Quando eu tenho troca de aminocido somente na minha protena eu posso ter SPN l no promotor, posso ter SNP em outros lugares mas eu no estou alterando a estrutura, a seqncia primria de aminocido, continua tendo o mesmo tamanho. Mas, ao invs de ter tirosina tem uma leucina, uma protena, ela a mesma protena desempenha a funo dela, mas essa mudana ela muito sutil para a seleo natural agir, ento muitas pessoas carregam essa alterao no DNA sem ela ser deletria para a sade. Mas tem uma pequena variao bioqumica que diferem das outras pessoas. Vocs esto lembrados do exemplo que eu falei, quem toma pinga manh, tarde e noite no fim do dia est timo, tem gente que bebe o dia todo fica o outro dia bem. Por que essas pessoas so assim? Porque elas metabolizam o lcool mais rapidamente, quem fraco para a bebida o lcool fica circulante muito tempo por que a sntese da quebra do lcool demora para quebrar. Ento a diferena apenas na eficincia cataltica dessas protenas, mas elas continua exercendo a funo delas. Ento, isso chamou de polimorfismo. Polimorfismo Polimorfismo uma mudana no DNA, tambm uma mutao, mas ela no deletria ao ponto de causar uma doena, ela s gera uma variao que eu consigo separar os indivduos numa performance humana. Por exemplo, numa corrida tem gente que vai ser em 10 segundos outro em 15 segundos. Isso explicado, muitas vezes, nas pequenas variaes estruturais em algumas protenas que participam do sistema actina e miosina do msculo. Essas pequenas variaes no levam a doena, s leva a uma variao que eu consiga diferenciar quem mais rpido ou devagar. Ela mais comum na populao. Toda vez que eu falo de polimorfismo, eu digo que essa mutao, ela est presente em muito mais individuo do que uma mutao que cause uma doena gentica. Se eu pegar Sndrome de cookies, vamos ver depois o que , quantos indivduos com essa sndrome existe? Mais ou menos 1 a cada 100.000, agora quantas pessoas tem a variante que faz o lcool metabolizar mais rpido? Tem 1 a cada 100. Tudo aquilo que no causa uma doena, no causa uma limitao de qualquer natureza agente chama de polimorfismo. Essa variante ela mais freqente nos indivduos. Pergunta: anemia falciforme tem alguns polimorfismo (no deu pra ouvir direito) 3:25 o termos polimorfismo as vezes usado incorretamente, se estou falando de anemia falciforme estou falando de mutaes, eu posso ter gente com anemia falciforme no poro ATG ou com stop cdon pr maturo, ento voc tem uma gama de mutaes que j foram descritas para aquela doena, chamamos de variantes mutacionais. O morfismo, estritamente dentro das regras da gentica formal, isso aqui quando tenho uma pequena variante que no est relacionada a uma doena. Voc pode continuar chamando de SNPs mutao DNA do mesmo jeito, s que essas mais brandas, mais suaves a gente vai chamar de polimorfismo. Exemplo: na fibrose cstica, vamos supor que l no cdon 120 que AAT vai servir de informao para a protena, e eu posso ter indivduos na populao que sejam tambm nesse mesmo cdon AAG, se eu pegar todo mundo de Campina Grande eu s vou ter dois tipos de indivduos para esse cdon aqui, ou ele AAT ou AAG, s que quem carrega este cdon AAG tem fibrose cstica e o outro individuo normal. Eu posso ter outras mutaes que vo gerar fibrose cstica, isso s um exemplo. Eu tambm posso ter o cdon GGG na posio 137, mas alguns pacientes com fibrose cstica tem o cdon GGT, outros pacientes com fibrose cstica foi visto com o cdon CTA na posio 277, era CAA. Todas essas mutaes na mesma protena elas levam a fibrose cstica. Ento, uma outra fabricao do polimorfismo pode ser a sntese de transio. Agora tambm posso ter uma outra definio de polimorfismo, aqui quantas formas eu tenho nessa posio aqui, s tenho duas T e G, agora se eu tiver ainda pacientes com AAA e estiverem com fibrose cstica eu tambm chamo de polimorfismo, porque no mais dimorfico, trimorfico j posso chamar de polimorfismo, mais de um. Aqui quantos polis eu tenho