debido a que la mayora de las protenas sintetizadas por estas clulas son secretadas, Palade y
colaboradores fueron capaces de estudiar la ruta tomada
Figura9.1 Retculo endoplsmatico (RE). (A) Microfotografa electrnica del RE rugoso en clulas de higado
de rata. Los ribosomas estn unidos a la cara citoslica de la membrana del RE. (B) Microfotografa
electrnica del RE liso en las clulas de Lydig del testculo, que participan activamente en la sntesis de
hormonas esteroideas. (A. Richard Rodewald, University of Virginia/ Biological Photo Service; B, Dan
Fawcett/Photo Researchers, Inc.)

Figura 9.2

por las protenas secretadas simplemente mediante el marcaje con aminocidos radiactivos de las
protenas recin sintetizadas. La localizacin en la clula de las protenas marcadas radiactivamente se
determin a continuacin mediante una autorradiografa, poniendo de manifiesto los lugares celulares
implicados en los procesos que conducen a la secrecin de las protenas. Despus de una breve
exposicin de las clulas acinares pancreticas a los aminocidos radiactivos, se detectaron protenas
sintetizadas de novo en el RE rugoso, por lo que se le identific como el lugar de sntesis de las
protenas destinadas a la secrecin. Si a continuacin las clulas se incubaban durante un corto
perodo de tiempo en un medio que contena aminocidos no radiactivos (proceso conocido como
caza), las protenas marcadas radiactivamente se detectaban en el aparato de Golgi. Tras perodos
de caza ms largos, las protenas marcadas radiactivamente migraban desde el aparato de Golgi a la
superficie celular en vesculas de secrecin, que posteriormente se fusionaban con la membrana
plasmtica para liberar su contenido fuera de la clula.

Estos experimentos definieron una va tomada por las protenas secretadas, la va secretora
RE rugoso, Golgi , vesculas de secrecin-exterior de la clula. Estudios adicionales ampliaron estos
resultados y demostraron que esta va no est restringida a las protenas destinadas a ser secretadas.
Las protenas de la membrana plasmtica y las lisosmicas tambin migran desde el RE rugoso hasta
el Golgi y posteriormente a sus destinos finales. Otras protenas pasan por las etapas iniciales de la
va secretora pero posteriormente son retenidas y su actividad tiene lugar en el RE o en el aparato de
Golgi.

Por lo tanto, la entrada de las protenas en el RE representa un cruce de caminos muy importante en el
trfico de protenas en las clulas eucariotas. Las protenas destinadas a ser secretadas o a
incorporarse en el RE, aparato de Golgi, lisosomas, o membrana plasmtica son dirigidas inicialmente
al RE. En las clulas de los mamferos, la mayora de las protenas son transferidas al RE mientras
estn siendo traducidas por los ribosomas unidos a la membrana (Fig. 9.3).

Por el contrario, las protenas destinadas a permanecer en el citosol o que se van a incorporar al
ncleo, a las mitocondrias, cloroplastos o peroxisomas son sintetizadas en los ribosomas libres y
liberadas al citosol cuando finaliza su traduccin.


Marcaje de las protenas para dirigirse al retculo endoplsmico

Las protenas pueden ser translocadas al RE durante su sntesis en los ribosomas unidos a la
membrana (translocacin cotraduccional) o una vez que la traduccin se ha completado en los
ribosomas libres en el citosol (translocacin postraduccional). En las clulas de los mamferos, la
mayora de las protenas entran en el RE de manera cotraduccional, mientras que en las levaduras se
utilizan tanto la va cotraduccional como la postraduccional. El primer paso en la va cotraduccional es
la asociacin de los ribosomas con el RE. La marca que determina que los ribosomas se unan con la
membrana del RE es la secuencia de aminocidos de la cadena polipeptdica que est siendo
sintetizada, en vez de propiedades intrnsecas del propio ribosoma. Los ribosomas libres y los unidos
a la membrana son funcionalmente indistinguibles, y toda la sntesis proteica se inicia en los ribosomas
que estn libres en el citosol. Los ribosomas implicados en la sntesis de protenas destinadas a ser
secretadas estn marcados para dirigirse al retculo endoplsmico mediante
localizada en el extremo amino-terminal de la cadena polipeptdica en crecimiento. Estas secuencias
seal son pequeos segmentos de aminocidos hidrfobos que son escindidos de la cadena
polipeptdica durante su transferencia a la luz del RE.
Figura 9.4

El papel general de las secuencias seal para dirigir a las protenas a sus localizaciones adecuadas en
la clula se dilucid por primera vez mediante estudios sobre la internalizacin de las protenas de
Figura 9.4 - Aislamiento del RE rugoso. Cuando las clulas se rompen, el RE se fragmenta en pequeas vesculas denominadas
microsomas. Los microsomas derivados del RE rugoso (microsomas rugosos) estn rodeados por ribosomas ensu superficie externa.
Debiso a que los ribosomas contienen una gran cantidad de ARN, los microsomas rugoso son ms densos que los microsomas lisos y sse
pueden aislar mediante centrifugacin de equilibrio en gradiente de densidad.
secrecin en el RE. Estos experimentos utilizaron preparaciones n vitro de RE rugoso, que se
aislaron de extractos celulares mediante centrifugacin en un gradiente de densidad (Fig. 9.4). Cuando
las clulas se rompen, el RE se fragmenta en pequeas vesculas denominadas. Puesto que las
vesculas derivadas del RE rugoso estn recubiertas por ribosomas, stas pueden separarse de
vesculas similares derivadas del RE liso o de otras membranas (p. ej., la membrana plasmtica).
Concretamente la gran cantidad de ARN existente en los ribosomas aumenta la densidad de las
vesculas de membrana a las que estn unidos, permitiendo la purificacin de las vesculas derivadas
del RE rugoso (microsomas rugosos) mediante centrifugacin de equilibrio en gradientes de densidad.

David Sabatini y Gnter Biobel propusieron por primera vez en 1971 que la seal para la unin del
ribosoma al RE era una secuencia de aminocidos prxima al extremo amino-terminal de la cadena
polipeptdica en crecimiento. Esta hiptesis fue apoyada por los resultados de la traduccin in vitro
de ARNm que codifican protenas secretadas, como las inmunoglobulinas (Fig. 9.5). Si un ARNm
que codifica una protena secretada era traducido in vitro por ribosomas libres, se observaba que la
protena producida era ligeramente mayor que la protena normal secretada. Sin embargo, si se
aadan microsomas al sistema la protena traducida in vitro se incorporaba a los microsomas y se
escinda en el tamao adecuado, Estos experimentos condujeron a que se formulara de una manera
ms detallada la hiptesis de la seal, proponiendo que una secuencia gua amino-terminal marca y
dirige la cadena polipeptdica a los microsomas y que es escindido posteriormente por una proteasa
microsomal. Muchos hallazgos posteriores han sostenido este modelo, incluyendo experimentos con
ADN recombinante que han demostrado que la adicin de una secuencia seal a una protena que
normalmente no es secretada es suficiente para dirigir la incorporacin de la protena recombinante al
RE rugoso.
El papel general de las secuencias seal para dirigir a las protenas a sus localizaciones adecuadas en
la clula se dilucid por primera vez mediante estudios sobre la internalizacin de las protenas de

Figura 9.7

El mecanismo por el que las protenas secretadas son dirigidas al RE durante su traduccin (va
cotraduccional) se conoce bien actualmente. Las secuencias seal estn constituidas
aproximadamente por 20 aminocidos, incluyendo un grupo de residuos hidrfobos, habitualmente en
el extremo amino-terminal de la cadena polipeptdica (Fig. 9.6). A medida que salen del ribosoma, las
secuencias seal son reconocidas y unidas a una que est constituida por seis polipptidos y un ARN
citoplsmico pequeo ( ). La PRS se une tanto al ribosoma como a la secuencia seal, inhibiendo
la traduccin y dirigiendo todo el complejo (PRS, ribosoma, y la cadena polipeptdica en crecimiento)
al RE mediante la unin al receptor de la PRS en la membrana del RE (Fig. 9.7). La unin al receptor
libera a la PRS del ribosoma y de la secuencia seal de la cadena polipeptdica en crecimiento.
Entonces el ribosoma se une a un complejo de translocacin de protenas en la membrana del RE, y la
secuencia seal es insertada en un canal de la membrana. En las levaduras y en las clulas de los
mamferos, los canales de translocacin que atraviesan la membrana de RE estn constituidos por
tres protenas transmembrana, denominadas protenas Sec6l. Las protenas Sec6l de las levaduras y
los mamferos estn estrechamente relacionadas con las protenas de la membrana plasmtica que
translocan los polipptidos secretarios en las bacterias, demostrndose una conservacin significativa
de la maquinaria de secrecin de protenas en las clulas procariotas y eucariotas. La transferencia
de ribosoma desde la PRS al complejo Sec6l permite que se reanude la traduccin, y la cadena
polipeptdica en crecimiento se transfiere directamente al canal Sec6l y atraviesa la membrana del RE
a medida que contina la traduccin. As, el proceso de la sntesis de protenas dirige directamente la
transferencia de las cadenas polipeptdicas en crecimiento a travs de canal Sec6l y al interior del RE.
A medida que contina la translocacin, la peptidasa seal escinde la secuencia seal y el polipptido
es liberado en la luz del RE.

Muchas protenas en las levaduras, as como algunas protenas en las clulas de los mamferos, son
dirigidas al RE tras haber sido traducidas (translocacin postraduccional), en lugar de ser transferidas
al RE durante su sntesis en los ribosomas unidos a la membrana. Estas protenas son sintetizadas en
ribosomas citoslicos libres, y su incorporacin postraduccional al RE no requiere una PRS. En su
lugar, sus secuencias seal son reconocidas por protenas receptoras diferentes (el complejo
Figura 9.7. - Direccin contradiccional de protenas de secrecin al
RE. Paso 1: A medida que la secuencia seal emerge del ribosoma, es
reconocida y unida a la particula de reconocimiento de la seal (PRS).
Paso 2: La PRS acompaa al complejo hasta la membrana del RE,
donde se une al receptor de la PRS. PAso 3: La PRS se libera, el
ribosoma se une a un complejo de translocacin de membrana se
protena Sec61, y la secuencia seal se inserta en un canal de
membrana. Paso 4: Se reanuda la traduccin, y la cadena poliptdica en
crecimiento es translocada a travs de la membrana. Paso 5: La escisin
de la secuencia seal por la peptidasa de la seal libera el polipptido
en la luz del RE.
Sec62/63) asociadas con el complejo Sec6l en la membrana del RE (Fig. 9.8). Se requieren
chaperonas citoslicas para mantener las cadenas polipeptdicas en una conformacin desplegada
para que puedan entrar en el canal Sec6l, y se requiere otra chaperona en el RE (denominada BiP)
para tirar de la cadena polipeptdica a travs del canal y hacia dentro del RE. Parece que la unin de
las cadenas polipeptdicas a BiP es necesaria para dirigir la traslocacin postraduccional de las
protenas al RE, mientras que la translocacin cotraduccional de las cadenas polipeptdicas en
crecimiento est dirigida directamente por el proceso de la sntesis proteica.

Figura 9.8

Insercin de las protenas en la membrana del RE

Las protenas cuyo destino es ser secretadas o residir en la luz del RE, aparato de Golgi, o lisosomas
son translocadas a travs de la membrana y liberadas en la luz del RE tal como ya se ha descrito. Sin
embargo, las protenas destinadas a incorporarse en la membrana plasmtica o en la membrana del
RE, Golgi, o lisosomas se insertan inicialmente en la membrana del RE en lugar de ser liberadas a la
luz. Desde la membrana del RE continan hasta su destino final por la misma ruta que la de las
protenas secretadas: RE-Golgi-Membrana plasmtica o lisosomas. Sin embargo, estas protenas son
transportadas a lo largo de esta ruta como componentes de la membrana, en lugar de como protenas
solubles.

Figura 9.9

Las protenas integrales de la membrana se incluyen en la membrana mediante regiones hidrofbicas
que atraviesan la bicapa lipdica (Fig. 2.48). Las partes de estas protenas que atraviesan la membrana
suelen ser regiones en hlice alfa constituidas por 20 a 25 aminocidos hidrfobos. La formacin de
una hlice alfa maximiza los puentes de hidrgeno entre los enlaces peptdicos, y las cadenas laterales
hidrfobas de los aminocidos interaccionan con las colas de cidos grasos de los fosfolpidos. Sin
embargo, las distintas protenas integrales de la membrana difieren en cmo estn insertadas. (Fig.
9.9). Por ejemplo, mientras que algunas protenas integrales atraviesan la membrana una sola vez,
otras tienen mltiples regiones que atraviesan la membrana. Adems, algunas protenas estn
orientadas en la membrana con su extremo amino-terminal en el lado citoslico; otras tienen su
extremo carboxilo-terminal expuesto al citosol. La orientacin de las protenas insertadas en el RE,
Golgi, lisosomas y membranas plasmticas se establece a medida que las cadenas polipeptdicas en
crecimiento se translocan en el RE. La luz del RE equivale topolgicamente al extede las protenas de
la membrana plasmtica que estn expuestos en la superficie celular se corresponden con las regiones
de la cadena polipeptdica que se translocan al interior del RE (Fig. 9.10).

El mecanismo ms directo de insercin en la membrana del RE da como resultado la sntesis de
protenas transmembrana orientadas con sus extremos carboxilo termina hacia el citosol (Fig. 9.1l).
Estas protenas tienen una secuencia seal amino termina normal, que es escindido por la peptidasa
seal durante la translocacin de la cadena polipeptdica a travs de la membrana del RE por el canal
Sec. 61. Seguidamente se anclan a la membrana por una segunda hlice alfa que atraviesa la
membrana, localizada en el centro de la protena. Esta secuencia transmembrana, denominada
secuencia de detencin de la transferencia, determina el cierre del canal Sec6l. De este modo se
bloquea que la cadena polipeptdica se siga translocando a travs de la membrana del RE, por lo que
la porcin carboxilo terminal de la cadena polipeptdica en crecimiento se sintetiza en el citosol. El
dominio transmembrana entonces abandona lateralmente el canal de traslocacin para entrar en la
bicapa lipdica. Por lo tanto, la insercin de estas protenas en la membrana implica la accin
secuencia de dos elementos diferentes: una secuencia seal amino terminal susceptible de ser
escindido que inicia la translocacin a travs de la membrana, y una secuencia transmembrana de
detencin de la transferencia que ancla la protena a la membrana.


Las protenas tambin pueden anclarse en la membrana del RE mediante secuencias seal internas que
no son escindidas por la peptidasa seal (Fig. 9.12). Estas secuencias seal internas son reconocidas
por la PRS y trasladadas a la membrana del RE de la manera vista hasta ahora. Sin embargo, debido
a que no son escindidas por la peptidasa seal, estas secuencias seal actan como hlices alfa
transmembrana que abandonan el canal de translocacin y anclan a las protenas a la membrana del
RE. Es importante sealar que las secuencias seal internas pueden estar orientadas de tal manera
que dirijan la translocacin a travs de la membrana bien del extremo amino o bien de extremo
carboxilo termina de la cadena polipeptdica. Por tanto, dependiendo de la orientacin de la
secuencia seal, las protenas insertadas en la membrana mediante este mecanismo pueden tener bien
su extremo amino o bien su extremo carboxilo terminal expuesto al citosol.

Las protenas que atraviesan la membrana varias veces se piensa que son insertadas como resultado
de una serie alternante de secuencias seal internas y secuencias transmembrana de detencin de la
transferencia. Por ejemplo, una secuencia seal interna puede dar lugar a la insercin en la membrana
de una cadena polipeptdica con su extremo amino termina en el lado citoslico (Fig. 9.13). Si a
continuacin se encuentra una secuencia de detencin de la transferencia, el polipptido formar un
bucle en la luz del RE, y la sntesis de la protena continuar en el lado citoslico de la membrana. Si
aparece una segunda secuencia seal, la cadena polipeptdica en crecimiento se insertar otra vez en
el RE, dando lugar a otro dominio en forma de bucle en el lado citoslico de la membrana. A esto le
puede seguir otra secuencia de detencin de la transferencia, por lo que una serie alternante de
secuencias seal y de detencin de la transferencia pueden dar lugar a la insercin de las protenas que
atraviesan la membrana varias veces, con dominios en forma de bucle expuestos tanto a la luz del RE
como al lado citoplsmico.