s um o G, se tiver mais de um polimorfismo. Tudo isso sobre polimorfismo est relacionado com propenso. Eu prefiro chamar isso aqui de variantes. A definio de SNPs que ningum divergem quanto a ela, quando eu tenho a freqncia da populao maior que 1%. Quando eu falo que tenho um paciente com sndrome de Cookies aqui em Campina Grande com uma populao 450 mil, quantos alelos eu tenho na minha populao afetados com essa sndrome? Eu tenho 450 mil habitantes, quantos alelos para sndrome eu tenho? Eu tenho 47 alunos nessa sala, quantos alelos ns temos aqui na sala para um gene em especial? 94 alelos, por que? Cada gene tem dois alelos, todo mundo tem uma copia do gene CFR que causa fibrose cstica normal, pois ningum tem a doena, temos a verso normal do gene. Ns no somos diplides, se so 47 pessoas sero 94 alelos. Vamos supor que algum de ns tem fibrose cstica, e vamos supor que basta apenas ter um alelo mutado, dos dois normais apenas um modificado para voc ter a doena, que caracteriza a doena dominante. Qual a freqncia desse alelo aqui na sala? Nessas 47 pessoas e 94 alelos, 1 alelo mutante, para saber a freqncia dessa mutao aqui na sala s pegar esse 1 e dividir por 94, que dar quantos por cento? 0,01064, isso maior que 1%? A freqncia desse alelo maior que 1%? , at 0,01 1% se isso for maior que 1% esse alelo polimrfico e apresenta mais de 1% de freqncia na populao. Vamos pegar outro exemplo: em Campina Grande temos 450 mil habitantes, quantos alelos ns temos? 900 mil. Vamos supor que em Campina Grande tem 4 indivduos com fibrose cstica, qual a freqncia desse alelo na populao? Eu tenho 4 indivduos teria 8 alelos, mas basta ter 1 mutante para a fibrose cstica, ento eu tenho 4 alelos s. Se eu dividir 4 por 900 mil isso vai dar um numero muito menor que 1%, ento eu chamo de mutao. No precisa fazer esse calculo na hora da prova, basta vocs entenderem a diferena de mutao para polimorfismo. Eu vou chamar em gentica mdica, s nela, chamar de polimorfismo aquilo que for maior de 1%, o resto mutao toda doena gentica rara, e eu chamo de mutao aquilo que deletrio, se o que deletrio raro eu vou chamar de mutao. No existe nenhuma mutao gentica com mais de 1% na populao de freqncia, bem caracterizado no existe. Se eu somar todas as doenas genticas a freqncias delas fica bem alta, s estou falando de uma mais a freqncia de todas em conjunto, quantos pacientes com Sndrome de Down existe? Em nvel de DNA mutao a mesma coisa, agora quando eu falo do fentipo que essa mutao pode vir a trazer para o individuo, se ele vai ser doente ou no, quando eu falo de doena vocs entendem que incapacita o individuo de alguma forma, quando se fala de doena a pessoa tem algo que faz com que no consiga desempenhar qualquer tarefa mais. Se eu colocar na questo assim a doena tal causando pela mutante tal, mutao. Eu vou lhe dizer o que . Se no causar doena e tiver uma freqncia maior de 1% polimorfismo, se no causar doena e tiver uma freqncia menor de 1% no nada, uma mutao silenciosa. Estamos falando at agora de insero, deleo, duplicao por que essas coisas aparecem? Eu comecei do inverso primeiro mostrei as conseqncias para depois falar da causa. Quais so as causas da mutao? Quando eu falo de mutao vocs tem que lembrar de DNA e da protena, eu no posso falar de mutao do lipdeo, mutao na membrana plasmtica. Quando falo de mutao deve vir na cabea o nucleotdeo e conseqentemente os aminocidos que vem durante a traduo. Agente mutagnico O que um agente mutagnico? Quais so os agentes mutagnicos? Tem vrios, a radiao solar, quais que reconhecemos que so danosas para o DNA? Radiao UVA e UVB, radiao gama, raio-x. Outra coisa que causa mutao? Radicais livres, so sub produtos do metabolismo do oxignio, a molcula de oxignio encontramos bastante na gua, no ar que respiramos. O oxignio que respiramos serve para receber hidrognio na cadeia transportadora de eltrons e virar gua. Ento essas duas molculas