Plegamiento y procesamiento de las protenas en el RE

El plegamiento de las cadenas polipeptdicas en sus conformaciones tridimensionales correctas, el
ensamblaje de los polipptidos en protenas constituidas por varias subunidades, y las modificaciones
covalentes implicadas en el procesamiento de las protenas se trataron en el Captulo 7. Con respecto
a las protenas que entran en la va secretora, muchos de estos acontecimientos ocurren durante la
translocacin a travs de la membrana del RE o en el interior de la luz del RE. Uno de estos procesos
es la rotura proteoltica del pptido seal a medida que la cadena polipeptdica se transloca a travs
de la membrana del RE. El RE es tambin el sitio donde tiene lugar el plegamiento de las protenas, el
ensamblaje de protenas de varias subunidades, la formacin de los puentes disulfuro, las primeras
etapas de la glicosilacin, y la adicin de anclajes de glicolpidos a algunas protenas de la membrana
plasmtica. De hecho, el papel principal de las protenas de la luz del RE es catalizar el plegamiento y
ensamblaje de los polipptidos recin translocados.

Como ya se ha dicho, las protenas se translocan a travs de la membrana del RE a modo de cadenas
polipeptdicas sin plegar mientras prosigue su traduccin. Por lo tanto, estos polipptidos se pliegan
en su conformacin tridimensional en el RE, asistidos por las chaperonas moleculares que facilitan el
plegamiento de las cadenas polipeptdicas (vase Cap. 7). Por ejemplo, una de las protenas
principales en la luz del RE es un miembro de la familia de las chaperonas Hsp7O denominado BiP.
Se piensa que BiP se une a la cadena polipeptdica sin plegar cuando sta atraviesa la membrana y
que despus interviene en el plegamiento de la protena y en el ensamblaje de protenas oligomricas
en el RE (Fig. 9.14). Las protenas ensambladas correctamente se separan de BiP y estn disponibles
para el transporte al aparato de Golgi. Sin embargo, las protenas plegadas anormalmente o
ensambladas de manera inadecuada permanecen unidas a BiP y se retienen en el RE o se degradan,
en lugar de ser transportadas ms all en la va secretora.

La formacin de puentes disulfuro entre las cadenas laterales de los residuos de cistena es un aspecto
importante del plegamiento y ensamblaje proteico en el RE. Estos puentes no se forman en el citosol,
que se caracteriza por ser un ambiente reductor que mantiene los residuos de cistena en su estado
reducido (-SH). En el RE, sin embargo, un ambiente oxidante promueve la formacin de puentes
disulfuro (S-S), y los puentes disulfuro formados en el RE desempean un papel importante en la
estructura de las protenas secretadas y de la superficie celular. La formacin de los puentes disulfuro
est favorecida por la enzima
(vase Fig. 7.21) que se localiza en la luz del RE.

Las protenas tambin son glicosiladas en residuos especficos de asparragina (N-glicosilacin), en el
RE, mientras se estn traduciendo (Fig. 9.15). Como se trat en el Captulo 7, se aaden unidades de
oligosacridos constituidas por 14 residuos de azcar a los residuos de asparragina de las cadenas
polipeptdicas en crecimiento, mientras estn siendo translocadas al RE. El oligosacrido se sintetiza
en un transportador lipdico (dolicol) anclado en la membrana del RE. Despus se transfiere como
una unidad a los residuos de asparragina aceptores en la secuencia consenso Asn-X-Ser/Thr
mediante una enzima unida a la membrana denominada oligosacaril transferasa. Se eliminan cuatro
residuos de azcar (tres glucosas y una manosa) mientras la protena an est en el RE, y la protena
es modificada posteriormente despus de haber sido transportada al aparato de Golgi (lo que se
tratar posteriormente en este captulo).

Algunas protenas se anclan a la membrana plasmtica mediante glicolpidos en lugar de mediante
regiones de la cadena polipeptdica que atraviesan la membrana. Debido a que estos glicolpidos
anclados a la membrana contienen fosfatidilinositol, se denominan cuya estructura se muestra en la
Figura 7.32. Los anclajes de GFI se ensamblan en la membrana del RE. Se unen inmediatamente
despus de completarse la sntesis de las protenas, al residuo carboxilo termina de algunas protenas
ancladas en la membrana por una regin C-terminal que atraviesa la membrana (Fig. 9.16). La regin
transmembrana de la protena se intercambia por el anclaje de GFI, por lo que estas protenas
permanecen unidas a la membrana slo a travs del glicolpido. Al igual que las protenas
transmembrana, son transportadas a la superficie celular como componentes de la membrana a travs
de la va secretora. Su orientacin en el RE determina que las protenas ancladas al GFI sean
expuestas hacia el exterior de la clula, permaneciendo unidas a la membrana a travs del anclaje de
GFI.

El oligosacrido se transfiere desde un transportador lipdico de dolicol a las cadenas polipeptdicas
mientras estn siendo translocadas a travs de la membrana del RE.


RE liso y sntesis de lpidos

Adems de su actividad en el procesamiento de las protenas secretadas y de membrana, el RE es el
sitio principal en el que se sintetizan los lpidos de la membrana en las clulas eucariotas. Puesto que
son extremadamente hidrfogos, los lpidos se sintetizan asociados con membranas celulares ya
existentes, en lugar de hacerlo en el ambiente acuoso del citosol. Aunque algunos lpidos se sintetizan
asociados con otras membranas, la mayora se sintetizan en el RE. Despus son transportados, en
vesculas o mediante protenas transportadoras, desde el RE a sus destinos finales, como se tratar
posteriormente en este Captulo y en el Captulo 10.

Las membranas de las clulas eucariotas estn compuestas por tres tipos fundamentales de lpidos:
fosfolpidos, glicolpidos y colesterol. La mayora de los fosfolpidos, que son los componentes
estructurales bsicos de la membrana, derivan del glicerol. Son sintetizados en la cara citoplsmica de
la membrana del RE, a partir de precursores citoslicos hidrosolubles (Fig. 9. 17). En primer lugar
los cidos grasos se transfieren desde los transportadores de coenzima A al glicerol-3-fosfato
mediante una enzima unida a la membrana, y el fosfolpido resultante (cido fosfatdico) se inserta en la
membrana. Las enzimas en la cara citoplsmica de la membrana del RE catalizan a continuacin la
adicin de diferentes grupos de cabeza polares, dando lugar a la fosfatidilcolina, fosfatidilserina,
fosfatidiletanolamina, o fosfatidilinositol.

La sntesis de estos fosfolpidos en la cara citoplsmica de la membrana del RE permite que las
cadenas hidrfobas de los cidos grasos permanezcan ocultas en la membrana mientras que las
enzimas unidas a la membrana catalizan sus reacciones con precursores hidrosolubles (p. ej., CDP-
colina) en el citosol. Sin embargo, y debido a esta topografa, los fosfolpidos nuevos slo se aaden
a la mitad citoslica de la membrana del RE (Fig. 9. 18). Para mantener una membrana estable,
algunos de estos fosfolpidos de nueva sntesis deben transferirse a la otra mitad (la de la luz) de la
bicapa del RE. Esta transferencia no tiene lugar espontneamente ya que requiere el paso de un
grupo polar a travs de la membrana. Por el contrario, las protenas de membrana denominadas
catalizan la translocacin rpida de fosfolpidos a travs de la membrana del RE, dando lugar a un
crecimiento uniforme de las dos partes de la bicapa.

Adems de su papel en la sntesis de los glicerofosfolpidos, el RE tambin es el lugar principal de la
sntesis de otros dos lpidos de membrana: colesterol y ceramida (Fig. 9.19). Como se tratar
posteriormente, la ceramida se convierte en glicolpidos o esfingomielina (el nico fosfolpido de
membrana que no deriva del glicerol) en el aparato de Golgi. Por lo tanto, el RE es el responsable de
la sntesis de los productos finales o de los precursores de todos los lpidos principales de las
membranas eucariotas.

Fosfatidilinositol
Fosfatidiletanolamina
Fosfatidilserina


El RE liso es abundante en las clulas que son particularmente activas en el metabolismo lipdico. Por
ejemplo, las hormonas esteroideas se sintetizan (a partir del colesterol) en el RE, por lo que se
encuentra una gran cantidad de RE liso en las clulas que producen esteroides, como las de los
testculos y del ovario. Adems, el RE liso es abundante en el hgado, donde contiene enzimas que
metabolizan varios compuestos liposolubles. Estas enzimas desintoxicantes inactivan un nmero
importante de drogas potencialmente nocivas (p. ej., fenobarbital), convirtindolas en compuestos
hidrosolubles que pueden eliminarse de cuerpo a travs de la orina. Por lo tanto, el RE liso est
implicado en mltiples aspectos de metabolismo de los lpidos y de los compuestos liposolubles.


Exportacin de protenas y lpidos desde el RE

Tanto las protenas como los lpidos migran a travs de la va secretora en vesculas de transporte, que
se originan por gemacin en la membrana de un orgnulo y se funden posteriormente con la
membrana de otro. As, las molculas son exportadas desde el RE en vesculas que se originan por
gemacin e el RE y que, en primer lugar, transportan su contenido al compartimento intermedio RE-
Golgi y despus al aparato de Golgi (Fig. 9.20). Pasos posteriores e la va secretora suponen el
transporte de vesculas entre compartimentos diferentes del Golgi y desde el Golgi a los lisosomas o a
la membrana plasmtica. En cada caso, las protenas en la luz de un orgnulo se empaquetan en un
vescula de transporte que se va a escindir por gemacin, y despus se liberan en la luz del orgnulo
receptor tras la fusin de la vescula. Las protenas de membrana y los lpidos se transportan de
forma similar, y es digno de mencionar que su orientacin topolgico se mantiene al viajar desde un
orgnulo rodeado por membrana a otro. Por ejemplo, los dominios de una protena expuestos en la
cara citoslica de la membrana del RE tambin estarn expuestos en la cara citoslica de las
membranas del Golgi y plasmtica, mientras que los dominios de un protena expuestos en la cara
luminal de la membrana del RE estarn expues tos en la cara luminal del Golgi y al exterior de la clula
(vase Fig. 9.10).

Mientras que la mayora de las protenas viajan desde el RE al Golgi, algunas protenas han de
retenerse en el RE en lugar de continuar a lo largo de 1 va secretora. Concretamente, las protenas
que realizan su funcin en el R (incluyendo BiP, la peptidasa seal, la protena disulfuro isomerasa, y
otras enzimas tratadas previamente), deben retenerse en el interior de dicho orgnulo. Por lo tanto, ser
exportadas al Golgi frente a ser retenidas en el RE es la primer disyuntiva con la que se encuentran las
protenas que estn siendo distribuida a sus destinos correctos en la va secretora. Un cruce de
caminos similar aparece en cada paso posterior de transporte, como la retencin en el Golgi frente la
exportacin a los lisosomas o a la membrana plasmtica. En cada caso, una seales especficas de
localizacin dirigen a las protenas a sus destinos intra celulares correctos.

La distincin entre las protenas que han de ser exportadas desde el RE aquellas que son retenidas
en l parece que se produce por dos tipos diferentes de secuencias directoras que marcan
especficamente a las protenas como aquellas (1) destinadas para el transporte al Golgi o (2)
destinadas para la retencin en el RE. Muchas protenas se retienen en la luz del RE debido a la
presencia de la secuencia marcadora Lys-Asp-Glu-Leu (KDEL, en el cdigo de una nica letra) en su
extremo carboxilo terminal. Si esta secuencia se deleciona en un protena que normalmente se retiene
en el RE (p. ej., BiP), la protena mutada e transportada al Golgi y secretada de la clula. Por el
contrario, la adicin de 1a secuencia KDEL al extremo carboxilo terminal de las protenas que
normalmente son secretadas hace que sean retenidas en el RE. La retencin de algunas protenas
transmembrana en el RE est dictada de una manera similar por secuencia C-terminales cortas que
contienen dos residuos de lisina (secuencias KKXX).

Es interesante destacar que las seales KDEL y KKXX no impiden que la protenas solubles del
RE sean empaquetadas en vesculas y transportadas Golgi. Lo que sucede es que estas seales
provocan que las protenas residente en el RE sean recuperadas selectivamente del compartimento
intermedio R Golgi o del complejo de Golgi y devueltas al RE a travs de una va de reciclad (Fig.
9.21). Las protenas que portan las secuencias KDEL y KKXX parece que se unen a receptores
especficos para el reciclado en la membrana de estos compartimentos y posteriormente son
transportadas selectivamente de vuelta hacia el R La accin de las secuencias KDEL y KKXX como
seales de retencin/recuperacin indica que hay un flujo masivo no selectivo de protenas a travs de
1a va secretora dirigido desde el RE a la superficie celular. Este flujo desde el RE Golgi puede ser
responsable de la exportacin de muchas protenas desde el R Sin embargo, tambin parece que
algunas protenas destinadas a ser secretada estn marcadas por seales que dirigen activamente su
exportacin desde el R Por lo tanto, la exportacin de protenas desde el RE puede tener lugar no
slo p este flujo masivo, sino tambin por una va regulada que reconoce especficamente las seales
que median el transporte selectivo de las protenas al aparato de Golgi.

Aparato de Golgi

El funciona como una fbrica en la que las protenas recibidas desde el RE se reprocesan y distribuyen
para ser transportadas a sus destinos finales: los lisosomas, la membrana plasmtica o la secrecin.
Adems, como ya se ha mencionado, los glicolpidos y la esfingomielina son sintetizados en el Golgi.
En las clulas vegetales, el aparato de Golgi, adems, es el sitio en el que se sintetizan los
polisacridos complejos de la pared celular. As el aparato de Golgi est implicado en procesar el
amplio espectro de constituyentes celulares que viajan a lo largo de la va secretora.

Organizacin del Golgi

Morfolgicamente el Golgi est compuesto por unas bolsas aplanadas, rodeadas de membrana
(cisternas) y por vesculas asociadas (Fig. 9.22). Un aspecto llamativo del aparato de Golgi es su
polaridad tanto en la estructura como en la funcin. Las protenas procedentes del RE entran por su
cara cis (cara de entrada), que es convexa y habitualmente se orienta hacia el ncleo. Entonces son
transportadas a travs del Golgi y salen por su cara cncava trans (cara de salida). Segn atraviesan
el Golgi, las protenas se modifican y se distribuyen para el transporte a sus destinos finales en la
clula.

Los diferentes procesos de procesamiento y distribucin de las protenas parece que tienen lugar en
una secuencia ordenada en diferentes regiones del complejo de Golgi, por lo que se suele considerar
que el Golgi est constituido por mltiples compartimentos diferenciados. Aunque no se ha
establecido el nmero de tales compartimentos, normalmente se considera que el Golgi est
constituido por cuatro regiones funcionalmente diferentes: la red cis del Golgi, el apilamiento del Golgi
(que se divide en los subcompartimentos medial y trans) la red trans del Golgi (Fig. 9.23). Las
protenas procedentes del RE se transportan al compartimento intermedio RE-Golgi y entran a
continuacin en el aparato de Golgi por la red cis del Golgi. Posteriormente pasan a los
compartimentos medial y trans del apilamiento del Golgi, donde tienen lugar la mayor parte de las
actividades metablicas del aparato de Golgi. Las protenas modificadas, los lpidos y los
polisacridos migran a continuacin a la red trans del Golgi, que acta como un centro de
organizacin y distribucin, dirigiendo el trfico molecular a los lisosomas, a la membrana plasmtica,
o al exterior de la clula.

Aunque el aparato de Golgi se describi por primera vez hace ms de 100 aos, el mecanismo por el
que las protenas se desplazan a travs del aparato de Golgi an no ha sido establecido y es un rea
de controversia entre los bilogos celulares. Una posibilidad es que sean unas vesculas de transporte
las que lleven las protenas entre una cisterna y otra de los compartimentos del Golgi. Sin embargo,
un modelo alternativo que se apoya en una evidencia experimenta considerable propone que las
protenas se transportan a travs de los compartimentos del Golgi dentro de las cisternas del Golgi,
que van madurando y se desplazan progresivamente a travs del Golgi en una direccin cis-trans.