hidrognio e oxignio, elas podem se transformar em subprodutos do metabolismo, por exemplo a gua pode se transformar em algum momento em gua oxigenada, que reativa por causa do acrscimo do oxignio que mais reativo que gua sozinha, ela est oxigenado. Alm disso eu posso ter tambm os nios superoxidos que uma molcula de oxignio (O2) s que ela tem um eltron a mais que est doido para reagir com algum. Esses quatro elementos causam uma baguna no nosso DNA, eles oxidam alm de biomolculas, oxidam o DNA trocando a informao que temos. Ento um agente mutagnico. Tem algo reativo a mais, o oxignio a mais, faltou um muito importante o OH- e H+ que so produtos de dissociao das molculas da gua que esto em equilbrio isso encontramos no pH. Vrus causa mutao, por que quem tem HPV tem chance de desenvolver cncer de colo de tero? O que o vrus faz? Integra no seu genoma, principalmente os retrovrus quando saem levam um pedao, quando entra de novo encaixa o pedao, sai embaralhando o DNA, causa de questo de deleo. Outro agente mutagnico a nicotina vai interferir no metabolismo alm de ter substancia carcinognicas , so adutos que significa qualquer elemento qumico que se liga a uma base. Quando voc pega o DNA, o aduto quando eu ligo por exemplo na base guanina o grupamento etila, se alguma reao qumica no controlada pendurar o grupamento etila na guanina, quando essa fita for servida de molde na replicao o que vai acontecer TAAC quem entra em frente a uma guanina com uma etila? Eu sei quem entra em frente a uma guanina. Agora a maquinaria celular quando tem um aduto, essa guanina talvez ela no reconhecida como guanina, ai a polimerase coloca l timina. Ento esses adutos temos uma lista com mais de 10 mil tipos de adutos diferentes, sendo 500 deles na fumaa do cigarro, quem fuma est fazendo a pior coisa na vida, pode ter certeza, e isso gera mutao de ponto, esto vendo que mudou uma base por outra. Estamos cercados com agentes multagenicos em todo lugar no sabo que lava a sua roupa, na gua que bebemos, as vezes eles so indetectveis, no conseguimos perceber, nos alimentos enlatados, os conservantes que esto ali por mais que o fabricante te fale que ele no vai lhe causar mal, muitos deles a gente no conhece os efeitos. J possui muitos trabalhos falando que os conservantes causam evelhecimento precoce como o presunto, salaminho, tudo isso causa evelhecimento precoce por que tem conservante que vai levar a produo de radicais livres que vo envelhecer a sua clula. Mutao espontnea Uma mutao espontnea que acontecem muito, o que quase metade do nosso genoma tem? O que o nosso genoma , regies repetidas eu falei pra vocs que temos 45% do nosso genoma GAGAGA, por que essas repeties elas aumentam ou diminuem? Ento se todo mundo ficar no quarto escuro sem fumar, sem comer e sem estar exposto ao sol as mutaes esto acontecendo, e quem est gerando essas mutaes? A prpria DNA polimerase, ela tem atividade revisora, mas as vezes ela derrapa toda vez q encontra uma fita. Quando a Polimerase encontra uma regio do genoma que tem um trecho que est repetido, como por exemplo: GTCGTCGTC. a unidade de trs nucleotdeos que est se repetindo. O que estamos mostrando aqui: a fita me que essa em azul escuro que tem CAGCAGCAG (SLIDE 16 de mutaes) que o complementar de GTC e ela estende aqui certinho. As vezes quando essa regio ta repetida, o que que pode acontecer? Pode formar essa ala. A fita filha por permitir um alinhamento que varia, ela pode recuar pra trs e formar essa ala aqui. Sabe um fecho de moleton? As vezes se eu encaixo o fecho desencontrado ele sobre do mesmo jeito. Por que ele sobe do mesmo jeito? Por que a unidade do fecho igual, repetida, ento o encontro ali pode acontecer em diversos pontos. a mesma coisa que acontece aqui. Aquela regio que repetida, ela pode simplesmente soltar e formar essa ala aqui. Vamos contar quantos CAG na fita me: SETE. Na fita filha tambm teriam que ter sete (NO SLIDE: NORMAL DNA REPLICATION). Mas se acontecer essa derrapagem aqui, essa fita filha aqui tem SEIS, quer dizer que deslocaram TRES (NO SLIDE: ERROR IN DNA REPLICATION), ento se forma uma ala. E o que vai acontecer com essa fita aqui? Ela continua seguindo como fita filha, ento eu vou colocar mais quantas unidades? QUATRO. Como aqui j tem SEIS, com mais QUATRO: DEZ. Ento subiu de SETE pra DEZ. Depois disso acontecer, aumentaram NOVE bases nessa fita filha. Isso derrapar! Na verdade no a polimerase que derrapa, a fita filha que derrapa na volta (?). (Gente, eu ouvi vrias vezes esse trecho do udio, tentei visualizar no slide, mas t muito confuso. Sugiro que todos ouam o udio. No minuto 30 do udio de mutaes 2 que ta no drop).
Da mesma forma que voc gera um aumento de repeties quando a fita filha forma a ala, quando a fita me forma a ala, voc vai gerar uma deleo de bases. s imaginar o inverso. A fita molde uma fita menor que formou uma ala e a fita filha vai poder replicar agora num intervalo menor. Ento a polimerase tem essa atividade. Pode fazer o que voc quiser tomar um ch (algo saudvel), vai continuar acontecendo mutao. por isso que a tendncia do genoma humano sempre aumentar. Daqui a milhes anos teremos uma maior porcentagem do genoma de partes repetidas. Ento as mutaes espontneas podem acontecer quando: a DNA Polimerase coloca uma base errada, ou quando ela derrapa. Outras coisas podem acontecer no DNA tambm. Temos uma fita de DNA e o que vcs esto vendo de modificaes que podem acontecer? (Acho que ele desenhou no quadro). Posso ter pareamento de guanina com uracila? No. Como eu chamo isso aqui? Mau pareamento. Isso tem que ser corrigido? Tem. Essa guanina aqui uma guanina que foi modificada. Ela pode ter sido oxidada, pode ter recebido um aduto, que chamamos isso de alquilao; toda vez que eu modifico a base e ela deixa de ser a base, pq tem algo a menos ou a mais isso tambm no pode permanecer no DNA. Eu posso ter ligao covalente entre timinas na mesma fita de DNA? As bases nitrogenadas na mesma fita elas se ligam umas com as outras? No. Elas s fazem ligaes de hidrognio com as outras bases que esto pareando com elas, mas com as que esto do lado no. O arcabouo sim, mas a base no faz ligao com nenhuma outra. Ento isso tem que ser reparado. Quem que gera esse tipo de problema aqui? Radiao UV, por exemplo. Se vc ficar muito tempo no sol, timinas na mesma fita se ligam umas as outras, a quando a polimerase vai usar isso como molde, ela no reconhece o que era timina, ela reconhece como algo que no timina. Eu posso ter ligaes covalentes entre bases de fitas diferentes? No. Eu tenho ligao de hidrognio que uma ligao fraca. Agora, eu posso ter ligao covalente? E quando esse DNA for separado na hora da replicao celular, o que acontece se tiver uma ligao covalente? Arrebenta. Que mais que eu posso ter? Eu posso ter quebra no arcabouo ribose fosfato, que eu chamo de quebra simples, se acontecer em uma das fitas; ou quebra dupla se ela arrebentar a dupla fita de DNA. Se eu arrebentar um cromossomo meu no meio, o que vai acontecer com um desses fragmentos de DNA? Ele vai se perder. Isso tudo que est sendo mostrado no slide eu chamo de pr-mutao. Por que so pr- mutaes? Pq como a replicao ainda no aconteceu, elas ainda so passveis de serem reparadas. Todas essas que eu mostrei so leses no DNA. Antes de replicar, se eu unir essas duas pontas aqui, fica tudo certo. Se antes de replicar, eu quebrar essa ligao covalente e voltar a ser uma ligao de hidrognio, o DNA fica reparado. E vocs esto vendo aqui nesse desenho, que cada modificao dessa tem um agente especfico; ento, por exemplo: radiao ionizante, radicais livres, agentes alquilantes podem levar ao mau pareamento. Radiao ionizante vai levar a quebra do DNA, enquanto a luz UV vai levar a formao de ligaes covalentes na mesma fita e assim por diante. Isso so danos no DNA. Se j no bastassem termos