Glicosilacin de protenas en el Golgi

El procesamiento de las protenas en el Golgi supone la modificacin y sntesis de los restos de
carbohidratos de las glicoprotenas. Uno de los aspectos principales de este procesamiento es la
modificacin de los N-oligosacridos que se unieron a las protenas en el RE. Como ya se ha tratado
en este Captulo, las protenas se modifican en el RE al aadrselas un oligosacrido constituido por 14
residuos de azcar (vase Fig. 9.15). Seguidamente se eliminan tres residuos de glucosa y una manosa
mientras los polipptidos an estn en el RE. Tras el transporte al aparato de Golgi, los N-
oligosacridos de estas glicoprotenas sufren diversas modificaciones posteriores.

Los N-oligosacridos se procesan en el aparato de Golgi mediante una secuencia ordenada de
reacciones (Fig. 9.24). La primera modificacin de las protenas destinadas a ser secretadas o a la
membrana plasmtica, es la eliminacin de otros tres residuos de manosa. A esto le sigue la adicin
secuencias de una N-acetilglucosamina, la eliminacin de dos manosas ms, y la adicin de una fucosa
y de otras dos N-acetilglucosaminas. Finalmente, se aaden tres galactosas y tres residuos de cido
sifico. Como se mencion en el Captulo 7, las distintas glicoprotenas se modifican de forma
diferente durante su paso a travs del Golgi, dependiendo tanto de la estructura de la protena como
de la cantidad de enzimas implicadas en el proceso presentes en el complejo de Golgi de los
diferentes tipos de clulas. Por consiguiente, las protenas pueden salir del Golgi con diversos N-
oligosacridos.

El procesamiento del N-oligosacrido de las protenas lisosmicas difiere del de las protenas
secretadas y de la membrana plasmtica. Las protenas destinadas a incorporarse en los lisosomas,
en vez de la eliminacin inicial de tres residuos de manosa, son modificadas mediante una
fosforilacin de la manosa. En el primer paso de esta reaccin, se aade N-acetilgiucosamina
fosfato a residuos especficos de manosa, probablemente mientras la protena an est en la red cis
del Golgi (Fig. 9.25). A esto le sigue la eliminacin del grupo N-acetilgiucosamina, dejando residuos
de manosa-6-fosfato en el N-oligosacrido. Debido a esta modificacin, estos residuos no son
eliminados durante el procesamiento posterior. En su lugar, estos restos de manosa fosforilados son
reconocidos especficamente por un receptor de manosa-6-fosfato en la red trans del Golgi, que
dirige el transporte de estas protenas a los lisosomas.

Por lo tanto, la fosforilacin de los residuos de manosa es un paso crucial en la distribucin de las
protenas lisosmicas hacia su destino intracelular correcto. La especifidad de este proceso reside en
la enzima que cataliza el primer paso en la secuencia de la reaccin -la adicin selectiva de N-
acetilglucosamina fosfato a las protenas lisosmicas. Esta enzima reconoce un determinante
estructura que est presente en las protenas lisosmicas pero no en las protenas destinadas a la
membrana plasmtica o a la secrecin. Este determinante de reconocimiento no es una simple
secuencia de aminocidos, sino que est constituido, en la protena plegada, por la yuxtaposicin de
secuencias de aminocidos de regiones diferentes de la cadena polipeptdica. A diferencia de las
secuencias seal que dirigen la translocacin de protenas al RE, el determinante de reconocimiento
que conduce a la fosforilacin de la manosa, y que por tanto dirige finalmente las protenas a los
lisosomas, depende de la conformacin tridimensional de la protena plegada. Estos determinantes
se denominan regiones seal, a diferencia de las seales lineales tratadas previamente en este
captulo.

Las protenas tambin pueden mortificarse mediante la adicin de carbohidratos a las cadenas
laterales de residuos de serina y treonina que formen parte de secuencias especficas (O-
glicosilacin) (vase Fig. 7.28). Estas modificaciones tienen lugar en el aparato de Goigi mediante la
adicion secuencial de residuos nicos de azcar. La serina o la treonina se suelen unir directamente a
la N-cetilgalactosamina, a la que despus pueden aadirse otros azcares. En algunos casos, estos
azcares sufren modificaciones posteriores por la adicin de grupos sulfato.


Metabolismo de lpidos y de polisacridos en el Golgi 2

Adems de procesar y distribuir las glicoprotenas, el aparato de Golgi participa en el metabolismo
lipdico -concretamente, en la sntesis de glicolpidos y esfingomielina. Como ya se ha visto, los
glicerofosfolpidos, el colesterol, y la ceramida se sintetizan en el RE. La esfingomielina y los
glicolpidos se sintetizan a partir de la ceramida en el aparato de Golgi (Fig. 9.26). La esfingomielina
(el nico fosfolpido no glicrico en las membranas celulares) es sintetizada por la transferencia de un
grupo fosforilcolina desde la fosfatidilcolina a la ceramida. Alternativamente, la adicin de
carbohidratos a la ceramida puede dar lugar a diferentes glicolpidos.

La esfingomielina se sintetiza en la superficie luminal del Golgi, pero la glucosa se aade a la ceramida
en la cara citoslica. Sin embargo, parece ser que la glucosilceramida se da la vuelta y los
carbohidratos adicionales se aaden en la cara luminal de la membrana. Ni la esfingomielina ni los
glicolpidos pueden transiocarse a travs de la membrana del Golgi, por lo que slo se localizan en la
mitad luminal de la bicapa del Golgi. Tras el transporte vesicular, se localizan en la cara externa de la
membrana citoplasmtica, con sus grupos de cabeza polares expuestos en la superficie celular. Como
se ver en el Captulo 12, los residuos de oligosacridos de los glicolpidos son marcadores de
superficie imPortantes en el reconocimiento clula-clula.

En las clulas vegetales, el aparato de Golgi tiene la funcin aadida de ser el lugar donde se sintetizan
los polisacridos complejos de la pared celular. Como se tratar con mayor detalle en el Captulo 12,
la pared celular vegetal est compuesta por tres tipos principales de polisacridos. La celulosa, el
constituyente predominante, es un polmero lineal de restos de glucosa. Es sintetizado en la superficie
celular por enzimas de la membrana plasmtica. Sin embar90, los otros polisacridos de la pared
celular (hemicelulosas y pectinas) son molculas complejas de cadena ramificada que se sintetizan en
el aparato de Golgi y que son transportadas posteriormente en vesculas a la superficie celular. La
sntesis de estos polisacridos de la pared celular es una funcin principal de la clula, y hasta el 80 %
de la actividad metablica del aparato de Golgi en las clulas vegetales se dedica a la sntesis de
polisacridos.


Distribucin y exportacin de protenas desde el aparato de Golgi

Las protenas, al igual que los lpidos y los polisacridos, son transportadas desde el aparato de Golgi
a sus destinos finales a travs de la via secretora. Esto implica que las protenas se distribuyan en
diferentes tipos de vesculas de transporte, las cuales saldrn por gemacin desde la red trans del
Golgi y llevarn su contenido hasta la localizacin celular adecuada. (Fig. 9.27). Algunas protenas se
transportan desde el Golgi a la membrana plasmtica por una va secretora constitutiva, responsable
de la incorporacin de nuevas protenas y lpidos a la membrana plasmtica, as como de la secrecin
continua de protenas desde la clula. Otras protenas son transportadas a la superficie celular a
travs de una va diferente de secrecin regulada, o son dirigidas especficamente a otros destinos
intracelulares, como los lisosomas en las clulas animales o las vacuolas en las levaduras.

Las protenas que realizan su funcin en el aparato de Golgi deben retenerse en ese orgnulo, en lugar
de ser transportadas a travs de la va secretora. A diferencia del RE, todas las protenas retenidas en
el complejo de Golgi estn asociadas con la membrana del Golgi en lugar de ser protenas solubles en
su interior. Las seales responsables para la retencin de algunas protenas en el Golgi se han
localizado en sus dominios transmembrana, que retienen las protenas en el aparato de Golgi
impidiendo que sean empaquetadas en las vesculas de transporte que salen por la red trans del
Golgi. Adems, al igual que sucede con las secuencias KKXX de las protenas de membrana
residentes en el RE, las seales en las colas citopismicas de algunas protenas del Golgi son
responsables de la recuperacin de estas protenas desde compartimentos posteriores a lo largo de la
va secretora.

La va secretora constitutiva, que est presente en todas las clulas, da lugar a una secrecin de
protenas continua no regulada. Sin embargo, algunas clulas tambin poseen una va secretora
regulada diferente, a travs de la que se secretan protenas especficas en respuesta a seales
ambientales. Ejemplos

de secrecin regulada son la liberacin de hormonas desde las clulas endocrinas, la liberacin de
neurotransmisores desde las neuronas, y la liberacin de enzimas digestivas desde las clulas acinares
pancreticas que se vio al principio de este captulo (vase Fig. 9.2). Las protenas se distribuyen a la
va secretora regulada en la red trans del Golgi, donde son empaquetadas en vesculas secretoras
especializadas. Estas vesculas secretoras, que son ms grandes que otras vesculas de transporte,
almacenan su contenido hasta que unas seales especficas dirigen su fusin con la membrana
plasmtica. Por ejemplo, las enzimas digestivas producidas por las clulas acinares pancreticas se
almacenan en vesculas secretoras hasta que la presencia de comida en el estmago y en el intestino
delgado desencadena su secrecin. La distribucin de las protenas hacia la va secretora regulada
implica el reconocimiento de regiones seal compartidas por muchas de las protenas que entran en
esta va. Estas protenas se acumulan selectivamente en la red trans del Golgi y se liberan por la
gemacin de las vesculas secretoras.

Una complicacin adicional en el transporte de las protenas a la membrana plasmtica surge en
muchas clulas epiteliales que se encuentran polarizadas en los tejidos. La membrana plasmtica de
dichas clulas se divide en dos regiones distintas, el dominio apical y el dominio basolateral que
contienen protenas especficas relacionadas con sus funciones diferenciadas. Por ejemplo, la
membrana apical de las clulas epiteliales de intestino mira hacia la luz de intestino y est
especializada en la absorcin eficaz de nutrientes; el resto de la clula est rodeada por la membrana
basolateral (Fig. 9.28). Los diferentes dominios de la membrana plasmtica se encuentran no slo en
las clulas epiteliales, sino tambin en otros tipos de clulas. Por lo tanto, la va secretora constitutiva
debe transportar selectivamente protenas desde la red trans del Golgi a los diferentes dominios de la
membrana plasmtica. Esto se lleva a cabo mediante el embalaje selectivo de protenas en, al menos,
dos tipos de vesculas secretoras constitutivas que abandonan la red trans del Golgi, dirigidas
especficamente al dominio apical o al dominio basolateral de la membrana plasmtica de la clula.

La va de distribucin de protenas mejor caracterizada en el Golgi es el transporte selectivo hacia los
lisosomas. Como ya se ha visto, las protenas cuyo destino es el interior de los lisosomas estn
marcadas con manosa-6fosfato, que se origina por la modificacin de sus N-oligosacridos al poco
tiempo de entrar en el aparato de Golgi. Un receptor especfico en la membrana de la red trans de]
Golgi reconoce estos residuos de manosa-6-fosfato. Los complejos constituidos por el receptor ms
la enzima lisosmica se empaquetan en vesculas de transporte destinadas a los lisosomas. Las
protenas cuyo destino es la membrana de los lisosomas estn sealizadas por secuencias en sus colas
citoplsmicas, en vez de por residuos de manosa-6-fosfato.

En las levaduras y en las clulas vegetales, que carecen de lisosomas, las protenas son transportadas
desde el aparato de Golgi hacia un destino adicional: la vacuola (Fig. 9.29). En estas clulas, las
vacuolas asumen la funcin de los lisosomas adems de realizar otros cometidos, como el
almacenamiento de nutrientes y el mantenimiento de la presin de turgencia y de equilibrio osmtico.
A diferencia de las protenas destinadas a los lisosomas, las protenas se destinan a las vacuolas
mediante secuencias peptdicas cortas en lugar de por seales de carbohidratos.

Mecanismo de transporte de las vesculas

Como ha quedado claro en las secciones precedentes de este captulo, las vesculas de transporte
desempean un papel central en el trfico de las molculas entre los diferentes compartimentos
rodeados por membrana de la va secretora. Como se tratar en el Captulo 12, las vesculas estn
implicadas de igual forma en el transporte de material que se ha captado en la superficie celular. El
transporte de las vesculas es, por tanto, una actividad celular fundamental, responsable de trfico
molecular entre diversos compartimentos rodeados por membrana, especficos. Por lo tanto, la
selectividad de dicho transporte resulta clave para mantener la organizacin funciona de la clula.
Por ejemplo, las enzimas lisosmicas deben transportarse especficamente desde el aparato de Golgi a
los lisosomas -no a la membrana plasmtica o al RE-. Algunas de las seales que dirigen a las
protenas a los orgnulos especficos, como los lisosomas, ya se han tratado en este captulo. Estas
protenas se transportan en vesculas, por lo que la especificidad de transporte se basa en el
empaquetamiento selectivo de la carga seleccionada en vesculas que reconozcan y se fusionen slo
con la membrana diana apropiada. Dada la gran importancia que tiene el transporte de las vesculas
en la organizacin de la clula eucariota, el conocimiento de los mecanismos moleculares que
controlan el empaquetamiento de las vesculas, la gemacin, y la fusin es un rea principal de
investigacin en biologa celular.


Aproximaciones experimentales al conocimiento del transporte de las vesculas

Tres abordajes experimentales diferentes han permitido avanzar en el conocimiento de los
mecanismos del transporte de las vesculas: (1) el aislamiento de mutantes de levaduras defectuosas en
el transporte y distribucin de las protenas; (2) la reconstitucin del transporte de vesculas en
sistemas acelulares; y (3) el anlisis bioqumico de las vesculas sinpticas, que son las responsables de
la secrecin regulada de los neurotransmisores por las neuronas. Cada uno de estos sistemas
experimentales tiene diferentes ventajas para el conocimiento de aspectos concretos del proceso de
transporte. Sin embargo, lo ms importante, es el hecho de que los resultados derivados de estas tres
lneas de investigacin han convergido, indicando que la secrecin est regulada por mecanismos
moleculares similares en clulas tan distintas como las levaduras y las neuronas de los mamferos.

Al igual que ocurre en otras reas de la biologa celular, las levaduras son tiles para estudiar la va
secretora porque son susceptibles de poderse realizar un anlisis gentico. Concretamente, Randy
Schekman y sus colaboradores han sido pioneros en el aislamiento de mutantes de levaduras
defectuosos en el transporte vesicular. Estos incluyen mutantes defectuosos en varios pasos de la
secrecin proteica (mutantes sec), mutantes i ncapaces de transportar protenas a la vacuola, y
mutantes incapaces de retener las protenas residentes en el RE. El aislamiento de tales mutantes en las
levaduras condujo a la clonacin molecular y al anlisis de los genes correspondientes, identificndose
varias protenas implicadas en diversos pasos de la va secretora. Por ejemplo, ya se vio en este
Captulo el papel de Sec6l como un componente fundamental del canal de translocacin de las
protenas en el retculo endoplsmico.

Los estudios bioqumicos sobre el transporte vesicular utilizando sistemas reconstituidos han
complementado estos estudios genticos y han permitido aislar directamente protenas de transporte
en las clulas de mamferos. El primer sistema de transporte acelular lo desarroll James Rothman y
colaboradores, que analizaron el transporte de protenas entre los compartimentos del aparato de
Golgi (Fig. 9.30). El diseo experimenta utiliz una lnea celular mutante de mamfero, que careca de
la enzima requerida para transferir los residuos de N-acetilglucosamina al N-oligosacrido en una fase
temprana de su modificacin en el aparato de Golgi (vase Fig. 9.24). Por lo tanto, las glicoprotenas
producidas por esta lnea celular mutante carecan de las unidades de N-acetilglucosamina aadidas.
Sin embargo, si el apilamiento del Golgi aislado de la lnea celular mutante se incubaba con un
apilamiento aislado de clulas normales, los residuos de N-acetilglucosamina se aadan a las
glicoprotenas sintetizadas por las clulas mutantes. Diferentes experimentos establecieron que esto se
deba al transporte vesicular de las protenas desde el apilamiento del Golgi de la lnea celular mutante
al apilamiento del Golgi de las clulas normales, por lo que la adicin de N-acetilglucosamina
proporcionaba un marcador detestable sencillo del transporte de vesculas en este sistema
reconstituido.