mudanas nas bases, como dito antes, ainda temos danos fsicos no DNA que acontecem a todo momento. Na verdade estamos tendo a cada cem mil bases, temos uma mutao por dia, que a clula tem que corrigir, e cada tipo de leso reparado por uma via bioqumica diferente e temos que saber o que elas fazem, por que essas vias no atuam, temos uma doena gentica e so doenas comuns. Leses espontneas: ocorrem sem que precisemos fazer nada. Voc no precisa ficar no sol pra voc ter uma complementao errada de bases. Quando o DNA ta se replicando, o que acontece com a fita filha? Esta havendo a chegada de bases complementares as da fita me na fita filha. Ento se eu tenho guanina, adenina, aqui na fita me vai ligar uma timina. Essa timina vem de onde? De onde os nucleotdeos e as bases nitrogenadas vem? Eles esto, durante a replicao, boiando do lado do DNA e vo sendo incorporados a medida em que aparecer a base do ligante ( 39:21* voltei varias vezes o udio, mas no entendi o que ele disse ao certo). S que existem formas que so chamadas de formas tautomricas e os tautomeros so uma pedra no sapato da clula. As formas tautomricas so duas formas que esto em equilbrio dentro da clula. De todas as guaninas que existem no nucleoplasma, eu tenho 2 formas: a forma cetnica e a forma enlica, que so guaninas do mesmo jeito que vao parear com citosina, s que uma tem um grupo hidroxila e a outro o oxignio. A forma enlica a forma tautomrica da forma cetnica da guanina, so formas qumicas da mesma coisa. igual a ter pessoas de cabelo curto e cabelo longo, mas so pessoas e s mudou um pequeno detalhe. A forma cetnica da guanina pareia com a citosina, mas se eu tiver uma forma tautomrica ali presente, pode parear com outra base, ento se a DNA polimerase, encontrar no molde de DNA uma forma imino da citosina ela vai colocar frente a essa citosina uma adenina e isso normal, natural. Todos ns temos formas tautomricas nesse exato momento em todas as nossas clulas e no tem como evitar que essas bases seja controladas no DNA, pq a polimerase erra, no reconhece quem a forma enlica e a forma cetnica (SLIDE 20). Pq temos essas duas formas enlica e cetnica? Se a forma tautomrica causa tanto mal assim (a forma enlica da guanina pareando com a timina, pode acontecer? Guanina com timina ta certo? Isso normal), porque temos isso at hoje? Se eu tenho um negcio na minha clula que natural, mas que leva a um mau pareamento timina-guanina, pq nossa clula tem isso e tem que lidar com isso? Voc pode ficar em casa sem comer, sem beber sem fumar, que as formas tautomricas sero incorporadas ao seu DNA. Isso acontece, pq a evoluo t o tempo todo agindo na espcie, a espcie humana est em evoluo. O que sabemos na medicina hoje, daqui a cem, mil anos pode ser diferente, pois estamos em constante mudana o tempo todo e isso aqui acontece pra gente no ser clones uns dos outros. Ns somos diferentes uns dos outros, pq ao longo dos milhares de anos essas ms incorporaes foram fixando no genoma e a gente foi virando o que a gente . Ento, toda vez que eu tenho um mau pareamento, timina-guanina, adenina-citosina, eu tenho que consertar isso antes da clula replicar e quem faz o reparo desses mau pareamentos (mau pareamento teve deleo de bases, sim ou no? Aqui eu so coloquei uma guanina na frente de uma adenina, no deletei nada, no tive insero e tenho que consertar isso) a via de reparo que faz esse conserto chamada de via de reparo de mau pareamento (MMR). agora que eu entro com o conceito de epigentica: toda vez que eu tenho um mau pareamento no meu genoma e ele bastante frequente, a cada mil bases vc vai ter um mau pareamento que vai ser corrigido, existem trs protenas que vo ser guardis do seu genoma contra os maus pareamentos que so as MultiS, MultiL e MultiH. O que acontece: (SLIDE 21) temos a fita me de DNA, a DNA polimerase, a forquilha de replicao (aberta) e a fita filha. Na fita filha que acabou de ser polimerizada