Se han desarrollado otros sistemas reconstituidos similares para analizar el transporte entre otros
compartimentos, incluyendo el transporte desde el RE al Golgi y el transporte desde el Golgi a las
vesculas de secrecin, a las vacuolas, y a la membrana plasmtica. El desarrollo de estos sistemas in
vitro ha permitido realizar estudios bioqumicos del proceso de transporte y el anlisis funciona de las
protenas identificadas mediante mutaciones en levaduras, as como el aislamiento directo de algunas
de las protenas implicadas en la gemacin y la fusin de las vesculas.

Los estudios sobre la transmisin sinptica en las neuronas, que representa una forma altamente
especializada de la secrecin regulada, han revelado aspectos crticos de los mecanismos moleculares
del transporte vesicular. Una sinapsis es la unin de una neurona con otra clula, que puede ser o
bien otra neurona o un efector, como una clula muscular. La informacin se transmite a travs de la
sinapsis mediante neurotransmisores qumicos, como la acetilcolina, que se almacenan en vesculas
sinpticas. La estimulacin de la neurona transmisora desencadena la fusin de las vesculas sinpticas
con la membrana plasmtica, lo que produce la liberacin de los neurotransmisores y la estimulacin
de la neurona postsinptica o clula efectora. Las vesculas sinpticas son extremadamente
abundantes en el cerebro, lo que permite que se puedan purificar en grandes cantidades para el
anlisis bioqumico. Algunas de las protenas aisladas de las vesculas sinpticas estn estrechamente
relacionadas con las protenas que, mediante anlisis gentico de levaduras y experimentos de
reconstitucin, se mostr que desempean un papel crtico en el transporte de las vesculas; por lo que
el anlisis bioqumico de estas protenas ha revelado aspectos importantes del mecanismo molecular
de la fusin de las vesculas.


Protenas de revestimiento y gemacin de las vesculas

El primer paso en el transporte de las vesculas es la formacin por gemacin de una vescula a partir
de la membrana. La superficie citoplsmica de las vesculas de transporte est recubierto por
protenas, y al parecer la unin de estas protenas de revestimiento es lo que dirige la gemacin de las
vesculas al distorsionar la conformacin de la membrana. Se han caracterizado tres tipos de vesculas
revestidas de protenas, que parece que intervienen en diferentes tipos de transporte vesicular. Las
primeras que se describieron fueron las vesculas que son responsables de la captacin de molculas
extracelulares desde la membrana plasmtica mediante endocitosis (vase el Cap. 12), as como del
transporte de molculas desde la red trans del Golgi hacia los lisosomas. Se han identificado otros
dos tipos de vesculas revestidas que se originan a partir del RE y del complejo de Golgi. Estas
vesculas se denominan (COP viene de protena de revestimiento). Un tipo de estas vesculas
(vesculas revestidas COPII) se originan a partir del RE y transportan su carga a lo largo de la va
secretora hasta el aparato de Golgi. Por el contrario, las vesculas revestidas COPI se originan a
partir del compartimento intermedio RE-Golgi o del aparato de Golgi, y participan en las vas de
recuperacin que sirven para retener a las protenas residentes en el Golgi y en el RE. Por ejemplo,
las vesculas revestidas COPI transportan las protenas residentes del RE, marcadas con las seales
de recuperacin KDEL o KKXX, desde el compartimento intermedio RE-Golgi o desde la red cis
del Goigi, de vuelta al RE.

Las cubiertas de las vesculas revestidas por clatrina estn compuestas por dos clases de complejos
proteicos, clatrina y protenas adaptadoras, que se unen al lado citoslico de las membranas (Fig.
9.31). La desempea un papel estructural, al ensamblarse formando una estructura semejante a la red
de las canastas de baloncesto que distorsiona la membrana y dirige la gemacin de las vesculas. La
unin de la clatrina a las membranas est mediada por una segunda clase de protenas, denominadas
protenas adaptadoras. El ensamblaje de las vesculas cubiertas por clatrina en la membrana
plasmtica y en la red trans del Golgi est dirigido por protenas adaptadoras diferentes, y son las
protenas adaptadoras las que estn implicadas en la seleccin de molculas especficas para
incorporarse a las vesculas. Por ejemplo, la protena adaptadora AP-1, implicada en la gemacin de
las vesculas desde la red trans del Golgi, se une a la regin citoslica del receptor de la manosa-6-
fosfato, dirigiendo de este modo, al interior de las vesculas cubiertas por clatrina, a las protenas
destinadas a los lisosomas.

Las cubiertas de las vesculas revestidas COPI y COPII estn constituidas por complejos proteicos
diferentes, que funcionan de forma anloga a la clatrina y a las protenas adaptadoras en la gemacin
de las vesculas. Es interesante sealar que los componentes de revestimiento COPI interaccionan
con el motivo KKXX responsable de la recuperacin de las protenas del RE desde el aparato de
Golgi, lo que concuerda con el papel de las vesculas revestidas COPI en el reciclaje desde el Golgi al
RE.
El ensamblaje de la cubierta de la vescula tambin requiere protenas de unin a GTP, que parece
que regulan la unin de las protenas de revestimiento a la membrana. La gemacin, tanto de las
vesculas revestidas de clatrina como de las vesculas cubiertas COPI desde el complejo de Golgi,
requiere una protena de unin a GTP denominada ARF (factor de ribosilacin del ADP), mientras
que la gemacin de las vesculas revestidas COPII desde el RE requiere una protena de unin a GTP
diferente, denominada Sar l. El papel de estas protenas se muestra por la funcin de ARF en la
formacin de las vesculas cubiertas COPI (Fig. 9.32). El primer paso en la formacin de una vescula
es la asociacin de ARF, unido a GDP, con la membrana del Golgi. Entonces las protenas de la
membrana del Golgi estimulan el intercambio del GDP unido al ARF por GTP, Y las protenas de
cubierta COPI se unen al complejo ARF/GTP. La formacin de la cubierta se contina con la
deformacin de la membrana y la gemacin de una vescula. Seguidamente el ARF hidroliza su GTP,
pasando el ARF a estar unido a GDP Y a la disociacin de las protenas de la cubierta de la
membrana de la vescula.


Fusin de las vesculas

La fusin de una vescula de transporte con su diana implica dos tipos de acontecimientos.
En primer lugar, la vescula de transporte debe reconocer especficamente la membrana diana
correcta; por ejemplo, una vescula que transporta enzimas lisosmicas tiene que llevar su carga slo a
los lisosomas. En segundo lugar, la membrana de la vescula y la membrana diana deben fusionarse,
entregndose el contenido de la vescula al orgnulo diana. Las investigaciones realizadas en los
ltimos aos han conducido a un modelo de fusin vesicular en el que el reconocimiento especfico
entre una vescula y su diana est mediado por la interaccin especfica entre pares de protenas
transmembrana, seguido de la fusin entre las bicapas fosfolipdicas de la vescula y de la membrana
diana.


Las protenas implicadas en la fusin de las vesculas se
identificaron por primera vez en el laboratorio de James
Rothman, mediante el anlisis bioqumico de sistemas de
transporte vesicular reconstituidos procedentes de clulas
de mamferos (vase Fig. 9.30). El anlisis de las protenas
implicadas en la fusin de las vesculas en estos sistemas
condujo a Rothman y a sus colaboradores a proponer un
modelo general, denominado la en el que la fusin de las
vesculas est mediada por la interaccin entre un par
especfico de protenas, denominadas SNAREs, en la
membrana de la vescula y en la membrana diana (v-
SNAREs y t-SNAREs, respectivamente) (Fig. 9.33). Esta
hiptesis se vio reafirmada al identificarse SNAREs que
estaban presentes en las vesculas sinpticas, y por el
hallazgo de mutantes de secrecin de levadura que pareca
que codificaban SNAREs que se requeran para diversas
etapas de transporte vesicular. Por ejemplo, el transporte
desde el RE al Golgi en las levaduras requiere SNAREs
especficos que se localizan tanto en la membrana de 1a
vescula como en la membrana diana. La formacin de
complejos entre las SNAREs de la vescula y las t-
SNAREs de la membrana diana conduce a la fusin de la
membrana, mediante mecanismos que an no se conocen
por completo

Adems de las SNARES, la fusin de las vesculas
requiere al menos otros dos tipos de protenas. Las
protenas son una familia de protenas pequeas de unin a
GTP que estn relacionadas con las protenas Ras, que ya
se trataron en Captulo 7. Se han identificado ms de 30
protenas Rab diferentes y se ha demostrado que
intervienen en procesos especficos del transporte de
vesculas. Puede intervenir en varios de los pasos del
trfico vesicular, incluyendo la interaccin con SNAREs
para regular y facilitar la formacin de complejos v-
SNARE/t-SNARE.

Tras la formacin de los complejos entre las SNAREs
complementarias y 1a fusin de las membranas, se
requiere un complejo de otras dos protenas (el complejo
NSF/SNAP) para completar el proceso del transporte de
vesculas. Las protenas NSF/SNAP son reclutadas en las
membranas tras la formacin de los complejos v-
SNARE/t-SNARE, pero no se requieren para el
emparejamiento vescula/diana o para la fusin de las
membranas apareadas. Por el contrario, las protenas
NSF/SNAP actan despus de la fusin de la membrana
para desmontar el complejo SNARE, y permitir de este
modo que las SNAREs se puedan reutilizar en ciclos
posteriores de transporte vesicular.

Lisosomas

Los lisosomas son orgnulos rodeados de membrana que contienen una serie de enzimas capaces de
degradar todas las clases de polmeros biolgicos -protenas, cidos nucleicos, carbohidratos y
lpidos-. Los lisosomas funcionan como el sistema digestivo de la clula, sirviendo tanto para
degradar el material captado del exterior de la clula como para digerir los componentes obsoletos de
la propia clula. En su forma ms sencilla, los lisosomas se observan como vacuolas esfricas densas,
pero pueden exhibir diversidad de tamaos y de formas en funcin de los distintos materiales que
hayan captado (Fig. 9.34). Por lo tanto los lisosomas representan orgnulos morfolgicamente
diversos definidos por la funcin comn de degradar material intracelular.


Hidrolasas lisosmicas cidas

Los lisosomas contienen alrededor de 50 enzimas degradativas diferentes que pueden hidrolizar
protenas, ADN, ARN, polisacridos y lpidos. Las mutaciones en los genes que codifican estas
protenas son responsables de ms de 30 enfermedades congnitas humanas diferentes, que se
denominan enfermedades de depsito lisosmico , ya que el material no degradado se acumula en los
lisosomas de los individuos afectados. La mayora de estas enfermedades se deben a deficiencias en
una nica enzima lisosmica. Por ejemplo, la enfermedad de Gaucher (la alteracin ms comn) se
debe a una mutacin en el gen que codifica una enzima lisosmica requerida para la degradacin de
los glicolpidos. Una excepcin curiosa es la enfermedad celular-, que se debe a una eficiencia en la
enzima que cataliza el primer paso en el marcaje de las enzimas lisosmicas con manosa6-fosfato en el
aparato de Golgi (vase Fig. 9.25). El resultado es una alteracin generalizada en la incorporacin de
las enzimas lisosmicas a los lisosomas.

Todas las enzimas lisosmicas son hidrolasas cidas, que son activas al pH cido (aproximadamente
5) del interior de los lisosomas pero no al pH neutro (aproximadamente 7,2) caracterstico del resto
del citoplasma (Fig. 9.35). El que estas hidrolasas lisosmicas necesiten un pH cido proporciona una
doble proteccin contra la digestin incontrolado de los contenidos del citosol; incluso si se rompiera
la membrana lisosmica, las hidrolasas cidas liberadas seran inactivas al pH neutro del citosol. Para
mantener su pH cido interno, los lisosomas deben concentrar activamente iones H
+
(protones). Esto
se consigue mediante una bomba de protones en la membrana lisosmica, que transporta activamente
protones al lisosoma desde el citosol. Este bombeo requiere un gasto de energa en forma de
hidrlisis de ATP, ya que mantiene una concentracin de H
+
aproximadamente cien veces ms
elevada en el interior del lisosoma.


Endocitosis y formacin del lisosoma

Una de las funciones principales de los lisosomas es la digestin del material captado del exterior de la
clula mediante endocitosis, que se discute en detalle en el Captulo 12. Sin embargo, el papel de los
lisosomas en la digestin del material captado mediante endocitosis se relaciona no slo con la funcin
de los lisosomas sino tambin con su formacin. Concretamente, los lisosomas se forman mediante la
fusin de las vesculas de transporte originadas desde la red trans del Golgi con los endosomas, que
contienen las molculas ingeridas por endocitosis a partir de la membrana plasmtica

La formacin de los lisosomas representa as una interseccin entre la va secretora, mediante la que
se procesan las protenas lisosmicas, y la va endoctica, mediante la cual son ingeridas las molculas
extracelulares a partir de la Superficie de la clula (Fig. 9.36). El material del exterior de la clula es
ingerido en vesculas endocticas revestidas de clatrina, que se originan por gemacin de la membrana
plasmtica y seguidamente se funden con los endosomas primarios. A continuacin los componentes
de la membrana son reciclados a la membrana plasmtica (se tratar con detalle en el Cap. 12) y los
endosomas primarios van madurando a endosomas tardos, que son los precursores de los lisosomas.
Uno de los cambios importantes durante la maduracin del endosoma es el descenso del PH interno
hasta aproximadamente 5,5, lo que desempea un papel clave en la liberacin de las hidrolasas cidas
lisosmicas desde la red trans del Golgi.
.








Como se trat previamente, las hidrolasas cidas son dirigidas a los lisosoma por residuos de
manosa-6-fosfato, que son reconocidos por los receptores de manosa-6-fosfato en la red trans del
Golgi y empaquetados en vesculas revestidas d clatrina. Tras la liberacin de la cubierta de clatrina,
estas vesculas de transporte se fusionan con los endosomas tardos, y el pH interno cido hace que
las hidrolasas se disocien de receptor de manosa-6-fosfato (vase Fig. 9.36). Las hidrolasas son as
liberadas en la luz de endosoma, mientras que los receptores permanecen en la membrana y
finalmente son reciclados al Golgi. Los endosomas tardos maduran entonces a lisosomas a medida
que adquieren una carga completa de hidrolasas cidas, que digieren las molculas originalmente
ingeridas por endocitosis.


Fagocitosis y autofagia

Adems de degradar las molculas englobadas por endocitosis, los lisosomas digieren el material
derivado de otras dos rutas: la fagocitosis y la autofagia (Fig. 9.37). En la fagocitosis, clulas
especializadas, como los macrfagos, ingieren y degradan partculas grandes, incluyendo bacterias,
restos de clulas, y clulas envejecidas que han de ser eliminadas del organismo. Estas partculas
grandes son ingeridas en vacuolas fagocticas (fagosomas), que posteriormente se fusionan con los
lisosomas, dando lugar a la digestin de su contenido. Los lisosomas formados de esta manera
(fagolisosomas) pueden ser bastante grandes y heterogneos, ya que su tamao y forma viene
determinado por el contenido del material que est siendo digerido.

Los lisosomas tambin son responsables de la autofagia, la renovacin gradual de los propios
componentes de la clula. El primer paso de la autofagia parece ser el que un orgnulo (p. ej., una
mitocondria) sea englobado por una membrana derivada del RE. La vescula resultante ( un
autofagosoma) se fusiona despus con un lisosoma, y su contenido es digerido (vase Fig. 9.37).
Como ya se trat en el Captulo 7, la autofagia es la responsable de la renovacin gradual de los
orgnulos citoplsmicos.