pela DNA pol foi coloca uma timina em frente a uma citosina, isso no pode ficar e a clula tem que tirar. EXEMPLO: Foi detectado no meu paciente o pareamento A-G. Qual a base que tem que sair da? Quem est errada? Pra clula saber quem deve sair, a fita me deve estar marcada de alguma forma pra clula saber de onte vai tirar. Ento, assim que termina a replicao do DNA, toda vez as fitas so metiladas (NO SLIDE: pontinho verde nas bases corresponde ao radical metil) e essa metilao vai ocorrer toda vez que em seu genoma aparecer GATC, quando aparece a adenina metilada e dessa forma a clula sabe qual fita a filha e qual fita a me. Nesse mau pareamento aqui (do exemplo do slide) a clula sabe que a timina foi colocada errada e que a informao correta a citosina; isso pq ela viu que antes tem um stio GATC e s o de baixo est metilado. A fita filha que acabou de ser feita no metilada, s a me. Como a timina sai? A Multi S vem e conhece o mau pareamento, que no um pareamento perfeito, pode at continuar sendo purina com pirimidina, mas essa protena tem capacidade de enxergar aquilo como um mau pareamento, que de alguma forma distorce o DNA. As outras duas protenas, Multi L e Multi H, vo agir (ele fez um desenho) recortando um fragmento na fita filha de aproximadamente 20-30 pares de bases, possibilitando que a DNA refaa o pedao tirado e coloque a base correta, no caso a citosina, no lugar certo. Logo, todo mau pareamento identificado pela marcao com o grupamento metil. Agora quando eu adiciono esse grupo metil mudou minha sequencia de bases? No. Isso o que eu chamo de modificao epigentica: quando eu altero (controlo) o DNA sem alterar sua sequencia. Quando o cromossomo condensa e depois ele relaxa, na mitose e meiose, estou alterando a sequencia de DNA? No. Isso tambm um exemplo de modificao epigentica. O DNA controlado, condensado, marcado, desmarcado chamo isso de epigentica. Os fenmenos epigenticos so importantes para o controle da expresso gnica, para uma via de reparo. Utilidade pra sua vida: HNPCC (SLIDE 22) que uma doena que ataca uma em cada 200 pessoas (muito frequente) e ela surge exatamente quando eu no tenho o meu MMR, que a via que eu acabei de mostrar, funcionado. Quando essa via no funciona e eu mantenho essa timina aqui (exemplo do slide 21) e eu gero uma mutao nesse lugar e essa timina vai ficar pra sempre ai, ela vai servir de fita me numa outra rodada de replicao e a uma adenina vai ser colocada na frente dessa timina, ento no ponto onde era GC, como era antes, vai ser TA e a eu comeo a acumular mutaes. Ento, toda vez que eu tiver um mau pareamento, aquilo ali vai fixar no meu genoma. uma pr mutao aqui. Se a via MMR corrigir, tirar a timina e colocar a citosina, tudo bem, mas se a timina for mantida, eu saio do momento de pr-mutao e ela vira uma mutao que no tem como mais tirar. Uma vez que vira mutao e isso acontece num protoncogene, ou num gene supressor de tumor eu tenho essa doena que caracterizada pela formao de plipos, que nada mais que uma nica clula que adquiriu uma mutao em um gene envolvido em cncer, que o MMR no foi capaz de remover, pq tem mutao no MMR. Esses plipos (cnceres) vo obstruir a luz do intestino e a comida fica parada e comea a apodrecer ali dentro. A estenose do colo sigmoide um dos sintomas do HNPCC e muitas vezes, dependendo do comprometimento, preciso remover cerca de 70% do intestino. Esta uma doena provocada pela deficincia na via de reparo do MMR, ento a conduta adequada solicitar um teste gentico para saber se o paciente tem alguma mutao no gene do MMR. Pergunta: Caso a pessoa tenha nascido sem pelo menos sem uma das protenas da via do MMR, qualquer mau pareamento do seu genoma no ser reparado. Se voc fizer o diagnstico precoce dessa doena, voc pode tomar medidas que podem atrasar o desenvolvimento desses plipos, como por exemplo, remover carcingenos da sua rotina, como por exemplo parar de fumar.